Cultivo in vitro de anteras y granos de polen de cucarda (Hibiscus rosa-sinensis)

Peralta Janine, Sigüenza Sasha

jbperalta@espe.edu.ec, svsiguenza@espe.edu.ec
Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales
Entregado: 06 de agosto del 2018
Introducción: se cultivó in vitro las anteras y granos de polen de la flor de cucarda (Hibiscus
rosa-sinensis) en medio Murashige y Skoog (MS) enriquecido con 2,5 mg/L de Ácido 2,4-
Diclorofenoxiacético (2,4D). El cultivo de anteras inmaduras induce al polen a división para
formar embriones o callo. Es un sistema de micropropagación de plantas frutivinicolas y
ornamentales. Permite el ahorro de espacio, tiempo y costos (Trivellini, Ferrante, & Hunter,
2015).
Protocolo: se recolectaron flores inmaduras cerradas. Se preparó la sala de siembra: se barrió
y desinfectó (Kalipto) el piso, se limpió las cámaras (alcohol 70% y sablón), se introdujeron
los materiales (algohol 70%), se prendió (20min) y apagó el UV y se prendió flujo. Se
desinfectó la flor: se lavó con agua corriente, con detergente al 2% (500 ml), con agua
destilada, con hipoclorito de sodio al 2% y 3 gotas de Tween. Finalmente, se sembró el
material: con bisturí y pinzas estériles se tomó la flor y se flameó en el mechero, se la colocó
en la servilleta y se realizó cortes para dejar libre las anteras, se raspó el polen sobre los
frascos con medio MS y se sellaron. Se llevó oscuridad y se evaluó la contaminación y
características a los 7, 14 y 21 días.
Resultados: Al haber transcurrido 21 días después de la siembra, se contó con 0% de
contaminación, un 9% de oxidación, un 6% de muerte del explante y el 62% de los explantes
no presentaron cambio de coloración. Cabe destacar que el 24% de los explantes presentó
hinchamiento mientras que el 7% consiguieron la formación de callo.
Discusión: el cultivo in vitro de anteras y polen es una técnica en la cual solo ciertas plantas
pueden desarrollar líneas homocigóticas, en otras especies ocurre una duplicación espontánea
de los cromosomas (Llorente, 2002). Entonces resultad difícil definir a simple vista si los
brotes obtenidos en la práctica son haploides.
Recomendaciones: es importante la preparación del medio de cultivo, se deben respetar las
concentraciones y cantidades de cada solución madre, fitoreguladores y vitaminas, dependerá
de éstas concentraciones el resultado que la investigación busca. Se requiere un adecuado
manejo de material e instrumentos dentro de la cámara de flujo, para evitar el crecimiento de
bacterias y hongos en los explantes. Para evitar la oxidación de los tejidos es recomendable
usar medidas preventivas como es el carbón activado, un antioxidante capaz de absorber
compuestos fenólicos del medio.

Referencias
Llorente, B. (2002). Cultivo in vitro. Sedici UNLP, 12-14. Obtenido de
http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/2211/4_-_
Trivellini, A., Ferrante, A., & Hunter, D. (2015). Transformación mediada por
Agrobacterium tumefaciens del callo de la yema axilar de Hibiscus rosa-sinensis L.
'Ruby' y regeneración de plantas transgénicas. Citeulike, 681-692.