FACULTAD DE INGENIERÍA DE PROCESOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA

AMBIENTAL

AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y
ANÁLISIS DEL POTENCIAL BIORREMEDIADOR
DE UNA BACTERIA DE AIRE, ENCONTRADA
EN CONGATA

Docente:
Dr. JULIO CESAR BERNABE ORTIZ
Integrantes:
✓ ANGELA MILAGROS FIGUEROA TAPIA
✓ CARLA DEL ROSARIO PALO FERNANDEZ
✓ CINTIA HUILLCAÑAHUI TACO
✓ DEYSI IVANI YANA QUISPE

2016
 AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y ANÁLISIS DEL POTENCIAL
BIORREMEDIADOR DE UNA BACTERIA DE AIRE, ENCONTRADA EN CONGATA

Isolation, Characterization and Analysis of Potential Bioremediation of air bacteria, found

in Congata

Autores: Figueroa Tapia Angela Milagros, Huillcañahui Taco Cintia, Palo Fernández Carla
del Rosario, Yana Quispe Deysi Ivani

Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental, Microbiología Ambiental, V semestre,

Universidad Nacional de San Agustín

RESUMEN

El estudio presentado tiene como objetivos poder aislar, caracterizar e identificar una cepa
bacteriana, es así que se encuentra un género de bacteria Arthrobacter sp. La cual fue
extraída de Congata, Uchumayo, Arequipa; una vez aislada y purificada mediante 5
repiques sucesivos, la cepa bacteriana fue identificada por análisis de la secuencia del
gen Rrna16S, estas cepas son algunos de los géneros más frecuentemente aisladas,
indígenas, aeróbicos bacterianas que se encuentran en los suelos.

Miembros del género son metabólicamente y ecológicamente diversos y tienen la

capacidad de sobrevivir en condiciones ambientalmente duras durante largos períodos de
tiempo. Se ha ampliado sus capacidades metabólicas, apoyándose en la duplicación de
genes catabólicos y al canalizar los intermediarios metabólicos generados por los genes
del plásmido transmitidas a las vías codificada cromosómicamente. Los datos
presentados aquí sugieren que la prevalencia ambiental de Arthrobacter puede ser debido
a su capacidad para sobrevivir en condiciones de estrés inducidos por el hambre, la
radiación ionizante, radicales de oxígeno, y los productos químicos tóxicos.

Palabras Clave: Cepa bacteriana, Arthrobacter sp.

ABSTRACT

The study presented aims to isolate, characterize and identify a bacterial strain, so that a
genus of bacteria is Arthrobacter sp. Which it was extracted from Congata, Uchumayo,
Arequipa; once isolated and purified by 5 successive rings, the bacterial strain was
identified by sequence analysis of the gene Rrna16S, these strains are among the genera
most frequently isolated, indigenous aerobic bacteria found in soil.

Members of the genus are metabolically and ecologically different and have the ability to
survive in environmentally harsh conditions for extended periods of time. It has expanded
its metabolic capabilities, relying on duplicated genes catabolic and metabolic
intermediates channel generated by plasmid genes transmitted to the chromosomally
encoded tracks. The data presented here suggest that the environmental prevalence of
Arthrobacter may be due to its ability to survive under stress induced by hunger, ionizing
radiation, oxygen radicals, and toxic chemicals.
Keywords: Bacterial strain, Arthrobacter sp.

INTRODUCCIÓN

La sociedad humana se beneficia de los microorganismos de muchas formas. Los

microorganismos son componentes indispensables de nuestro ecosistema. Gracias a
ellos se desarrollan los ciclos del carbono, oxigeno, nitrógeno y azufre, que tienen lugar
en los sistemas terrestres y acuáticos. Son también fuente de nutrientes en la base de
todas las cadenas alimentarias y redes ecológicas.

Las actividades metabólicas microbianas son excepcionalmente variadas, siendo algunas

de ellas exclusivas del mundo procariótico.

Los microorganismos han sido los primeros en aparecer en la evolución, y constituyen

seguramente la mayor parte de la biomasa de nuestro planeta. Se calcula que sólo hemos
descrito menos del 10% de los microorganismos existentes, por lo que se tiene una gran
tarea por delante para estudiar esta parte de la biodiversidad.

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

Las muestras de aire fueron tomadas en distintas zonas para que la muestra sea
homogénea y representativa de la urbanización de Congata perteneciente al distrito de
Uchumayo ubicado a 16° 24’ 55’’S, 71°39’49’’w.

Cabe resaltar que se tomaron las muestras en horas de la tarde en dirección contraria a la
que van las corrientes de aire y viento.

FIGURA 1: CONGATA LUGAR DE MUESTREO.

Arthrobacter en acción

Los sistemas de suelos contienen la mayor diversidad de microorganismos en la tierra,

con 5.000-10.000 especies de microorganismos por gramo de suelo. Arthrobacter sp.
cepas tienen un ciclo de vida primitiva y se encuentran entre los más frecuentemente
aislados, las bacterias del suelo indígenas, que se encuentran en el subsuelo comunes y
profundo, el hielo ártico, y los ambientes contaminados con productos químicos
industriales y materiales radiactivos.

Las cepas de Arthrobacter especies fueron sacrificadas por primera vez de los suelos en
el siglo XIV y se encuentran entre los géneros más frecuentemente aisladas, indígenas,
aeróbicos bacterianas que se encuentran en los suelos. Estas bacterias aparecen
típicamente como bacilos Gram negativos en las culturas más jóvenes y, como cocos
grampositivos en las culturas más antiguas. La base molecular para su método distinto de
crecimiento no se conoce. Debido a su apariencia pleomórficos y heterogéneos,
Arthrobacter sp. cepas se agruparon originalmente con el Corynebacteria Sin embargo,
los análisis sistemáticos más modernas indican que los miembros del género Arthrobacter
son taxonómicamente agrupado con el Micrococcaceae, que se compone de alta G + C.

Hábitad de Arthrobacter

Arthrobacter sp. son ubicuos y se han encontrado en los suelos comunes y en ambientes
extremos, tales como el subsuelo profundo, hielo ártico, sitios contaminados
químicamente, y ambientes radiactivos. Arthrobacter sp. cepas fueron reportados a estar
entre los géneros más frecuente de bacterias aisladas de una filtración por debajo
tanques de almacenamiento de radionucleidos en la instalación del Departamento de
Energía en Hanford, Washington, Estados Unidos.

RESULTADOS / DISCUSION

Características de Arthrobacter

Arthrobacter sp. cepas tienen un ciclo de vida primitiva y se encuentran entre los más
frecuentemente aislados, las bacterias del suelo indígenas, que se encuentran en el
subsuelo comunes y profundo, el hielo ártico, y los ambientes contaminados con
productos químicos industriales y materiales radiactivos. Para entender mejor cómo estas
bacterias sobreviven en condiciones ambientales duras, nos basamos en realizar un
enfoque de la genómica estructural para identificar el potencial biorremediador de
Arthrobacter aurescens TC1 cepa, una bacteria aislada originalmente por su capacidad
para degradar el herbicida atrazina.

Encontraron que el genoma de esta bacteria comprende un único cromosoma circular y

dos plásmidos que codifican para un gran número de proteínas implicadas en las
respuestas al estrés debido a la inanición, la desecación, los radicales de oxígeno, y los
productos químicos tóxicos. A. aurescens ' versatilidad metabólica se debe en parte a la
presencia de genes catabólicos duplicados y su capacidad para canalizar intermedios
plásmido derivado en vías cromosómicamente codificados. Arthrobacter ' array s de genes
que permiten la supervivencia en condiciones de estrés y su capacidad de producir una
con temperatura tolerante "quiste" -como la célula en reposo rinde este microorganismo
del suelo capaces de sobrevivir y prosperar en una variedad de condiciones ambientales.

La prevalencia ambiental de Arthrobacter puede ser debido, en parte, a su capacidad de

sobrevivir largos periodos de tiempo bajo condiciones de estrés inducidas por el hambre,
cambios de temperatura, radiación ionizante, radicales de oxígeno, y los productos
químicos tóxicos.

FILOGENIA

La filogenia de las bacterias se desarrolla en la actualidad a partir de la elaboración

de árboles filogenéticosmoleculares, especialmente basados en el ARN ribosomal, pero
también sobre la base de proteínas (proteoma) y genes (genoma).

Las técnicas del DNA recombinante nos ayudan a subsanar estos problemas y a clasificar
a los organismos de un modo más correcto, de acuerdo a su filogenia. Estos estudios
podemos hacerlos estudiando la secuencia total de nucleótidos del genoma del
microorganismo, pero actualmente se utilizan los estudios del rRNA 16S o 18S, porque
son secuencias que se han mantenido bastante uniformes a lo largo de la evolución, y por
eso se ven claramente las diferencias entre los distintos microorganismos y se pueden
realizan árboles filogenéticos y esquemas evolutivos.

La hipótesis del cronómetro molecular asume que el número de cambios en las

secuencias de estas moléculas es, a grosso modo, equivalente al tiempo transcurrido
desde la divergencia de dos líneas evolutivas que comparten la molécula. Tanto proteínas
como ácidos nucleicos han sido ampliamente utilizados como cronómetros moleculares
en la resolución de filogenias de muy distintos grupos de seres vivos, pero son los ácidos
nucleicos los que han tenido una especial incidencia en la elaboración del árbol evolutivo
de los procariotas. Además, presentan la ventaja de que los cambios mutacionales
quedan en su totalidad reflejados en la secuencia, evento que no ocurre en las proteínas,
debido al carácter degenerado del código genético.

Un cronómetro molecular que permita detectar las relaciones evolutivas más amplias ha
de cumplir las siguientes condiciones:

• Debe tener una distribución universal. · No debe estar sujeto a transmisión

horizontal.
• Ha de poseer una constancia funcional, de modo que la presión selectiva que
actúe sobre la molécula sea mínima.
• La longitud de la secuencia debe ser suficiente para que las estimaciones de
semejanza tengan validez estadística.
• La tasa de cambio, al menos en una parte de la molécula, debe ser lo
suficientemente baja como para permitir la detección de las relaciones evolutivas
lejanas.
 • Desde el punto de vista metodológico interesa que no sea excesivamente larga
para poder aplicar técnicas de secuenciación.

Se usan dos estrategias a la hora de aislar genes de rRNA del total de los ácidos
nucleicos. Una aproximación es clonar fragmentos al azar de DNA del medio ambiente y
analizar aquellos que contienen genes de rRNA. Como la cantidad de DNA clonado que
contiene genes de rRNA es pequeña, el segundo paso, casi obligado, es la utilización de
la PCR para amplificar este rRNA.

Como el rRNA esta altamente conservado en la naturaleza los investigadores utilizan

primers universales para los tres dominios de organismos (eucariotas, bacterias y
arqueobacterias), desde todos los puntos parece aconsejable el uso de la PCR pues se
necesita amplificar el rRNA que antes sólo formaba una pequeña parte del total. La
manera más rápida de obtener los constituyentes de los ecosistemas microbianos es pues
mediante el uso de la PCR.

En principio la PCR realizada con estos primers amplifica los genes de RNA de todos los
tipos de organismos presentes en un ambiente. Los tipos individuales de genes en la
mezcla son separados en principio por clonación y posteriormente son secuenciados.

FIGURA 2: REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

Para realizar la respectiva filogenia de las bacterias, se hace uso de programas

especiales (MEGA, BioEdit, dnasp51001) en donde se desarrolla la respectiva
programacion de correccion de la secuencia de nuestra bacteria, para ello se necesita la
correspondiente secuenciación de nuestras bacterias.
 TCGAACGATGAACCTCACTTGtcgGGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGT
AACACGTGAGTAACCTGCCCTTGACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACCGGG
TCTAATACTGGATACGACCTTCTGGCGCATGCCATGTTGGTGGAAAGCTT
TTGTGGTTTTGGATGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAATG
GCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACA
CTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAAT
ATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGAA
Secuenciación GGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCCGGCCTTTGGG
TTGGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGC
DACC CGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAG
AGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGCCGTGAAAGTCCGGGGCTTAACCC
CGGATCTGCGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGA
ATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGG
CGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCATGGG
GAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTanaCGTTGGGCA
CTAGGTGTGGGGGACATTCCACGTTTTCCGCGCCGTAGCTAACGCATTAA
GTGCCCCGCCTgGgga GTACGGCCGCAAGGCtaaaactcaaaggAATTGA
CggGGGCCCGCACAa GCGGC

FILOGENIA DE BACTERIA DACC

FILOGENIA DE BACTERIA DACC (BLAST)

Propiedades de Arthrobacter

El género Arthrobacter representa uno de los grupos de bacterias heterótrofas más

divergentes de actinobacteria, debido a su versatilidad metabólica que son reportados a
existir en una amplia gama de entornos como los suelos, plantas, agua dulce, muestras
clínicas y los hábitats marinos. Numerosos estudios han puesto de manifiesto la
asociación de diversas cepas de Arthrobacter con diferentes plantas por ambos métodos
de cultivos dependientes e independientes.

✓ La especie Arthrobacter aurescens cepa para la remediación de suelos

contaminados terbutilazina que tiene eficacia tanto para el suelo y los
compartimentos acuáticos. Se demostró la viabilidad de crecimiento de la bacteria
inóculos bioaumentación en fuentes simples únicos de nitrógeno (amonio y nitrato)
en lugar de atrazina, mientras que todavía mantiene su eficiencia para biodegradar
terbutilazina.
✓ En la secuencia, los exitosos y rápidos (3 días) la eficacia biorremediación de
amonio. La utilidad de esta herramienta bioaumentación para proporcionar
ambiente descontaminación rápida es particularmente relevante en el caso de
contaminación accidental del herbicida alta.
✓ Arthrobacter sp. son metabólicamente diversa y se han aislado por su capacidad
para biodegradar una variedad de contaminantes ambientales, tales como el
glifosato, metil terc-butil éter, 2,4-diclorofenoxiacetato (2,4-D), nictotine, 4-
nitrofenol, dimethylsilanediol, endoxohexahydrophthalate ( endotal), fluoreno,
ftalato, nitroglicerina, y un número muy grande de herbicidas triazina .Arthrobacter
también se han demostrado ser altamente resistente a algunos metales pesados
tóxicos y anión cromato.
✓ Arthrobacter cepa, es una bacteria nitrificante convierte amoniaco tóxico en nitrato
menos dañino. Comúnmente se utiliza para eliminar sustancias de nitrógeno de las
aguas residuales, pero en lagos y estanques que ocurre.
✓ La prevalencia ambiental de Arthrobacter puede ser debido, en parte, a su
capacidad de sobrevivir largos periodos de tiempo bajo condiciones de estrés
inducidas por el hambre, cambios de temperatura, radiación ionizante, radicales de
oxígeno, y los productos químicos tóxicos. Esta capacidad de supervivencia
notable es ejemplificado por la recuperación de Arthrobacter sp. de suelos
antárticos desierto; experimentos en el laboratorio confirman estas observaciones.
En estos estudios, la morfogénesis de Arthrobacter de varilla a coccus ha sido
implicado en la capacidad de la bacteria para sobrevivir a las tensiones, con el
pequeño estado cocoides similar descrito como la forma más estable. La transición
a este estado cocoides-como se ha demostrado para requerir manganeso y la
acumulación de este metal en el citoplasma bacteriano se ha relacionado con la
supervivencia de la radiación de estrés en Deinococcus radiodurans y otras
bacterias.
✓ Las bases moleculares de la Arthrobacter éxito en sobrevivir a condiciones de
estrés en el suelo y la metabolización de diversos compuestos se ha investigado
de manera esporádica.
Importancia de Arthrobacter

Arthrobacter sp. son metabólicamente diversa y se han aislado por su capacidad para
biodegradarse una variedad de contaminantes ambientales, tales como el glifosato, metil
terc-butil éter, 2,4-diclorofenoxiacetato (2,4-D), nictotine, 4-nitrofenol, dimethylsilanediol,
endoxohexahydrophthalate ( endotal), fluoreno, ftalato, nitroglicerina, y un número muy
grande de s . herbicidas triazina Arthrobacter también se han demostrado ser altamente
resistente a algunos metales pesados tóxicos y anión cromato.

Las bases moleculares de la Arthrobacter éxito en sobrevivir a condiciones de estrés en el

suelo y la metabolización de diversos compuestos se ha investigado de manera
esporádica. Estos estudios incluyen el aislamiento de genes implicados en la síntesis de
glicina betaína en A. globiformis, el análisis de trehalosa y la síntesis de glucógeno en
condiciones de estrés en A. globiformis, la secuenciación del plásmido de nicotina-
degradación en A. nicotinovorans, y la secuencia parcial del genoma de la resistente al
metal pesado Arthrobacter sp.

• Sobrevivir a constante estrés oxidativo interna.

Una pista a la capacidad de supervivencia de Arthrobacter es su capacidad para

sobrevivir radicales de oxígeno reactivos generados continuamente producidos por su
intenso metabolismo aeróbico. Esto se deriva, en parte, a partir de 14 genes que codifican
oxidasas que utilizan oxígeno molecular para metabolizar grupos amino. Esto es más que
cualquier otra bacteria de la que se ha publicado una secuencia del genoma. Nuestros
análisis de los genomas de M. la tuberculosis 210, Bacillus
subtilis BS0001, M. avium 104, P. putida KT2440, S. avermitilis MA-4680, y S.coelicolor
A3 (2) revela sólo diez, seis, ocho, siete, dos, y tres de amina oxidasas,
respectivamente. Por otra parte, hay más de 30 otros genes en el genoma oxidasa
TC1. Oxidasas generan H 2 O 2 que se pueden generar otras especies reactivas del
oxígeno, como el radical hidroxilo hiperreactivas, que puede causar grandes daños que
conduce a la muerte celular.

• Cupins en Arthrobacter y relación con el estrés, la acumulación de

manganeso, y la morfogénesis.

Cupins, una superfamilia de dominios estructurales β-barril, se cree que está involucrado
en las respuestas al estrés, la morfogénesis celular y desarrollo, la estructura de la pared
celular, y la tolerancia a la desecación. Enzimas de la superfamilia Cupin incluyen varios
dioxigenasas y germins asociadas a las plantas que se unen a un único ión manganeso,
similar al manganeso superóxido dismutasa (MnSOD).

• Capacidad de biodegradación.

De los 326 microorganismos (que incluyen 83 géneros de bacterias) en la Universidad de

Minnesota biocatálisis base de datos, Arthrobacter sp. cepas son la tercera más
abundante en las reacciones de biotransformación catalogadas, sólo menos de
Pseudomonas y Rhodococcus sp. cepas. Arthrobacter cepas son metabólicamente
diversa y son capaces de catabolizar una variedad de compuestos químicos.
Mientras que los miembros del género Arthrobacter se han destacado por su capacidad
para catabolizar diversos compuestos de relevancia ambiental, incluidos los
contaminantes tales como el glifosato, metil tert -butil éter, 2,4-diclorofenoxiacetato (2,4-
D), nictotine, 4-nitrofenol, dimethylsilanediol, endoxohexahydrophthalate (endotal),
fluoreno, ftalato, y nitroglicerina.

• El catabolismo de los polímeros de origen natural.

Un nicho metabólica significativa de Arthrobacter sp. está en la descomposición de

polímeros de carbohidratos. Por ejemplo, estas cepas pueden expresar en el orden de
dos proteínas de la familia docena de amilasa, que se excretan putativamente. También
hacen enzimas para la degradación de carbohidratos oligomérica, así como para la
hidrólisis de la pectina, glucósido, y xilano. En este
contexto, Arthrobacter sp. probablemente ocupará un lugar importante en la naturaleza
biodegradar polímeros de carbohidratos y sustancias húmicas.

MATERIALES Y METODOS

SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

La siembra; proceso mediante llevamos una porción de una población de

microorganismos (inóculo) de nuestro cultivo bacteriano a un medio nutritivo para su
crecimiento, bajo ciertas condiciones como que se lleva a cabo con instrumentos estériles
sobre medios de cultivo estériles.

Para estudiar esta bacteria ha sido necesario destruir todos aquellos microorganismos
que pudieran encontrarse en el medio y en los instrumentos de trabajo. Esto lo
conseguimos con la esterilización en el autoclave, proceso que consiste en conseguir que
todos los microorganismos presentes mueran, haciéndose uso del calor húmedo
Utilizándose tipos principales de esterilización.

El autoclave es un aparato que permite elevar la presión y la temperatura con lo que se

consigue un aumento en la temperatura de ebullición del agua. Normalmente, se lleva la
presión a 1 atmósfera (por encima de la ambiental) lo que corresponde a una temperatura
interior de 121ºC, manteniéndolo en estas condiciones durante 20 minutos.

En el caso de objetos metálicos y vidrio pirex como el asa de digralsky, se esterilizarón en

el momento de su utilización, manteniéndolos en la llama hasta que se pongan al rojo,
teniendo la precaución de enfriarlos antes de su uso.

Para que el inóculo obtenido no se contamine, modifique o destruya no se emplea el calor

directo, flameando las bocas de los tubos de ensayo, matraces, etc. antes y después de
su utilización, a pesar de estar esterilizados previamente, las condiciones ambientales
durante el proceso de siembra y en general han sido lo más próximas a la esterilidad para
evitar contaminaciones durante el manejo del instrumental y de los medios de cultivo.
 • Material usado en la siembra

Mechero, asa de digralsky, placas con el medio preparado

• Realización de la siembra en placa

En la placa correspondiente, se realizó la siembra directa a través del muestreo ya que

contamos con el medio preparado en las placas de Petri, manteniéndolo a una
temperatura de 37°C,. Una vez habiendo realizada la siembra dejamos que se formen las
distintas cepas que hay en la muestra que cogimos, en primer lugar, se observó a simple
vista diversas características como el color y el borde de las cepas crecidas en el agar así
como el olor y la turbidez del medio ya que en algunos casos suelen ser típicos de un
determinado tipo de microorganismo y pueden servir de ayuda a la hora de su
identificación escogiendo así una determinada cepa y aislándola haciendo el repique
correspondiente.

FIGURA 3: MUESTRA DE AIRE

FIGURA 4: CEPAS SELECCIONADAS.

REALIZACIÓN DE REPIQUES

1. Se extrajo una colonia alejada de la siembra con ayuda de el “asa de col”

previamente esterilizada
2. Cada una la depositamos en un tubo Eppendorf con 1 ml de ClNa,
3. Luego se homogenizo con ayuda del “vortex”
4. Se introdujo el asa de col en el ependor y se tomó una pequeña muestra de la
bacteria la cual fue sembrada en una nueva placa en un medio de agar sólido.
Repetimos este procedimiento 5 veces completando de esta manera el quinto
repique.

FIGURA 5: 1ER REPIQUE CON TRITON. FIGURA 6: 5TO REPIQUE CON TRITON.

TINCIÓN DE GRAM

1. Se colocó una gota de agua destilada en la parte media del portaobjetos.

2. Con ayuda de un asa de col o de siembra se retiró una colonia de la placa Petri
para mezclarla con la gota de agua hasta que esta se vuelva turbia; seguidamente,
se fija la muestra con ayuda del mechero hasta que el agua se haya evaporado
completamente.
3. Se agregó 2 a 3 gotas de colorante cristal violeta, se deja actuar por 1 minuto,
luego de este tiempo se lava el portaobjetos.
4. El segundo colorante agregado es el lugol, de 2 a 3 gotas, se deja actuar por 2
minutos y se lava el portaobjetos.
5. Se agrega de 2 a 3 gotas de alcohol-acetona, se deja actuar por 20 segundos para
proseguir al lavado.
6. Finalmente se agrega la safranina de 2 a 3 gotas, se deja actuar por 1 minuto y se
lava el portaobjetos.
7. Cuando ya esté totalmente seco el portaobjetos, se coloca una gota de aceite de
inmersión para poder observar la muestra en el microscopio.
 TABLA 1: MATERIALES PARA LA TINCION DE GRAM.

Colorantes utilizados:

✓ Cristal violeta
✓ Lugol
✓ Safranina

También se utilizó:

✓ Alcohol-acetona

Cristal violeta

Lugol

Safranina

Tinción de gram para la bacteria DACC

Al realizar la tinción de gran para la

bacteria DACC se concluyó que:

✓ Es una GRAM NEGATIVA (-)

La morfología bacteriana:

✓ Cocos

Específicamente:

✓ Staphylococcus
FIGURA 6: VISTA DEL MICROSCOPIO
CONSERVACIÓN DE MUESTRA

La muestra se conservó en el medio: caldo nutritivo más glicerol.

Procedimiento:

✓ Utilizando el asa de col se retira toda una fila de colonias de la placa Petri con la
finalidad de arrastrar la mayor cantidad de muestra.
✓ Se coloca la muestra en un tubo eppendorf, se agita hasta disolver completamente
la muestra.
✓ Con ayuda de una micropipeta, se retiran 5ul de la muestra disuelta y se coloca
esta misma cantidad en 5 tubos eppendorf que contiene caldo nutritivo con glicerol
con la finalidad de conservar la muestra.
✓ Finalmente, estos tubos son guardados en un refrigerador para que puedan ser
utilizados en un futuro.

FIGURA 6: Placa de la cual se saca la muestra

FIGURA 7: Conservación final de la muestra

 PRUEBA DE SENSIBILIDAD

Se realizó la preparación del medio de cultivo agar a base de cloruro de sodio al 0.1%,
luego se depositó una colonia y se incubó a 37°C Pasado 24 y 28 horas se procedió a
evaluar la prueba de patogenenicidad y resistencia a los antibióticos de las colonias,
donde presentaron los siguientes resultados.

FIGURA 8: ANTIBIOTICOS

TABLA 2: PRUEBA DE PATOGENENICIDAD Y RESISTENCIA A LOS ANTIBIÓTICOS

BACTERIA Antibiótico Contenido Diámetro del halo Sensible /

(mm) Resistente
Tilosina 150 ug.
TILODROGL Lincomicina 2ug. 16 Sensible

TILMICODROG Tilmicosina 15 ug. 16 Sensible

Amoxicilina 25ug.
DACC AMOXIDROG C. Ciprofloxacina 16 Sensible
5ug.

Trimetoprim 5ug.
FOSFODROG T. Fosfomicina 16 Sensible
sódica 50ug.
Lincomicina 2ug.
SANADROG Doxiciclina 30ug. 16 Sensible

El diámetro del halo que posee la bacteria correspondiente tendrá la misma dimensión
para todos los antibióticos analizados, debido a que ya se encuentra estipulado, por lo
que nuestra bacteria ha sido muestreada en el aire.
 FIGURA 9: PRUEBA DE ANTIBIOTICOS

CONCLUSIONES

1. De acuerdo al estudio realizado Arthrobacter sp., bacteria del suelo autóctona que
tiene la capacidad para sobrevivir por largos períodos de tiempo en una variedad
de condiciones ambientales. Su capacidad para sobrevivir está íntimamente ligada
a su versatilidad genómico, especialmente con respecto al metabolismo de
nitrógeno y la capacidad de crecer en sustratos poliméricos que a menudo no son
utilizados por muchos microbios del suelo. Esto da más probable es que esta
bacteria una ventaja competitiva en ambientes de suelos oligotróficos. Además,
impresionante conjunto de esta bacteria de genes y mecanismos que permitan la
supervivencia en las condiciones del suelo estresantes, junto con su capacidad de
producir un "quiste" tolerantes a la temperatura -como descansando celular, hace
Arthrobacter un microorganismo del suelo verdaderamente ubicua que está bien
posicionada para sobrevivir y prosperar en una gran variedad de condiciones
ambientales.
2. La importancia del informe radica toda la metodología aplicada para llegar a los
resultados, ya que el objetivo primordial fue investigar las posibles propiedades
biológicas que tiene la bacteria descubierta con la finalidad de que esta pueda ser
utilizada en un futuro con fines académicos.
3. El estudio realizado, nos permitió resaltar características propias de
Arthrobacter sp. Las cuales son cepas que tienen un ciclo de vida primitiva y se
encuentran entre los más frecuentemente aislados, las bacterias del suelo
indígenas, que se encuentran en el subsuelo comunes y profundo, el hielo ártico, y
los ambientes contaminados con productos químicos industriales y materiales
radiactivos. Para entender mejor cómo estas bacterias sobreviven en condiciones
ambientales duras. Se encontró que el genoma de esta bacteria comprende un
único cromosoma circular y dos plásmidos que codifican para un gran número de
proteínas implicadas en las respuestas al estrés debido a la inanición, la
desecación, los radicales de oxígeno, y los productos químicos tóxicos.
REGISTRO EN GENBANK
Genómica comparativa.

Todos los genes y proteínas predichas a partir de la Arthrobacter sp., así como de todos
los otros genomas completos publicados, se compararon utilizando BLAST. Para la
identificación de los últimos duplicaciones de genes. Se hicieron búsquedas en la base de
datos no redundante contra una de genomas microbianos completos.

Presentación GenBank.

La secuencia de nucleótidos de todo el genoma de Arthrobacter sp., se presentó al

GenBank (números de acceso que figuran en la información de apoyo). La secuencia del
genoma completo también está disponible a través del sitio web de recursos microbianos
TIGR Integral.

EXPRESIONES DE GRATITUD

Agradecemos al Dr. JULIO CESAR BERNABE ORTIZ miembro de la sociedad Americana

de Microbiología (ASM), Asociación Americana para el Avance de la Ciencia (AAAS) y
Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular (SEBBM); por dirigirnos y
apoyarnos en la búsqueda e identificación molecular de bacterias.

BIBLIOGRAFIA

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nucleares de alto nivel en el sitio de Hanford, Washington. Appl Environ
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ANEXO 1: IDENTIFICACIÓN DE INCULTOS CLON BACTERIA 16S ARN RIBOSOMAL

LL141-6C2 GEN EN MUESTRAS DE AIRE ENCONTRADAS EN CONGATA.

Importancia relevante como indicadores de contaminación del agua y los alimentos.

GcaagTCGAACGATGAAGCACTGCTTGcagTGTGGATTAGTGGCGAACGG
GTGAGTAACACGTGGGTGATCTGCCCCGCACTTCGGGATAAGCCTGGGAA
ACTGGGTCTAATACCGGATACGACCCCCTGGTAGGTCAGGGGGTGGAAAG
ATTTTATCGGTGTGGGATGAGCCTGCGGCCTATC AGCTTGTTGGTGGGGT
Secuenciación AATGGCCTACCAAGGCGTCGaCGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGATCGGC
CACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGC AGC AGTGGG
FHPY GAATATTGCAC AATGGGCGC AAGCCTGATGC AGCGACGCCGCGTGGGGGA
TGACGGCCTTCGGGTTGTAAACTCCTTTCGCC AGGGACGAAGCGTTATAG
TGACGGTACCTGGAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCC AGC AGCCGCG
GTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTGTCCGGAATTACTGGGC GTAAAGAGCT
CGTAGGTGGTTTGTCGCGTCGTCTGTGAAATCCCGGGGCTTAACCTCGGG
CGTGCAGGCGATACGGGC ATAACTTGAGTGCTGTAGGGGAGACTGGAATT
CCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGC AGATATC AGGAGGAAC ACCAATGGCGA
AGGCAGGTCTCTGGGCAGTAACTGACGCTGAGGAGC GAAAGC ATGGGTAG
CGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTacaCgGTGGGCGCTA
GGTGTAGGGGACTTCC ACGTCTTCTGTGCCGCagcTAACgcaTTAAGCGC
CCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAaGGCTAAAACTC AAA

FILOGENIA DE BACTERIA FHPY

FILOGENIA DE BACTERIA FHPY (BLAST)