Cromatografa

en papel
Quinto Semestre
Qumica Biolgica
Universidad Galileo
ANTECEDENTES
Las
experiencias en cromatografa se
remontan a 1850, cuando Runge
describi para el anlisis de mezclas de
colorantes, aplicando gotas de
colorantes en papel y notando la
separacin en diferentes colores.
ANTECEDENTES
Sin embargo, el crdito del
descubrimiento de la cromatografa se la
da al botnico Tswett, quien en 1906
efectu la separacin de pigmentos
vegetales en un tubo conteniendo
material adsorbente solido finamente
dividido,.
Se basa en.

En el coeficiente de particin liquido-

liquido de los compuestos.
CROMATOGRAFA EN PAPEL
Fue desarrollada por Martin en 1944.
Consiste en colocar en tiras de papel
como soporte de una fase estacionaria
acuosa mientras una fase mvil orgnica
se desplaza en la tira. Se utilizan gotas de
la sustancia a separar cerca del punto
donde partir el desplazamiento de la
fase orgnica
 CROMATOGRAFA
BIDIMENSIONAL
Es una variante de considerable poder
de separacin, ya que se emplean dos
diferentes solventes aplicados
secuencialmente para desplazar un solo
compuesto.
La gota del compuesto (generalmente
un aminocido o un pptido) se revela
como una mancha en papel. Y el
material revelador es usualmente
ninhidrina o permanganato de potasio.
 CROMATOGRAFA EN CAPA
FINA
Utiliza el mismo principio de la cromatografa
en papel, el soporte utilizado es silica gel o
celulosa colocadas en una hoja de vidrio o
plstico en forma de capas muy finas.
En la cromatografla de capa fina, un
adsorbente est depositado formando una
delgada capa sobre una placa de vidrio,
papel de aluminio u otros materiales, por la
que ascienden, arrastradas por un disolvente
(eluyente), una o ms sustancias que se
pretenden separar o identificar.
RELACIN DE FRENTES
La relacin de la distancia recorrida por
el compuesto entre la distancia que
recorre el frente del solvente desde el sitio
de aplicacin se conoce como valor Rf
(relacin de frentes)
El Rf es una constante importante para
propsitos de identificacin.
RF=(distancia recorrida por el compuesto)
(distancia recorrida por el disolvente)
RELACIN DE FRENTES
Naturalmente, los valores de RF para un
determinado compuesto varan
ampliamente con los cambios de
disolvente.
El valor de RF para un compuesto dado
depende de su estructura y es una
constante fsica de ste, lo mismo que lo
es su punto de fusin.
DISOLVENTES DE ELECCIN
Cuanto mayor es la polaridad de los
compuestos, ms intensamente se ven stos
atrados por el adsorbente. Se puede
establecer el orden aproximado de
polaridad:
cidos carboxlicos < aminas < alcoholes y
tioles < aldehdos, cetonas y steres <
halogenuros de alquilo y arilo <
hidrocarburosno saturados < hidrocarburos
saturados
DISOLVENTES DE ELECCIN
La polaridad del disolvente influye
asimismo en la velocidad de ascensin
del soluto a lo largo de la capa de
adsorbente. A mayor polaridad del
disolvente, mayor grado de ascensin del
soluto por la placa, pudindose
establecer un orden orientativo de
polaridad creciente de los disolventes:
ter de petrleo < tetracloruro de
carbono < ciclohexano < ter etlico
< acetona < benceno < acetato de
etilo < cloroformo < etanol < metanol <
agua < piridina < cido actico
MATERIALES
Bata, guantes.
Tubos capilares
Frasco con tapadera hermtica
2 tiras de papel filtro de 3 x 8 cm
Regla , lpiz y tijera
Cloroformo
Hojas de remolacha
Mortero con pistilo
PROCEDIMIENTO
Paso no. 1
Macerar las hojas de remolacha en el
mortero con pistilo hasta extraer el
pigmento color purpura fuerte que estas
contienen.
Paso no. 2
Cortardos tiras de papel filtro de 3 x 8cm.
Hacer una marca con lpiz a 1cm de la
parte inferior.
Paso no. 3
Con la ayuda de un capilar de vidrio
colocar una gota de la mezcla sobre la
lnea trazada en el cromatofolio. Dejarla
secar y repetir el procedimiento 10 veces
Paso no. 4
Dejarsecar las placas. Colocar en el
frasco aproximadamente 15mL de
cloroformo, tapar bien para que los
vapores ocupen la atmosfera del frasco y
evitar que se escapen.
Paso no. 5

Colocarlas placas de papel con la muestra

dentro del frasco con cloroformo, dejar que el
eluyente suba por capilaridad.
Paso no. 6
Cuando el nivel de disolvente se
situ a unos pocos milmetros de la
parte superior del cromatofolio,
extraer ste y dejarlo secar al aire.
Marcar con un lpiz el nivel que ha
alcanzado el disolvente.
Paso no. 7
Medir
la distancia a la que llego cada
mancha y calcular el Rf.