LABORATORIO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS - UNISUCRE

TÍTULO: EXTRACCION DE CROMOSOMAS DE CELULAS VEGETALES

LABORATORIO No. 2

Los seres diploides pluricelulares se desarrollan a partir de una célula original, “el cigoto",
portadora de dos dotaciones cromosómicas homólogas, una procedente del padre y otra de la
madre.

Al proceso de división nuclear se denomina mitosis, mediante el cual una célula da lugar
a dos células hijas, cada una con una dotación cromosómica idéntica a la de la célula
parental.

La división celular se completa mediante el mecanismo de la citocinesis, en el que se

reparten más o menos equitativamente (nunca con la precisión de la mitosis) los
orgánulos y componentes citoplasmáticos a las células hijas, y las independiza por la
formación de la membrana citoplasmática.

Estos dos procesos normalmente van sincronizados.

El significado biológico de la mitosis es asegurar la conservación del patrimonio

hereditario nuclear en el proceso de formación del individuo adulto.

Es interesante el estudio de la mitosis en todos los organismos, ya que ello nos permite
observar de forma directa la base física de la herencia y la forma de la transmisión de los
genes de una célula a otra. Asimismo, es interesante por su aplicación en Citotaxonomía
y Mejora de plantas y animales, ya que por medio de dicho estudio podemos observar la
morfología de los cromosomas, así como su número, perrnitiéndonos de este modo
poder catalogar una especie, además de por rasgos morfológicos, por sus características
cariológicas.

Una célula que no está en división se dice que está en Interfase:

En este periodo se produce una gran actividad metabólica, ya que es cuando los genes
entran en acción, aunque no todos; únicamente lo harán aquellos cuyos productos sean
necesarios para cada célula en particular, de acuerdo con su función.

Así mismo, también tiene lugar el proceso de duplicación de los cromosomas, quedando
cada uno de ellos compuesto por dos cromátidas idénticas. El periodo durante el cual
ocurre este proceso se llama S (periodo de síntesis). Este periodo está precedido por un
periodo G1 y seguido de un periodo G2, en los cuales la célula se dedica al metabolismo
y crecimiento, pero no a la replicación cromosómica.
Este ciclo se repite una y otra vez cuando las células están proliferando. Las células
diferenciadas que no se dividen, quedan indefinidamente en un estadío denominado
G0, situado antes de S, por lo que el material hereditario no se replica.

Aunque la mitosis es un proceso continuo, ciertos sucesos límites sirven para identificar
cuatro etapas:

1. profase
2. metafase
3. anafase
4. telofase
OBJETIVOS

Reconocer la interfase y las distintas etapas de la mitosis en preparaciones citológicas de Allium

Sativum.

NOTA: Traer placas, laminillas (cubreobjetos), Colocar con días de antelación una cebolla o una
cabeza de ajo por el extremo donde crecen en contacto con agua está contenida en un vaso
desechable, traer el día de la práctica el material biológico contenido en el agua.

MATERIAL
Para el estudio de la mitosis se han de emplear tejidos que están en división celular activa.
En la presente práctica vamos a utilizar raíces de ajo (Allium sativum).

El procedimiento a seguir para el tratamiento de las raíces de Allium es el siguiente:

PROCEDIMIENTO

1. Se cortan los ápices de las raíces jóvenes de un tamaño aproximado de 5 mm de longitud.

2. Se colocan en un vidrio de reloj o caja de Petri y cubrir con unos 2 ml de orceína acética
clorhídrica.
3. Se deja actuar el colorante por 10 minutos.
4. Tomar el recipiente donde se colaron las raíces por un borde y se lleva a calentamiento
evitando ebullición, al observar la emisión de vapores se retira de la llama.
5. Con unas pinzas finas tomar con cuidado una raíz y colocarla sobre un portaobjetos,
cortar los últimos 2 o 3 milímetros y desechar el resto.
6. Colocar el cubreobjetos y encima una almohadilla echa de papel, hacer presión con el
dedo pulgar, primero suave después más intensa, para aplastar la muestra, técnica
conocida como “squash”.

Observación microscópica. - Una vez obtenida la preparación, ésta se coloca en un

microscopio de la forma ya descrita y se pasa a su observación.

Aspectos que se han de observar:

A. INTERFASE: La cromatina aparece bastante homogénea.

B. PROFASE: La cromatina comienza a condensarse. Los cromosomas aparecen

como filamentos delgados.

C. METAFASE: Cada cromosoma integrado por dos cromátidas hermanas se disponen

en el plano ecuatorial.

D. ANAFASE: Las cromátidas hermanas se separan y comienzan a migrar hacia los

polos opuestos de la célula. Ahora los cromosomas se observan formados por una sola
cromatida con los centrómeros dispuesto hacia los polos.

E. TELOFASE: No es posible individualizar los cromosomas. La cromatina comienza a

condensarse en ambos núcleos hijos.

ACTIVIDAD

1. Recuento de células en interfase y mitosis

2. Índice mitótico (Porcentaje de células en mitosis en la población meristema total).

3. Índice de fases (profase, metafase, anafase y telofase) % células en cada fase de la

mitosis, dentro del total de células mitóticas.