Investigadores Fundacin PROINPA, n.ortuno@proinpa.

org

BIOFERTILIZANTES ARTESANALES CON MICROORGANISMOS RIZOSFERICOS

NATIVOS
PARA UNA PRODUCCION ORGANICA DE QUINUA EN BOLIVIA
Noel Ortuo, Mayra Claros, Violeta Angulo, Oscar Navia y Edson Meneses
.
Resumen
Ante la necesidad y la demanda por los productores de quinua del Altiplano boliviano, inicialmente
se dise una estrategia de investigacin para el desarrollo de Bioinsumos. Especficamente en
este caso se presenta estudios de desarrollo de biofertilizantes. Se iniciaron investigaciones
haciendo prospecciones en la microbiologa del suelo, para lo cual se muestrearon suelos de la
rizsfera de las plantas de quinua. Se aislaron cerca de 50 microorganismos, entre los cuales se
obtuvieron hongos del gnero Trichoderma, Beauveria y Metarizium; y las bacterias del gnero
Bacillus, Azotobacter y Azospirilum. Luego, estos fueron evaluados en laboraotrio usando medios
especficos para encontrar su actividad funcional con la planta, sutilizndose cultivos para fijadoras
de Nitrgeno, solubilizadoras de Fsforo y promotoras de crecimiento. Se utiliza en esta ocasin
como estudio de caso a la bacteria B. subtilis, de la cual se presenta las pruebas de invernadero,
campo, posteriormente, la manera de su produccin masiva, formulacin y obtencin de un
biofertilizante. Asimismo, se indica como progresivamente se fue utilizando y evaluando con
productores de quinua del Altiplano boliviano.
INTRODUCCION
Es conocido el proceso de la erosin de la fertilidad de los suelos agrcolas en el Altiplano
boliviano, llegado a grados de desertizacin agudo, por la aridez de los suelos y la escasa
precipitacin, que generan suelos con baja cobertura vegetal y escasa reposicin de
materia orgnica. Estos problemas han generado disminuciones drsticas en la
produccin en los cultivos andinos, disminuyendo as bajos ingresos a los agricultores, y
en algunos, el agricultor a sido inducido a utilizar agroqumicos para superar esos
problemas, pudiendo llegar a alterar el medio ambiente y la salud. Ante esa necesidad, se
ha generado corrientes que impulsan una agricultura amigable al medio ambiente, que
permita producir quinua limpia de agrotxicos y saludables para al hombre, lo que ha ido
ganando nichos de mercados locales e internacionales.
En Bolivia existen movimientos que fortalecen estos principios y ha llegado a constituirse
en una necesidad de Estado, donde se ha establecido que es una necesidad Nacional la
produccin ecolgica (Plan Nacional de Desarrollo). Esto motiva a sectores de la sociedad
agrcola quienes demandan la necesidad de producir alimentos sin txicos, adems que
genera un ingreso importante para los productores del Altiplano.
Por esas razones, es necesario desarrollar tecnologa que apoye una produccin
ecolgica, como los biofertilizantes, permitiendo as disminuir efectos nocivos al medio
ambiente, producir alimentos sin contaminantes y bajar costos de produccin para los
pequeos agricultores, de esa forma los productores de quinua podran contar con una
tecnologa alternativa para superar esas limitaciones.
Investigadores Fundacin PROINPA, n.ortuno@proinpa.org
MATERIALES Y MTODOS
Para lograr ese fin se han seguido los siguientes pasos:
Explorar la biodiversidad microbiana del suelo, se hicieron muestreos de campos de
cultivos de quinua, del Altiplano. Sud, Central y Norte, los cuales fueron llevados a
laboratorio para su respectivo aislamiento.
Se realizaron aislamientos utilizando medios de cultivo que permitan separa bacterias,
actinomicetos y hongos que se encontraban en la rizsfera de la planta.
Establecer la actividad funcional en la relacin suelo-planta, utilizando medios de cultivos
especficos para solubilizadores de Fsforo, Fijadores de Nitrgeno y promotores de
crecimiento a travs de la prueba de AIA.
Se seleccionaron los microorganismos nativos en pruebas in vitro y luego los mejores
fueron llevados a invernadero, donde se volvi a tamizar en base a la reaccin de la
planta.
Las cepas promisorias fueron caracterizadas morfolgicamente y bioqumicamente, para
luego realizar su identificacin molecular.
Una vez obtenidas las cepas, se desarrollaron medio de cultivo, considerando caldos
como de papa, cebada, arroz y soya, los cuales potencialmente se pueden encontrar en el
mercado nacional.
Cuando ya se contaba con cantidades suficientes de las poblaciones microbiales
seleccionadas, se realizaron pruebas de campo para verificar lo observado en laboratorio.
Una vez verificada la eficiencia del microorganismos, se evaluaron formulaciones
artesanales en forma lquida y slida, los cuales no deban cambiar la viabilidad del
microorganismos.
Despus de disponer el biofertilizante formulado se realizan validaciones en campos de
agricultores, desde parcelas de investigacin hasta extensivas.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Para el desarrollo de bioinsumos es importante tener claro los macropasos (figura 1) que
se deben seguir y el tiempo necesario para lograr el desarrollo de un producto, tambin
ser importante desarrollar las capacidades bsicas para disponer de las facilidades
bsicas para ese fin.
Sin embargo presentaremos los pasos claves para demostrar que es posible el desarrollo
de bioinsumos para una produccin sostenible y soberana.
Figura

Figura 1. Proceso de investigacin para el desarrollo de Bioinsumos

Aislamiento y formacin de cepario.

A. Aislamiento
a. Hongos
i. T. harzianum, T. asperellum T. koningiopsis
ii. Beauveria basiana y B. brogniartii
iii. Metarrizium sp.

b. Bacterias
i. Bacillus subtilis
ii. Bacillus thuringiensis
iii. Azotobacter
iv. Azospirilum

Despus de los aislamientos se constat que tambin hay la presencia de microorganismos

entomopatgenos que pueden ser explorados posteriormente. Con el material disponible se
estructur la conservacin de las cepas bajo condiciones disponibles en el laboratorio (figura 2),
considerando la procedencia, fecha de recoleccin, recolectos, altitud y otros.
Figura 2. Cepario de microorganismos, conservados en condiciones
disponibles en laboratorio.

Como caso de estudio de caso, solo presentaremos el caso de Bacillus subtilis, por ser
una bacteria de la cual se conoce varios mecanismos en su simbiosis con la planta, por
esa razn no describiremos los resultados de la actividad funcional de todos los
aislamientos ni las pruebas in vitro, sino directamente las caractersticas funcionales, su
seleccin in vitro ni en invernadero, sino directamente su produccin masiva.
Las muestras provenientes de la rizsfera se purific en cultivo TSB (Tryptic Soy Broth),
incubndola por 24hrs. a 28 C, despus de este tiempo se pas este cultivo a placas con agar
nutriente las cuales se incubaron a 28 C por 48 hrs. Luego se seleccionaron las colonias
caractersticas de Bacillus subtilis; colonias planas de color blanco crema, circulares de bordes
irregulares y ondulados (figura 3).

Figura 3. Crecimiento de colonias de Bacillus subtilis en agar TSA

Esta bacteria cuando entra en simbiosis con la planta, libera una encima llamada Iturin
A1, la cual induce una resistencia sistmica natural en la planta contra patgenos
bacterianos y fungosos, propiedad llamada Resistencia Sistmica Adquirida (SAR) (Butt et
al., 1999). Esta propiedad hace que tenga un efecto supresor de patgenos de suelo y
fundamentalmente promueve el crecimiento de la planta hacindola ms vigorosa y se
obtenga mejores rendimientos. Tambin tiene potencial para la solubilizacin de Fosforo
del suelo, as ayuda al reciclaje de nutrientes para la planta.
B. Seleccin de medios de cultivos para la multiplicacin de la bacteria.
Como se indic anteriormente presentaremos lo observado con la bacteria B. subtilis.
Para disponer en cantidades suficientes para su evaluacin en bioensayos en campo, se
desarroll un medio de cultivo para su multiplicacin masiva, para lo cual se seleccionaron
y evaluaron diferentes medios lquidos:
1. Caldo de papa de la variedad Waycha, la cual fue hervida en agua por 5 minutos.
2. Caldo de arroz hervido en agua por 10 minutos.
3. Caldo proteico de soya.

Se incubaron los tratamientos en un shaker (figura 4) a 100 rpm, 35 C de temperatura por

un lapso de diez das.
Figura 4.
Figura 4. Diferentes medios de cultivo y su produccin aerbica en laboratorio de B. subtilis

Para la produccin de la bacteria en medio lquido se adecu un sistema aerbico (figura

5), donde se cosech al tercer da y cuantific las poblaciones bacterianas.
Cuando se compararon los medios de cultivos se evidenci que hubieron diferencias
estadsticamente significativas (p<0,001) para el N de Unidades formadoras de colonia entre los
diferentes tratamientos (Tabla 1).

Tabla 1. 2,57E+09 a
Comparaci
n de
medios de
cultivos.
Soya
Papa 2,69E+08 b
Arroz Soya 2,06E+08 b
Arroz 1,00E+08 b
PapaSoya 9,69E+07 b
TSB 6,20E+07 b

En el Tabla 1 se observ que el caldo en base a soya es superior estadsticamente al

resto de los tratamientos (Pr<0,001).
C. Multiplicacin masiva y formulacin en polvo de la bacteria.

Una vez desarrollado el medio de cultivo y el sistema aerbico, se construy un bioreactor

artesanal para la multiplicacin a mayor escala de la bacteria, para eso se utiliz material
disponible en el mercado local, como recipientes de plstico y bombas de peceras, como
se muestra en la figura 5.
Figura
Figura 5. Biodigestor artesanal y semi industrial para la produccin de Bacillus subtilis.

Posteriormente, debido a que las cantidades de produccin no eran suficientes se tuvo

que adecuar con ayudad de ingenieros mecnicos, un bioreactor en acero inoxidable
(figura 4) que tenga los mismos principios, pero que permita una produccin en
volmenes que permita hacer pruebas en mayores superficies. Esto permiti hacer un
escalamiento en la produccin con el que se puede abastecer hasta 500 hectareas.
Para la formulacin en polvo de la bacteria se us bandejas de plstico (figura 7), y se
evalu diferentes medios inertes, lo cuales no afecten al microorganismo, para eso se
cuido que no existan variaciones en el pH u otro factor fsico no adecuado, se tom en
cuenta materiales de amplia disponibilidad en el mercado local como la caolinita,
carbonato de calcio y arcillas.
Figura
Figura 7. Formulacin en polvo y secado de Bacillus subtilis.

Para mejorar esta tecnologa que an es muy artesanal y que no permite formular cantidades altas
de la bacteria, se dise, con apoyo de un ingeniero mecnico, un secador (figura 8) que tiene una
capacidad de 350 kg. en 36 horas. Con este equipo podemos hacer proyecciones mayores a las 500
hectreas, lo cual nos da la oportunidad de abastecer a mayor cantidad de pequeos agricultores.

Figura 8. Secador con aire forzado para la formulacin en polvo de la bacteria

Posteriormente, se hicieron evaluaciones con Bacillus subtilis, bacteria promotora de
crecimiento (BPC) y supresora de patgenos de suelo, utilizando una cepa de Suiza
(formulacin slida, 250g/100 l agua/ha) y boliviana (formulacin slida, 1 kg/100 lt.
agua/ha y la lquida, 1 lt. /100 l agua/ha). Se adicion compost (7 tn/ha) a la siembra para
favorecer la reproduccin del microorganismos. Ambas cepas Se evaluaron las cepas
comercial y la seleccionada en Bolivia fueron evaluadas en campos de agricultores,
siendo que las mismas tuvieron los rendimientos del cultivo de cebolla, utilizado como
modelo biolgico de prueba (Figura 9).

D. Generacin y formulacin de bioinsumos

En base a resultados de la investigacin, se dise un plan para emprender el reto de la
produccin masiva y formulacin de bioinsumos, que permitan ser accesibles a los agricultores,
permitan bajar sus costos de produccin, cuide su salud y el medio ambiente

Figura 10. Formulacin y envasado de biofertilizantes con cepas de microorganismos nativos.

Se utilizaron materiales locales como birreactores construidos en el pas, se optimiz los

medios de cultivos, utilizando extractos de especies cultivadas nativas, donde se optimiz
las relaciones de pH, temperatura, aireacin adecuada y relaciones de C/N, adems se
evalu ingredientes inertes que estn permitidos en la produccin orgnica.
De esa forma se pudo obtener biofertilizantes (figura 11) en base bacterias del tipo
Bacillus, uso de residuos orgnicos como los estircoles y otros, utilizando recursos
naturales para su formulacin.:
Figura 11.
Figura 11. Biofertilizantes formulados con cepas nativas, material y tecnologa local.

Consideramos que estos resultados demuestran que se puede ofertar alternativas

tecnolgicas, hechos en base a la biodiversidad microbiana nativa de Bolivia, siendo una
tecnologa apropiada a nuestro medio. Estos bioinsumos desarrollados para los pequeos
productores quienes pueden producir productos mas sanos, proteger su salud y el
ambiente, incluso llegar a bajar sus costos de produccin o disponer de bioinsumos para
enfrentar mercados mas competitivos.

La formulacin masiva se inici el ao 2006 produciendo para 4 has, luego se increment hasta
200 has. para la produccin de quinua orgnica y otros cultivos en Bolivia, esto permite mostrar
que podemos disminuir la dependencia de insumos impostados y es posible producir bioinsumos
para una produccin sostenible y demostrar pasos hacia una soberana alimentaria (figura 12).

Figura 12. Uso de Bioinsumos en el cultivo de quinua en el Altiplano Sud.

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