Tema11.

Estequiometría y cinética microbiana.

Curva de crecimiento. Fases. Factores
que influyen. Crecimiento exponencial.
Ecuaciones
Cinética enzimática. Factores que
influyen. Constante de Michaelis.
Inhibición competitiva, no competitiva,
acompetitiva , irreversible. Ecuaciones.
Aplicaciones en la industria
 Crecimiento
Crecimiento implica un aumento ordenado
de todos los componentes de un organismo
y no solamente de alguno de ellos

Crecimiento de población

Es el crecimiento de una población donde el

número de células se duplica cada cierto
tiempo
CICLO CELULAR
Proceso de desarrollo de un
organismo aislado.
• replicación del material genético,
• síntesis de componentes
celulares,
• elongación y división para dar
lugar a dos células hijas.
La duración del ciclo celular
coincide con el tiempo de
generación
CRECIMIENTO
MICROBIANO
Es el aumento del número
de microorganismos a lo
largo del tiempo. Por tanto,
nos referimos al crecimiento
demográfico de una
población.

El crecimiento de una población resulta de la

suma de los ciclos celulares de todos los
individuos de dicha población.
Requisitos para el crecimiento
microbiano
Los requisitos para el crecimiento microbiano son:

¾ Inóculo viable
¾ Fuente de energía
¾ Medio de cultivo con los nutrientes necesarios
¾ Ausencia de inhibidores
¾ Condiciones ambientales apropiadas.
 Crecimiento Celular
Aspectos fundamentales

Estequeométrico:

¾ la concentración final de células depende de la

concentración y composición del medio de
cultivo
¾ balance de materia y energía de los procesos de
crecimiento celular

Cinético:

¾ velocidad en la que se desarrolla el proceso

 Estequiometría

Consideramos al crecimiento de un
organismo como una reacción química. Por
lo tanto se pueden formular ecuaciones y
realizar el balance de esas ecuaciones.
sustrato
biomasa
CwHxOyNz
c CHaObNd

b O2 célula d CO2

fuente de N
a HgOhNi e H2O

CwHxOyNz + a HgOhNi + b O2 c CHαOβNδ + d CO2 + e H2O

¿qué peso de células (o biomasa) corresponde a

"un mol"?.
 Balance de elementos
Fórmula Promedio : C = 46.5; H = 6.94; 0 = 31.0; N = 10.85
de microorganismo
CnH l O q Nm CHl/n Oq/n Nm/n
"Fórmula Mínima" de microorganismo promedio:

CH1.79O0.5N0.2

Cálculo de un carbono mol de biomasa:

1 C-mol de biomasa =cantidad de biomasa que contiene
un átomo gramo de Carbono.

12 + 1.79+ 16*0.5 + 14*0.2 = 25.8 g

0.95
 Cómo se llega a la fórmula mínima?

Mediante un análisis químico elemental se obtiene en % la

Fórmula Promedio de microorganismo:
C = 46.5; H = 6.94; 0 = 31.0; N = 10.85
Esto suma alrededor del 95% el 5% restante serán los otros
componentes celulares P, S, minerales, etc.
Para saber a cuantos átomos gramo corresponden esos
porcentajes, entonces:
46/12= 3,875 C;6,94/1= 6,94 H; 31/16= 1,9375 O; 10,85/14= 0,775 N

Para expresar todo

en átomos C,
dividimos por 3,875
C 3,875/ 3,875=1
H 6,94/ 3,875= 1,79
O1,9375/ 3,875= 0,5
N 0,775/ 3,875= 0,2
"Fórmula Mínima" de
microorganismo promedio:
CH1.79O0.5N0.2
Ahora podemos calcular
el valor de:
1Cmol de biomasa
Por tanto una concentración de biomasa:

X g/l X/25.8 C-mol de biomasa l-1.

equivale a

o bien
Xσ x / 12 C-mol de biomasa l -1 .

Donde σx =a fracción de Carbono de la biomasa (0.465

para el "microorganismo promedio").
Esta última forma de calcular los C-moles de biomasa es
ventajosa ya que sólo requiere conocer σx ; un dato de
bibliografía.
Composición elemental de algunos microorganismos

Microorganismo Sustrato Fórmula

limitante Elemental
Aerobacter aerogenes glucosa CH1.78N0.24O0.33

Klebsiella aerogenes glicerol CH1.74N0.22O0.43

Candida utilis glucosa CH1.84N0.2O0.56
Candida utilis etanol CH1.84N0.2O0.55

S. cerevisiae glucosa CH1.70N0.17O0.46

S. cerevisiae Etanol CH1.83N0.56O0.17
Promedio CH1.79O0.50N0.20
De forma análoga definimos:
•1 C-mol de fuente de carbono y energía: cantidad de
fuente de carbono y energía que contiene 1 átomo gramo
de carbono.
•1 C-mol de producto: cantidad de producto que contiene
1 átomo gramo de carbono.

Ejemplos:

C6H 12 O 6 CH2 O (C-mol de glucosa)

C2H 6 O CH3 O0.5(C-mol de etanol)

Rendimiento Celular

En la práctica, para el cálculo del Yx/s se emplea la

expresión:

Si además se forma algún producto :

Rendimiento en Producto
Son parámetros de importancia fundamental dentro de la
microbiología industrial, pues dan una medida de la
eficiencia del proceso de producción.
En un proceso destinado a la producción de biomasa, el
objetivo será maximizar Y x/s y minimizar Yp/s.
Los valores de yx/s e yp/s se calculan a partir de Yx/s
e Yp/s mediante las expresiones:
 Balance de materia

CwHxOyNz + a HgOhNi + b O2 c CHaObNd + d CO2 + e H2O

Balance de C w=c+d
Los coeficientes
Balance de H x+ag=cα +2e estequiométricos
están referidos a
un C-mol de
Balance de O y+ha+2b=cβ+2d+e
fuente de C y
energía
Balance de N z+a i=cδ c =y X/S

d= y CO2/S

Tenemos 4 ecuaciones con 5 incógnitas

Para resolver definimos el coeficiente de respiración RQ, = moles
de CO2 producidos por moles de O2 consumidos, :

moles de CO2 producidos d Valores de RQ

RQ = =
moles de O2 consumidos b S. cerevisieae = 1,033 (glucosa)
S cerevisieae = 0,43 (hexadecano)

c= yX/S = YX/S σx Yx/s = c-moles de biomasa formada

σs por cada C-mol de fuente de
CyE

Donde σ x y σ s es la fracción de carbono en la biomasa

y en el sustrato respectivamente.
σ x ؆ 0.465
Sabemos que yx/s + y p/s + y CO2/s = 1

En la práctica se encuentra que:

Ejemplo:

Se cultivó la levadura Candida utilis en un medio conteniendo glucosa,

SO4(NH4) 2 y sales.

Concentración inicial de microorganismos X0 = 0.53 g l -1

Concentración inicial de glucosa So = 15.2 g l -1
En 9.5 horas, se consumió la glucosa Sf = 0, y0.12 3 mol de O2 l-1
Se produjeron 0.179 mol de C02 l-1 y
biomasa Xf = 6.07 g l -1 (Xf)
Se desea averiguar si, además de biomasa, se formó algún
producto.
Como no se dispone de datos de la composición elemental de C.
utilis, se supone un microorganismo promedio
Del mismo modo se tiene que yco2/s = 0.354.

sumando se ve que

Puesto que la suma de ambos rendimientos es muy inferior a

1, es evidente que se ha formado algún producto cuyo
rendimiento será= 0,230
 Cinética
Microbiana
 Lista parcial métodos para cuantificar el
crecimiento de poblaciones microbianas

¾ Recuento directo de células en celda

¾ Recuento de colonias crecidas en placa
¾ NMP
¾ Medida de peso seco por gravimetría
¾ Nefelometría
¾ Turbidimetría
¾ Correlación entre microorganismos y el nivel de un componente
celular (nitrógeno, proteína, ADN, ATP, etc.)
¾ Correlación entre microorganismos y una actividad metabólica
(consumo de substrato, formación de producto, emisión de luz,
etc.)
 Fases de crecimiento en cultivo batch

IV V VI
Fase
I II III
Log biomasa

I Lag o de retardo
II Aceleración
Exponencial
III (logarítmica), de
producción
IV Desaceleración
V Estacionaria
VI Decaimiento o muerte

tiempo
 Parámetros que caracterizan el
desarrollo de un cultivo

I. Velocidad específica de crecimiento

II. Tiempo de duplicación
III. Número de generaciones/hora
IV Rendimiento del crecimiento
 I Velocidad específica de crecimiento : μ
μ = cambio de masa por unidad de tiempo y por unidad de masa(h-1)

dx/dt = μ x

1/x dx = μ dt ó 1/N dN = μ dt

Integrando

ln x = ln xo + μ t ó ln N = ln No + μ t

log x = log xo + μ /2,303 t

 ln x
ó
ln N
μ ln (x/xo) = μ t

ln xo ó
ln No
x/xo = e μ t
tiempo
log x
ó
log N
x = xo e μ t
μ/2,303

log xo ó
log No

tiempo
II. Tiempo de duplicación
Crecimiento Bacteriano: Incremento del Nº de células
Número de
Generaciones
1
tD = tiempo para
duplicar la biomasa.
2 1

4 2

8 3

4
16

Incremento Exponencial en el número de células

 Nº células Nº de
generaciones
1 20
2 21 1
4 22 2
8 23 3
16 24 4

X 2n n

Para t = tD x = 2 xo
y para t = tD*n X = Xo * 2n

ln (x/xo) = μt ln (2 xo/xo) = μ tD
tD = ln 2 / μ = 0,693 / μ tD varía
inversamente con μ
μ = ln 2 / tD = 0.693 / tD
Tabla 4. Valores típicos de tiempo de
duplicación o generación (td)

Tipo de organismo td (h)

Bacterias 0,3 – 2,0

Levaduras 1,0 – 4,0

Hongos filamentosos 2,0 – 4,0

Microalgas 18 – 35
Células animales (in
20 - 40
vitro)
 Tiempo de generación en E. coli - 20 min.

PROBLEMAS

Si una célula de Escherichia coli se duplica continuamente

por 2 días , cuál será el peso del cultivo? Considerar que
una célula pesa~10-12 g

Si E. coli contiene un 55% de proteínas, considere a

cuantas vacas sería proporcional (Peso de vaca 600 Kg)
 III. Número de generaciones
Nº células Nº de
generaciones
1 20
2 21 1
4 22 2
8 23 3
16 24 4

X 2n n

x = xo 2 n
log X = log Xo + n log 2 n = (log X - log Xo) / log 2
tD = t / n μ = ln 2 .n
 IV Rendimiento del crecimiento.
Coeficiente de rendimiento = Y
Y = peso de bacteria formada (g/l) / peso de nutriente
limitante consumido (g/l)

Xm - Xo = Y So Xm
Xm = Xo + Y So
Y

Xo

So
(mg/ml)
Efecto de la concentración de nutrientes
sobre la velocidad específica de crecimiento
μ

μ = μ max * S / Ks + S

S (mg/ml)

Ejemplos de KS:
la KS para la glucosa en E. coli es 1·10-6M
la KS para el triptófano en esta bacteria es 2·10-7 M
Cuando [S] < 10 Ks µ = f(S)
Cuando [S] > 10 Ks µ = µ max
La presencia de inhibidores del crecimiento en el medio de
cultivo causa disminución en el valor de µ. La substancia
inhibidora puede ser un componente del medio de cultivo o
un producto formado.
El tipo de inhibición, igual que en cinética enzimática,
puede ser competitiva o no competitiva.
Como a > 1 si existe I resulta
Competitiva la afinidad del
microorganismo por el S
disminuída.

Donde:

No Competitiva En este caso el valor de µm

resulta afectado.
Cuando existen en el medio de cultivo inhibidores del
crecimiento, en concentraciones relativamente
elevadas, sobre todo de fuentes de Carbono y Energía.
para considerar éste efecto se puede utilizar

Como una alta concentración de sutrato puede inhibir el

crecimiento, impone una restricción a la concentración
de los medios de cultivo que se pueden emplear en la
práctica, y con esto a la concentración final de biomasa
que se puede obtener.
 Cinética de la utilización de substrato y
de la formación de producto
La formación de producto y el crecimiento están
relacionados con la utilización (consumo) de nutrientes.
Para establecer las relaciones entre ellos, se utilizan
ecuaciones de balance de materiales.

dS d SG d SM d SP
− =− − −
dt dt dt dt
En términos de concentraciones:
dX
Velocidad específica de crecimiento: μ=
X dt

−dS
Velocidad específica de consumo de substrato: qS =
Xdt

d
Pd
X
t
Velocidad específica de formación de producto: qP =
 Consumo de sustrato

Hemos definido

Reordenando esta y derivando respecto del tiempo :

o bien:

Y considerando que

Será:

También puede expresarse como:

 Mantenimiento celular
Consumo de sustrato para el mantenimiento de funciones vitales
(recambio de material celular, mantenimiento de gradientes de
concentración y movilidad).
Para considerar este consumo Pirt propuso la siguiente ecuación para
la velocidad de consumo de la fuente de carbono y energía

donde ms es el coeficiente de mantenimiento e Y'x/s es el

rendimiento que se obtendría si el mantenimiento fuese
nulo. Yx/s = rendimiento observable,
Y' x/s = rendimiento teórico evaluado
Y x/s < Y'x/s, indirectamente mediante la ecuación
anterior
dividiendo por r x, y considerando las ecuaciones

Resulta:

O sea que cuando:

Tabla 5. Valores típicos de velocidad específica de
consumo de substrato para mantenimiento (m)

Organismo m (g/gh)
Lactobacillus casei 0,135
Aerobacter cloacae 0,094
Saccharomyces cerevisiae 0,036
Penicillium chrysogenum 0,022
Candida utilis 0,170
Azobacter vinelandii 0,15
Klebsiella aerogenes 0,04
 Para la formación de producto:

Introduciendo los parámetros cinéticos y los dS d SG d SM d SP

− =− − −
coeficientes de rendimiento en la ecuación : dt d t(35) d t dt

dS μX q X
− = + mX + P (36)
dt YG YP
μ qP
qS = + m + (38)
YG YP

Y como μ 1 1 m YP/S 1(37)

qS = = + +
YX/S YX/S YG μ YX/S YP

Definiendo YP/X = coeficiente de rendimiento de producto

(39) por
cantidad de biomasa producida, :

=
dP
=
YP/S O sea 1 1 m YP/X
YP/X
dX YX/S = + +
YX/S YG μ YP
Para la formación de producto:

d
Pd

q
X

Y
t YP/S

P
/
S
= = qS X = μ X = YP/X μ X
YX/S

Y
P

P
/
S
= qS
q
P
= YP/X μ
La relación cinética entre crecimiento y formación de producto
depende del papel del producto en el metabolismo microbiano. :
a) Formación de producto asociada al crecimiento (clase 1)
b) Formación de producto parcialmente asociada al crecimiento,
cinética mixta (clase 2, situación intermedia entre 1 y 3)
c) Formación de producto no asociada al crecimiento (clase 3).
 Modelos cinéticos para la formación de producto
Formación de producto asociado al crecimiento
(fermentaciones de clase 1, metabolitos primarios).
qP = α μ
α es un coeficiente cinético y en particular se demuestra
que α = YP/X

Formación de producto parcialmente asociada al

crecimiento (fermentaciones de clase 2, cinética mixta).
Modelo de Leudeking & Piret (1959) de dos parámetros, α y β.
qP = α μ + β
Formación de producto no asociada al crecimiento
(fermentaciones de clase 3, metabolitos secundarios)
qP = β