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Fluorescencia
Fluorescencia
Objetivos
Aprender a usar un fluorómetro de filtros.
Determinar cómo afecta el pH del disolvente en la intensidad de la fluorescencia.
Determinar cómo afecta la concentración de riboflavina en la intensidad de la fluorescencia.
Resultados
CONCENTRACION DISUELTO EN DISUELTO EN DISUIELTO DISUELTO
(ppm) AGUA HCl EN EN NaOH
CH3COOH
0 0 0 0 0
1 1.2 0.16 0.76 0
2 1.95 0.27 1.45 0.01
3 2.6 0.4 2.05 0.01
4 3.83 0.52 2.64 0.03
5 4.51 0.66 3.24 0.04
10 17.26 1.12 5.51 0.06
50 22.15 2.1 10.15 0.13
pH 5 3 1 13
TABLA 1. Resultados de la curva de calibración de riboflavina en diferentes medios.
25
20
Intensidad de emisión
15
10
0
0 10 20 30 40 50 60
-5
Concentración (ppm)
Intensidad de emisión
3
0
0 1 2 3 4 5 6
-1
Concentración (ppm)
Discusión de resultados
En esta práctica, nuestro analito fue la riboflavina, sustancia resistente a ácidos fuertes y
que en solución acuosa tiene una fluorescencia amarilla muy intensa. La fluorescencia es
un tipo de luminiscencia que se produce cuando una sustancia es excitada por radiación
luminosa. La longitud de onda de la luz emitida es normalmente más larga que la luz de
excitación (Sampedro, de los Toyos y Martínez-Nisal, 1993, P.94).
El fluorómetro utilizado contaba con dos filtros para distintas longitudes de onda, uno de
emisión y otro de extracción. El de emisión era de color verde, para longitud de onda de
540 nm y el de extracción era azul, para longitud de onda de 425 nm.
En general, El fluorómetro es muy útil para determinar un analito en soluciones con una
concentración muy baja, pero se necesitan de filtros específicos y de conocer sus
longitudes de onda de máxima excitación y de máxima emisión
Preguntas adicionales
1. ¿Por qué deben conocerse las longitudes de onda de máxima excitación y de
máxima emisión?
Para saber a qué longitud de onda nuestro analito emitirá una mayor fluorescencia y sea
más fácil trabajar con los datos de intensidad de emisión obtenidos.
La riboflavina (B2) tiene dos formas coenzimáticas, flavina adenina dinucleótido (FAD) y
flavina mononucleótido (FMN), requeridos en reacciones de oxidación-reducción
catalizadas por las deshidrogenasas ligadas a la flavina (Amstrong y Bennett, 1982, P. 277).
La clorofila de las hojas de las plantas absorbe la energía solar necesaria para la
fotosíntesis, pero no la usa toda; hay una parte que se disipa como calor y como
fluorescencia para no dañar la hoja.
Referencias
Amstrong, F. y Bennett, T. (1982). Bioquímica. Barcelona, España: Editorial Reverté S.A.
Espectrometria.com. (2018). Espectrometría de fluorescencia. Disponible en:
https://www.espectrometria.com/espectrometra_de_fluorescencia [Consultado 29 Mar.
2018].
Sampedro, A., de los Toyos, J. y Martínez-Nisal, A. (1993). Técnicas de fluorescencia en
microscopia y citometría. 1ª ed. Oviedo, España: Universidad de Oviedo, servicio de
publicaciones.