INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA GENERAL
MÉTODOS DE ANÁLISIS

5QV1
21/02/2018

SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE

JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

OBJETIVOS
 Utilizar una técnica de separación de aminoácidos de jugo de naranja.
 Identificar los componentes de jugo de naranja por dos técnicas.
 Comparar las ventajas de utilizar una cromatografía bidimensional.
 Aplicar conocimientos en técnicas de separación e identificación.
FUNDAMENTO
Se realiza un cromatograma con el mismo procedimiento que una cromatografía, la diferencia es
que la sustancia problema se coloca en un ángulo del cromatofolio y se desarrolla con 2
disolventes en direcciones contrarias. El segundo disolvente debe tener propiedades químicas
diferentes al primero, entonces los compuestos que habían migrado juntos previamente se
distribuirán de manera diferente y se separaran dependiendo de la afinidad que tengan por la
segunda fase móvil.
Después de efectuar la separación con las dos fases móviles, los componentes del mismo tipo se
revelan con una solución que reaccione con todos ellos y posteriormente se identifican por la
comparación de los valores de Rf. También se basa en la polaridad y afinidad de la muestra
problema hacia las fases móviles. Esto determinara que tanto corre la sustancia sobre el soporte.

RESULTADOS
I. Cálculo de Rf en los cromatogramas

FRENTE O DISTANCIA DEL SOLUTO

Rf= FRENTE O DISTANCIA DEL DISOLVENTE
Se utilizó la fórmula para el cálculo de los Rf de acuerdo a la fórmula anexada en la hoja anterior.
Los valores obtenidos fueron los siguientes:
Tabla 1. Valores de Rf obtenidos en los cromatogramas unidimensionales para soluciones de
aminoácidos estándar (placa I)
PRIMERA FASE MÓVIL SEGUNDA FASE MÓVIL
FRENTE FRENTE DEL Rf FRENTE FRENTE DEL Rf
AMINOÁCIDO DEL DISOLVENTE DEL DISOLVENTE
SOLUTO (cm) SOLUTO (cm)
(cm) (cm)
Tirosina 7.2 8 0.90 4.5 7.8 0.57
Treonina 1.5 8 0.18 2.5 7.8 0.32
Arginina 5.5 8 0.68 1.1 7.8 0.14
Histidina 5.2 8 0.65 0.8 7.8 0.10
Ácido 5.4 8 0.67 2.1 7.8 0.26
glutámico
Glicina 4.4 8 0.55 2.3 7.8 0.29
Lisina 1.4 8 0.17 0.7 7.8 0.08
Metionina 7.0 8 0.87 4.1 7.8 0.52
Fenilalanina 7.5 8 0.93 4.7 7.8 0.60
Prolina 4 8 0.5 2.1 7.8 0.26

Tabla 2. Valores de Rf para la solución de jugo de naranja problema (placa II)

PRIMERA FASE MÓVIL SEGUNDA FASE MÓVIL
FRENTE FRENTE DEL Rf AMINOACIDO FRENTE FRENTE DEL Rf AMINOACIDO
DEL DISOLVENTE CORRESP. DEL DISOLVENTE CORRESP.
SOLUTO SOLUTO
1.6 8 0.2 Treonina 0.8 7.8 0.10 Histidina
3.8 8 0.47 Prolina 1.1 7.8 0.14 Arginina
4.6 8 0.54 Glicina 4.3 7.8 0.55 Tirosina
7.1 8 0.88 Metionina - -
7.5 8 0.93 Fenilalanina - -

Tabla 3. Cromatograma bidimensional desarrollado en las dos fases móviles (placa III)
PRIMERA FASE MÓVIL SEGUNDA FASE MÓVIL AMINOÁCIDO
No. De FRENTE FRENTE DEL FRENTE FRENTE DEL
mancha DEL DISOLVENTE Rf DEL DISOLVENTE Rf
SOLUTO SOLUTO
1 2.2 7.8 0.30 1.2 7.9 0.15 Treonina
 2 3.8 7.8 0.48 1.0 7.9 0.24 Glicina
3 4.5 7.8 0.67 2.0 7.9 0.28 Arginina
4 5.7 7.8 0.63 2.1 7.9 0.26 Acido
glutámico
5 5.9 7.8 0.75 2.3 7.9 0.29 Prolina
6 6.0 7.8 0.68 0.9 7.9 0.11 Histidina
7 6.2 7.8 0.79 4.1 7.9 0.51 Metionina
8 6.3 7.8 0.80 4.7 7.9 0.59 tirosina
9 6.7 7.8 0.85 4.9 7.9 0.62 Metionina
10 6.9 7.8 0.88 6.3 7.9 0.58 Tirosina

Tabla 3. Cromatograma bidimensional desarrollado en las dos fases móviles (placa IV)
PRIMERA FASE MÓVIL SEGUNDA FASE MÓVIL AMINOÁCIDO
No. De FRENTE FRENTE DEL FRENTE FRENTE DEL
mancha DEL DISOLVENTE Rf DEL DISOLVENTE Rf
SOLUTO SOLUTO
1 1.4 7.8 0.17 5.7 7.9 0.72 Histidina
2 2.5 7.8 0.32 6.7 7.9 0.84 Prolina
3 4.7 7.8 0.60 6.1 7.9 0.77 Tirosina
4 4.3 7.8 0.55 6.8 7.9 0.86 Tirosina
5 5.7 7.8 0.63 1.9 7.9 0.21 Ácido
glutámico
6 5.1 7.8 0.59 2.0 7.9 0.28 Arginina
7 6.3 7.8 0.80 7.5 7.9 0.94 -
II. Representación esquemática de las placas de cromatografía

Figura a. Cromatograma unidimensional Figura b. Cromatograma unidimensional

Fase móvil 1 (placa I) Fase móvil 2 (placa II)

Figura C. Cromatograma bidimensional Figura d. Cromatograma bidimensional

(placa III) (placa IV)
 CUESTIONARIO
1. Investigar en la literatura los aminoácidos que contiene el jugo de naranja. comparar
resultados y concluya

2. Escriba la reacción completa de la ninhidrina con un aminoácido.

 3. ¿Es posible cambiar el orden de las fases móviles?
Si es posible, siempre y cuando las fases móviles sigan teniendo sus características específicas
en cuanto a su polaridad y afinidad hacia ciertas sustancias. Y respetando los demás pasos de la
técnica.
4. Indique las posibles fuentes de error de la técnica.
 Mal corrimiento de las fases móviles, es decir en el caso de la cromatografía
bidimensional puede haber errores en la orientación en que se corren y por lo tanto
la muestra no se verá separada y la placa no podrá leerse.
 También es muy importante saber escoger las fases móviles, tomando en cuenta la
polaridad de los sustratos y del soporte, para que la sustancia problema reaccione
eficazmente con ambas fases y se lea correctamente la placa.
 Aplicar mucha muestra en el punto de aplicación, si esto sucede no se distinguirán
las manchas y la mezcla no podrá ser separada para su fácil interpretación.
 El error en el cálculo de los Rf puede causar falsos datos si no se determina
adecuadamente, además de posibles contaminaciones en la muestra problema si no
se maneja adecuadamente.

5. ¿Quién fue el autor de la novela I robot?

Isaac Asimov
6. Que es la adsorción?

Es la tendencia de un componente del sistema a concentrarse en la interfase, donde la

composición interfacial es diferente a las composiciones correspondientes al seno de
las fases.
Hay una clara diferencia entre el fenómeno de adsorción y el de absorción, en el
segundo existe una penetración física de una fase en la otra; sin embargo es factible
que ambos sucedan simultáneamente, y en este caso puede ser muy difícil separar
los efectos de ambos fenómenos, inclusive un fenómeno puede afectar al otro.

BIBLIOGRAFIA
 Burriel, Marti F., Conde, Lucena. Química Analítica Cuantitativa. Editorial Thomson, (2008),
18th edición. Pp. 319-325
 https://es.scribd.com/doc/210306664/cromatografia-bidimensional-pdf
 Braitwaite, L. and F. J. Smith, 1985. Chromatographic Methods, 4° edición., Chapman and
Hall N.Y., pp. 96-101
 https://www.vitonica.com/alimentos-funcionales/los-aminoacidos-y-donde-encontrarlos-ii
 Hans, Beyer,. Wolfgang, Walter,. Manual de Química Orgánica 1987. Editorial Reverté,
edición en español. Pp. 9