ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS PECUARIAS

ESCUELA DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS PECUARIAS

TEMA: EXTRACCIÓN DEL ADN DE LA CEBOLLA COLORADA

POR EL MÉTODO DE LISIS CELULAR.

NOMBRE: BÉLGICA TATIANA FLORES ZAVALA

ASIGNATURA: BIOTECNOLOGÍA II

FECHA: 19-07-2018

DOCENTE: ING. IVÁN SALGADO

RIOBAMBA – ECUADOR

2018
INTRODUCCION

Los estudiantes de sexto nivel de la Carrera de Ingeniería en Industrias Pecuarias

realizamos la práctica de extracción del ADN de vegetales como cebolla blanca y
colorada, tomate, manzana, brócoli y acelga por medio del método de centrifugación
líquida para posterior ser observada las hebras de ADN en el microscopio. La extracción
del ADN sigue una serie de pasos en donde es muy importante tener en consideración el
rompimiento de la membrana celular para poder acceder al núcleo la cual contiene el
AD, a ese procedimiento de rompimiento se lo llama lisis. Muchos estudios han
demostrado que al extraer ADN se logra obtener los famosos Organismos
Genéticamente Modificados con el fin de mejorar un producto, o desarrollar un
microorganismo para utilizarlo con un propósito específico.

OBJETIVOS

GENERAL

 Realizar la extracción del ADN de la cebolla colorada con el fin de observar las
hebras en el microscopio.

ESPECÍFICOS

 Observar la forma fibrilar del ADN.

 Observar la función de cada reactivo usado en la práctica.

MATERIALES Y EQUIPOS

Materiales

 Vaso de precipitación
 Agitador magnético
 Bisturí
 Cebolla
 Tubos de ensayo
 Pipeta
 Pera
 Probeta
 Placa porta objeto
 Papel filtro
 Embudo
EQUIPOS
 Vortex
 Microscopio
 Licuadora

REACTIVOS
 Jabón 5ml
 Cloruro de Sodio 1,5 gr
 Bicarbonato sódico 5gr
 Agua destilada 120 ml
 Alcohol 10ml

MARCO TEÓRICO

¿Qué hace el proceso de lisis en la extracción del ADN?

Lisis celular es el proceso físico o químico por el cual se rompen las membranas para
liberar sus componentes celulares. (Alberto, 2016)
La lisis celular por medio de detergentes es una manera más suave de romper la
membrana celular. Los detergentes rompen la barrera lipídica solubilizando las
proteínas e interrumpiendo la interacción lípido-lípido, lípido-proteína. Los detergentes,
al igual que los lípidos, se asocian entre ellos y se unen a superficies hidrofóbicas. Al
romperse las membranas celulares se permiten la salida del ADN al exterior. (Jimenez,
2015)

¿Qué es una solución tampón y para qué sirve el NaCl, Bicarbonato, agua
destilada y jabón?

Las soluciones tampón.- denominadas también soluciones buffer, son aquéllas que
ante la adición de un ácido o base son capaces de reaccionar oponiendo la parte de
componente básica o ácida para mantener fijo el pH. (J., V., & J., 2011)

Cloruro de Sodio

Las altas concentraciones de (5 M) de NaCl se emplean para prevenir la contaminación

de la muestra con polisacáridos que afectan la pureza del ADN, pudiendo inhibir la
actividad de algunas encimas como inhibir la actividad de algunas enzimas como
polimerasas, ligasas y endonucleasas de restricción3 la base para la separación de los
polisacáridos de los ácidos nucleicos, es su solubilidad diferencial en presencia de las
altas concentraciones NaCl los polisacáridos precipitan ba0o la acción de fuerzas
centrifugas. (Jimenez, 2015)

Bicarbonato

El ion bicarbonato (HCO3-) se puede combinar con un protón (H+) para formar ácido
carbónico (H2CO3), absorbiendo así protones de la disolución y elevando el pH
sanguíneo. (UVAH, 1998)

Jabón

Los detergentes rompen la barrera lipídica solubilizando las proteínas e interrumpiendo

la interacción lípido-lípido, lípido-proteína. Los detergentes, al igual que los lípidos, se
asocian entre ellos y se unen a superficies hidrofóbicas. Al romperse las membranas
celulares se permiten la salida del ADN al exterior. (Jimenez, 2015)

¿Cuál es la acción del alcohol?

La acción del alcohol es limpiar el ADN de otras biomoléculas a través de la

precipitación. En este proceso el alcohol hace que el ADN pierda contacto con las
moléculas de agua que lo rodean y lo aisla de la solución acuosa. El ADN es soluble en
agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre
el alcohol y el agua. (Jimenez, 2015)

PROCEDIMIENTO.

1. Preparar la muestra tampón se colocó en un vaso de precipitación de 800 ml 1,5

gr de cloruro de sodio + 5gr de bicarbonato sódico + 120 ml de agua destilada.
2. Pasar y mezclar.- Agregar 5ml de jabón al momento que se está realizando la
solución tampón, colocar poco a poco el jabón para evitar que se forme mucha
espuma.
3. Observar si la solución está en término de color blanco pálido y espuma.
4. Triturar nuestra cebolla colorada con la ayuda de la licuadora.
5. Filtrar la extracción hacia un vaso de precipitación con la ayuda de un papel
filtro para obtener solo la fase liquida de la cebolla.
 6. Tomar 10 ml líquido de la filtración y colocar en 20 ml de solución tampón, esta
mezcla se la realiza en la probeta, se da pequeños giros para realizar bien la
mezcla.
7. Colocamos la mezcla en un tubo de ensayo.
8. Homogenizamos en un Vortex por 30 segundos y filtramos nuevamente esa
mezcla.
9. Tomamos 5ml de la muestra y añadimos 10 ml de alcohol produce que el ADN
se precipite.
10. Homogenizamos nuevamente en el Vortex el tiempo es hasta cuando se observe
como el ADN se va separando de la solución acuosa.
11. Tenemos el ADN extraído.
12. Colocar en el porta objetos para visualizar en el microscopio.

RESULTADOS

1. RESULTADOS
 El primer intento fue nulo por lo que se realizó una mala filtración y no nos
dio como resultado el ADN extraído.
 Al segundo intento se tomó muy en cuenta la filtración ya que fue nuestra
falla en el primer intento, por lo que tuvimos que esperar el tiempo necesario
y evitar complicaciones, ya una vez puesta la muestra con alcohol colocamos
en el Vortex y a los 30 segundos pudimos observar la formación de pelusas
el ADN extraído de la cebolla. En el microscopio pudimos observar la
estructura, estaba un poco borrosa pero nos dimos cuenta que se visualizaban
unas largas hileras y así concluimos nuestro trabajo de extracción de ADN.

CONCLUSIONES

 Se pudo observar la estructura fibrilar del ADN de la cebolla con la ayuda del
microscopio.
 El alcohol ayuda a la separación del ADN mediante la sedimentación, también
podemos decir que el jabón cumple un papel muy importante dentro del
procedimiento ya que actúa en la lisis de la membrana plasmática de la cebolla.
RECOMEDACIONES

 Se recomienda usar el agitador magnético para evitar romper los materiales de

laboratorio.
 Esperar que la filtración seda sola no apresurar ya que puede romper el papel
filtro y perjudicar todo el trabajo.
 Mantener limpio y ordenado el lugar de trabajo.

Bibliografía
Alberto, R. (2016). Conogasi.org. Obtenido de http://conogasi.org/articulos/extraccion-de-
adn/

J., C., V., L., & J., R. (2011). corinto.pucp.edu. Obtenido de

http://corinto.pucp.edu.pe/quimicageneral/contenido/368-soluciones-buffer-o-
amortiguadoras.html

Jimenez, L. (2015). academia. Obtenido de

http://www.academia.edu/10194525/Lisis_celular_por_medio_de_detergentes

UVAH. (1998). biologia.arizona. Obtenido de

http://www.biologia.arizona.edu/biochemistry/problem_sets/medph/02t.html

ANEXOS

Ilustración 1ADN de la cebolla

Ilustración 2. ADN de cebolla colorada colorada separada del alcohol
por sedimentación