UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y ALIMENTARIAS

DEPARTAMENTO DE QUIMICA FARMACUTICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA GENERAL (07-771)

CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS

METABOLISMO BACTERIANO

ALEXANDER MOSQUERA CRDOBA C.C.: 1028016267

DANIELA HERNANDEZ ORJUELA C.C.: 1039466924
GRUPO 2

OMAR OCAMPO JIMENEZ

23 DE OCTUBRE DEL 2017
 MARCO TERICO
CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones
adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos. Son esenciales en el Laboratorio de Microbiologa por lo que un
control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud,
confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.
De forma general, algunas de las condiciones fsicas para lograr un adecuado
crecimiento de bacteriano (y microbiolgico en general) consiste en tener una
disponibilidad de nutrientes y consistencia del medio adecuada, pH, temperatura y
esterilidad del medio; lo cual es fundamentales para obtener un crecimiento
microbiolgico efectivo. (1)
Aprovechando la capacidad que tiene las bateras para adaptarse a las condiciones
de un medio se puede separar en funcin de sus caractersticas fenotpicas que son
perceptibles a simple vistas, tales como color forma y distribucin espacial en el
medio de cultivo.
METABOLISMO BACTERIANO
El trmino metabolismo se refiere al conjunto de reacciones qumicas que se
producen en la clula y tiene tres funciones especficas (2):
Obtener energa qumica del entorno y almacenarla, para luego usarla en diferentes
funciones celulares.
Convertir los nutrientes exgenos (macro y micronutrientes) en unidades
precursoras de los componentes macromoleculares de la clula bacteriana
Formar y degradar molculas necesarias para cumplir funciones celulares
especficas, por ejemplo: movilidad y captacin de nutrientes.
Estas reacciones qumicas las realizan unas protenas conocidas como enzimas,
las cuales son protenas especializadas capaces de transformar qumicamente una
molcula especfica (3).
Segn la forma en que lo usa, existen fundamentalmente dos tipos de bacterias:
auttrofas y hetertrofas. Los autosuficientes (auttrofos), que utilizan al bixido de
carbono (CO2) y al agua (H20) como nica fuente de alimento y a partir de estos
compuestos producen todas las molculas necesarias para su subsistencia,
crecimiento y proliferacin. Por otra parte, los que dependen de otros compuestos
o de sus productos, se llaman hetertrofos. Estos no pueden utilizar el bixido de
carbono como tal y por lo tanto deben obtener el carbono que necesitan a partir de
otros compuestos que se encuentran en el medio que los rodea, como por ejemplo
la glucosa.
Lo anterior quiere decir que unas formas de vida requieren de otras y as se
establece una cadena alimenticia establecindose una interrelacin necesaria y vital
(4).
Para identificar caractersticas metablicas de una bacteria se realizan las pruebas
bioqumicas, algunas de estas pruebas son tcnicas rpidas porque su lectura se
puede realizar despus de unos segundos u horas, aunque otras pruebas requieren
para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubacin previa de 18
a 48h; a este grupo pertenecen la mayora de las pruebas que detectan
componentes metablicos o aquellas que determinan la sensibilidad de un
microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de identificacin que
contienen el sustrato a metabolizar (4).
En general las pruebas metablicas evalan la presencia de una enzima y su lectura
se realiza de forma cualitativa.
 RESULTADOS Y DISCUSIONES
CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
Pruebas en medio slido
El medio de la figura 1 est compuesto por
peptona, lactosa, sacarosa, fosfato
dipotsico, agar, eosina y azul de metileno,
lo que permite el crecimiento de y
aislamiento selectivo de bacilos Gram (-)
de rpido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales tales como la Escherichia coli,
Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, lo
cual difiere mucho de los microorganismos
presentes en la muestra biolgica
proveniente de la saliva de una de las
compaeras del laboratorio en el cual no se
percibe crecimiento alguno. (3)

Fig. 1. Cultivo de microorganismos en Eosina Azul de Metileno (EMB) donde se puede apreciar el de
forma decreciente el crecimiento de diferentes especies de microrganismos: (1) E. coli, (2) B. cereus y
(3) S. aureus.

En la figura 2 se aprecia el crecimiento de

cuatro especies distintas de
microorganismo, las tres anteriormente
mencionadas y los microrganismos
presentes en la muestra salival, lo cual
indica que los microorganismos presentes
en el medio (agar sangre) requieren de
estos nutrientes para su adecuado
crecimiento y por tanto son capaces de
sobrevivir en tejido biolgico con irrigacin
sangunea, pudiendo llegar a ser patgenos
si no se controla su proliferacin.

Fig. 2. Cultivo de microorganismos en medio Agar Sangre (AS), en relacin decreciente de su

tamao se tiene (1) B. cereus, (2) S. aureus, (3) E. coli y (4) muestra salival.
 En la figura 3 se observa el crecimiento de
B. cereus y S. aureus lo cual no tiene
mucho sentido debido a que este medio
est compuesto por nitrgeno y carbono
por tanto debera poder observarse el
crecimiento de la E. coli, posiblemente su
no proliferacin e deba a causa en el
proceso de siembra o inoculacin. (4)

Fig. 3. Cultivo de B. cereus (a la derecha) y S. aureus (a la izquierda) en medio Agar Nutritivo (AN).

En la figura 4 se observa a la derecha un

cambio de coloracin de rojo a amarillo lo
cual indica que la muestra de S. aureus
hidroliz el manitol presente en el medio,
acidificndolo, debido a la presencia de la
enzima coagulasa. (5)

Fig. 4. Cultivo positivo de Staphylococcus aureus en medio altamente selectivo Agar Manitol
Salado (AMS).
 En la figura 5 se logra apreciar un alto
crecimiento bacteriano en agar nutritivo,
pero debido al mtodo de siembra utilizado
no lora percibirse a simple vista la especie
de microorganismos proliferantes

Fig. 5. Inoculacin bacteriana en medio Agar Nutritivo de forma homognea de E. coli, B. cereus,
S. aureus y muestra biolgica.

Prueba en medio semislido Prueba en medio lquido

Fig. 6. Cultivo en medio Fig. 7. Cultivo en medio lquido de E. coli y

semislido de E. coli y S. S. aureus.
aureus.
 En la figura 6, de izquierda a derecha se tiene la incubacin de E. coli y S. aureus
respectivamente en la cual se puede observar un desplazamiento a lo largo y ancho
del medio.
Mientras que en la figura 7 se tienen las mismas especies de microrganismos, pero
en medio lquido pudiendo percibirse crecimiento bacteriano en el fondo del tubo de
ensayo correspondiente a la S. aureus (anaerobia) y en la parte superior del tubo,
E. coli (aerobio).

METABOLISMO BACTERIANO
Los resultados obtenidos para las pruebas metablicas se muestran a continuacin:
Bacteria Kliger Citrato de Motilidad Ureasa SIM
Fondo Inclinacin Simmons H2S Indol Motilidad
Escherichia coli NH NH NH NH NH NH NH NH
Bacillus cereus NH NH NH NH NH NH NH NH
#6 A K - +/- - - - -
#9 K K + + - - - +

Bacteria Fermentacin Hidrlisis Catalasa

de de
carbohidratos almidn
Escherichia coli NH + +
Bacillus cereus NH - ++
#6 + SG + +++
#9 + SG + ++++
*NH: No se realiz esta prueba metablica
*Sin produccin de gas
Segn los resultados obtenidos para la bacteria #6:
Positivo en las pruebas de hidrlisis de almidn, catalasa y fermentacin de
glucosa sin produccin de gas
Medio acido (amarillo) en el fondo del agar de Kliger que indica fermentacin
de la glucosa
Medio alcalino (rojo, sin cambio de color) en la inclinacin del agar de Kliger
Negativo para las pruebas restantes
Coloracin rosa en sus colonias
Teniendo en cuenta que la coloracin rosa es algo que diferencia la colonia de esta
bacteria de las otras observadas en el laboratorio, al consultar la literatura se
confirma que es Serratia mercescens (5), aunque solo la prueba de Simmons y de
motilidad (cuya interpretacin del resultado fue dudoso para nosotros) no
concuerdan con la informacin terica.
Los resultados en la hidrlisis de almidn concuerdan con la revisin bibliogrfica
realizada (6) que indica su crecimiento en medios con carbohidratos y almidn (7).
Adems, segn los resultados obtenidos para la bacteria #9:
Positivo en las pruebas de citrato de Simmons, motilidad, fermentacin de
carbohidratos, hidrolisis de almidn y catalasa.
Negativo en las pruebas de ureasa, produccin de cido sulfrico y
metabolismo del triptfano en indol.
Medio alcalino (rojo) en el fondo y en la inclinacin del agar de Kliger.
Teniendo en cuenta los anteriores resultados y la tabla del manual del laboratorio
se puede confirmar que la bacteria es Pseudomona aeuruginosa que es una
bacterias Gram-negativas, aerbicas, es un patgeno oportunista en humanos y
tambin en plantas. Segn la teora esta bacteria si posee la bacteria catalasa y
degrada la glucosa (8).

CONCLUSIONES
CRECIMIENTO
Fue posible determinar el tipo de bacterias presente en un cultivo teniendo como
base sus caractersticas fenotpicas, adems teniendo presente el medio en el cual
presentan proliferacin es un factor a tener en cuenta para determinar su
patogenicidad.
En el desarrollo de esta prctica fue posible conocer y determinar los diferentes
compuestos nutricionales presentes en cada medio de cultivo para determinar el
crecimiento microbiano de cada especie
Finalmente, fue posible diferenciar las diferentes caractersticas fsicas observables
de los microorganismos en funcin del medio en el cual se encontraban expuestas.
METABOLISMO
Las pruebas metablicas realizadas son un mtodo de identificacin bacteriano de
tipo cualitativo y rpido que permite identificar el tipo de enzima que interviene en
sus procesos metablicos.
La bacteria #6 es Serratia mercescens debido a su coloracin rosa en el cultivo y
debido a que solo dio positivo en las pruebas de las pruebas de hidrlisis de almidn,
catalasa, fermentacin de glucosa sin produccin de gas, medio acido en el fondo
y bsico en la inclinacin del agar de Kliger.
La bacteria #9 es Pseudomona aeuruginosa debido a que dio positivo en las
pruebas de citrato de Simmons, motilidad, fermentacin de carbohidratos, hidrolisis
de almidn y catalasa; dio un medio alcalino en el fondo y en la inclinacin del agar
de Kliger y dio negativo en las pruebas de ureasa, produccin de cido sulfrico y
metabolismo del triptfano en indol.

REFERENCIA
1. Ecured.cu. (2017). Medio de cultivo (Microbiologa) - EcuRed. [online]
Disponible en:
https://www.ecured.cu/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa)
[Accedido 21 oct. 2017].

2. [1] G. Varela, G. Grotiuz. Fisiologa y metabolismo bacteriano. Disponible en:

https://goo.gl/dYxhzc. Consultado el 21 de octubre de 2017.

3. [2] ILCE. Metabolismo bacteriano. Disponible en: https://goo.gl/PdnxnZ.

Consultados el 21 de octubre de 2017.

4. [3] Fernndez A., Garca C., Sez J., Valdezate S. Mtodos de identificacin
bacteriana en el laboratorio de microbiologa. Eimc. Disponible en:
https://goo.gl/ByGShP. Consultado el 21 de octubre de 2017.

5. [4]UCSB Science Line. Disponible en:

http://scienceline.ucsb.edu/getkey.php?key=434. Consultado el 14 de
octubre de 2017.

6. [5]Cervantes E., Garcia R., Salzar P. Proteinas de membrana externa de

Serratia marcescens. Revista Latinoamericana de Patologa Clnica. UNAM.
2014. Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/patol/pt-
2014/pt144e.pdf. Consultado el 14 de octubre de 2017.

7. [6]Serratia marcenscens. Wikipedia. Disponible en:

https://en.wikipedia.org/wiki/Serratia_marcescens. Consultado el 14 de
octubre de 2017.

8. [7] Rojas O., Villafaa R., Gonzalez J., Nungaray A., Anlisis de rutas
metablicas en Pseudomonas aeruginosa para la produccin de
polihidroxialcanoatos a partir de glucosa usando modos elementales.
Universidad de Gualajara. Mexico. Disponible en:
http://www.redalyc.org/pdf/730/73000412.pdf. Consultado el 21 de octubre
de 2017.
9. Saberdeciencias.com. (2017). MICROBIOLOGIA. METABOLISMO
BACTERIANO - REVISTA DE CIENCIAS SABER DE CIENCIAS con Noticias
de ciencias y Apuntes para estudiantes. [online] Disponible en:
https://www.saberdeciencias.com/apuntes-de-microbiologia/167-
microbiologia-metabolismo-bacteriano [Accedido 21 oct. 2017].

10. Britanialab.com.ar. (2017). E.M.B. Agar. [online] Disponible en:

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm [Accedido 21
oct. 2017].

11. Britanialab.com.ar. (2017). Nutritivo Agar. [online] Disponible en:

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivoagar.htm [Accedido
21 oct. 2017].

12. : Britanialab.com.ar. (2017). Manitol Salado Agar. [online] Disponible en:

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/manitolsalagar.htm
[Accedido 21 oct. 2017].