Cul es el fundamento terico de la reaccin de Biuret?

La reaccin o prueba de BIURET es un mtodo que detecta la presencia de compuestos con

dos o ms enlaces peptdicos y, por tanto, sirve para todas las protenas y pptidos cortos.
El reactivo del Biuret (sulfato de cobre en una base fuerte) reacciona con los enlaces del
pptido y cambia el color cuando entra en contacto con otra sustancia, tornndose
VIOLETA. Mientras ms cantidad de protena est presente en la solucin, ms oscuro es
el color.
Por ejemplo cuando se calienta la urea a 180 Celsius, se descompone transformndose en
un compuesto llamado "Biuret", el cual en presencia de Cu2+ en solucin alcalina forma un
complejo color violceo ya que reconoce los enlaces peptdicos de las protenas, no es
especfico para identificacin de protenas con dos o ms enlaces peptdicos.
El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y
otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin
desconocida.

Est hecho de hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico (CuSO4), junto con tartrato de
sodio y potasio (KNaC4H4O64H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en
presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con poli pptidos de cadena corta.
El hidrxido de potasio no participa en la reaccin, pero proporciona el
medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un mtodo colorimtrico que permite

determinar la concentracin de protenas de una muestra mediante espectroscopia
ultravioleta-visible a una longitud de onda de 560 nm (para detectar el ion Cu2+).

Cul es el fundamento terico de la reaccin xantoproteica?

La reaccin XANTROPROTEICA es un mtodo que se puede utilizar para determinar la
cantidad de protena soluble en una solucin. El espectrofotmetro se puede entonces
utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. Este test especfico es para
reconocer enlaces peptdicos, por lo tanto requiere de la presencia de al menos en tetra
pptido para que de positivo. Los reactivos utilizados son NaOH y SO4Cu.5H2O. Opera a
travs del ion Cu2+ el que en reaccin alcalina interacciona con los iones de N-3 de los
grupos amino formando un complejo color violeta. Cada tomo de Cu2+ reacciona con dos
tomos de N y establece una resonancia de electrones con otros dos N formando un
complejo color violeta y es as como podemos catabolizar una reaccin anastrfica de la
mayor enzima llamada octatriona.
Se obtuvo bajo forma cristalina, una sustancia extrada de las paratiroides de la vaca que
tiene los siguientes caracteres: poli pptido compuesto de muchos aminocidos, todava no
determinados, y probablemente unidos a una protena; da las reacciones de las protenas por
investigacin qumica (reaccin xantroproteica); contiene trazas de fierro y azufre; su pH es
de 4.8; insoluble en las grasas y en el ter, algo soluble en el alcohol y muy soluble en el
agua acidulada; es destruida por los fermentos digestivos y por esta causa no se administra
por la va digestiva.

FUNDAMENTO:

Las protenas son compuestas de carbono, oxigeno hidrogeno y nitrgeno. La mayora de

ellas contienen adems azufre, y algunos fsforos. Sus molculas son de proporciones
coloidales, todas son muy complejas molecularmente y tienen alto peso molecular. La
molcula proteica esta compuesta de una combinacin de aminocidos por condensacin.
Las pro teosas, peptonas, pptidos y aminocidos son derivados de las protenas formados
en sntesis e hidrlisis.

Hay ciertas reacciones coloreadas que dan las protenas y dependen de los aminocidos
presentes en la molcula proteica. Todas dan la reaccin de BIURET. Se basa en una
reaccin tpica de los enlaces peptdicos, en la cual los tomos de cobre del reactivo se unen
a los grupos amino, lo que provoca una coloracin rosa - violcea. Las que contienen
tirosina dan las reacciones Xantoproteica.

Observaremos tambin en esta prctica como se destruye los enlaces que mantienen estable
la conformacin globular de las protenas, de manera que stas queden con una estructura
filamentosa; con lo cual pierden su solubilidad y precipitan en forma de cogulos. La
desnaturalizacin se efectuar sometiendo una disolucin de protenas a cambios de pH, a
alteraciones de concentracin del medio y a variaciones de la temperatura.

Qu significa cada uno de los siguientes trminos: floculacin

desnaturalizacin, coagulacin de las protenas?

La floculacin desnaturalizacin
es un proceso qumico mediante el cual, con la adicin de sustancias denominadas
floculantes, se aglutinan las sustancias coloidales presentes en el agua, facilitando de esta
forma su decantacin y posterior filtrado. Es un paso del proceso de potabilizacin de
aguas de origen superficial y del tratamiento de aguas servidas domsticas, industriales y de
la minera.

COAGULACIN DE LAS PROTENAS

Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas,

forman con el agua soluciones coloidales. Estas
soluciones pueden precipitar con formacin de
cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70C o al ser tratadas con soluciones
salinas, cidos, alcohol, etc. La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a
su desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la desordenan por
la destruccin de su estructura terciaria y cuaternaria .

La coagulacin es el proceso por el cual se forma un cogulo sanguneo. Comienza en respuesta a

una lesin en un vaso sanguneo. En el proceso de coagulacin se producen una serie de
reacciones en cadena en las que participan varios tipos celulares y protenas solubles de la sangre
con el objetivo de formar un cogulo para evitar la prdida excesiva de sangre. Un cogulo
consiste en una red de protenas insolubles como la fibrina con plaquetas y clulas atrapadas que
bloquea la salida de sangre hasta que se repare el tejido. Se distinguen dos rutas de activacin de
la cascada de coagulacin conocidas como va extrnseca y va intrnseca. Hacen referencia al lugar
donde se inicia la cascada de coagulacin: el interior de un vaso sanguneo (intrnseca) o fuera de
un vaso sanguneo (extrnseca). Ambas vas convergen en la activacin del factor, que transforma
la protrombina en trombina. En el paso siguiente la trombina genera fibrina a partir de
fibringeno.

En el proceso de coagulacin participan los siguientes elementos:

Clulas que presentan el factor tisular (TF): Estas clulas no estn normalmente en contacto con
elementos solubles de la sangre. Cuando se produce una lesin con prdida de sangre, el
reconocimiento entre el TF y las protenas solubles dispara la cascada de la coagulacin.
Plaquetas: Son fragmentos celulares derivados del megacariocito. Participan en el proceso de
coagulacin en las fases de amplificacin y propagacin y forman parte del cogulo. En sus
membranas se dan muchas de las reacciones del proceso de coagulacin y secretan varios
elementos imprescindibles durante el proceso.
Factores de coagulacin: Son un conjunto de protenas que participan en las reacciones
enzimticas encadenadas que hacen posible la cascada de la coagulacin. Las protenas de la
cascada se van activando por protelisis adquiriendo actividad proteasa y activando por protelisis
a la siguiente protena de la cascada de coagulacin. La activacin de esta cascada lleva a la
produccin de grandes cantidades de trombina que posibilitan la formacin del cogulo. Algunos
de estos factores se asocian entre s en la membrana de plaquetas y de otros tipos celulares que
participan en el proceso de coagulacin
Sistema anticoagulante: Para evitar la formacin de trombos (cogulos fijos dentro de los vasos) o
mbolos (cogulos mviles que viajan por el torrente sanguneo) existen una serie de protenas
que confinan la formacin del cogulo a la zona lesionada. Algunos elementos de estos sistemas
son la protena C, la protena S, la antitrombina (AT) y la trombomodulina (TM).
Este proceso es debido, en ltima instancia, a que una protena soluble que normalmente se
encuentra en la sangre, el fibringeno, experimenta un cambio qumico que la convierte en
insoluble y con la capacidad de entrelazarse con otras molculas iguales, para formar enormes
agregados macromoleculares en forma de una red tridimensional.
El fibringeno, una vez transformado, recibe el nombre de fibrina. Coagulacin es por lo tanto, el
proceso enzimtico por el cual el fibringeno soluble se convierte en fibrina insoluble, capaz de
polimerizar y entrecruzarse.
Un cogulo es, por lo tanto, una red tridimensional de fibrina que eventualmente ha atrapado
entre sus fibras a otras protenas, agua, sales y hasta clulas sanguneas.
El proceso de coagulacin implica toda una serie de reacciones enzimticas encadenadas de tal
forma que actan como un alud o avalancha, amplificndose en cada paso: un par de molculas
iniciadoras activan un nmero algo mayor de otras molculas, las que a su vez activan un nmero
an mayor de otras molculas, etc.
En esta serie de reacciones intervienen ms de 12 protenas.

La desnaturalizacin es un proceso reversible? Porque?

La desnaturalizacin puede ser reversible o irreversible, pero cuando se rompen los enlaces
dislfuros que contribuyen a la conformacin de las protenas, este proceso es normalmente
irreversible.
Bajo ciertas circunstancias puede ser o no reversible; esto ltimo ocurre, generalmente
cuando las condiciones de desnaturalizacin no han sido demasiado drsticas, ni el tiempo
necesario. En algunas ocasiones el proceso de desnaturalizacin puede ocasionar otras
estructuras diferentes a la de la protena nativa, al establecer interreacciones y enlaces entre
regiones de aminocidos diferentes a los originales.