EXTRACCIÓN DE ADN

OBJETIVOS:

Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de

su composición con sencillas técnicas.

Observar la estructura fibrilar del ADN.

Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades químico-físicas del ADN.

La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son
atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de
la célula.

Se empieza por lisar (romper) la célula mediante un detergente.

El detergente hace que la célula vacíe su contenido molecular en una disolución tampón en la que
se disuelve el ADN en ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos
moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción las proteínas
asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separadas
de el por acción del detergente.

Solo queda, por tanto, extraer el ADN de esa muestra de tampón y detergente, para lo cual se
utiliza alcohol isoamílico.
MATERIALES
Agua destilada
Sal común
Bicarbonato sódico
Detergente liquido o
champú
Alcohol isoamílico a 0°C
Alcohol de 96° (isopropanol)
Alcohol de 90° (etanol)
Material biológico (cebolla)
PROCEDIMIENTO
1. Preparar el tampón y mantener en baño de hielo.
2. Trocear o picar la muestra biológica y triturarla en mortero con un poco de agua destilada.
3. Mezclar 5 ml del triturado biológico con 10 ml del tampón frío, agitar vigorosamente
durante 2 m y filtrar usando papel de filtro.
4. Tomar 5 ml del caldo molecular y añadir 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0º C,
dejándolo resbalar por la pared del recipiente; se formará una línea de separación entre el
tampón y el alcohol.
5. Introducir una varilla de vidrio en la interfase y moverla adelante y atrás, de modo que
se irán enredando los fragmentos de ADN de mayor tamaño.
EXTRACCIÓN DE ADN DE LA SALIVA
PROCEDIMIENTO
1. Poner media cucharadita de sal común en 125 cc de agua y añadir un poco de jabón
líquido (mistol).
2. Poner un poco de agua en la boca y moverla con fuerza de una mejilla a otra durante 30
seg.
 3. Escupir al agua en un vaso de precipitados.
4. Incorporar unos cc de etanol de 96º, a 0º C, dejándolo resbalar poco a poco por las
paredes.
5. Añadir 2.5 ml de la solución salina con detergente y mover lentamente con una cucharilla
para que no se forme espuma.
6. En la interfase se formarán hebras de ADN que se podrán retirar con un gancho de vidrio,
sumergiéndolo a través de las dos capas.
7. Trasladar el ADN a un frasco con alcohol para su observación y conservación.
RESULTADOS
La saliva arrastra las células del epitelio que recubre las paredes internas de la boca y que se están
desprendiendo constantemente. La sal común (NaCl), con esa concentración, es un medio
hipertónico que provoca el estallido de las células y los núcleos, quedando libres las fibras de
cromatina.
El detergente cumple la misión de formar un complejo con las proteínas histonas y separarlas del
ADN.

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él,
hay fragmentos de ARN.
Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN
e impiden que se unan al ADN.
El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de
permitirnos ver el ADN, el alcohol lo separa de otros componentes celulares, los cuales
permanecen en la solución acuosa.