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MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS
PRÁCTICA DE LABORATORIO
CULTIVO DE MICROORGANISMOS
CICLO : V
AYACUCHO – PERÚ
2014
I. INTRODUCCIÓN 1
II. OBJETIVOS: 2
4.2. PATOGENIA
4.2.1 VIRULENCIA
4.3. TRATAMIENTO
4.4. CALSIFICACION
FILTRO DE MEMBRANA 10
1. PREPARACION DE LA MUESTRA
5. FILTRACON DE MEMBRANA
8. RECUENTO
VII. CONCLUSIONES 23
VIII. INTRODUCCIÓN
IX. OBJETIVOS:
- Deterinacion de coliformes totales y fecales en la planta de tratamiento de
EPSASA.
- Describir el método de ensayo para la numeración de Coliformes totales por
técnica de Filtración de membrana
- Identificar el uso de medios de cultivo de acuerdo al microorganismo a
estudiar.
- Interiorizar en el reconocimiento de los materiales empleados en la siembra
de microorganismos.
- Determinar si en las aguas se encuentran coliformes totales o fecales.
X. FUNDAMENTO TEÓRICO:
Escherichia
Klebsiella
Enterobacter
11.2. PATOGENIA
La Escherichia coli puede causar infecciones intestinales y extra
intestinales generalmente graves, tales como infecciones del aparato
excretor, vías urinarias, cistitis, Uretritis, meningitis, peritonitis, mastitis,
septicemia y neumonía Gram-negativa.
4.2.3 VIRULENCIA
La Escherichia coli está dividida por sus propiedades virulentas,
pudiendo causar diarrea en humanos y otros animales. Otras
cepas causan diarreas hemorrágicas por virtud de su
agresividad, patogenicidad y toxicidad. En muchos países ya
hubo casos de muerte por esta bacteria. Generalmente pasa en
niños entre 1 año y 8 años. Causado generalmente por la
contaminación de alimentos, y posterior mala cocción de los
mismos, es decir, a temperaturas internas y externas menores
de 70 °C.
11.3. TRATAMIENTO
El uso de antibióticos es poco eficaz y casi no se prescribe. Para la
diarrea se sugiere el consumo de abundante líquido y evitar la
deshidratación. Cuando una persona presenta diarrea no debe ir a
trabajar o asistir a lugares públicos para evitar el contagio masivo.
En algunas patologías como la pielonefritis hay que considerar el uso de
alguna cefalosporina endovenosa.
11.4. CALSIFICACION
Se distinguen seis cepas según su capacidad patógena, -también se les
puede llamar virotipos-: Escherichia coli enteropatogénica (ECEP),
enterotoxigénica (ECET), enteroinvasiva (ECEI), enterohemorrágica
(ECEH), enteroagregativa (ECEA) y de adherencia difusa (ECAD).
11.4.1. Escherichia coli enteropatogénica (ECEP) Esta cepa causa
diarrea en humanos, conejos, perros y caballos, al igual que la
enterotoxigénica, pero la etiología y los mecanismos moleculares
de colonización son diferentes. Carece de fimbrias y no produce
las toxinas ST y LT, pero utilizan la proteína intimina, una
adhesina, para adherirse a las células intestinales. Este virotipo
posee una serie de factores de virulencia que son similares a los
que se encuentran en Shigella, como la toxina shiga. La
adherencia a la mucosa intestinal causa una reordenación de la
actina en la célula hospedante, que induce una deformación
significativa. Estas bacterias son moderadamente invasivas:
penetran en las células hospedadoras provocando una
respuesta inflamatoria. La causa principal de diarrea en los
afectados por esta cepa son seguramente los cambios
provocados en la estructura de las células intestinales.
11.4.2. Escherichia coli enterotoxigénica (ECET) Se parece mucho a
Vibrio cholerae, se adhiere a la mucosa del intestino delgado, no
la invade, y elabora toxinas que producen diarrea. No hay
cambios histológicos en las células de la mucosa y muy poca
inflamación. Produce diarrea no sanguinolenta en niños y
adultos, sobre todo en países en vías de desarrollo, aunque los
desarrollados también se ven afectados. Emplea varias toxinas,
incluyendo la enterotoxina resistente al calor y la enterotoxina
termolábil.
11.4.3. Escherichia coli enteroinvasiva (ECEI) Es inmóvil, no fermenta
la lactosa. Invade el epitelio intestinal causando diarrea
sanguinolenta en niños y adultos. Libera el calcio en grandes
cantidades impidiendo la solidificación ósea, produciendo artritis
y en algunos casos arterioesclerosis. Es una de las E. coli que
causa más daño debido a la invasión que produce en el epitelio
intestinal.
11.4.4. Escherichia coli enterohemorragica (ECEH) La convención
internacional de nomenclatura de patógenos ha recomendado el
uso de STEC (Shiga Toxin Escherichia coli) para este grupo,
debido a que estas bacterias producen una toxina citotóxica para
células Vero de cultivo de similaridad estructural a la toxina
producida por Shigella dysenteriae. Las STEC producen
verotoxinas que actúan en el colon. Sus síntomas son: primero
colitis hemorrágica, luego síndrome urémico hemolítico (lo
anterior más afección del riñón, posible entrada en coma y
muerte), y por último, púrpura trombocitopénica trombótica (lo de
antes más afección del sistema nervioso central). Esta cepa no
fermenta el sorbitol y posee un fago, donde se encuentran
codificadas las verotoxinas, también llamadas "Toxinas Shiga",
no posee una fimbria formadora de mechones, en vez de esto
posee una fimbria polar larga que usa para adherencia.
11.4.5. Escherichia coli enteroagregativa (ECEA) Sólo encontrada en
humanos. Son llamadas enteroagregativas porque tienen
fimbrias con las que aglutinan células en los cultivos de tejidos.
Se unen a la mucosa intestinal causando diarrea acuosa sin
fiebre. No son invasivas. Producen hemolisina y una
enterotoxina ST similar a la de las enterotoxigénicas. se le
asocian dos toxinas:
toxina termoestable enteroagregante (EAST)
toxina codificada por plasmidos (PET)
11.4.6. Escrerichia coli adherencia difusa (ECAD) Se adhiere a la
totalidad de la superficie de las células epiteliales y
habitualmente causa enfermedad en niños inmunológicamente
no desarrollados o malnutridos. No se ha demostrado que pueda
causar diarrea en niños mayores de un año de edad, ni en
adultos y ancianos.
XII. M
A
T
E
R
I
A
L
E
S
U
T
ILIZARSE EN LA TÉCNICA O MÉTODO ESTANDAR FILTRO DE
MEMBRANA
MUESTRA
MICROPIPETA
PLACAS PETRI
UNIDAD DE FILTRACION
FILTROS MEMBRANA
ALMOHADILLAS ABSORBENTES
PINZAS DE PUNTA PLANA
MEDIO M ENDO
MEDIO MFC
12.1. MEDIOS DE CULTIVO
9. PREPARACION DE LA MUESTRA
Seleccionar el tamaño (volumen) de la muestra, el cual
dependerá de la densidad bacteriana que se desee esperar, en
el caso de las muestras de agua potable, estará limitada por el
grado de turbidez o por el crecimiento de no Coliformes en el
medio.
El volumen ideal de muestra, es aquel que nos proporciona un
recuento de 20 a 80 colonias de Coliformes y no más de 200
colonias de todos los tipos. En el caso de agua potable se
recomienda filtrar volúmenes de 100 - 500 mL o muestras
duplicadas de volúmenes pequeños (50 ó 25 mL). Para otros
tipos de agua se procede a realizar las respectivas diluciones.
Las muestras deben recolectarse en frascos estériles de 500
mL, de boca ancha con tapa rosca. En el caso que es agua
tratada y tiene cloro residual, los frascos deben contener tío
sulfato de sodio al 3% (0,25 mL por cada 250 mL de muestra).
En el caso que se filtre volúmenes de 20 mL se debe añadir 10
mL de agua de dilución estéril al embudo antes de la filtración,
permitiendo de esta manera aumentar el volumen de la muestra
y una mejor dispersión uniforme de la muestra en la superficie
de la membrana.
Las placas de agar Endo Les, deben atemperarse (colocar las
placas a 35ºC), antes de iniciar el proceso de análisis, así
mismo, marcar cada placa con el código de la muestra, fecha y
dilución.
Preparar las diluciones correspondientes de la muestra, se debe
agitar vigorosamente aproximadamente 25 veces, para asegurar
una buena homogenización, transferir con una pipeta estéril un
volumen de 10 mL de la muestra a un frasco con 90 ± 2 mL de
agua de dilución. De esta manera se tiene la primera dilución
(10-1).
Homogenizar el frasco que contiene la dilución (10-1), con una
nueva pipeta estéril transferir 10 mL a un nuevo frasco de
dilución, teniendo así la segunda dilución (10-2). Continuar con
este proceso hasta realizar todas las diluciones del caso,
dependiendo del grado de contaminación de la muestra.
Ordenar los frascos conteniendo las diluciones, en secuencia
decreciente de concentración (de mayor a menor dilución),
cuando se trabaja con diluciones se empieza con la mas diluida.
16. RECUENTO
Con este trabajo se logró tener el conocimiento de que si las aguas de las cuales
nosotros adquirimos puedan estar contaminadas o libres de coliformes para el
consumo humano.