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Electromagnetic Spectrum
𝑐=𝜆𝜈
𝐸=ℎ𝜈
𝐸=ℎ𝑐/𝜆
1 𝑛𝑚=1 𝑚μ=10 Å
Radiation and the Atom
Electron Transitions:
Se puede considerar que los electrones en el átomo ocupan grupos de niveles de
energía similares. El modelo molecular más complicado muestra los electrones de
enlace asociados con más de un núcleo, y son particularmente susceptibles a las
transiciones de subcapas.
Los electrones en cuestión pueden estar presentes en uno de los dos tipos de
enlaces químicos; los enlaces sigma (σ) que resultan de la superposición de s-
subcapa, o el enlace pi (π) generalmente más débil que resulta de la
superposición de p-subcapa.
Specific Absorption
Cada electrón en una molécula tiene una energía de estado fundamental única, y
como los distintos niveles a los que puede promoverse también son únicos, existe
un conjunto finito y predecible de transiciones disponibles para los electrones en
cualquier molécula dada. Cada transición, resultante de la absorción de un fotón,
tendrá una relación directa y permanente entre la longitud de onda del fotón y la
transición particular que estimula, conocida como absorción específica. Una
gráfica de esos puntos a lo largo de la escala de longitud de onda, en la que una
sustancia dada muestra "picos" o máximos de absorción, se denomina espectro
de absorción (Figura 5).
𝐼/𝐼0=𝑇
𝐼/𝐼0×100=%𝑇
𝐴=𝑙𝑜𝑔𝐼/𝐼0=𝑙𝑜𝑔100/𝑇=𝜀𝑐𝑙
𝑘=𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑡𝑖𝑜𝑛/𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑒
𝑐=𝑘×𝐴
Instrumentation
La luz VIS normalmente es suministrada por una lámpara con base de tungsteno,
con lámparas halógenas de tungsteno que tienen un rendimiento relativamente
más alto en la región de cruce de UV-VIS (Figura 11). El límite de longitud de onda
larga generalmente es el corte del vidrio o la envoltura de cuarzo de la lámpara,
pero normalmente está más allá del límite visible útil a 900 nm.
Las fuentes de luz de la lámpara de destello de xenón son una alternativa a los
sistemas combinados de tungsteno y deuterio. Las lámparas de destello de xenón
cubren la gama UV y VIS, y tienen una vida útil muy larga. Sin embargo, los
procesos adicionales para tener en cuenta los niveles más altos de luz parásita,
así como menos energía en la región VIS, significa que los instrumentos están
limitados a aplicaciones donde no se requieren especificaciones de instrumentos
más altas.
Los filtros de vidrio coloreado o gelatina son la forma más simple de selección,
pero tienen una utilidad limitada debido a que los filtros rentables están
restringidos a la región VIS, además de tener una resolución de longitud de onda
pobre: por lo general, no pueden aislar rangos de longitud de onda menores a 30
40 nm. Los filtros de interferencia más sofisticados pueden alcanzar resoluciones
de longitud de onda de 10 nm o menos, pero siguen siendo inadecuados para la
mayoría de las aplicaciones de laboratorio de rutina, a pesar del bajo costo y la
simplicidad técnica. Más a menudo se usan en combinación con, y aguas arriba,
de elementos dispersantes más sofisticados para eliminar regiones relativamente
grandes de radiación no deseada.
Si las ondas difractadas están en fase, sufren interferencias constructivas que dan
como resultado la amplificación. Aumentar la intensidad de la luz difractada. Si las
ondas difractadas están en antifase, se someten a interferencias destructivas que
se anulan entre sí, disminuyendo la intensidad de la luz dañada (Figura 13). Como
diferentes longitudes de onda de la misma fuente de luz estarían en fase y en
antifase en diferentes ángulos al haz incidente, su luz proyectada amplificada y
cancelada ocurre en una posición diferente en una superficie proyectada,
separando las longitudes de onda y creando un espectro.
El ángulo donde se producen los máximos se puede encontrar en la siguiente
ecuación:
𝑑sin𝜃𝑚/𝜆=𝑚
𝑑sin𝜃𝑚=𝑚𝜆
𝑑(sin𝜃𝑖+𝑠𝑖𝑛 𝜃𝑚)=𝑚𝜆
Cuando se reorganiza para que el ángulo máximo del sujeto, la ecuación es:
𝜃𝑚=𝑎𝑟𝑐𝑠𝑖𝑛(𝑚𝜆/𝑑−𝑠𝑖𝑛𝜃𝑖)
Optical Geometry: Como las mediciones dependen de la relación (𝐼 / 𝐼0), se toma una
medición de referencia que crea una línea de base impartida por la solución de
referencia antes de registrar la medición de la muestra. La intensidad de referencia
(𝐼0) varía con la longitud de onda, debido a muchos factores como la energía de la
fuente, la transmisión del monocromador, el ancho de la rendija y la respuesta del
detector, por lo que es necesario crear una nueva línea de referencia de referencia
para cada longitud de onda por separado en la que la medición de la muestra es
hacerse. Los microprocesadores en instrumentos modernos han permitido que la
instalación almacene múltiples líneas de base, establecidas en cada longitud de
onda, permitiendo que las opciones superen este requisito. Como resultado, los
instrumentos de haz único no tienen esta desventaja tradicional en comparación
con los instrumentos de haz doble más caros (Figura 15).
La incorporación de lámparas de destello de xenón en un instrumento requiere
una configuración de haz dividido. Esto se debe a que los destellos de alta
intensidad no son de igual magnitud. Aproximadamente el 70% de la energía del
monocromador se pasa a través de la muestra, y el resto va a un detector de
referencia separado, lo que permite un medio para tener en cuenta las
fluctuaciones en la energía. Esto estabiliza el sistema sin que se requieran
elementos adicionales costosos.
Vale la pena señalar que las configuraciones ópticas del instrumento, definidas
como doble y haz dividido, pueden diferir entre los fabricantes. Algunos describen
que la doble viga tiene un solo detector, mientras que una viga dividida tiene dos,
una para cada viga, otras describen que una viga doble tiene dos posiciones de
soporte de celda, una para cada viga, mientras que una viga dividida tiene una
posición de soporte de celda única.
Las cubetas generalmente están hechas de vidrio o cuarzo (sílice fundida) para las
longitudes de onda VIS o UV-VIS de interés respectivamente. Sus uniones están
fusionadas en lugar de cementadas, para resistir la acción de los solventes, y
están terminadas para asegurar que las ventanas ópticas (los lados a través de los
cuales pasa el haz) estén altamente pulidas, paralelas entre sí y planas, y que la
longitud del camino (distancia) Entre las superficies interiores de las ventanas) se
presenta una desviación mínima.
La cubeta más utilizada tiene una longitud de trayectoria de 10 mm, pero las
longitudes de trayectoria más largas o más cortas son útiles si se miden
concentraciones más altas o más bajas, respectivamente, que caen fuera del
rango del instrumento en una longitud de trayectoria de 10 mm. Micro cubetas;
para pequeños volúmenes de muestra, cubetas de gas y cubetas de flujo, así
como versiones enmascaradas y sin máscara, están disponibles para extender la
utilidad de un instrumento. El poliestireno desechable, que se usa en las
aplicaciones VIS, y el metacrilato de metilmetilo (PMMA), que se usa en las
aplicaciones UV-VIS, también están disponibles las cubetas. Preferido para evitar
la contaminación cruzada, o en aplicaciones de alto rendimiento para eliminar los
arduos procedimientos de lavado (Figura 16).
Los detectores de matrices incluyen una matriz de diodos fotográficos (PDA) y una
matriz de dispositivos de carga acoplada (CCD). Son un conjunto de elementos
fotodiodos individuales en forma lineal o matricial y se pueden montar de manera
que el espectro completo se centre en un conjunto de tamaño apropiado. No se
requiere un mecanismo de cambio de longitud de onda para que las mediciones
de toma y visualización sean muy rápidas. La resolución está limitada por el
tamaño físico de los elementos detectores individuales. Además, se requieren
consideraciones adicionales de geometría óptica para eliminar los efectos de la luz
dispersa de los espectros de segundo orden.
𝐴=𝜀𝑙𝑐+𝑘
Las variaciones de temperatura también pueden ser una fuente de error, por lo
tanto, se deben tomar nuevas medidas de referencia para actualizar la línea de
base y contrarrestar cualquier cambio potencial durante períodos de tiempo
significativos.
Se debe hacer un esfuerzo para mantener el pH del solvente entre las mediciones.
Como ejemplo, un cambio en el pH de ácido a básico resulta en un cambio
estructural del rojo fenol de su forma amarilla a su forma roja. La redistribución
relacionada de los electrones en las órbitas moleculares significa que el espectro
de absorción de la muestra cambia con el cambio en el pH (Figura 19).
Un último punto a tener en cuenta es que los componentes del tampón pueden
impartir su propia absorbancia. Detergentes como IGEPAL, Triton x-100 y NP-9
exhiben absorbancia en la región UV. Como resultado, se recomiendan
detergentes alternativos como Brij-35, CHAPS o Tween 20. También hay
alternativas comerciales reducidas (hidrogenadas) de Triton x-100 que reportan
una menor absorbancia UV. Donde no se pueda evitar su uso, las concentraciones
deben mantenerse al mínimo para que la absorbancia impartida por el analito sea
el componente más grande de la absorción total.
El tamaño de una molécula también afecta la desviación del grado. Las moléculas
más grandes, con más transiciones de electrones disponibles, exhibirán una
mayor absorbancia y, por lo tanto, mostrarán desviaciones incluso en
concentraciones muy bajas. Por ejemplo, la capacidad de absorción del azul de
metileno a 436 nm no cumple con la ley de Beer-Lambert, incluso en
concentraciones tan bajas como 10 μM.
Para concluir, se pueden tomar medidas para que el usuario final minimice los
efectos de las desviaciones de la muestra. La relación lineal entre la absorbancia y
la concentración, tal como lo define la ley de Beer-Lambert, es válida entre 0,1 y
1,5 UA. Con una absorbancia muy baja, las mediciones pueden ser ruidosas y con
una absorbancia mayor, ≥2,0 UA, pueden producirse desviaciones significativas
de la linealidad, lo que resulta en una subestimación considerable de la
concentración. Por lo tanto, para minimizar las desviaciones basadas en las
limitaciones de la ley de Beer-Lambert, se recomienda mantener los datos en el
rango de 0.1 a 1.0 UA. Si se requiere un ajuste para que la medición se encuentre
dentro de un rango de absorbancia preferido, es mejor cambiar la longitud de la
trayectoria de la muestra en lugar de la concentración de la muestra siempre que
sea posible.
Sources of Error
En cada caso posible, un electrón se excita desde un orbital completo (de baja
energía, estado fundamental) a un orbital anti-enlace vacío (mayor energía, estado
excitado). Cada longitud de onda de la luz tiene una energía particular asociada
con ella. Si esa cantidad particular de energía es la adecuada para hacer una de
estas transiciones electrónicas, entonces esa longitud de onda será absorbida.
Cuanto mayor sea la brecha entre los niveles de energía, mayor será la energía
requerida para promover el electrón a un nivel de energía más alto; dando como
resultado una luz de mayor frecuencia, y por lo tanto una longitud de onda más
corta, siendo absorbida.
Los enlaces π están formados por la superposición lateral de los orbitales p medio
llenos en los dos átomos de carbono de un enlace doble. Las dos formas rojas que
se muestran en el diagrama a continuación para el eteno son parte del mismo
orbital de enlace π. Ambos electrones se encuentran en el orbital de unión π
resultante en el estado fundamental.
Los grupos en una molécula que consisten en alternar enlaces simples y dobles
(conjugación) y absorber la luz visible se conocen como cromóforos.
Los complejos de metales de transición también son muy coloridos, lo que se debe
a la división de los orbitales d cuando los ligandos se acercan y se unen al ion
metálico central. Algunos de los orbitales d ganan energía y otros pierden energía.
La cantidad de división depende del ion metálico central y los ligandos.
Mientras que la interacción con la luz infrarroja hace que las moléculas
experimenten transiciones vibratorias, la longitud de onda más corta, la radiación
de mayor energía en el rango UV (200-400 nm) y visible (400-700 nm) del
espectro electromagnético hace que muchas moléculas orgánicas experimenten
transiciones electrónicas. Lo que esto significa es que cuando la energía de la luz
UV o visible es absorbida por una molécula, uno de sus electrones salta de una
energía más baja a un orbital molecular de energía más alta.
Transiciones electrónicas
Si la molécula está expuesta a la luz de una longitud de onda con energía igual a
Δ E, la brecha de energía HOMO-LUMO, esta longitud de onda se absorberá y la
energía utilizada para golpear uno de los electrones del HOMO al LUMO, es decir,
del σ al σ * orbital. Esto se conoce como una transición σ - σ * . Δ E para esta
transición electrónica es 258 kcal / mol, correspondiente a la luz con una longitud
de onda de 111 nm.
Cuando una molécula con doble enlace como el eteno (etileno de nombre común)
absorbe la luz, sufre una transición π - π *. Debido a que las brechas de energía
π - π * son más estrechas que las brechas σ - σ *, el eteno absorbe luz a 165 nm,
una longitud de onda más larga que el hidrógeno molecular.
Las transiciones electrónicas tanto del hidrógeno molecular como del eteno son
demasiado energéticas para ser registradas con precisión por espectrofotómetros
UV estándar, que generalmente tienen un rango de 220 a 700 nm. Donde la
espectroscopia UV-vis se vuelve útil para la mayoría de los químicos orgánicos y
biológicos, se encuentra en el estudio de moléculas con π conjugadosistemas En
estos grupos, la brecha de energía para las transiciones π - π * es menor que para
los dobles enlaces aislados, y por lo tanto la longitud de onda absorbida es más
larga. Las moléculas o partes de moléculas que absorben la luz fuertemente en la
región UV-vis se llaman cromóforos.
Ácido sulfanílico (paperKinetic, mechanistic and spectral studies for the oxidation of
sulfanilic acid by alkaline hexacyanoferrate(III))