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CAPITULO ee
Prueba de indol
|. PRINCIPIO
Determinar la capacidad de un microorganismo para separar indol a partir del tript6feno.
OBJETIVO
(Véanse tambign caps. 43-45)
‘A. Ayudar ala diferenciacién entre géneros
1. Separacién de Escherichia coli (+) de los miembros de los géneros Klebsiella (variables, porlo co-
iin negativos; V -), Enterobacter (V -), Hafnia (-), Serratia (V ~) y una especie de Pantoea, P.
agglomerans (~) (antes Enterobacter agglomerans) (30). fi
2. Candiobacterium hominis (+ 4%) (antes grupo I D del CDC) de Eikenella corrodens (~), de es-
pecies de Kingellat-) y de Suttonella indologenes (-) (antes Kingella indologenes) (30)
BB. Ayudar en la diferenciaci6n de especies junto con otras pruebas bioguimicas
1, Paenibacillus alvei (antes Bacillus alvet) (+) de otras especies de Bacillus (por lo general -).
2. Escherichia coli (+), E. hermanii (+) y E. fergusonii (+) de E. vuineris (-) y E. blattae (~) (30).
Citrobacter freundii (—) de-C. koseri (antes C. diversus) (+) ¥ de C. amalonaticus y del biognupo 1 (+).
Klebsiella oxytoca (+) y K. ornithinolytica (+) de otras especies de Klebsiella (V ~) (30).
Proteus vulgaris (+), P. inconstans (+), P retgeri (+) de otras especies de Proteus (~) (30).
Pasteurella dagmatis (+), P. dagmatis subesp. septica (V"), Pasteurella multocida (+), P. multoci-
dda subesp. gallicida (+) y P. multocida subesp. multocida (+), P. pnewmotropica (+) de P. haemoly-
tica (-) y de Actinobacillus ureae (antes Pasteurella ureae) (~) (30).
1, Paenibacillusalvei (+) de la especies aisladas con mayor frecuencia P; macenans (~) y P polymgra (-).
8. Peptosireptococcus asaccharolyticus (+) y P. indolicus (+) de otra especies de Peptostreptococcus
(©) que pueden eausar infecciones humanas.
9. Propionibacterium acnes (+) de las especies de Propionibacterium (~) aisladas con mayor fre-
cuencia,
C. Prueba de indol en mancha
1. Junto con otras pruebas (ureasa y ornitina) subdivide Haemophilus influenzae y Haemophilus pa-
rainfluenzae en biotipos (30, 51) H. influenzae de los biatipos I, I, V y VII son inidol positives; los,
biotipos II, LV, VI y VIII son indol negativos. H. parainfluenzae de los biotipos IV, VI, VILy VIIL
son indol positivos; los biotipos 1, ILy THT son indol negativos. Otras especies de Haemophilus son
indol negativas, excepto H. paracuniculus (+). Segin Welch y Ahlin (51) la prueba de indol en
mancha por sf sola puede proporcionar Ia identificacién presuntiva de H. influenzae en jas mues~
tras de vias respiratorias, ya que las cepas del biotipo indol positivo I representan 40-70% de las
cepas de H. influencae enconiradas en muestras respiratoriss.
2. Junto con la sialidasa, a- y B-glucosidasas y c-fructosidasa, diferencia entre los anacrobios
‘con pigmento negro (antes género Bacteroides): Porphyromonas asaccharolyticus (+), P. en-
dodontalis (+), P. gingivalis (+) y Prevotella intermedia (+) de Prevotella corporis (~), P. den-
ticola (~), P. loescheit (~), P. melaninogenica (-) y Porphyromonas levii (antes Bacteroides
levit) -) G8).
aa Prueba de indol 207
I, BIOQUINICA
El tiptéfano es un aminodcido que puede ser oxidado por ciertas bacteras para formar tres metabolitos
indélicos principales: indol, escatol (metil indol) y écido indolacético (IAA, indolacetato) (8, 22, 54). Las
diversas enzimas intracelulares involueradas se denominan colectivamente “triptofanasa”, un término gene~
ral usado para designar el sistema completo de enzimas que median la produccién de indol (22) por activi-
dad hidroltica sobre el sustrato tript6fano (23, 53). El principal intermediario en la degradaci6n del tripté-
fano es el dcido indolpirtvico, a partir del cual puede formarse indol por desaminacién y escatol por
descarboxilacién del IAA (22). La degradacién del tript6fano in vitro (54) se muestra a continnacién.
ie
val -CH,>—C— COOH
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KA
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| 9°
Attica
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KR .
Indtecteido
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KR
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Inca (Aa tec
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eserbortacén
2
LK
1
fi
Escatol (meti indo),
ineubaclon larga
Princjpales metaboltos indéticos producidos. (Redibujado en forma abreviada de Yokoyama, M.T y Carl
‘son, J. R. (1974) Appl. Microbiol, 27, 546, con permiso de la American Society for Microbiology)
La triptofanasa cataliza la reaccién de desaminaci6n (12) atacando Ia molécula de triptofano s6lo en
su cadena lateral y dejando el anillo aromético intacto como indol (9).
9
cHy—c#— coon 1
i ] + cta—€—coon + iy
Nie
HO Wei H
\Tiptétano Destin Indo ‘Acido pirtvico . Amontaco 208 Pruebas bioquimicas individuales
La desaminacién y la hidrdlisi tienen lugar con el agregado de una molécula de agua en presencia de
Ja triptofanasa y de la coenzima fosfato de piridoxal (9). En la desaminacidn, Ia porciGn amina (NH,) del
aminofcido es eliminada, con liberacién de una molécula de amoniaco. Existen dos tipos de desamina~
ci6n: oxidativa y reductiva. La desaminacién oxidativa separa el grupo NH de un aminodcido y agrega
tun enlace doble al producto deseminado (un compuesto no saturado) y de NHi y energia (9).
Desaminacién
R—€— COOK — Tria ig, FE COOH + NH + Enea
NH °
Aminodeldo Cetodcido
El desaminacién del tipt6fano es teductiva; la NH, es separada y liberada como NH, y energfa, la cual
es utilizada por la bacteria, La degradacién del triptofano libera indol,dcido pirsvico, amonfaco y energia,
E1 écido pirdivico puede metabolizarse mis a través del ciclo glucolitico 0 ingresando al ciclo de Krebs pa~
1a liberar CO, H,O y una gran cantidad de energia. El NH puede usarse para sintetizar nuevos aminoéci-
os usando la energia presente para la reaccién anabélica. El indol liberado de la molécula de tript6fano pue-
dedetectarse por medio de un reactivo que involucra una combinacién quimica que produce un color definido,
Lapresencia o la ausencia de formacién de indol se usan para la identificacién bacteria,
IV. MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS
‘A. Caldo tript6fano o peptona
1. Ingredientes
‘8. Medio basal: Ia mayorfa de las peptonas, de los digeridos pancresticos de caldo de caseina (trip-
‘tona) o de los hidrolizados enzimaticos de caseina disponibles en el comercie contienen sufi-
Estructura pirrol
Indt
Laestructura pirrol puede reaccionar en sus formas tautoméricas (cuando estéen solucin, algunas de
Jas moléculas se feordenan de-modo que hay dos formas presentes) (40)
: i
Los grupos CH; de ambas formas de pirrol permiten la condensaci6n con el aldehido en un procedi-
imiento en dos pasos (19).
+ ff Hn
“Tre C 7
N NCH32
Estructura pirlica _p-Dimetilamino-
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