METODOLOGA

El presente ensayo nos ayudara a definir el grado de toxicidad que tiene la muestra a ser
utilizada, en donde el modelo experimental (pez guppy) ser colocado en el agua de
muestra la cual le proporcionara un habita diferente al que ha sido acostumbrado, durante
un periodo de 4 das en los cuales se tomaran datos a las 24,48, 72 y 96 horas
respectivamente para determinar el grado de mortalidad de la muestra antes mencionada.
El ensayo est basado en Pruebas de Toxicidad (Hodgson y Levi, 1997) OECD TG 423.

PREPARACIN DEL AGUA CONTROL Y DEL AGUA DE MUESTREO

El agua control que se utilizara es agua de buena calidad (agua de beber) previamente
descolorada y la cual se dejara en reposo durante 4 das antes empezar el respectivo
ensayo.

El agua de muestreo se tomara del efluente de salida de la laguna de maduracin de la

PLANTA DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES DE PORTOVIEJO, esta
agua ser sometida a pruebas para conocer sus caractersticas. El tipo de muestreo a
utilizar es el Puntual o simple en el cual la muestra ser recolectada en la salida del
efluente hasta que obtener la cantidad necesaria a utilizar y llevada con cuidado al
laboratorio.

Para la obtencin, acondicionamiento y traslado de las muestra nos basaremos en el libro

de ensayos y mtodos de evaluacin de calidad de las aguas, editado por Gabriela Castillo
Morales en Mxico durante el ao 2004

MTODOS

Dentro de los diferentes mtodos que se utilizaran para la ejecucin de la investigacin

se encuentran:

Mtodo experimental: se experimentara con un modelo biolgico el cual ser sometido a

un proceso de adaptacin para despus cambiarle el habitad y as determinar la posible
toxicidad de la muestra obteniendo resultados y analizarlos posteriormente.

Mtodo estadstico: Para tabular, presentar e interpretar los datos surgidos de la

investigacin, se emplearan, los mtodos de recoleccin, descripcin, visualizacin y
resumen de datos originados a partir de los fenmenos de estudio. Los datos despus de
ser procesados, sern representados en forma de tablas y grficos mediante la utilizacin
del Microsoft Excel 2013 por diferentes mtodos como el Probit, y de estimacin grfica.

DESCRIPCIN DEL ENSAYO.

Muestra: se tomara la muestra del efluente de salida de la laguna de maduracin de la

planta de tratamiento de aguas residuales de Portoviejo.

Muestreo: Se tomara la muestra en material de vidrio una cantidad de 10 litros para

realizar los respectivos ensayos, la muestra ser transportada de la mejor manera posible
al laboratorio, no ser almacena puesto que se utilizara inmediatamente en los ensayos,
puesto que es una agua residual recin tratada con microorganismos se asume que no
contiene cloro, pero se verificara esto. La muestra se dejara en reposo una hora para
empezar el ensayo.

Caracterizacin de la muestra

A la muestra se le tomara el valor de pH. Se procede a leer el valor del pH cuando la

lectura se estabilice en el pH-metro. La conductividad al igual el pH se toma con un
equipo diseado para tal efecto que es el conductmetro, tanto el pH como la
conductividad dependen de la temperatura y en ambos equipos se puede tomar la
temperatura. Para determinar los slidos en suspensin Se filtra una muestra previamente
homogeneizada, mediante un filtro estndar de fibra de vidrio (Whatman 934-AH;
tamao de retencin de partculas de 1.5 m), previamente tarado en seco. El residuo
retenido en el mismo se seca a peso constante a 103 - 105 C. El aumento de peso de filtro
representa los slidos totales en suspensin. Los slidos sedimentables se pueden
determinar llenando un cono de Imhoff con la muestra bien homogeneizada, hasta la
marca de 1 litro, se deja sedimentar durante 45 minutos, removiendo a continuacin
suavemente las paredes del cono con una varilla o mediante rotacin, lo mantenemos
durante 15 minutos ms. Se registra el volumen de slidos sedimentados en la parte
inferior del cono. La determinacin se expresa en mililitros de partculas sedimentadas
por litro de muestra.

Para determinar el DQO se enciende una placa calefactora, se pesan 0,44 g de HgSO4 en
matraz para reflujo de 100 ml, se colocan unas bolitas de vidrio en el matraz para
favorecer la ebullicin, se aaden 20 ml de muestra, se aaden lentamente 30 ml de la
solucin de sulfato de plata en cido sulfrico, con una pipeta de vertido, mezclando bien
para disolver el HgSO4, y enfriar. Se aaden 12,5 ml de solucin de dicromatopotsico
0,25 N y se mezclan bien todos los productos aadidos, se debe dejar enfriar. El conjunto
se deja enfriar; el condensador del reflujo se lava con agua destilada, y despus se separa
el matraz del refrigerante. La muestra oxidada se diluye hasta 75 ml con agua destilada y
se deja enfriar hasta temperatura ambiente. Se aaden unas 5 gotas del indicador ferrona.
Se procede a valorar el exceso de dicromato con la sal de Mohr. El punto final de anlisis
se toma cuando el color vara bruscamente de azul verdoso a pardo rojizo.

El DQO se determina El agua residual se analiza a temperatura ambiente, por lo que hay
que dejarla un tiempo una vez sacada del refrigerador y agitarla para que sea una
suspensin homognea y no haya errores en la medida. Se usan frascos de Warburg que
se llenan con agua residual y con diluciones del agua residual con agua destilada. A cada
frasco se les aade un ncleo de agitacin y un tapn, que posee un reservorio para aadir
el NaOH, pero sin cerrarlo del todo. Estos frascos se introducen dentro de la incubadora
que estar a 20 C durante un tiempo, para que estn a esa temperatura cuando se realice
la medida. Una vez que la temperatura es de 20 C, los frascos se tapan y se ajusta a cero
en la escala. Se deja durante 5 das en la oscuridad y agitndose. Al finalizar la medida se
observa en la escala la marca del mercurio y se hacen los clculos pertinentes, teniendo
en cuenta la cantidad de muestra introducida y las diluciones, para conocer los mgO2/l,
que vienen dados por el tipo de frasco de Warburg. El tiempo estimado para atemperar la
muestra a 20 C es ms o menos una hora, siendo el volumen de agua residual dependiente
de la carga orgnica de la muestra de agua residual a analizar.

A su vez se realizaran pruebas de nitrgeno total, ntrico y amoniacal, pruebas de fosforo

total y anlisis microbiolgicos.

Mtodo OECD 423 Para Peces

La especie a ser utilizada es el pez guppy combinndolos entre hembras y machos en edad
adulta. Los peces fueron adquiridos en una tienda de mascotas, se le han dado las
condiciones ptimas para la sobrevivencia (agua ptima, comida necesaria, temperatura
ambiente y una respectiva aireacin.)

Se utilizara 7 peces por dosis a ensayar

Se realizaran 3 rplicas de 5 concentraciones, las mismas que sern al 0%, 25% 50% 75%
y 100%. Se entiende que la concentracin al 0% es el agua control, el agua ideal donde
han sobrevivido los peces durante un periodo de 1 mes, al 25% (25% de la muestra y 75%
del agua control), al 50% (50 % de la muestra y 50% del agua control), al 75% (75 % de
la muestra y 25% del agua control), al 100%, es la concentracin total de la muestra.

Para la concentracin al 100% se necesitara 1 litro de la muestra, al 75% se necesitaran

0,75% de la muestra, al 50% se necesitaran 0,5 litros de la muestra, al 25% se necesitaran
0,25 litros de la muestra. Sumando los valores nos da como resultado que se necesitaran
2,5 litros de la muestra para el ensayo por cada replica y como son tres replicas se
utilizaran 7,5 litro de la muestra en total para el ensayo completo.

Los 7 peces se colocaran al mismo tiempo en cada uno de los recipientes que contienen
las dosis. A partir de ese momento se debe tener paciencia para esperar y observar lo que
le pueda ocurrir a los modelos experimentales, se anotaran resultados a las 24 horas, 48
horas, 72 y 96 horas.

ANLISIS ESTADSTICO DEL ENSAYO

q se debe poner aqu ing.?

MATERIALES Y RECURSOS

Laboratorio de Ecotoxicologa y laboratorio de Qumica en la carrera de Ingeniera

Qumica de la Universidad Tcnica de Manab.

Modelo biolgico experimental (Peces Guppy)

Recipientes de vidrios para el muestreo

15 vasos de precipitacin de 1000 ml

2 probetas de 1000 ml

Ambiente adecuado en el laboratorio.

1.1 Mtodo
La metodologa de investigacin se basa en el anlisis de los resultados que proporcionen el
estudio respecto a los diferentes efectos que tengan los xenobiticos sobre el modelo biolgico
(Poecilia Reticulata), para establecer su comportamiento al ser expuesto a diferentes
concentraciones de la muestra, y as poder determinar los efectos qumicos ambientales que
produce el efluente de la laguna de maduracin de la planta de tratamiento de aguas residuales
de Portoviejo.

1.2 Tcnica
Las diferentes tcnicas de ensayo de laboratorio son mtodos desarrollados, aplicados a las
normas, como lo son los diferentes anlisis fsicos, qumicos, microbiolgicos y Ecotoxicolgicos.

1.3 10.3 Poblacin y Muestra

Se tomaran varias muestras en la descarga del efluente.

1.4 Tcnicas de Anlisis

Las tcnicas a usarse en la investigacin estn detalladas brevemente a continuacin:

1.4.1 pH
Principio.

El trmino "pH " se refiere al "poder de los iones de hidrgeno. " Se calcula usando logaritmos y
es una expresin de la concentracin de iones de hidrgeno disueltos en solucin.

La escala del pH es una forma de describir los cidos y bases. Su rango es de 0 a 14. Sustancias
que al ser probadas van de 0 a 7 en la escala de pH se denominan cidos. Ejemplos son el jugo
de limn y el vinagre. El nmero 7 es neutral. Por encima de 7 hasta 14 se llaman las bases.
Ejemplos de ello son el bicarbonato de sodio y la leja.

1.4.2 Conductividad elctrica

La conductividad es una variable que se controla en muchos sectores, desde la industria qumica
a la agricultura. Esta variable depende de la cantidad de sales disueltas presentes en un lquido
y es inversamente proporcional a la resistividad del mismo.

Con los instrumentos convencionales, la medida de la conductividad se obtiene aplicando un

voltaje entre dos electrodos y midiendo la resistencia de la solucin. Las soluciones con
conductividad alta producen corrientes ms altas. Para contener la intensidad de la corriente en
una solucin altamente conductiva, es necesario disminuir la superficie de la sonda o
incrementar la distancia entre los polos. Por esta razn se deben usar sondas diferentes para
rangos de medida diferentes. (Infoagro, s.f.)

1.4.3 Sulfatos
La determinacin del contenido de sulfatos puede hacerse por diferentes mtodos. Uno de ello
es el Test rpido de sulfatos.

El Mtodo gravimtrico, mediante precipitacin con cloruro de bario, es un mtodo muy preciso
y aplicable a concentraciones superiores a 10 mg/l. Los resultados previamente precipitados con
cloruro brico, en medio cido, son secados a 110C y calcinados a 600C.

El Mtodo nefelomtrico, mediante turbidmetro nefelomtrico, es menos preciso que el

gravimtrico para concentraciones inferiores a 10 mg/l. Se recomienda, preferentemente, para
la determinacin de sulfatos en aguas con contenidos superiores a 60 mg/l y siempre que se
disponga de turbidmetro. Este mtodo no es recomendable para aguas con color, materias en
suspensin o con elevado contenido en materias orgnicas. (Ambientum, s.f.)

1.4.4 Calcio
El calcio se determinara por varios mtodos, uno de ellos es haciendo que el calcio precipite con
oxalato de amonio.

El calcio inico de la muestra de alimento se combina con el reactivo oxalato de amonio con el
fin de precipitarlo en forma de oxalato de calcio. El citado compuesto se hace reaccionar con
cido sulfrico, para obtener cido oxlico, el cual es oxidado hasta CO2 y H2 cuando se aade
el reactivo permanganato de potasio (KMnO4).

La cantidad de cido oxlico que se forma es directamente proporcional a la cantidad de calcio

que tiene la muestra, a su vez, a mayor cantidad de calcio presente, mayor cantidad de
permanganato de potasio se emplea para la oxidacin.

El calcio tambin se determina por volumetra complexomtrica con EDTA a pH 12-13 en

presencia de cido calconcarboxlico como indicador. (oocities, s.f.)

1.4.5 Magnesio
La determinacin de magnesio se realiza mediante una tcnica hidrovolumtrica de formacin
de complejos. Se utiliza como valorante una solucin de cido 2-({2-[bis (carboximetil) amino]
etil} (carboximetil) amino) actico, ms conocido como EDTA: cido etilendiaminotetraactico
[C10H16N2O8, un ligando hexadentado (agente quelante) que forma complejos muy estables con
iones metlicos, solubles en agua, en relacin estequiomtrica 1:1 independientemente de la
carga del catin (Wikipedia, 2014)

El magnesio tambin se determina por volumetra complexomtrica con EDTA a pH 10 y en

presencia de negro de eriocromo T como indicador.

1.4.6 Hierro
El hierro presente en agua de determina por espectrofotometra: se disuelve y se reduce al
estado ferroso sometiendo la muestra a ebullicin en medio cido y en presencia de clorhidrato
de hidroxilamina. Posteriormente el Fe++ reacciona con 1,10 fenantrolina a pH comprendido
entre 3,2 y 3,3 formndose un complejo rojo-anaranjado. Este complejo es un quelato
conformado por 3 molculas de fenantrolina por cada in Fe++. Un pH entre 2,9 y 3,5 asegura
un rpido desarrollo de color en presencia de exceso de fenantrolina. La concentracin mnima
detectable es de 10 ug/L de Fe disuelto, en el espectrofotmetro

1.4.7 Manganeso
El manganeso se Determina por espectrofotometra de absorcin atmica con cmara de grafito
a una longitud de onda de 279,5 nm.

1.4.8 Temperatura
Normalmente las mediciones de temperatura pueden efectuarse con cualquier buen
termmetro centgrado de mercurio, con un termmetro de cuadrante o con un termistor. Este
parmetro afecta fundamentalmente los sistemas de tratamiento biolgico de las aguas debido
a su efecto sobre el metabolismo bacterial; tambin afecta la solubilidad de los gases, lo cual es
muy importante que un aumento de la misma, disminuya la solubilidad del oxgeno en el agua,
desfavoreciendo la aireacin del sistema. Por otro lado la temperatura afecta la velocidad de
sedimentacin de los slidos

1.4.9 Amonio
Los dos factores principales que influyen en la seleccin del mtodo para determinar el
amonaco son, la concentracin y la presencia de interferencias.

La determinacin manual directa slo es vlida para muestras con concentraciones bajas de
amonaco, En muestras con concentraciones ms elevadas o cuando existan interferencias, se
requiere un paso previo de destilacin.

Las tcnicas para determinar la concentracin de amonaco de una muestra son:

Nesslerizacin con o sin destilacin previa (Colorimetra)

 Electrodo selectivo de amonaco con o sin destilacin previa
Volumetra con destilacin previa (recomendable para concentraciones altas de
amonaco (a partir de 5 ppm), por encima de los lmites para la determinacin
colorimtrica).

1.4.10 Alcalinidad
La alcalinidad significa la capacidad tampn del agua; la capacidad del agua de
neutralizar.
Evitar que los niveles de pH del agua lleguen a ser demasiado bsico o cido. La
alcalinidad estabiliza el agua en los niveles del pH alrededor de 7. Sin embargo, cuando
la acidez es alta en el agua la alcalinidad disminuye, puede causar condiciones dainas
para la vida acutica.
En qumica del agua la alcalinidad se expresa en PPM o el mg/l de carbonato equivalente
del calcio. La alcalinidad total del agua es la suma de las tres clases de alcalinidad;
alcalinidad del carbonato, del bicarbonato y del hidrxido.
1.5 Anlisis Ecotoxicolgicos
1.5.1 Dosis-Respuesta

Se calcula de forma experimental en ensayos realizados con animales, se miden las respuestas
tras ensayar varias dosis y se ajustan los datos obtenidos a una curva dosis-respuesta.

El NOAEL es la dosis ms alta que no produce efecto txico en la especie animal ms sensible.
Para establecer un NOAEL se necesitan mltiples dosis, una poblacin amplia e informacin
complementaria para garantizar que la ausencia de respuesta no es un mero fenmeno
estadstico.

Es importante recordar que los umbrales NOAEL son valores que se determinan por medio de
experimentos toxicolgicos en animales y que, por lo tanto, dependen del diseo del estudio y
de la seleccin del nmero y la concentracin de las dosis administradas. De aqu se deriva la
importancia de que la evidencia toxicolgica se base en experimentos adecuados y
cientficamente rigurosos.

Las dosis umbral NOAEL se obtiene de los estudios cientficos disponibles que han sido
clasificados como adecuados por un panel de expertos. Si existen varios estudios que presentan
NOAEL diferentes para un mismo efecto causado por una misma sustancia txica, se selecciona
normalmente el valor de NOAEL ms bajo. Cuando no se puede establecer un NOAEL, entonces
se utiliza el NOAEL (nivel mnimo con efecto adverso observable) ms bajo