Captulo 2: Reaccin en Cadena de la Polimerasa

Un caso ficticio
El dueo de una granja ecuestre not recientemente que uno de sus caballos ha estado
teniendo dificultad para moverse y ha desarrollado hbitos alimenticios deficientes. El veterinario
examina al caballo, recoge una muestra de su sangre, y la enva al laboratorio de diagnstico de la
FACEN para descartar causas microbianas de estos sntomas. Mientras se aguardaban los
resultados, el caballo se recupera en gran medida luego de una semana. Los tests inmunolgicos y
bioqumicos descartaron la presencia de infecciones activas. Sin embargo, al dueo de la granja le
preocupa una enfermedad muscular particularespasmo muscular equino (EME, una enfermedad
ficticia)que se ha presentado con sntomas similares ocasionalmente en sus caballos.
Consecuentemente, solicita que el laboratorio de investigacin animal le haga pruebas a este
caballo para detectar la presencia de EME. Los estudios han mostrado que EME ocurre como
resultado de una mutacin de un solo aminocido en el gen prototipo (gen SKL) que codifica los
msculos esquelticos. Al gen mutante se lo denomina gen mSKL.

El laboratorio de investigacin animal decidi estudiar el gen SKL del caballo para buscar la
mutacin utilizando una tcnica distinta de los vectores plasmdicos.

Preguntas

Qu tcnica considerara utilizar para clonar el gen SKL a fin de diferenciarlo del gen
mSKL?
Qu pasos estn involucrados en la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)?
a. Paso de calentamiento. Por qu?
b. Paso de enfriamiento. Por qu?
c. Paso de elongacin. Por qu?
d. Ciclos de repeticin de a, b, y c. Por qu?
e. Anlisis de los productos resultantes. Por qu?
Puede utilizar otros trminos para describir los pasos a, b, y c en la pregunta de arriba? El
paso de calentamiento (a) se ha puesto como ejemplo.
a. Desnaturalizacin
b.
c.
Cules son las temperaturas usuales para los pasos de calentamiento, enfriamiento y
elongacin?
a.
b.
c.
Cules son los principales ingredientes necesarios para la PCR?
a. Una copia de
b. Dos
c. Cuatro tipos de dNTPs:
 d. La enzima
e. Termociclador
Cul es el DNA objetivo en este escenario?
Qu nucletidos son las piezas fundamentales del DNA?
a. dTTP
b.
c.
d.
Si se determina que el gen SKL tiene 1 kbp de longitud, puede ser un buen candidato
para PCR?
Cul debe ser el tamao o rango What should be the standard size or range for the
complementary PCR primers?
Which end of the primers is important for annealing?
a. Extremo 3'
b. Extremo 5'
c. Ambos extremos
Cul es la secuencia de nucletidos preferida en el extremo 3' de los cebadores/primers ?
Cul debe ser el porcentaje de G+C en un cebador?
Si la siguiente secuencia representa al gen SKL, qu par de cebadores sera adecuado
para realizar la PCR?

a. 5' ATG AGC CCC CGT TTG ACG G 3'

b. 5' TAC ACC TCC CGG CGC GAA T 3'
c. 5' ATG GAG GGC CGC GCT TAA A 3'
d. 5' ATA ACG CGC GCC AAA AGG C 3'
Si la secuencia del gen SKL de arriba es el gen objetivo, qu otro trmino podra utilizar
para describir el siguiente cebador?

5' ATG AGC CCC CGT TTG ACG G 3'

Si la secuencia del gen SKL de arriba es el gen objetivo, qu otro trmino podra utilizar
para describir el siguiente cebador?

5' ATA ACG CGC GCC AAA AGG C 3'

Si la secuencia del gen SKL de arriba es el gen objetivo, cul sera la hebra de DNA
resultante al utilizar el siguiente cebador?

5' ATA ACG CGC GCC AAA AGG C 3'

 Puede proceder con la PCR sin ningn conocimiento sobre las secuencias de nucletidos
del DNA objetivo o sus secuencias circundantes?
Cul de las siguientes es la funcin de la DNA polimerasa Taq?
a. DNA polimerasa DNA-dependiente
b. DNA polimerasa RNA-dependiente
c. RNA polimerasa DNA-dependiente
d. RNA polimerasa RNA-dependiente
Cul es la temperatura ptima de funcionamiento de cualquier enzima en el cuerpo
humano?
Cul es la temperatura ptima para que la DNA polimerasa Taq haga posible un anlisis
de PCR?
Podra la DNA polimerasa Taq ser una enzima humana? Puede alguna enzima humana
funcionar a 72C?
Luego de la finalizacin de la PCR del gen SKL de 1 kb, debe confirmar que el DNA
objetivo tiene el tamao correcto antes de la secuenciacin. Cules de los siguientes
marcadores de peso molecular deben utilizarse en la electroforesis en gel de agarosa para
identificar este fragmento objetivo de 1 kb?
a. 100, 200, 300, 400, 500, 600, 800, 900 (bp)
b. 0.5, 1, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5 5 (kbp)
Luego de confirmar que la reaccin de PCR result en la replicacin del fragmento de 1 kb,
usted procede con el siguiente paso, la secuenciacin automtica. El siguiente es el
resultado de la secuenciacin del fragmento:

Usted nota que el tercer codn tiene una sustitucin de un bp (C convertida a T) en

comparacin con el gen wild type. En otras palabras, el codn CCC ha sido convertido a
CCT. Esta mutacin puntual resulta en cul de estos cambios de aminocidos?
a. Prolina a leucina
b. Prolina a histidina
c. Prolina a arginina
d. Prolina a prolina (sin cambios)

Pista: Refirase a la tabla de cdigo gentico de abajo.

 El caso de arriba es un ejemplo de que no todas las mutaciones en el genotipo resultan en
un cambio en el fenotipo.
a. Verdadero
b. Falso
Cules de las siguientes bases nitrogenadas son consideradas purinas? (Seleccione
todas las que apliquen.)
a. dTTP
b. dGTP
c. dCTP
d. dATP
Asuma que la secuencia de DNA del gen X ha sido identificada. Se le ha provedo la
siguiente informacin: se ha determinado que en el gen X el porcentaje de dCTP es de
20%, y el porcentaje de dGTP es de 27%. Cul es el porcentaje de dATP en este gen?
a. 20%
b. 27%
c. 47%
d. No puede determinarse porque no hay suficientes datos.