UNIVERSIDAD

SAN PEDRO

FACULTAD : CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA : LABORATORIO C. ANATOMIA
P.
CURSO : BACTERIOLOGIA
DOCENTE : LIC. MAYURI
TEMA : ESTERELIZACION Y MEDIOS
DE CULTIVO
CICLO : VI CICLO

INTEGRANTES :
BIANCA LEYVA
LUIS ALBERTO OBREGON MAUTINO
JANDER VELA MONTENEGRO
VICTOR RAMOS VELEZ

HUACHO PER

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OBJETIVOS

Preparar correctamente el material que se someter a esterilizacin

Aplicar algunas metodologas para esterilizar material y medio de cultivo
Preparar el medio de cultivo y explicar el procedimiento de preparacin
Aprender a manipular los equipos de laboratorio
Aprender la clasificacin y uso de los medios de cultivo.
Preparar medios de cultivo y manejar adecuadamente la autoclave.

INTRODUCCION
Para los estudios de microorganismos es indispensable contar entre otras
cosas con material y medios de cultivo estriles la esterilizacin se define como
el proceso mediante el cual se elimina todos los microorganismos (incluyendo
formas de resistencias) de un objeto, medio o superficie y su aplicacin
garantiza la ausencia de microorganismos en el material y medios de cultivos al
hacer empleados.

Un medio de cultivo esta constituido por una mezcla de agua y sustancias

orgnicas e inorgnicas los que en conjunto proporcionan los requerimientos
nutricionales para el desarrollo de los microorganismos la composicin de los
medios de cultivo vara en funcin de:

GRUPO MICROBIANO; Que se presenta estudiar

COMPLEJIDAD QUIMICA
ESTADO FISICO
APLICACION

AGAR BASE (AGAR SANGRE)

Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos

microorganismos. Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el
aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios
nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como
para la observacin de reacciones de hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para
preparar el medio agar chocolate.

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PREPARACION Y ESTERIALIZACION DE MATERIAL DE VIDRIO

1. Lavar material con detergente lquido, enjuagar con abundante agua de

la llave y al final con agua destilada.

2. Secar el material de vidrio de preferencia en horno, si no es posible

secar al aire.

3. En las pipetas poner un filtro de algodn en la boquilla y envolver con

papel Kraft.

4. Envolver las cajas de Petri y pipetas de acuerdo a las indicaciones del

profesor.

5. Introducir los hisopos en un tubo y tapar con algodn.

6. Identificar con nombre y marcar el volumen en el papel de las pipetas.

7. Introducir el material a un horno previamente calentado a 180C, esperar

a que la temperatura se estabilice nuevamente y a partir de este
momento dejar 1 hora.

8. De no ser posible emplear el horno, se puede esterilizar el material de

vidrio en autoclave.

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MATERIALES
Asa de siembra
Placa Petri
Mechero
Hisopos largos
Gradillas tubo de ensayo
Papel kraft
Pabilo
Algodn
Porta objeto
Balanza analtica

ASA DE SIEMBRA HISOPOS PLACA PETRI

ALGODON PORTA OBJETO MECHERO

BALANZA ANALITICA PAPEL KRAFT

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EQUIPOS
AUTOCLAVE
ESTUFA
REFRIGERADOR

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PROCEDIMIENTOS DE MEDIOS DE CULTIVO
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

1. Realizar los clculos correspondientes para la preparacin de medio de

cultivo (agar sangre, de acuerdo con las indicaciones de la casa
comercial de medio de cultivo gramos de medida a pesar y mililitros de
agua destilada)
2. Recordar que todo procedimiento debe ser llevado en asepsia ( material
estril y/o desinfectado)
3. Pesamos 17.3 gr de agar base
4. Luego medimos 200 ml de agua destilada en una probeta
5. Agregamos la cantidad medida del agar base 17.3 gr al matraz y
tambin 200 ml de agua destilada
6. Luego Mesclamos el medio, y lo tapamos con un tampn de algodn y
papel kraft
7. Llevamos al autoclave para esterilizarlo (esperamos que llegue 15 libras
de presin y controlamos 15 minutos).
8. Ya esterilizado el medio esperamos que se enfri a 45 c y cerca al
mechero agregamos la sangre.
9. De forma inmediata se comienza a plaquear el agar sangre en la
placas Petri
10. Esperamos que se enfri y lo envolvemos la placa Petri con papel kraft
boca hacia abajo y base hacia arriba y lo guardamos en la refrigeradora.

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PREPARACION PARA EL CALDO NUTRITIVO

1. Con la aguda de un hisopo largo embebido con suero fisiolgico, se

toma la muestra de diversas partes.

MUESTRAS
Hisopado de antebrazo
Hisopado del cuello
Hisopado de la nariz
Hisopado vaginal
Hisopado de balano prepucial
Hisopado farngeo
Hisopado de muestras de trabajo
Hisopado de piso
Hisopado de oreja
Hisopado de encas
Hisopado axilar

2. Ya tomada la muestra de manera inmediata cerca al mechero se

pone dentro de caldo nutritivo
3. luego se lleva a la estufa se deja por 24 h
4. posteriormente ya el medio enriquecido con la muestra esta apta
para sembrar

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PREPARACION PARA LA SIEMBRA

1. Tenemos los materiales y el lugar con toda la asepsia para dar inicio
la siembra.
2. Esterilizamos nuestra asa de siembra, inoculamos dentro de caldo
nutritivo, y esperamos que se enfri en la orillas y luego introducimos
hacia dentro.
3. Retiramos el asa de siembra tapamos el caldo nutritivo, y
procedemos a sembrar en el agar sangre (todo el procedimiento
cerca al mechero).
4. Luego se lleva a la estufa por 24h y luego a la refrigeradora.
5. Luego procedemos a reconocer el crecimiento, y las hemolisis.

PREPARACION DE CATALASA

1. En un porta objeto se aade de 2 3 gotas de perxido de hidrogeno

2. Luego se esteriliza en asa de siembra al rojo vivo, cogemos nuestra
placa y retiramos una colonia de placa ( todo cerca al mechero)
3. Luego en las gotas aadida de perxido de hidrogeno en el portaobjeto
se junta con la colonia obtenida con el asa de siembra.
4. Si se liberan burbujas es catalasa positivo
5. Si no liberan burbujas es catalasa negativa

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PROCEDIMIENTO TINCION GRAM

Despus de haber realizado la catalasa positiva, procedemos a realizar

el extendido en la lmina con la coloracin gram.

a) 1 minuto en cristal violeta

b) se lava con agua destilada
c) 1 minuto en lugol.
d) se decolora con alcohol acetona
e) se lava con agua destilada
f) 1 minuto en fucsina fenicada
g) se lava con agua corriente

Una vez que la preparacin est totalmente seca, poner una gota muy
pequea de aceite de inmersin y observar al microscopio.

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FUNDAMENTOS
AGAR BASE

La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor

nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos,
an de aquellos nutricionalmente exigentes. el cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico.

El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %,

aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis.

CATALASA

Es una enzima presente en la mayora de los microorganismos que poseen

citocromos. Las bacterias que sintetizan catalasa hidrolizan el perxido de
hidrogeno en agua y oxigeno gaseoso que se libera en forma de burbujas. el
principal objetivo de esta prueba es separar micrococacceae (positiva) de
streptococcus spp. y enterococcusspp (negativa).

COAGULASA

staphylococcus aureus se diferencia de otras especies de estafilococos por la

presencia de la enzima coagulasa. la coagulasa es una protena termoestable similar a
la trombina, que activa el fibringeno para formar fibrina. la presencia de la enzima se
evidencia en el tubo de ensayo por la formacin de un cogulo cuando se inocula
plasma con colonias de estafilococos. adicional a lo anterior, s. aureus tiene un
receptor de fibringeno llamado coagulasa unida o factor clumping, que tiene la
capacidad de actuar directamente sobre el fibringeno para formar el cogulo; en este
caso la prueba se realiza en lminas portaobjetos.

COLORACION DE GRAM

Un frotis es tratado con una solucin de cristal violeta el cual se une a las
paredes celulares bacterianas, luego de un tratamiento con lugol, algunas
bacterias debido a la naturaleza qumica de sus paredes celulares, poseen la
capacidad de retener el cristal violeta, an luego del tratamiento con un
decolorante orgnico (alcohol acetona). tales bacterias se denominan gram
positivas. las bacterias gram negativas presumiblemente debido a su mayor
contenido lipdico en su pared celular, pierden la coloracin primaria del cristal
violeta aparecen rojas o rosadas al microscopio, habiendo fijado la safranina
como colorante de contraste a sus paredes celulares, las gram positivas
aparecen al microscopio de color azul intenso o violeta.

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CONCLUSIONES
La esterilizacin de los materiales , que es la eliminacin de total de todos los
microorganismos, incluyendo las esporas, a la vez nos hace saber que hay
varias tcnicas para esterilizar incluyendo el autoclave que es la que
utilizaremos en nuestro laboratorio de la USP.

- Es de importante tener los materiales adecuadamente esterilizados para la

preparar de nuestros medios de cultivo y evitar de esta manera su
contaminacin con otros agentes pudiendo alterar los resultados de nuestro
paciente.

- Recodar que un medio de cultivo es una preparacin artificial que tiene los
nutrientes necesarios para el crecimiento de los microorganismos de manera
ptima los cuales nos van a servir de gran ayuda para poder identificar los
diferentes tipos de bacterias aisladas y saber exactamente el agente etiolgico
causante de la patologa.

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BIBLIOGRAFIA
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/sangreagarbase.htm

file:///C:/Users/Jander&Daniela/Downloads/prcticadetemasterminadamediosdec
ultivo-110501020656-phpapp01.pdf

http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/pluginfile.php/231237/mod_reso
urce/content/0/2._PRACTICA_TINCIONES_ESPECIALES_EN_MICROBIOLO
GIA.pdf

http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-gram.htm

file:///C:/Users/Jander&Daniela/Downloads/seimc-
procedimientomicrobiologia37.pdf

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