UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHOMANN

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

“PRACTICA 3: SEPARACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE

PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS”
ALUMNA:
 LUZ PIERINA QUISPE CCALLE 2016-111041

CURSO: BIOQUIMICA
DOCENTE: ROBERTO CASTELLANO CABRERA

TACNA-PERU
2018
 PRACTICA 3: SEPARACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE PIGMENTOS
FOTOSINTÉTICOS

I. OBJETIVO:

 la práctica es extraer y separar los diferentes tipos de pigmentos de

cloroplastos por cromatografía en papel en función de su polaridad relativa.
Una vez separados, se analizará su migración a lo largo de la fase
estacionaria.

 papSeelp. arar los pigmentos fotosintéticos por medio de

cromatografía
 CRueaanlitzifaicraerl ecslopreocfitlraos deenaebl
smoarcteiórnialdesdtuicdhiaodsop.igmentos

II. FUNDAMENTO TEORICO

procedLeadierencetragíoa inqduierecptoasmibeinlittae dlael vsiodla,

adetralvaésmdaeylopríarocdeesolofsotosseirnetésticvoiv.oEs,n
este proceso se distinguen dos etapas:
pigmen-toEs tfaoptoasinfotéttoicqousí,myictara: nslaformenaedragíaen
leunmeinrgoísaaqueíms icaab,sboarbjoidla fopromr alodse
ATP y NADPH.

median-teEtealpacicbliooqdueímCicaalvinó. deenl CAO

teErsmteoqpuroímceicsoa: rceoqnusieisrtee laNAfiDjaPciHóny T2P
del
producido en la etapa anterior.
embebLidaoseneenrglaía mraedmiabnratenaestilaacbosiodrabliddael pcolor
roppiglamsetonto(esn qeulecasseo ednecuceénlutrlas eouecnarliáomtaisn)a,
seninltaemrneams b(craiannaopblaacstmeráiatisc)a. (Seen deilsctiansgouedne
bdaocstetirpiaoss fodteospiingtméteicnatso)s,
fotosintéticos:

a) Ppiigmentto cparpinaczipdael: insieciatrralotas

pdreocleasoms odléecóuxlaidode- recldouroccfiilóanad; eella úentaicpoa
fotoquímica.

b) Pesigpmecetnrotoseleacctcroemsoargionsé: tsicoon,
daoqnuedlelonsoquaebsaobrbseorlbaenclolurozfielana.reEgsioenlecsadseol
de la clorofila b, los carotenoides y las ficobilinas.

anillosLpairsróclilcoorosfiqlause (foFrigmuarna u1n)

msoancrpoicgimcloenctoons
dvieverdrseossqsuuestcitounyestnatnesdleatecruaaletrso. Luonscpoimrrpolejso,
+ 2
caotnraevlécsadtieónsuMsg á toqmueodsadnedoniutrnóageensotr,ufcotrumraan
 caesni pelacnean.trEondeell aanniilloo
IvVeisneteeántcoumenotsraduencraersbidonuo
d(feitoálc).idLoaprúonpicaanodicifoe,reenscteiarifeicnadlao
ceosntruucntuarlacodheol ldaes csleogroufnildaas uanyfobr,meislo.que la
primera presenta en el anillo II un grupo metilo, y la PuedenLossercdaerol
teipnooicdaersotesnoon, epnolciiusyooprceansooidleasmodléecu4la0
cáotnosmtaoesxcdleusicvaarmboenote.
dcaerbcoanrbooneoheidrhóidgreóngoe.nLoo,sopdrienlctiippaolexsanctaorfoiltaen
qouiedecsondteiecnleorooxpílgaesntoos addeempláasntdaes

snuepoexa
rionrtiensa. son: þ–caroteno (Figura 2), luteína (Figura 3), violaxantina y

de cLadsefnicaobaibliineartsa.
que no las consideraremos en este prá tico.
Diversas técnicas cromatográficas (cromatografía en capa fina, en papel,
(pEosrtáenjepmrpelsoenlatefsicoecniaanlginaas yvfeicrdoeariztruinlaad) assony

Figura 1: Estructura de las clorofilasa y b.

rteotjarasp, iprroorlelos en columna y recientemente HPLC) permiten separar los

diferentes pigment0

Aspectos teóricos necesarios:

 Pabaorardaudnoas menejoerstceopmrpárcetincsoi,ónel
daelumlonsoadsepbeecrtáosreqauliízmaircousnayrebvioislóiógnicdoes

los siguientes temas:

- FCuanradcatmereísnttiocassdefílsaiccarsomdaetolgaralfuíaz,enenpearpge
íal. del fotón, espectros de

- aEbsstrourcctiuórna ddeepilgoms epnitgoms.entos fotosintéticos, con

énfasis en grupos

- pUobliacraecsióynapdoelalroess
complejo antena.
dpeignmtroendteoslasfomtoosliénctéutliacso.s en los cloroplastos: el

Actividades:

Clorofila a = 12,7 x A663 - 2,69 x A645

Clorofila b = 22,9 x A645 - 4,68 x A663

-1
Exprese la concentración de clorofilas como mg . g de peso fresco.
Sg
edpearhaocjaiósnádlaempoig,mseinntnoesrvpaodrucrraosmgartaongdraefsía,
ceonrtpaadpaes:l ecnolotrqouceitoesn. Aundicmioonrteer7o m2 l de
entasnaoylo8. 0% y homogenice el tejido. Filtre, y transfiera el extracto a un
tubo
Pétreerpdaerepuentraólecoubeancuronmfratsocgor,áyficta,peaghreergmaéntdic
oam2,e5nmtel (dFeiguarcaet4o)n. aE,nyun2a0timral de
pdaepuenl acrpoimpeattaogPráafsicteouWr.
hSaetqmuaencnuºid1aedfoescatúmeenlatesileamsbieramdberal
ecxotnracutno,sceocnadaoyrude coabneallyou, dyardeepithailola, yopderjeaceiól
nsisutneamsadeoncerevpeocseos.haSsutsapqeunedaellafretinrateednelesl
ofrlvaesncote,
llegue al extremo del papel.

Figura 4: Esquema del sistema empleado en la cromatografía en papel

Cunoartedelaslabsafnradcacsioyneelsúyoablatesnsideapsa,raledaamaebnsoter,b

aconncia5smelndtreee3ta8n0oly8702%0.
intervalos de 10 nm, usando etanol 80% como
nEmnblanco.
,cacodna

Preparación del informe:

1m)gCdaelcpuilgemlaenctoon.cge n tdraecmióantedreiacfloreroscfla.sa y b en el
- 1

extracto bruto, y exprese en 2cr)oGmratfoiqgureafeíal esnppeacptreol.de

absorción de las diferentes fracciones separadas por

3 de 5
 RESULTADOS:

abs muestra
380 2.412
390 2.579
400 2.65
410 2.636
420 2.875
440 1.91
460 1.884
480 2.428
500 1.226
520 0.897
540 0.923
560 0.662
580 0.508
600 0.83
620 0.769
640 0.802
660 1.477
680 1.115
700 0.193
720 0.172
3.5

2.5

1.5

0.5

0
350 400 450 500 550 600 650 700 750

CUESTIONARIO:
1pr)OETENÍNQAUSÍ,MIECTAC,ANMAELÍDTIICAAN,TEPAREAL
LEAMCPULAENOTIFIDCEACITÓÉNCNDICEACSAREBSOPHEIDCRTAROTOF
OST,OAMMÉITNRIOCÁACS,IDOSSE,

rneoqueiserneecdeesl aaruiox,ilipoudeestounqauecusrevadipsaptorónne.nEdne
eelccuaascoiodneslaqsucelopreorfmilaitsean, bc,alecsutloar seun

binarios mediante espectrofotometría”.

cteoxntcoesntdraecióqnu.ím¿iCcaómaonaslíetichaa,brcáonnsgueltneerealdoteem
sata: s“Reecusoalcuiocinóens?d.eUsniastepmistaas:

2un) aObcsaerarvcetelraísteicsatruecnturcaomdeúnlo:
slapigpmreesnetnocsiafodtoesindtoébtilceoss.eTnoladcoess
¿Cuál será la importancia de los mismos en el proceso fotosintético?.
ecllonsjupgoasdeoesn.
3fo)toOsinbtséetricvoes,dyetlueengidoampientsee enl uensapescetlrvoa
tdropicae abls,ocrocinóndifedreentloes
epsigtramtoesntodse

v(leognegtiatucdiódne. Loansdae)sqpueeciaeqsudeelllaessdtreal

teoshtreartboáacreboó,re¿or?e.cibirán luz de igual calidad

4fo)toEsninteéstticeopsr.á¿cCticóomhoemprooscerdeearliízaadpoaruanreeaslpiz
fotosíntesis?.
eacrtroundeesapbescotrrociódne daeccpiiógnmednetolas

Bibliografía recomendada:

Caumrtisp,bHel.l,2N0.0200. B02io. lBoigoílao,g6yt,a6. tEad. iEcidóinci.óEnd.

iLtorniaglmMaénd, iIcnac.Panamericana TPauibzl,ishLinyg CZoemigpear,nyE,
.In1c.999. Plant Physiology. The Benjamin/ Cummings