Malonato

CAPITULO. Prueba de malonato 1. PRINCIPIO Determinar la capacidad de un microorganismo de utilizar el mialonato de sodio como tinica fuente de carbono con la resultante alcalinidad, HLOBJETIVO (Véanse también caps. 43 a 45) A. Diferenciar entre especies de Enterobacteriacese. 1. Salmonella choleraesuis subesp. arizonae (+) y Salmonella choleraesuis subesp. diazonae (+) dé ‘otras especies de Salmonella (-). 2. Enterobacter asburiae (~), E. cloacag (V, variable) y E. sakazakit (V, por lo comtin—) de otras especies de Enterobacter (+) (10). 3. Escherichia blattae (+), E. fergusonii (V) y E. vilneris (V, por lo comin +) de otras especies de Escherichia (pot lo comin ~) (10). Citrobacter amalonaticus (-) y C. freundii (V, por lo comtin ~) de C. koseri (+) (10). Klebsiella pneumoniae subesp. ozaenae (~) de otras especies de Klebsiella (+) (10). Edwardsiella hoshinae (+) de otras especies de Edwardsiella(-) (10). Serratia rubidaea (+) y S. fonticola (V, por lo comiin +) de otras subespecies de Serratia (10). Salmonella choleraesuis subesp. salamae (+) de otras subespecies de S. choleraesuis. (10) Pantoea agglomerans (+) (antes Enterobacter agglomerans) de P.dispersa (10). 10. Cedecea davisae (+), C. lapagei (+) y C. neteri (+) de las especies 3 y 5 de Cedecea (~). LL. Erwinia cacticida (+) y E. persicinus (+) de otras especies de Erwinia (~) BB. Ayudar en la diferenciacién entre géneros: Leclercia adecarboxylata (+) (antes Escherichia adecarboxylata) de Escherichia coli (-) y Pantoea agglomerans (V) (antes Enterobacter agglomerans) (11). . Otras especies entéricas malonato-positivas: especies de Kluyvera (V, por lo comtin +) (11), Rahnella aquatilis (+), grupo entérico 64 (+), Hafnia alvei, del Hafnia alvei del biogrupo | (V) y Budvicia aqua- tica (V). I. BIOQUIMICA El malonato es un inhibidor enzimatico (9, 15, 17). Quastel y Woodridge (17) demostraron por prime- ra ver que el éeido malénico (malonato) interferfa con a oxidaci6n del écido succinico a écido fuméico ‘mediante la inhibicién de la accién catalitica de la enzima succinico deshidrogenasa. El écido mal6nico inactivala enzima por un proceso denominado inhibicién competitiva. La succinico deshidrogenasa trans- fiere hidrégeno a un aceptor apropiado en la conversién de Acido succfnico a dcido fumirico (2, 8, 9, 15), ppero esta reacci6n puede ser inhibida por un compuesto organico similar desde el punto de vista estruc- tural al sustrato natural, el écido succinico (15). El deido mal6nico presenta una estructura similar al éci- 40 sucetnico y compite por los sitios en la enzima. El écido malénico difiere en su composicién quimica del sustrato porque es un Scido dicarboxtlico de 3 carbonos mientrés que el écido sucefnico es un Acido dicarboxilico de 4 carbonos (1, 15).292 Pruebas bioquimicas individuales goon coon CH (Chas I 3°COOH 4°Cooi Acido maténico edo succinico idomaléice _Aeido ave EI écido mal6nico se une a la enzima y odupa los sitios activos; asf, 1a enzima no puede combinarse ‘con su sustrato normal, el écido sucefnico, y se bloquea la oxidacién del Acido succfnico (15). ES necesa~ rio un complejo enzima-sustrato para la activacién del sustrato,y si se bloquea la activacién, no se forma el producto nuevo (écido fumérico): E + Sa comijoes —E + P Bioqueado por el malonato donde B es la enzima, S es el sustrato y P es el producto. El grado de inhibicin presenta una relacién inversa a la razén de la concentraci6n del inhibidor con 1a del sustrato (I, 2). Fl Acido mal6nico inhibe el &cido succinico porque es un anélogo del metabotito normal, el cido succinico, y este antagonismo metabélico inhibe el crecimiento (1, 2, 17). Sin embargo, Ia inhibicién competitiva es reversible (17). Si se agrega al medio la concentracién normal del sustrato (uccinato) y esté presente de un aceptor de hidrdgeno (17), el malonato se tibera de la enzima, la cual se encuentra libre para catalizar la oxidacién del dcido succinico a écido furnérico. La inhibicién por el malonato de la succfnico deshidrogenasa frena la enzima estequiométricamente (8) y se acumula Scido succinico (8, 13). De acuerdo con la concentracién del malonato, se puede retar- dar la velocidad de oxidaciGn del dcido suecinico o lograr la completa inhjbicién. Enel ciclo de Krebs, sobre cada compuesto Acido independiente actiian enzimas especificas; una mo- Iécula se usa y una se forma de tn modo progresivo. Si se suprime la formaciGn de un tinico deido (P. ¢)., Acido fumérico) y éste no es reemplazado, el ciclo de Krebs cesa de funciona (1). Dado que mucha energia para el metabolismo bacteriano es proporcionada por el ciclo de Krebs (1), Ja célula bacteriana debe contar entonces con el ciclo del écido glioxlico para producir los intermedia~ ris, para la biosintesis ulterior incluida en el metabolismo continuo. Mediante el ciclo del &cido glioxi- fico, la célula bacteriana regula la cantidad de acetil coenzima A (acetil-CoA) introducida en el ciclo para su continuaci6n, la cual es controlada por la actividad de la enzima isocitratasa (1). Sin embargo, el aumento de 1a concentracién del dcido succfnico también inhibe la isocitratasa, lo cual produce una au- sencia de Acido glioxilico y formacién de Acido acstico (1). Piruvato 1 Acetil CoA Oralacetato + Citrato ae Malato cis-Aconitato Fumarato Isoctrato £ Succinato e-Cotoglutarato ‘ Inhibicién del malonato Ciclo de Krebs abreviadoPrueba de malonato 293, La mayoria de las bacterias pueden sintetizar una pequefia cantidad de isotitrato en ciertas condicio- nes, pero esta sintesis es inhibida por el agregado de Acido succinico al medio de cultivo (1). 2 Acido aostico + Acido oxalacético ™~ Acido eftica Acido cls-aconttico Acie matico Acido Isoc'sico ~~ Acido acstico + dcido glioxlico a Isocitratasa ‘Acido suecinico Ciel de ido toto (1) En consecuencia, la acumulacién de écido succinico a causa de la inhibicién de la succinico deshidrogenasa interrumpe el ciclo de Krebs, lo que priva a algunos microorganismos de su fuente de energfa y también interfiere con el ciclo del acido glioxilico, lo que detiene la ulterior producciGn de intermedia~ ros requeridos para la biosintesis de los nuevos compuestos necesarios para el metabolismo. E] resulta- do final es que los mictoorganismos no pueden crecer y reproducirse a menos que puedan fermentar (12) o.utilizar (18) el malonato de sodio como tinica fuente de carbono. Si esta reaccién es esencial para le actividad metabolica de una bacteria, entonces el inhibidor malonato exhibe actividad antibacteriana. Leifson (12) describié la prucba de malonato de sodio como una fermentaciGn, mientras que Shaw (18) la <éenomin6 utlizaci6n. Leifson (12) también mostré una correlaciGn entre la produccién de acetiImetilcabi- ‘nol (acetofna) y la fermentacién del malonato de sodio por Escherichia col y el grupo Klebsiella-Enterobac- ter. Esta correlacién no pertenece a otros miefnbros de la familia Bnterobacteriaceae (11) (cuadro 25-1). Cuadro 25-1, Resullados de malonato y acelofna de Escherichia-Klebsiella-Enlerobacter Escherichia coll (Grupos Kiebsiella-Enterobacter ‘Aoeioina (VP) = ‘Malonato de Socio o = + IV, MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS: A, Caldo para malonato modificado (caldo para malonato, Ewing) (4, 6, 12, 16) 1, Modificacién de la f6rmula original de LeifSon (12) por el agregado de extracto de levadura y ghu- cosa realizada por Ewing, Davis y Reavis (7) 2. Ingredientes, pH 6,7 0,2 [Extracto de levadura le Sulfato de amonio, (NH,),SO, 2g Fosfato dipotisico, K,HPO, 06g Fosfato monopotésico, KH,PO, 04g Clomuro de sodio, NaCl 25 ‘Malonato de sodio 3g ‘Glucosa (dextrose) 025 5 Azal de bromotimol (BTB) 0,025 g ‘Agua desionizada 1.000 ml 3. Indicador de pH: azul de bromotimol (BTB) 1. Acido: color amarillo, pH 6. ». Alcalino: color azul de Prusia oscuro, pH7,6. ¢. Medio no inoculado: pH 6,7; color verde. Los fosfatos presentes en el medio corrigen el pH a 6,7 (levemente &cido), por lo que el medio es ver- econ el indicador de pH BTB (4, 12, 16)294 Pruebas bioquimicas individuaies B. Caldo para malonato con fenilalanina. 1. Medio de Shaw y Clarke (19) 2. Agregar D-fenilalanina, 0,2%; 2 g/L a la base de malonato antes de la esterilizacién de la base. Si se utiliza L-fenilalanina, usar sOlo 1 g/L (3). 3. Después de interpretar los resultados del malonato, agregar directamente al tubo. a. HCIN/10: 5 gotas 'b, Solucién de cloruro férrico, 8%: 3-5 gotas. c. Véase capstulo 34, Prueba de fenilalanina desaminasa, para la interpretaci6n. C. Discos de malonato: disponibles en el comercio por BBL; seguir las dicectivas del fabricante. D. Método de preparaci6n; cualquier medio. +1. Pesarla cantidad exacta como indica él rétulo, Las diferentes compafiias pueden mostrar leves di- ferencias. 2, Rehidratar con agua destilada o desionizada 3. Calentar la solucién suavemente. 4, Fraccionar alrededor de 3 mL por tubo con tapa a rosca (13 x 100 mm). E, Método de esterilizacién: autoclave; 121°C, 15 Ib, 15 min. F, Enfriar antes del uso y reftigerar para la conservacién (4-[0°C) hasta 3 meses (14). G. Inoculacién 1. Crecimicnto a partir de un cultivo puro de 18 2 24 h: agar con hierro de Kligler (KIA) u otro me~ dio apropiado. 2, Inéculo liviano. H, Incubacién: 35°C; 24-48 h; observar la presencia de crecimiento al final de cada periodo (6). Tanto la glucosa como el malonato sirven como fuente de carbono (20) Sin embargo, la alcalinizacién espontnea causada por el crecimiento bacieriano es amortiguada por la fermentacién de la glucosa y por Jos fosfatos incorporados al medio (5). El extracto de levadutra, le fuente de vitamina, y las trazas de glucosa, la fuente de carbono mfnima, pueden ser eliminados en la férmula, pero spn necesarios para estimular el crecimiento de algunos microorganismos (3), en especial Salmonella (20).Los microorganismos que no pue- ‘den utilizar las sales de amonio 0 el malonato como fuente de carbono pueden crecer en estos medios. V. MICROORGANISMOS UTILIZADOS PARA EL CONTROL DE CALIDAD A. Positivo Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae subesp. pneuiioniae ‘ATCC 13883, B. Negativo Escherichia coll ATCC 25922 No inoculado VI. RESULTADOS Véase figura 25-1 (Apéndice 1) para Jos resultados fotograficas en color. Vil. INTERPRETACION ‘A. Malonato 1. Positive . a. Reaccién alcalina, », Color azul palido,a color azul Prusia oscuro en todo el medio. Negativo (-~): sin cambios de color (verde) o amarillo (sélo fermentacién de la glucosa), Enel medio de malonato diseiado por Leifson (12), el malonato de sodio es la tinica fuente de carbono disponible. Si un microorganismo utiliza malonato de sodio como su fuente de carbono en el mismo momento que utiliza el sulfato de amonio como fuente de nitrégeno, la alcalinidad aumenta,Prueba de malonato 295 debido a la formacién de hidréxido de sodio (NaOH) y bicarbonato de sodio (NalTCOs) (14). Dado {que todos los miembros de la familia Enterobacteriaceae fermentan la glucosa, aquellos que no pue-
También podría gustarte
Inserto 17ohp
Documento29 páginas
Inserto 17ohp
Josué Ramírez
Aún no hay calificaciones
Convocatoria Licenciatura 2023
Documento6 páginas
Convocatoria Licenciatura 2023
Josué Ramírez
Inserto Fenilalanina
Inserto Fenilalanina
Josué Ramírez
Revistas
Podcasts
Partituras
Inserto TSH
Inserto TSH
Josué Ramírez
Inserto T4
Inserto T4
Josué Ramírez
Inserto Irt
Inserto Irt
Josué Ramírez
Inserto Biotinidasa
Inserto Biotinidasa
Josué Ramírez
Catalog PDF
Catalog PDF
Sandra Mendoza
100% (1)
Organización
Organización
Josué Ramírez
Leucemias
Leucemias
Josué Ramírez
Anexo
Documento2 páginas
Anexo
Josué Ramírez
Nom 010 Ssa2 2010
Nom 010 Ssa2 2010
Omar Vieyra
Lista de Materiales para Granulometría
Documento1 página
Lista de Materiales para Granulometría
Josué Ramírez
Ureasa
Ureasa
Josué Ramírez
E Cloacae
Documento1 página
E Cloacae
Josué Ramírez
Movilidad
Documento6 páginas
Movilidad
Josué Ramírez
Manual Vacuna Antirrabica CRL Perros y Gatos v2
Manual Vacuna Antirrabica CRL Perros y Gatos v2
Josué Ramírez
Indol
Indol
Josué Ramírez
Citrato
Documento6 páginas
Citrato
Josué Ramírez
Vacunas Subunitarias
Documento2 páginas
Vacunas Subunitarias
Josué Ramírez
Diámetro de Feret
Documento1 página
Diámetro de Feret
Josué Ramírez
Cefalosporinas: Actualidades Farmacológicas
Documento3 páginas
Cefalosporinas: Actualidades Farmacológicas
Gerardo Urióstegui Reyna

Malonato

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Malonato

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

También podría gustarte