SESIÓN

Sesión No. 3 Medidas de desinfección y esterilización.

Sesión No. 4: Tinción de Microorganismos. Tinción de Gram.
Sesión No. 5: Tinciones Especiales de Microorganismos

ASIGNATURA:
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA BÁSICA

DOCENTE:
VALERIO NARANJO MARÍA ANGÉLICA ZELENE

GRUPO: 323
SEMESTRE: 2018-1

PRESENTA:
TOVAR ARTEAGA ABIUD 1245580

PACHECO FELIX BRIAN GIOVANNI 1235582

BURGOS FLORES X. MARINA 1250569

FECHA DE ENTREGA: 02 MARZO 2018.

Sesión No. 5: Tinciones Especiales de Microorganismos

COMPETENCIA:
Los alumnos conocerán y realizaran diferentes métodos de tinción de acuerdo a
las estructuras bacterianas, los cuales se aplican en la identificación por el
laboratorio de agentes etiológicos de enfermedades infecciosas y a su vez serán
de utilidad para el diagnóstico en el ejercicio profesional.

ANTECEDENTES:
Esporas
Son estructuras altamente resistentes que se forman en respuesta a condiciones
adversas en dos géneros de bacilos Gram positivos de importancia médica como
son Bacillus, que incluye el agente causal del ántrax, Clostridium sp, que incluye
los agentes causales del tétanos, gangrena y botulismo. La formación de esporas
(esporulación) se produce cuando hay ausencia de nutrientes, como por ejemplo
de las fuentes de carbono y de nitrógeno. Las esporas se forman en el interior de
la célula y contiene el DNA bacteriano, cierta cantidad de citoplasma, membrana
celular, peptidoglicano, poca agua y, sobre todo, una envuelta gruesa de un
compuesto similar a la queratina que es la responsable de la resistencia de la
espora al calor, a la deshidratación, a la radiación y a los compuestos químicos.
Esta resistencia puede estar mediada por el ácido dipicolìnico, un quelante de los
iones de calcio que sólo se encuentra en las esporas.
La tinción tradicional para la tinción de esporas de Shaeffer y Fulton en el que se
utiliza como colorante básico Verde malaquita.

Capsula
La cápsula bacteriana o glucocálix es una capa que se forma en la parte externa
de la pared de la mayoría de las bacterias. Está compuesta por azúcares, protege
de la desecación, del ataque de los anticuerpos del hospedador y de la fagocitosis
por los glóbulos blancos, lo que aumenta la virulencia de las bacterias
encapsuladas.
Las cápsulas son claramente visibles con el microscopio óptico cuando se
emplean tinciones negativas o especiales para cápsulas, pero se pueden estudiar
también con el microscopio electrónico.
Aun que las cápsulas no son necesarias para el crecimiento y multiplicación
bacterianas en cultivos de laboratorio, confieren varias ventajas a las bacterias
cuando éstas crecen en su hábitat normal. Les ayudan a resistir la fagocitosis por
células fagociticas. Streptococcus pneumoniae es un ejemplo clásico. Cuando
carece de cápsula se destruye fácilmente y no causa enfermedad, mientras que la
variante capsulada matará rápidamente a ratones infectados.
Las cápsulas contienen una gran cantidad de agua y puede proteger a las
bacterias frente a la desecación. Evitan los virus bacterianos y la mayoría de los
materiales tóxicos hidrofóbicos, como detergentes.
El hongo Cryptococcus neoformans se identifica en muestras biológicas en el
laboratorio con la tinción de tinta china que evidencia la capsula.

Bacterias acido alcohol resistentes:

Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos
(ácidos micólicos) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren
la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción
con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistente. Las
micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos como
Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia.
La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el
colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Una modificación de la
coloración denominada Coloración Kinyoun que no requiere la aplicación de calor.
Se ha desarrollado una coloración de ácido-alcohol resistencia modificada que
diferencia las especies de Nocardia (bacterias ramificadas filamentosas cuya
pared celular contiene ácidos-grasos de unos 50 átomos de carbono), de los
actinomiceos (muy semejantes pero no ácido-alcohol resistentes). Nocardiaspp
son decoloradas por la mezcla ácido-alcohol estándar pero no por un tratamiento
más suave con ácido sulfúrico 0,5 a 1%. Estos microorganismos se denominan
ácido-alcohol resistentes parciales o débiles.

MATERIALES:
 2 Cajas inoculadas con Bacillus sp ( esporas) por sesión
 2 Cajas inoculadas con Cryptococcus neoformans ( cápsula) por sesión
 Porta objetos y cubreobjetos
 Tinción de Esporas Verde de Malaquita y azul de metileno
 Tinta China comercial. (Cápsula)
 Asas bacteriológicas
 Glotero de plásticos.
 Aceite de inmersión
 Papel y solución especial para limpieza de microscopio
 Microscopio óptico
 Agua estéril
• Azul de metileno.
 • Lápiz diamante.
• Aplicadores.
• Alcohol con torundas pata flamear
• Pinzas
DESARROLLO:
Frotis para tinción Estructural. (Esporas)
1. Realice un frotis de cepa de Bacillus sp. Fije con calor.
2. Coloque sobre el frotis papel filtro de manera que cubra toda la
preparación
3. Añada colorante cubriendo toda la preparación.
4. Aplique calor evitando que se seque el colorante durante 5 minutos.
5. Lave el colorante
6. Cubra con azul de metileno durante 30 seg. a 1 min.
7. Enjuague con agua nuevamente y deje secar
8. Observe al microscopio a100X (inmersión)

Capsula -Tinción simple: preparación en fresco con Cryptococcus neoformans

1. Coloque una pequeña gota de tinta china en un portaobjetos.
2. Con un ansa coloque una colonia de la cepa, y mezcle.
3. Coloque un cubreobjetos sobre la mezcla.
4. Observe a 40x al microscopio.

RESULTADOS:

CONCLUSION
Las tinciones especiales son de importancia en el ámbitos medico ya que de esta
forma se puede conocer la estructura, formación y tamaño tanto de esporas como
la capsula bacteriana. En ambos casos se podría decir que es la resistencia de
ambas la que se quiere conocer ya que tanto la capsula como la espora formada
es una manera de protegerse y al ellas evolucionar se es difícil cada vez más
atacarlas y también para buscar nuevos métodos de destruirlas para facilitar su
eliminación. Claro que también se utiliza para identificarlas, como lo es en la
tinción acido alcohol resistente y de esta manera detectar alguna enfermedad.
Estos métodos son accesibles y prácticos, pero eso no las excluye que ante falta
de cuidados se llegue a tener resultados falsos. Algo importante de recalcar es
que en la tinción de capsula no se tiñe la bacteria si no que se le “añade” un fondo
para poder observarla mejor.
En conclusión son métodos que nos permite identificar mejor a las bacterias,
observar su estructura y así detectar enfermedades para encontrar una manera
efectiva de tratarlas observando su evolución.