El análisis completo de una enzima involucra la investigación de un gran número de propiedades

características que se detallan a continuación, pero de las que generalmente se estudian solo unas
pocas:

a) propiedades fisicoquímicas: coeficientes de sedimentación y difusión; peso molecular; forma;

punto isoeléctrico; estabilidad frente al calor, pH y oxidación; reversibilidad de la reacción y
constante de equilibrio; calor, energía libre y entropía de la combinación enzima-sustrato y de su
conversión en productos; medida de las constantes de velocidad de la reacción, efecto de
activadores e inhibidores.

b) estructura: composición en aminoácidos, secuencia, presencia de grupos prostéticos, grupos

sulfhidrilos, etc.

c) propiedades enzimáticas: naturaleza de la reacción, coenzimas, especificidad.

d) propiedades biológicas: significado en el metabolismo, acoplamiento con otras enzimas,

localización, genética, efectos de su deficiencia, inmunología.

ASPECTOS TÉCNICOS DEL TRABAJO CON ENZIMAS

El éxito del trabajo con enzimas depende del cuidado con que se eviten las condiciones en las
cuales son inestables. Las purificaciones deben llevarse a cabo sin pérdidas inútiles de tiempo y lo
más conveniente, en general, es guardar las preparaciones en congeladora.

Deben evitarse altas temperaturas y acidez o alcalinidad extremas. Durante el aislamiento y la

purificación conviene, en general, trabajar entre 0 y 4 oC y evitar pH mayor que 9 o menor que 5.

Debe evitarse la formación de espuma, ya que la misma es indicador de desnaturalización proteica.

Los solventes orgánicos inactivan muchas enzimas a temperatura ambiente; de modo que los
fraccionamientos con los mismos deben llevarse a cabo a baja temperatura y ésta no debe elevarse
hasta que el solvente se haya eliminado o diluido a concentraciones inocuas.

Deben tomarse también varias precauciones en lo que se refiere a las condiciones de la reacción:
a) Elegir pH y temperatura en las zonas de mayor estabilidad de la enzima
b) Llevar a cabo la reacción a temperatura constante.
c) Elegir un buffer adecuado para evitar cambios de pH
d) Evitar la introducción de trazas de otras enzimas (por ejemplo saliva).
e) Elegir una cantidad de enzima adecuada para obtener variaciones apropiadas de la magnitud a
medir.