1.

Laboratorio de Métodos de Análisis

2. Reporte de Practica 8 “ Determinación de la actividad de enzimas

proteolíticas. Método de Kunitz”

3.

4. Grupo: 4IV1
. Sección: 1
“Determinación de la actividad de enzimas proteolíticas. Método de
Kunitz”

• Objetivos
1. Observar la actividad de algunas enzimas (Bromelaína, Papaína y
Tripsina).

• Resultados
a) Tabla de resultados

Tabla 1. Actividad enzimática de la Tripsina

Concentracin #$%& (nm)
Tubo de Tripsina Problema Testigo #$%& corregida
(mg!m") (nm)
T1 y 1 &.&' &.1 &.1 &.1*%
T$ y $ &.&% &.'%& &.1* &.'
T y  &.1$ &.+ &.1$* &.1$
T' y ' &.1+ &.+$ &.1 &.
T y  &.$& &.** &.1'+ &.+1
PR!"#MA$
T- y - Bromelaína &.%$ &.$ &.
11&
T-- y -- Bromelaína &.$ &.$ &.$
1$&
T--- y --- Papaína 1$ &.'1 &.+& &.&1
T-/ y -/ Papaína 1' &.& &.$+ &.&+*
Tabla 1. Muestra las diferentes absorbancias a 280 nm obtenidas para diferentes
concentraciones de Tripsina, Bromelaína y Papaína. Cabe mencionar ue la ! 280 corre"ida es
la diferencia entre la !280 del problema y del Testi"o.

b) #r$%ca
 &.*

&.+

&.

&.'

Absorbancia corregida &.

&.$

&.1

&
&.&$ &.&' &.&+ &.&% &.1 &.1$ &.1' &.1+ &.1% &.$ &.$$

Concentracion de Tripsina (mg/mL)

&i"ura 1. Muestra la "r$%ca obtenida para la acti'idad en(im$tica de la tripsina utili(ando los
datos de la Tabla 1

C$lculos

Para obtener las unidades trípticas para caseína por mg de la tripsina usada se
necesita la ecuacin de la recta para los dos primeros puntos de la gr0ca de la
2igura 1.

3cuacin de la recta y4&.&15'.1$6  Pendiente4 '.1$

 Pendiente de la recta 4.125
( UT )cas
mg 4
= =¿
20 20

¿ 0.2062 unidades tripticas para caseína por mg de Tripsina

Con ayuda de una regla de tres podemos calcular las unidades tripticas para
las di7erentes concentraciones de Tripsina utilizada, entonces8

1 mg Tripsina  &.$&+$ ( UT )cas

mg

&.&' mg Tripsina  64&.&&%$ ( UT )cas

mg

&.&% mg Tripsina  64&.&1+' ( UT )cas

mg

&.1$ mg Tripsina  64&.&$'* ( UT )cas

mg

&.1+ mg Tripsina  64&.&$ ( UT )cas

mg

&.$& mg Tripsina  64&.&'1$ ( UT )cas

mg

Tabla %. &urva de actividad enzimática e specí'ca para la di(estión de

caseína por tripsina
Tubo 9nidades Trípticas #$%& corregida (nm)
1 &.&&%$ &.1*%
$ &.&1+' &.'
 &.&$'* &.1$
' &.&$ &.
 &.&'1$ &.+1
Tabla 2. Muestra los 'alores obtenidos de unidades tripticas para las diferentes concentraciones
de Tripsina con su correspondiente absorbancia corre"ida.