UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS

FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES

PROYECTO CURRICULAR DE INGENIERÍA SANITARIA
BIOQUÍMICA

Luis Mateo Chacón Hermida1

Leidy Vanessa Orduz Garzón2

RESUMEN

La práctica de cuantificación de proteínas por el método de Lowry se lleva a cabo el día 8

de mayo del 2018 en la cual a través de ciertos reactivos específicos se producen
sustancias “coloreadas” para posteriormente utilizarlas para medir su intensidad de color y
así obtener que cada solución sea proporcional a la concentración de la proteína dando
lugar a la ley de Lambert Beer. (Pérez, 2008)

A partir primeramente de las pastas, se realiza una cocción de las mismas las cuales a su
vez sufren un proceso de desnaturalización, por lo cual pierden su valor nutritivo como
comprobamos en el laboratorio “Desnaturalización de proteínas”, y a través del reactivo
Folin-Ciocalteau reaccionen dichas proteínas presentes en la pasta de consumo cotidiano
para obtener un complejo “coloreado”. El color que se forma es debido a la reacción de la
proteína con el cobre en medio alcalino y la reducción de los fosfomolibdato por la tirosina
y el triptófano presente. La intensidad del color depende del número de aminoácidos
aromáticos y cambiará según la cantidad de proteína- presente en la muestra problema.

PALABRAS CLAVE: Color, desnaturalización, luz, proteína, reacción-

ABSTRACT

The practice of quantification of proteins by Lowry's method is carried out on May 8, 2018
in which across certain specific reagents substances take place "colored" later to use them
to measure his intensity of color and this way to obtain that every solution is proportional to
the concentration of the protein giving place to Lambert Beer's law. (Pérez, 2008)

To departing firstly from the pastas, there is realized a boiling of the same ones which in
turn suffer a process of denaturalization, for which they lose his nutritional value since we
verify in the laboratory " Denaturalization of proteins ", and across the reagent Folin-
Ciocalteau the above mentioned present proteins react in the pasta of daily consumption
to obtain a "colored" complex. The color that is formed is due to the reaction of the protein
with the copper in alkaline way and the reduction of the fosfomolibdato for the tirosina and
the present triptófano. The intensity of the color depends on the number of aromatic amino
acids and present will change according to the quantity of protein - into the sample
problem.

KEYWORDS: Color, desnaturation, ligth, protein, reaction.

1. Estudiante de ingeniería sanitaria, código 20171181035

2. Estudiante de ingeniería sanitaria, código 20171181027
INTRODUCCIÓN
El método de Lowry da lugar hacía el
1940 aproximadamente, en el cual Oliver
H. Lowry desarrolla el reactivo para la
cuantificación y de este modo dar lugar a
este método.
La determinación cuantitativa de la
concentración de proteínas es una de las
pruebas que más frecuentemente deben
hacerse en el laboratorio de bioquímica.
Primitivamente, la cantidad de proteínas
se evaluaba midiendo la cantidad total de
nitrógeno proteico, y teniendo en cuenta
que este elemento representa
aproximadamente el 16% del peso de
una proteína. Este era un método largo y
laborioso y con poca sensibilidad. La
aparición de métodos calorimétricos ha
permitido solventar estos dos
inconvenientes como en este caso, al
realizar una cocción se evalúa el agua de
esta y mediante reactivos que ayudan a
la determinación podemos realizar un
análisis exhaustivo y de esta manera a
través de una muestra “coloreada” y
posteriormente expuesta al
espectrofotómetro poder realizar una
determinación de estas. (Stryer, 2008)
Esta práctica se desarrolla con el fin de
determinar de manera aproximada ya
que presenta cierto margen de error
debido a las condiciones de realización o
ya bien sea, por inexperiencia humana,
pero de igual manera identificar la
cantidad en productos cotidianos como lo
es pasta que consumimos en alimentos
de nuestro día a día. (Antonio, 2013)
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Realizar el proceso de cuantificación de
proteínas generando curva de calibración
con los datos obtenidos en la solución de
albúmina (proteínas).
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
MARCO TEÓRICO
El método de Lowry (1951) es un método
colorimétrico de valoración cuantitativa
de las proteínas. A la muestra se añade
un reactivo que forma un complejo
coloreado con las proteínas, siendo la
intensidad de color proporcional a la
concentración de proteínas, según la ley
de Lambert-Beer expresada de la
siguiente manera:
𝐴 = ε. ι. c
Al tratarse de este método arroja qué
debido a su extremada sensibilidad, es
capaz de detectar cantidades del orden
de 10 microgramos de proteína; su
inconveniente principal es que, al
evaluar, los fenoles presentes en la
proteína (esencialmente residuos de
tiroxina), la intensidad del color resultante
varía entre las distintas proteínas. Pero
cuando se trata con mezclas biológicas
complejas, podemos perfectamente
calibrar el método con alguna proteína
comercial, como es la pasta de fideos. La
reacción que tiene lugar en el método de
Lowry es bastante compleja y no del todo
conocida. Se desarrolla en las siguientes
fases:
1.-Reacción previa de la proteína en
medio alcalino con iones Cu2+, en
presencia de tartrato para evitar la
precipitación. Es esencialmente idéntica
a la reacción del Biuret, formándose un
complejo de coordinación entre el cobre
y el nitrógeno peptídico.
2.-Reacción con el reactivo de Folin-
Ciocalteau para fenoles (ácido
fosfomolibdotungstico), que se reduce
por medio de los grupos fenol (y en
menor medida imidazol e indol)
presentes en la proteína a un complejo
de color azul oscuro, que se mide
colorimétricamente. El complejo
coloreado, cuya composición es
desconocida, presenta dos máximos de
absorción a las longitudes de onda de
560 y 680 nm. La elección de una u otra
depende de la concentración proteica de
la muestra estudiada. (Timoczko, 2014)
El espectro de absorción del reactivo de
Folin reducido presenta un máximo de
absorción a 750 nm y su intensidad es
proporcional a la de proteínas que existe
en la muestra. (Stryer, 2008)
 Curva de calibración:
La curva de calibración es un método
muy utilizado en química analítica para
determinar la concentración de una
sustancia (analito) en una muestra
desconocida, sobre todo en disoluciones.
El método se basa en la relación
proporcional entre la concentración y una
determinada señal analítica (propiedad).
Conociendo esta relación, será posible
conocer la concentración en una muestra
dada mediante la medida de esa señal.
La relación concentración – señal se
suele representar en una gráfica a la que
se le conoce como curva de calibración o
curva de calibrado.
Es imprescindible que la señal analítica
utilizada mantenga una relación
proporcional con la concentración. Las
señales más utilizadas son aquellas cuya
relación con la concentración es lineal, al
menos en el rango de trabajo. Por
ejemplo, una de las propiedades más
utilizadas es la absorbancia (absorción
lumínica) que suele mantener una
relación lineal con la concentración de
solutos en disoluciones. Al ser una
relación lineal, se puede representar
mediante una recta, de ahí que este tipo
específico de curva de calibración se
conozca también como recta de
calibración. (Voet, Voet, & Pratt, 2002)
Elaboración:
La elaboración de una curva de calibrado
se puede dividir en dos pasos:
preparación de las disoluciones patrón y
obtención de la función señal –
concentración (construcción de la curva
propiamente dicha). Una vez obtenida la
curva de calibración se podrá utilizar
para conocer la concentración de analito
en una muestra desconocida. Veamos
estos pasos aplicados a una recta de
calibración. (Antonio, 2013)
- Patrones: Para elaborar una
curva de calibrado se parte de
varias disoluciones con una
concentración conocida de analito
(la sustancia a medir). Estas
disoluciones se conocen como
disoluciones patrón. Se han de
elaborar una batería de patrones
suficiente para cubrir un rango
que incluya la concentración
esperada en las muestras
desconocidas.
Las concentraciones utilizadas en
los patrones también han de estar
dentro del rango válido para la
técnica analítica que se va a
utilizar. Es decir, han de estar por
encima del mínimo de
concentración de analito
cuantificable por la técnica
utilizada. Este mínimo es
conocido como límite mínimo
cuantificable. También ha de
estar por debajo del límite de
linealidad. La relación lineal entre
concentración y señal no se suele
mantener a altas concentraciones
y el límite de linealidad marca la
concentración máxima para la
cual la curva de calibración sería
fiable.
Construcción: concentración de
analito y señal analítica
La curva de calibrado se
construye midiendo la señal
analítica en cada uno de los
patrones previamente elaborados.
En el eje de ordenadas se asigna
el valor de la señal medida y en el
eje de abscisas la concentración
del patrón. De esta forma
podemos señalar puntos en la
gráfica según las coordenadas
(concentración (x), señal (y)).
A estos puntos podemos aplicar
la regresión lineal, generalmente
mediante el ajuste por mínimos
cuadrados, para obtener la recta
que los relaciona y su función.
- Uso: Teniendo una muestra de
concentración desconocida, se
puede medir la señal analítica y
estimar la concentración por
extrapolación sobre la gráfica
obtenida anteriormente. Pero se
puede obtener de forma más
exacta a través de la ecuación
explícita de la recta que, aplicada
a nuestra curva, sería:
𝑦 = 𝑏 + 𝑚. 𝐶𝐴
Dónde:
 B es la ordenada en el origen
(intersección de la recta en el eje
de ordenadas)
 m es la pendiente de la recta
 CA es la concentración del
analito, representada en el eje de
abscisas y es la señal medida.
Tomando dos puntos de la recta, se
calcula la pendiente y ya se podría
 obtener la concentración de analito Anexo N° 2 realizado por Leidy Vanesa
midiendo la señal: Orduz Garzón.

𝑦−𝑏
𝐶𝐴 =
𝑚
Anexos.
Además de para medir
concentraciones de analitos en Anexo 1. Flujograma, elaborado por
muestras, las curvas de calibrado Mateo Chacón.
también se utilizan para comprobar el
Anexo 2. Flujograma, elaborado por
correcto funcionamiento de
Vanessa Orduz
instrumentos analíticos. (Teijón,
2006)
Bibliografía
Materiales: Antonio, P. D. (2013). Bioquímica.
México: Limusa
- 8 tubos de ensayo.
- 2 vasos de precipitado (300mL) Díaz, P. (2013). Bioquímica. México:
- Balones aforados (250mL) Limusa.
- 3 pipetas (1, 5, 10 mL)
- 2 vidrios de reloj grandes Pérez, J. L. (2008). Cuaderno de
- 2 agitadores de vidrio prácticas de fundamentos de
- Gradilla psicobiología.
- Espectrofotómetro
Pertierra, G. (2009). Bioquímica. Madrid:
- Celdas
Tébar.
- Agua destilada
Rivera, T. (2009). Bioquímica estructural.
Reactivos:
Madrid: Tébar.
- Reactivo de Folin-Ciocalteau
Stryer, L. (2008). Bioquímica. Barcelona:
diluido (MERCK ART 9001). A
Reverté.
6,25 mL del reactivo concentrado,
adicionar 10 mL de agua Teijón, J. M. (2006). Fundamentos de
destilada. bioquímica estructural.
- Reactivo de cobre: Tartrato de
sodio-potasio tetra-hidratado Timoczko, J. L. (2014). Bioquímica.
0,278 g; Sulfato de cobre Barcelona: Reverté.
pentahidratado 6 mg; Hidróxido
Voet, D., Voet, J. G., & Pratt, C. W.
de sodio 2 g; Carbonato de sodio
(2002). Fundamentos De
deca-hidratado 26 g
Bioquimica.
METODOLOGÍA

Anexo N° 1 realizado por Luis Mateo

Chacón.