Taller del bloque 1 de Biología Celular:

1) Durante el primer seminario de integración se trataron aspectos del metabolismo del ADN nuclear que hacen a su
mantenimiento y variabilidad: replicación, reparación, mutación, reorganización.
Respecto a la replicación del ADN, se enfatizó en el seminario cuáles son los mecanismos de replicación in vivo.
a) ¿Puede realizarse un ensayo in vitro de replicación de ADN?, la respuesta es SI. Se realiza a través de una estrategia que
se denomina REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR siglas en inglés) considerada una herramienta básica
en el laboratorio de biología molecular y en genética. Durante el Taller, trabajará con el docente sobre los fundamentos de
esta técnica.
b) ¿Qué elementos son imprescindibles en esta reacción?
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c) ¿Qué principios/propiedades básicas del ADN y de la enzima ADN polimerasa son fundamento de la PCR?
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d) Compare las fases-procesos de desnaturalización, hibridación, y extensión de la PCR con la replicación in vivo en
eucariotas ¿Qué principales diferencias observa?
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e) ¿Puede haber errores de copiado durante la PCR? Explique brevemente
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f) Volviendo al proceso de replicación del ADN in vivo en eucariotas, durante el mismo pueden ocurrir errores de copiado,
¿hay mecanismos que pueden subsanar este fenómeno? ¿Cuáles?
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g) Además de los errores en el copiado del ADN molde durante la replicación, puede haber otros eventos que dañen la
estructura/secuencia del ADN nuclear. ¿Qué mecanismos de reparación del ADN conoce en eucariotas? Explique
brevemente cómo se relaciona el concepto de replicación semiconservativa y mecanismos de reparación del ADN nuclear.
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h) En una situación en la que ese error no haya sido reparado y la célula prolifere, habría posibilidades de que esa mutación
se transmita o herede a las células hijas. Teniendo en cuenta que existen dos tipos básicos de células en las especies
pluricelulares con reproducción sexual: las células germinales y las células somáticas; analice el siguiente esquema y
resuelva qué podría ocurrir con la herencia de esa mutación si: la mutación estuviera en la célula 1; en otro caso en la célula
2; y en otro caso en la célula 3. Tenga en cuenta que nuestra especie es diploide.
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2) En los seminarios de integración 3 y 4 se presentaron los principales conceptos de la regulación de la expresión genética.
Entendemos como expresión a los procesos involucrados en la transcripción y traducción. Usted y su grupo de colaboradores
están estudiando una población celular seleccionada. En un momento determinado, se observa que las células presentan
cómo característica tener distintas concentraciones de proteínas A y de proteínas B. Observe el siguiente esquema y explique
qué mecanismos podrían estar implicados en la diferencia de eficiencia en la expresión del GEN A y del GEN B. Especifique
cuáles de estos mecanismos ocurren antes de la obtención del transcripto maduro; cuáles entre el proceso de transcripto
maduro y el comienzo de la traducción y cuales durante y post proceso de traducción

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3) Una vez terminado los ejercicios anteriores, lo invitamos a resolver su primer caso clínico. Para ello requerirá aplicar
conceptos de los cuatro seminarios de integración. Lea el siguiente caso y resuelva las distintas consignas:
Llega para su evaluación una mujer de 39 años que le han diagnosticado un Cáncer de mama bilateral hace 2 meses. En
base a distintos estudios practicados en las biopsias se definió el tipo específico de cáncer (Carcinoma ductal infiltrante
bilateral de mama, con receptores de estrógeno, progesterona y her2 neu negativos).
Nota: sólo a los fines de poder entender el siguiente caso, simplificaremos la concepción de Cáncer como distintas entidades que
ocurren en los distintos tipos celulares cuando fallan los mecanismos que controlan el crecimiento y la proliferación celular. En
el taller 3 se especificará y se profundizará sobre los conceptos de la biología celular qué explican el desarrollo tumoral. La
especificación del tipo de Cáncer en cuestión “Carcinoma ductal infiltrante bilateral de mama, con receptores de estrógeno,
progesterona y her2 neu negativos”; en el taller 1 tiene solamente fines ilustrativos; en el taller 3 usará esta información.

a) Teniendo en cuenta que la base biológica de este caso hace referencia a fallas en los mecanismos que controlan el
crecimiento y la proliferación celular; mencione cuáles son los puntos claves o de chequeo para detener la progresión del
ciclo celular en células proliferativas.
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b) ¿Cuáles son los puntos involucrados específicamente en testear daño/error en ADN? ¿Cómo se lleva a cabo este
fenómeno?
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c) ¿A qué se denomina genes supresores de tumores?
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d) Investigue y mencione el rol/los roles que se les asigna a las siguientes proteínas y en qué compartimentos celulares
cumplen esas funciones: p53; RB (retinoblastoma); BRCA1; BRCA2
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Usted solicita que le realicen a la paciente, un estudio molecular para la búsqueda de mutaciones en los genes que codifican
para las proteínas BRCA1/BRCA2, ya que es conocido que algunas variantes genéticas en esos genes incrementan el riesgo
de desarrollar Cáncer de mama/Cáncer de Ovario. Los genes BRCA1 y BRCA2 son definidos como genes supresores de
tumores que intervienen en la reparación del ADN por recombinación homóloga. La proteína BRCA 1 también interviene
en el control del ciclo celular, remodelación de la cromatina y muerte celular programada, puede cumplir con diferentes
funciones en asociándose a distintas proteínas.
e) Explique brevemente en qué consiste la reparación de ADN por recombinación homóloga. ¿Recuerda algún otro proceso
celular, distinto al proceso de reparación, que también involucre a la recombinación homóloga?
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El resultado del estudio molecular fue: BCRA1: IVS16+6T>C (IVS: sigla en inglés de intervening sequence, que significa
intrón o secuencia intercalada) En la muestra se detectó una mutación en el gen BRCA1 consistente en una sustitución de
Timina por Citosina en el intrón 16, a 6 posiciones del límite intrón-exón del gen BRCA1. Esta mutación, no está ubicada
dentro de un exón, a priori uno podría interpretar que no modificaría la secuencia aminoacídica de la proteína BRCA1. Sin
embargo, un profesional amigo suyo le recomienda que revise si esta variante podría modificar el proceso de Splicing
(proceso de corte y empalme del ARN transcripto primario)
f) ¿Qué segmentos de las secuencias intrónicas participan del proceso de Splicing?
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g) ¿Qué implicancias podría tener esta mutación si afectara al proceso de Splicing? Explique.
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Usted verifica y comprueba que la mutación altera el proceso de Splicing generando que en el transcripto maduro quede
incorporado parte de la secuencia intrónica (mecanismo: activación de un sitio críptico de Splicing).
h) Explique qué significa ello.
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Esta secuencia que quedó inserta, cambia el marco de lectura generando secuencias de terminación prematuras.
i) Explique qué significa esto y relacione con el proceso de degradación del ARNm por secuencias de terminación prematura
(sigla en inglés: NMD-Nonsense Mediated Decay).
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La mujer tenía los siguientes antecedentes familiares: su madre presentó cáncer de mama unilateral con diagnóstico a los
45 años, su tía materna presentó cáncer de ovario bilateral con diagnóstico a los 49 años y su abuela materna cáncer de
mama y ovario unilateral con diagnóstico a los 50 años. Por los antecedentes personales y familiares de la consultante se
estima que se trata de un Síndrome de Cáncer de mama/ovario hereditario que se ha heredado en tres generaciones (abuela,
madre-tía, paciente). Se realiza la búsqueda de la mutación utilizando la técnica de PCR alelo específica en las familiares
afectadas y se encuentra que todas tienen la misma mutación.
Nota: Si bien se ha elegido en este ejercicio un caso de Síndrome de Cáncer hereditario, tenga en cuenta que la mayor parte de
los cuadros de Cáncer no constituyen Síndromes hereditarios.

j. Relacione los fundamentos de la PCR con esta estrategia diagnóstica (ayuda: tenga en cuenta que los Primers-cebadores
pueden diseñarse para que sean complementarios a una secuencia seleccionada)
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Vuelva al esquema del ejercicio 1 (esquema de células germinales y somáticas), aplíquelo ahora en este caso. Interprete
ahora al grupo de células somáticas como un grupo de células en proliferación que conforman la glándula mamaria
k. ¿En qué grupo/s celular/es de la paciente y sus familiares esperaría encontrar la mutación? (recuerde que se detectó la
misma mutación tres generaciones de afectadas de la familia)
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l. ¿Cómo podría explicarse que en la misma familia y con la misma mutación se produce tanto Cáncer de mama como
Cáncer de ovario? Justifique.
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Usted revisa lo publicado previamente en la bibliografía sobre pacientes con esta mutación heredada y figura que presentan
el ARN con splicing aberrante producto del alelo mutado, Generalmente además presentan inactivado el producto del alelo
normal, dando en consecuencia poblaciones celulares sin producto proteico efectivo BRCA1
m.) ¿Qué puede ocurrir con las funciones celulares en las que está involucrada la proteína BRCA1?
n.) Escriba las principales conclusiones de este caso clínico.
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