ESPECTROFOTOMETRÍA

CONCEPTOS
*TRANSMITANCIA *ABSORBANCIA
T = I/I0 A = log I/I0 = ε cl
%T = (I/ I0)x100

I : intensidad de la radiación transmitida

I0 : intensidad de la radiación incidente
c : concentración molar de la sustancia absorbente
ε : coeficiente de extinción molar (M-1cm-1)
l : espesor de la sustancia atravesada
 LEY DE LAMBERT-BEER
A=εcl
A : Absorbancia
ε : coeficiente de extinción molar (M-1cm-1)
l : espesor de la sustancia atravesada
c : concentración molar de la sustancia absorbente

La fracción de luz incidente absorbida por una sustancia

absorbente es proporcional al número de moléculas que
interaccionan con la radiación en su recorrido.
MEDICIÓN DE LA
ABSORBANCIA
* Importancia del blanco.
Adisolución=Asoluto + Adisolvente
Asoluto=Adisolución - Adisolvente

* En las mezclas:
Atotal=A1 + A2 + …….+ An

* Limitaciones de la Ley de Beer.

 NATURALEZA
EXPONENCIAL DE LA LEY
DE LAMBERT-BEER

La Transmitancia decrece
exponencialmente y la Absorbancia
aumenta linealmente a medida que se
incrementa la concentración o el
camino óptico atravesado por la
radiación.
 SPECTRONIC 20

5 Escala de
absorbancia
y transmitancia

3 Compartimento
para la muestra

2 Selector de la
longitud de onda

1 Encendido y ajuste 4 Ajuste del blanco

de la transmitancia
 Monocromador
Detector

Sistema de
Fuente de Cubeta con
lectura
radiación muestra
 ESPECTRO VISIBLE

IR UV

Longitud de onda (nm)

ESPECTROFOTÓMETROS
HITACHI U-2000 Y U-2001
Menú principal. Opciones:
1.- PHOTOMETRY
2.- WL SCAN
3.- TIME SCAN
4.- MULTIPLE WL
5.- MULTIPLE COMPONENT
6.- TEST MENU
7.- OPTIONAL FUNCTIONS
8.- CALIBRATION
9.- REMOTE CONTROL
 “FOSFORIMAGER”
(BAS-1500, FUJIFILM)

Equipo analizador de imágenes.

Consta de 3 componentes:
1.- pantallas (“Imaging Plate”, IP)
2.- lector
3.- borrador
 PANTALLAS, IP

Tienen en su composición una capa de cristales

de fósforo radiosensibles y fotoestimulables
unidos a una capa de poliester.
2 tipos: *para isótopos de uso general
*especiales para 3H
Las pantallas de uso general son reutilizables.
 OBTENCIÓN DE UNA
IMAGEN

3 PROCESOS:
- EXPOSICIÓN
- LECTURA: LÁSER DE He/Ne
- BORRADO