TEORICO: ESPECIES REACTIVAS DEL OXIGENO (EROS)

El oxígeno presenta una doble acción en el organismo que es, por un lado, ser el último aceptor de electrones en la cadena de su transporte,
en la respiración celular; mientras que esto, por otro lado, puede traer problemas por mecanismos de toxicidad. Estos problemas son
causados por especies reactivas que pueden o no ser radicales libres.

Radicales libres: Estos son especies químicas de existencia independiente que poseen un electrón no apareado, es decir, poseen un solo
electrón en el orbital más externo. Estas especies que suelen tener vida corta, intentan bajar su energía potencial “robando” electrones a
otro átomo para lograr aparearse, intentando llegar a un número más estable en el último nivel.
El movimiento de los electrones se da atraído por la masa del núcleo, pero también sobre si mismos. Las circunferencias de su trayectoria, su
espín (S), puede ser hacia la izquierda o hacia la derecha, aumentando su energía y reactividad cuando son más de uno los desapareados,
girando en sentidos opuestos. Opuesto a esto es el caso del oxígeno en el organismo en el cual los dos electrones de la molécula O2 (uno en
cada átomo) giran hacia un mismo lado, lo cual le permite captar otros 2 electrones a la vez, pero no es tan reactivo como para lesionar, por
tanto el O2 es poco reactivo, estable y NO ES un radical libre. En cambio si giraran en sentido contrario oxidaría todo 20 veces más rápido.

Estas especies (Radicales libres), pueden formarse de 3 formas diferentes:

• Ruptura hemolítica de un enlace covalente de una molécula normal: (Es el más usual)
X : Y ---> X.+Y. En este caso, cada uno queda con un (.) electrón en su última capa, siendo un radical libre.
En este caso ambas especies quedan sin carga.
Se utiliza el término “homo” que significa que “algo queda igual”, en este caso es 1 electrón, si fuera el caso de una transformación
heterolitica, una de las especies se quedaría con (:) los dos electrones en su última capa y el otro sin ninguno, con una división de
especie iónica.

• Perdida de un electrón de una molécula normal:

En este caso, se forma un catión, por tanto el radical libre tiene carga, siendo este “(A.)” en el ejemplo.
(A -----> electrón + A.+ )

• Ganancia de un electrón de una molécula normal:

En este caso, se forma un anión, por tanto el radical libre tiene carga, siendo este “(A.)” en el ejemplo.
(A + electrón -------> A- )

Con respecto a su función en la cadena de electrones, el O2 molecular se reduce con 4 electrones y 4 protones, para formar 2 moléculas de
agua, aunque esto no siempre es así, puede tomar solo un electrón y formar un radical libre.

1. Ganancia de un electrón con la consecuente formación de un radical libre anionico “Superoxido”.

(O2 + electrón ---------> O2- )

2. Ganancia de un segundo electrón formando H2O2 la cual no es un radical libre, pero si una especie reactiva.
(Electrón + O2- + 2H+ -----------> H2O2 + O2)

3. Ganancia de un 3er electrón con la formación del radical libre “Hidroxilo”, el cual no tiene carga.
Esto puede producirse porque hay grandes cantidades del anión superoxido O2- que reaccionan con el H2O2 en la reacción de
Haber – Weiss (O2- + H2O2 ----------> OH + O2 + OH-)
O también puede ocurrir porque los metales de transición (Fe2+) ceden un electrón al H2O2 y producen la nueva especie en la
reacción de Fenton (H2O2 + Fe2+ --------> OH. + OH- + Fe3+)
Sea cual sea el caso, la ecuación general es ( H2O2 + electrón + H+ ------------> OH + H2O)

4. Ganancia del 4to electrón y formación de H2O

(OH + electrón + H+ -------------> H2O)

Aunque este es el proceso general, no es necesario que sea en el último paso de la cadena de electrones, ya que puede filtrarse algún
electrón en un paso previo y formar superoxido u otras especies, el lugar más usual para que esto suceda es en donde la coenzima Q, que
debe aceptar y transferir rápidamente electrones de varias vías.

- Antes de continuar hay que aclarar que una especie reactiva no es necesariamente lo mismo que un radical libre, hay casos como el
del peróxido de hidrogeno el cual es una especie reactiva pero no un radical libre.
- El oxígeno puede derivar también a ozono (O3) o a O2’ (oxigeno singulate), que es una forma activa del O2 molecular.
- Otra unión es la del O. Nítrico (R. Libre), con un radical superoxido O2-, el cual forma la especie reactiva “Peroxinitrito”.
- La unión de 2 radicales libres se utiliza por algunas proteínas como estabilizador de especies reactivas al desaparecer el potencial de
la nueva especie, estas reacciones que forman un “no-radical” se denominan “Dismutaciones”. (Por enzimas dismutasas).
FUENTES DE RADICALES LIBRES:
• Cadena de electrones mitocondrial, por un aumento en la concentración de oxígeno y la transferencia de electrones):
Se produce sobre todo donde la entrada al complejo I y en el paso de electrones a la y de la ubiquitina.

• Otros sistemas de transporte de electrones como citocromos P450 y b5.

• Oxidasas presentes en peroxisomas: Estas generan especies oxidantes para degradar sustratos, rompiendo enlaces, acortando las
cadenas largas de los ácidos grasos, oxidando la cadena lateral del colesterol y oxidando aminoácidos, ácido úrico y otros sustratos
utilizando oxigeno molecular con formación de H2O2, la cual luego es neutralizada a H2O por otras enzimas.
(RH2 + O2 -------> R + H2O2)

• Células involucradas con la actividad fagocitica: Estas células, como los neutrófilos o macrófagos, generan los radicales libres
hidroxilo y óxido nítrico para causar daño a los organismos invasores, romperlos y luego fagocitarlos. Esto logra un efecto
beneficioso pero con un daño en la zona alrededor, conocida como “zona umbral”.

• La enzima Xantino Oxidasa: Esta enzima participa del catabolismo de bases puricas, produciendo oxidaciones para formar Ácido
úrico del NADPH (lo oxida), pero puede cambiar su morfología y con esto su función, y utilizar como sustrato al O2 generando sobre
todo al anión superoxido (O2-) sobre todo.

Acción dañina de los radicales libres: Dañaran lípidos (lo cual puede afectar a la membrana celular y causar su muerte), a las proteínas, a
hidratos de carbono o a ácidos nucleicos.
(En el caso de la mitocondria, lo primero que se ataca y es lo más importante son los lípidos de la membrana mitocondrial doble, para luego
atacar a las proteínas de la cadena transportadora, lo cual generara más radicales libres y aumentara el problema en cadena. Finalmente
atacara al ADN mitocondrial el cual se encuentra desnudo y vulnerable, causando mutaciones; aunque esto depende de la cantidad, ya que si
son pocos los radicales libres es posible que lo mas atacado sea el ADN mitocondrial).

• Lípidos:
La proxidacion lipídica en la membrana de las organelas o de la célula es causada mayormente por el radical hidroxilo.
Los pasos de este ataque se dividen en:
o Iniciación: En este paso un lípido, relacionado con hidrogeno, entra en contacto con un OH y pierde su hidrogeno, con la
formación de agua. “Lípido con H + OH --------> Lípido solo con electrón + H2O)
Pero este lípido sin hidrogeno reacciona con un O2, formando al radical Peroxilo (LOO)
o Propagación: En este paso el LOO va a reaccionar con un lípido que tiene asociado un hidrogeno (posiblemente al lado en la
membrana, generando una cadena), esta reacción genera a la especie reactiva hidroxiperoxido lípido (LOOH) y vuelve a dejar al
lípido solo con su electrón, para reaccionar con otro O2, además, como antes se generó agua, se puede tender a generar Pte.
hidrogeno con el agua externa a la celular. El daño a la membrana la vuelve laxa, aumentando su permeabilidad a agua e iones
generando una entrada o salida desmedida de estas, produciendo la lisis celular.
o Finalización: La finalización se produce en el momento en que se lo para, o cuando la célula muere. Para detener esta reacción
se utiliza a la Vitamina E, la cual cede un electrón para generar una dismutacion y lograr la unión de un lípido sin hidrogeno con
un LOO, generando un LOOH, que no es radical libre, y un lípido asociado a un hidrogeno que se estabiliza. Las reacciones son:
(L. + vit E ----> LH + vit E radical libre-semioxidada-) y (L. + Vitamina E radical libre ----------> LH + Vitamina E oxidada).

(La lipoperoxidacion puede darse también al ácido araquidónico y fosfolípidos)

Productos de degradación de lipoperoxidos:

Va a generar lipoperoxido degradado y malondialdehido (que unidos darán 4-hidroxi-2-nonenal). El Malondialdehido es un dialdehido que si
aumenta mucho su concentración puede ser detectado en la sangre, y puede reaccionar con el grupo amino de las proteínas, uniendo una de
cada lado y generando un “entrecruzamiento proteico” lo cual obstaculiza sus funciones.

• Proteínas:
La afección de las proteínas puede causar inactivación de las enzimas glutamino sintetasa y glucosa-6-P deshidrogenasa, las cuales
participan en la vía de las pentosas y generan NADPH reducido, el cual es antioxidante.
Las proteínas normalmente mas atacadas son las que tienen metales en su estructura, mayormente metales divalentes, en las
cuales se reemplazan estos por Fe++ y se produce una reacción de Fenton en los que se oxidan los grupos carbono a carbonilo en
las proteínas. Esto es detectable en la sangre.

• Hidratos de carbono:
- La glucosa es uno de los casos, el cual puede servir como un “atrapador de radicales hidroxilos”, y de esta manera se reduce.
- El manitol y los deoxiazucares reaccionan fácilmente con los radicales libres, siendo oxidados por estos.
- El ácido hialuronico, principal proteoglicano que mantiene la viscosidad del fluido sinovial en las articulaciones, es un GAG que
contiene unidades repetidas de glucuronico y N-acetil-glucosamina, el cual puede fragmentarse por acción de radicales libres.
 • Ácidos nucleicos:
Las oxidaciones en estos pueden darse por el daño a los hidratos de carbono, sus enlaces en las pentosas, los cuales se rompen y no
mantienen unidas a las bases con el resto del ADN/ ARN. O pueden romper una base internamente por oxidación y producción de
compuesto que pueden generar mutaciones como en el caso de la guanina que formara luego de la oxidación 8-oxoguanina; la
adenina que al oxidarse formara farmamido y pirimidina; y la timina que formara luego de oxidarse, timina y glicol. Esto puede
producir mutaciones, ya que, por ejemplo en el caso de la 8-dihidroxiguanina, en vez de poder formar 2 pte hidrogeno, puede
formar 3 y con esto unirse a adenina o timina en vez de su natural a citosina.
El momento del ADN también influye ya que si esta compactado y protegido por proteínas es más difícil que pueda ser oxidado,
mientras que al extenderse para ser leído puede ser más afectado, así como tiene mas tendencia siempre el ADN mitocondrial o el
ARN mensajero.

SISTEMAS DE DEFENSA CONTRA DAÑO OXIDATIVO:

• Primarios:
o Antioxidantes:
- Vitamina E: Es el más importante antioxidante liposoluble, y tiene la función de ceder electrones para impedir la
oxidación en cadena de la membrana plasmática.
-Vitamina C: Es un antioxidante soluble que regenera a la vitamina E cediéndole sus electrones.
- CoQ: Es un antioxidante que funciona pudiendo cederle electrones a la Vit E y regenerándola.
- Vitamina A (retinol): Es un antioxidante de membrana.
- Glutatión: Es el antioxidante más importante entre los solubles. Este péptido de 3 aminoácidos con restos de cisteína se
encarga de reducir otras especies al oxidarse en su extremo tiol en GSSG por y luego reducirse utilizando NADPH a GSH
reducido, el cual puede volver a oxidarse.
- Bilirrubina: Este es parte del grupo hemo, y una hemoxigenasa la oxida a biliverdina, al mismo tiempo, en la misma
reacción, un agente oxidante queda desactivado. Lo importante de la bilirrubina es que tiene la capacidad de con mucha
velocidad volver a reducirse por la biliverdina reductasa y reiniciar el ciclo.
- Melatonina: Este antioxidante tiene tanto la función de inducir a la glucosa-6-P con la consecuente producción de NAD
reducido como la función de atrapar radicales libres (esto significa que distrae la acción del radical hasta que otros agentes
antioxidantes llegan y lo desactivan, demorando el efecto del radical.

o Sistemas enzimáticos que intervienen en el metabolismo de EROS:

- Superoxido dismutasa (SOD): estas se encuentran en peroxisomas en el citoplasma (utilizan cobre o zinc) y en las
mitocondrias (donde pueden utilizan al manganeso), en ambos casos sus metales tienen forma dimerica. Estas se
encargan de unir 2 aniones superoxidos a 2 H+ y esto da H2O2 + O2.
- Catalasa: Esta enzima, que se encuentra en peroxisomas, es la encargada de degradar el H2O2 en 2 H2O y O2.
-Glutatión peroxidasa: Esta enzima es soluble y dependiente de selenio, utiliza al glutation como sustrato con el cual
transforma al H2O2 en agua; y al LOOH en hidroxilipido (LOH) y agua.

• Sistemas secundarios:
o Enzimas lipoliticas (fosfolipasas): Degradan ácidos grasos dañados y los reemplazan por unos nuevos.
o Enzimas proteolíticas: Eliminan a las proteínas dañadas y las reemplazan por otras nuevas.
o Enzimas reparadoras de ADN: Eliminan las bases dañadas y las reemplazan por otras nuevas.
o Sustancias exógenas atrapadoras de radicales libres: Pueden ser flavonoides o antocianos.

ESTRÉS OXIDATIVO:
Esta reacción que puede ser producida en una cierta zona, como una infección por lesión especifica o puede ser una reacción sistémica
consta de un desbalance entre la producción de especies reactivas y las defensas celulares, por causa de que las especies reactivas son
producidas más rápido de lo que las defensas las pueden remover.

OXIDO NITRICO (Radical libre):

Esta especie tiene 11 electrones, 5 en el nitrógeno y 6 en el oxígeno, el cual queda con 1 desapareado en su último nivel.
Esta molécula tiene una vida media superior al resto, y se produce a partir de la arginina y el NADP reducido, lo cual genera citrulina y a este
ON, por las isoenzimas óxido nítrico sintasa, algunas de las cuales siempre están presentes en el organismo, como la endotelial (eNOS), y la
neuronal (nNOS), mientras que las isoenzimas macrofagicas solo aparecen cuando son inducidas (por eso se las llama mNOS o actualmente
iNOS).
Este óxido nítrico reacciona con proteínas que contienen Fe (Hemoproteinas), ya que les puede quitar fácilmente un electrón. Como en el
caso de la guanilato ciclasa, a la cual activa y genera que se estimule la producción de AMPc, el cual funciona como relajante muscular.
Luego de cumplir su función interacciona con la hemoglobina, la oxida quitándole un electrón y posteriormente reacciona con el O2 para
formar un nitrato. La reacción es: Fe2+ + O2 + NO ----------------> NO3- + Hemoglobina Fe3+
Otros ejemplos son la citocromo oxidasa mitocondrial, la citocromo P-450 microsomal y proteínas como la aconitasa del ciclo de Krebs.
El óxido nítrico reacciona con:

• ADN
• Sulfhidrilos de proteínas, formando nitrosotioles (RSNO)
• Anión superoxido, formando peroxinitrito (ONOO-)
• Otros radicales orgánicos como el radical peroxilo.

-Al reaccionar con el O2 (+ ½ NO) queda conformado NO2* un radical libre, pero puede combinarse con agua y otro radical libre (NO*) para
formar nitrito, o combinarse con agua y otro radical libre que es NO2* para formar nitrato. Ambos productos son especies menos toxicas que
el Óxido Nítrico y que el NO2* ya que son reactivas pero no son radicales libres.
-De esto se deduce que las funciones del óxido nítrico son buenas y malas. Entre las buenas están que al ser no polar y por tanto soluble en
un medio hidrófobo puede atravesar bien membranas y ser un mensajero celular, así como también participar en el metabolismo del sistema
nervioso, ya sea fisiológica como patológicamente, funcionar como ya se mencionó de relajante endotelial y hasta como factor citotóxico de
virus, bacterias y tumores a nivel de los neutrófilos y macrófagos en el sistema inmune.

PATOLOGIAS:

• Radiación ionizante: Genera OH* por ruptura de moléculas de agua, causado por los radicales libres sobre el ADN, lípidos y proteínas.

• Deficiencia dietaria de selenio: En enfermedad de Keshan/ glutation peroxidasa; o de tocoferoles.

• Retinopatía del prematuro: En el prematuro, la vascularización de la retina se relaciona con el oxígeno en sangre, al nacer antes de
tiempo y recibir grandes cantidades de oxígeno, por ejemplo, de una incubadora, la arteria se ramifica antes de llegar a la retina.
Cuando recibe cantidades normales no ha crecido lo suficiente, o vuelve a crecer de forma deficiente produciendo desprendimiento y
ceguera en cualquier caso.

• Artritis reumatoidea: En estos casos, el fluido sinovial (en la rodilla sobre todo) se llena de neutrófilos activados que producen radicales
libres en la articulación por infecciones, dañando el ácido hialuronico.

• Deficiencia en la enzima glucosa-6-P deshidrogenasa: Esta deficiencia afecta a los eritrocitos, ya que forma parte de la vía de las
pentosas y genera NADPH, el cual es utilizado por la glutation reductasa para generar glutation reducido. Al faltar se produce hemolisis
en los eritrocitos.

• Fenómeno de reperfusion: La xantino deshidrogenasa se transforma por anoxia, en una xantino oxidasa, la cual usa como sustrato al
O2 y forma ácido úrico pero también superoxido, lo cual afecta a la zona donde se encuentra pero también a la periferia o “zona
umbral” por este superoxido.

• Ateroesclerosis basada en la hipótesis de la modificación oxidativa de las lipoproteínas: Se produce un aumento de concentración
plasmática de LDL y colesterol que provocan se deposite ácidos grasos en la pared arterial, formando una lesión primaria aterogenica.
La injuria tisular produce hemorragias con liberación de hemoglobina por lisis de eritrocitos. Los LDL oxidados son capturados por
monocitos y macrófagos, los cuales son transformados en células espumosas. Además, los LDL oxidados dañan la túnica intima de la
arteria, contribuyendo al proceso aterogenico por disrupción del endotelio.

• Las especies reactivas del O2 pueden generar tanto como empeorar las enfermedades, y estas enfermedades suelen estar relacionados a
procesos neurodegenerativos, pero otros ejemplos además de los anteriores asociados a injuria por radicales libres son:

- Efisema/ Bronquitis
- Las neurodegenerativas (Parkinson, Huntington, Alzheimer)
- Preclamsia
- Cáncer
- Diabetes
- Alteraciones cardiovasculares
- Envejecimiento

ESTE APUNTE HA SIDO REALIZADO POR NICOLAS MAZZANTINI EL DIA 16/7/16