1. A.

Cuando se clonan todos grandes extensiones de DNA por la tcnica mencionada, como
en el caso de Drosophila del ejemplo, se obtiene una librera gentica que se puede
mantener como colonias bacterianas de E. coli sembradas en una placa de agar. Para
identificar un clon especfico a partir de una librera gentica, se podran usar sondas de
hibridacin.
Para ello se usan cadenas de DNA o RNA complementario al gen objetivo que queremos
seleccionar, dichas sondas deben estar marcadas con algn compuesto que emita una seal
y permita su identificacin; pueden estar marcadas con elementos radiactivos o
modificadas con compuestos fluorescentes que permitan identificar, mediante una seal
luminosa, el clon correspondiente que contiene el gen de inters.
Un procedimiento para llevar a cabo la deteccin puede ser como sigue: Comenzar con la
transferencia de las colonias bacterianas a una membrana de nitrocelulosa, romper las
clulas y remover todo hasta dejar solo el DNA (ste no se ir porque tiene afinidad por la
nitrocelulosa) desnaturalizado, es decir, de una sola cadena. Luego se aplica la sonda, se
incuba, se lava y luego se hace la deteccin; bien sea de la radiacin o de la fluorescencia.

b. Para identificar un clon especfico de un tRNA podra usar una sonda producida mediante
la secuencia del gen que produce el tRNA objetivo. Sintetizara la sonda con algunas
modificaciones de nucletidos con biotina, puesto que es altamente afn por la avidina. De
este modo usara la metodologa esbozada en el punto anterior. Una vez aplicada la sonda,
aplicara la avidina acomplejada con marcadores fluorescentes que emitan una seal
detectable.

2. Para empezar, transformara el tRNA a su DNA complementario respectivo usando para ello
una transcriptasa reversa. Una vez obtenido el cDNA procedera agregando adaptadores a
los extremos para que coincidan con las formas de corte que produce la EcoRI en el plsmido.
Ya con el cDNA adicionado a los adaptadores y el plsmido digerido por la enzima,
procedera a la ligacin del DNA usando enzimas ligasas. Por ltimo, trasformara las
bacterias.
Para reconocer las bacterias recombinantes, sembrara primero sobre un agar nutritivo y
luego hara una rplica de las colonias obtenidas y las pasara a un agar adicionado con
ampicilina, de modo que las colonias que no crezcan en este nuevo medio sern las
recombinantes que puedo aislar de la otra placa. Esto se lograra porque el sitio de corte de
la enzima de restriccin debe situarse justo sobre el gen de resistencia.

3. A. Los extremos cohesivos se refieren a los productos generados por cierto tipo de enzimas
de restriccin que cortan de forma tal que generan unos cortos fragmentos de DNA de
cadena sencilla a los extremos, de modo tal que se pueda unir a dichos extremos otra
molcula que posea unos extremos de cadena sencilla de secuencia complementaria.

b. El plsmido en cuestin posee dos sitios de corte para la enzima Bgl II y un sitio de corte
para la Pvu II.
 c. El fragmento a se refiere al plsmido relajado (de mayor peso molecular); el fragmento b
se refiere al plsmido en estado superenrollado (de menor peso molecular); c y d
corresponden a los fragmentos lineales producidos por dos cortes realizados por la enzima
Bgl II; el fragmento e corresponde al producto de un corte generado por la enzima Pvu II,
en estado abierto o lineal; por lo tanto, f corresponde al plsmido sin digerir que posee
inicialmente Luis, pero que est en estado lineal debido a mala manipulacin.

d. Resultado de la digestin del plsmido de Luis (bandas en rojo).

Nota: Fiajte que los extremos de abajo estn a la misma altura.

En el pozo 5 se producen 3 fragmentos porque la enzima Bgl II porduce dos cortes y el

plsmido ya estaba en forma lineal (tena un corte adicional). La misma explicacin aplica
para el caso del pozo 6.

4. Est bien usar dos enzimas de restriccin diferentes para preparar el fragmento de DNA y
el vector. Si se generan extremos con secuencias diferentes, no autcomplementarias, a los
extremos del fragmento y del vector, se evita la autocircularizacin de cada uno, la unin
de dos fragmentos entre s, la incorporacin de un fragmento doble o triple al vector; todo
para incrementar la probabilidad de formar un DNA recombinate adecuado.

5. Como se obtuvieron 4 fragmentos tras la digestin, el plsmido debe contener 4 sitios de

restriccin para dicha enzima. Como el plsmido es circular, con el primer corte se obtiene
un nico fragmento en forma lineal, al segundo corte se obtienen dos fragmentos, al tercero
3 fragmentos y as sucesivamente; de modo que, con n sitios de restriccin que posea un
plsmido para una enzima dada, producir n fragmentos.