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Tripsina PDF
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Carreras: Farmacia
Profesorado en Qumica
Licenciatura en Qumica
Lic. en C. y T. de los Alimentos
2- Se tiene una muestra de un triacilglicrido puro que por hidrlisis cida rinde:
glicerina, cido esterico y cido palmitoleico en una relacin molar 1:2:1. El anlisis
polarimtrico de la muestra indica que el triacilglicrido no posee actividad ptica.
Escriba en frmulas el triacilglicrido de la muestra.
3- Los triacilglicridos (TAG) forman parte de las grasas, sobre todo de origen animal.
Los aceites son triacilglicridos en estado lquido.
Su presencia en humanos se debe a partir de la dieta o por produccin endgena a
partir de hidratos de carbono.
Los TAG son transportados a todo el organismo mediante lipoprotenas para ser
utilizados como productores de energa metablica o para ser almacenados en tejido
adiposo.
En la prctica mdica diaria se solicita la cuantificacin de TAG sanguneos debido a
que valores elevados de los mismos son causa de enfermedades ateroesclerticas.
El laboratorio clnico utiliza una serie de reacciones acopladas para determinar la
concentracin sangunea de TAG.
El esquema de reacciones es el siguiente:
Lipoprotenlipasa
Triacilglicridos--------------------------------------------- Glicerol + cidos grasos
Glicerol quinasa
Glicerol + ATP---------------------------------------------- Glicerol-1-P + ADP
Glicerolfosfatooxidasa
Glicerol-1-P + O2-------------------------------------------- H2O2 + Dihidroxiacetona fosfato
Peroxidasa
2 H2O2 + 4 aminofenazona + Clorofenol---------------------------- Quinonimina
7- Se tiene una muestra de un fosfolpido puro que por hidrlisis cida rinde cantidades
equimolares de: glicerina, cido esterico, cido palmitoleico, cido fosfrico y serina.
Escriba en frmulas el fosfolpido.
Colesterol oxidasa
Colesterol + O2 + H2O----------------------------------- Colestenona + H2O2
Peroxidasa
2 H2O2 + 4 aminoantipirina + Fenol -------------------------------- Quinonaimina + 4 H2O
RESPUESTAS
1. Va a ser ms soluble el compuesto ms polar.
3. Paciente A: [TAG]= 1,6 g/L. Para el paciente B se debe diluir la muestra, hacer
nuevamente la reaccin y multiplicar el resultado final por la dilucin realizada. Otra
forma: (con el mismo volumen de muestra sin diluir) duplicar el volumen de reactivo y
multiplicar por 2 el valor hallado.
4. 730
5. 18 carbonos
6. 2 dobles enlaces
8. nodo, nodo, origen, nodo.
9. 400 mL, 6 mL.
10. 5,92 mL. 3 Glicerol:2Ac fosf.:4Ac grasos
11. C2 del fosfolpido esterificado con un cido graso de 18 C y 2 dobles enlaces
12. 5 mL.
14. 3,0 g/L
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MEMBRANAS BIOLGICAS.
3- La mayor parte de las membranas de las clulas normales contienen alrededor del
60% en peso de protenas, y un 40% en peso de fosfoglicridos.
a) Calcule la densidad media de una membrana, suponiendo que la protena posee
una densidad de 1,33 g/cm3 y el fosfoglicrido una densidad de 0,92 g/cm3
b) Si se centrifuga una muestra del material membranoso en una solucin de NaCl con
una densidad de 1,05 g/cm3. Sedimentara o flotara?
5- Un laboratorio le encarga un liposoma que sirva para transportar por sangre una
protena M con accin medicamentosa. La protena M es un homodmero de PM
15.000 compuesto por 30% Ser, 20% Lys, 15% Gly, 10% Arg, 10% Phe, 5% Val, 5%
Glu, 3% Cys y 2% Tyr. El liposoma debe estar dirigido a clulas de pncreas. A tal
fin disea un sistema conteniendo:
a- una mezcla de esfingo y glicerofosfolpidos en relacin molar 1:2
b- una glicoprotena N con alto contenido en Phe y cuya parte glucosidica determina
especifidad para unirse a clulas de pncreas.
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c- la protena M.
Incuba esta mezcla siguiendo un protocolo adecuado y obtiene, para su satisfaccin,
liposomas que responden a las expectativas teraputicas al ser ensayadas en ratas.
Haga un esquema de los liposomas indicando la ubicacin de cada uno de los
componentes de la mezcla. Qu esperara obtener al tratar los liposomas en las
siguientes condiciones:
I- Medio isotnico con NaCl 0,15 M.
II- Medio con detergentes y 0,3 M NaCl.
III- Ruptura hipotnica seguida de un lavado con 0,3 M NaCl.
AMINOACIDOS A B C
Alanina 5 9 4
Arginina 6 3 15
Asprtico 10 4 7
Cistena 2 1 3
Fenilalanina 4 17 4
Glicina 4 5 3
Glutmico 12 3 8
Histidina 12 2 8
6
Leucina e Isoleucina 4 17 3
Lisina 6 2 18
Metionina 3 9 2
Prolina 1 1 2
Serina 13 2 9
Tirosina 6 2 7
Treonina 8 2 5
Triptofano 2 9 1
Valina 2 12 1
11- Se realiz un estudio con clulas adiposas de oso pardo, obtenindose los
siguientes resultados:
a) Se identificaron 6 componentes mayoritarios en estas clulas, 4 lpidos (A, B, C y
D) y 2 protenas (X e Y).
b) El lpido A puro luego de hidrlisis completa rindi esfingosina, cido palmtico y
Ser en cantidades equimoleculares. El lpido B mostraba actividad ptica y luego de
hidrlisis rindi glicerol, cido palmtico y cido esterico en una relacin molar
1:2:1. El lpido C fue identificado como colesterol. El lpido D rindi luego de
hidrlisis completa glicerol, cido oleico, cido esterico, cido fosfrico y Thr en
cantidades equimoleculares.
c) El componente X se identific como una glicoprotena con un alto contenido de
Phe, Val, Leu y Trp. De esta glicoprotena se obtuvieron 2 anticuerpos diferentes
IgG1 e IgG2.
d) La protena Y era globular y tena un PM de 360.000.
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e) El tratamiento de los adipocitos intactos con 0,3 M NaCl no liber ninguna protena
y en estas condiciones slo IgG1 se uni a X.
f) La ruptura hipotnica de los adipocitos, seguida de un lavado con 0,3 M NaCl,
liber en solucin a la protena Y y en estas condiciones tanto IgG1 como IgG2 se
unieron a X.
La liberacin en solucin de X e Y requiri de un tratamiento con detergente.
En base a estos datos escriba en frmulas los lpidos A, B y D y haga un esquema
completo de los adipocitos indicando la localizacin de los componentes mayoritarios
A, B, C, D, X e Y.
13- Usted ha estado trabajando para caracterizar el metabolismo lipdico de una cepa
bacteriana termoflica capaz de resistir temperaturas mayores a 50C. Como parte de
ese trabajo, ha determinado la composicin de los lpidos de membrana de esta
bacteria. A efectos comparativos, realiza la misma medicin en una cepa de una
especie cercana que es termosensible, no creciendo sta a temperaturas mayores a
37C. Asigne cada serie de datos a la cepa correspondiente y explique su decisin.
14- La enzima X es una protena de membrana mitocondrial interna y est formada por
dos polipptidos: a y b de pesos moleculares 40.000 y 22.000 respectivamente, unidos
entre si por fuerzas no covalentes. Se dispone de preparaciones de membranas
mitocondriales abiertas y de mitocondrias sometidas a diversos tratamientos,
obtenindose las siguientes fracciones:
TRATAMIENTOS
I) Membranas mitocondriales abiertas + detergente
10.000g x 60 min
P1 S1
II) Membranas mitocondriales abiertas + NaCl 0,3 M
10.000g x 60 min
P2 S2
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III) Vesculas de membrana interna (right side out) + tripsina
10.000g x 60 min
P3 S3
IV) Membranas mitocondriales internas abiertas + tripsina
10.000g x 60 min
P4 S4
V) Mitocondrias obtenidas de clulas tratadas con cloranfenicol (F5).
Actividad
Polipptido a Polipptido b
enzimtica (*)
I P1 0 NO NO
S1 100 SI (40 kDa) SI (22 kDa)
II P2 0 SI (40 kDa) NO
S2 0 NO SI (22 kDa)
III P3 100 SI (30 kDa) SI (22 kDa)
S3 0 NO NO
IV P4 0 SI (20 kDa) NO
S4 0 NO NO
V F5 0 SI NO
(*) Expresada en unidades arbitrarias
RESPUESTAS
1. a) Perifricas b) Perifricas, ancladas a lpidos e integrales c) Hidrlisis de protenas
perifricas externas, parte de la protena integral que se expone al medio fuera de la
membrana, ancladas a lpidos externas d) Hidrlisis de protenas perifricas, internas y
externas, segmentos proteicos de protenas integrales ubicados fuera de la membrana
y ancladas a lpidos, internas y externas.
2. I- C, D, F. II- C. III- C, F. IV- C, D, F
3. 1,17 g/cm3, sedimentara
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4. A intrnseca con proyeccin hacia el lado citoslico, B extrnseca externa, C
intrnseca
5. I- -. II- M, N, EL y FL. III- M.
6. El estado o fase de la membrana afectar el transporte de metabolitos producido por
el transportador.
7. Utilizando un perfil hidroptico. A partir de la secuencia primaria de esta protena se
puede deducir la existencia de regiones de aminocidos que podran ser componentes
de - hlice. Siendo que la bicapa lipdica tiene un espesor de 3 nm y cada aminocido
se desplaza en la -hlice 0,15 nm, podran estas regiones estar insertadas en la
membrana.
8. Indican que es interna y extrnseca
9. A protena extrnseca interna, B protena intrnseca, C protena bsica extrnseca
externa
10. Se aumenta el % de cidos grasos saturados.
11. Protena X es integral. Fraccin 1 (atacada por IgG1) expuesta al exterior de la
clula. Fraccin 2 hacia el interior. La protena Y no forma parte de la membrana y se
libera cuando se rompe la clula. Y es extrnseca interna.
12. Fosfatidiletanolamina y fosfatidilserina se hallan en mayor porcentaje en la cara
interior de la membrana del glbulo rojo.
13. A termosensible; B termoflica.
14. a) a; b) b; c) iii) a y b; d) ii; e) a ncleo; b mitocondrias f) b no es esencial
para la catlisis.
MATERIAL SUPLEMENTARIO
Definiciones tiles:
-Indice de saponificacin es el nmero de mg de KOH necesarios para saponificar 1 g
de triacilglicrido.
PM KOH = 56
-Indice de Iodo es el nmero de gramos de I2 absorbidos por 100 g de aceite o grasa.
PM I2 = 254.
-PA fsforo: 31. PA nitrgeno: 14.
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11
cidos grasos: saturado y con una insaturacin cis
Triacilglicrido
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Glicerofosfolpidos
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La unin a la ceramida es a travs de un enlace glucosdico.
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Sitios de corte de fosfolipasas.
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La composicin de lpidos de membrana es distinta en diferentes
organismos y tipos de membrana
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La distribucin de lpidos en la membrana es asimtrica
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Glicoforina
ndice hidroptico
Fantasma abierto
ado
Lav
o Fantasma cerrado
La va d
e sella do
yr
Dis
Lisis rup
hipotnica yr ci Vesculas con el lado
es n
ella correcto afuera (right-
do side-out)
Vesculas invertidas
(inside-out)
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