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Tipos de Cultivo RManarin 12-5 PDF
Tipos de Cultivo RManarin 12-5 PDF
Generalidades
Curso Introduccin al Cultivo de Clulas
Eucariotas
Ao 2015
Dra. Romina Manarin
Y as comenz todo
Alexis Carrel
Wilhem Roux
1913
1885
Ross Harrison
1907
Cultivo celular
CULTIVO DE
RGANOS
EXPLANTES
PRIMARIOS
CLULAS
DISGREGADAS
Cultivo de rganos
El tejido se coloca sobre una
rejilla situada en la interfase
lquido-gas de un medio del que
obtiene los nutrientes.
Representa una buena rplica
del tejido de origen ya que se
conservan las interacciones
histolgicas.
El crecimiento es limitado.
Se necesita un nuevo explante
para cada experimento.
Explantes primarios
Constituidos por fragmentos pequeos de
tejidos u rganos que se adhieren a una
superficie en la que generalmente crecen
las clulas de la periferia del explante.
til para pequeas cantidades de tejidos,
como biopsias de piel.
Enzimtica
1.tripsina fra
2.tripsina caliente
3.colagenasa
Mecnica
Tripsina caliente
Pequeas porciones
de tejido se incuban
con tripsina a 37C y
las clulas disociadas
deben recolectarse
por centrifugacin
cada media hora. La
tripsina se neutraliza
con suero en medio
de cultivo.
Tripsina fra
Las porciones de
tejido se incuban en
tripsina a 4C
durante 6-18 hs
permitiendo la
penetracin con una
mnima actividad
trptica y la digestin
se puede hacer en
un tiempo corto de
20-30 min a 37C.
Disgregacin por colagenasa
Disgregacin mecnica
SCRAPING O RASCADO
DISGREGACIN CON LA
JERINGA
TAMIZADO
PIPETEO
Inicio de un cultivo celular
Puede derivar del crecimiento de las clulas disgregadas.
El cultivo primario es lo primero de una serie de
procesos selectivos que finalmente darn origen a una
lnea celular.
Los cultivos celulares son los ms utilizados
MONOCAPA SUSPENSIN
LNEA CELULAR
Subcultivos en monocapas
Tripsinizacin
Cundo hacer un Subcultivo o Pasaje
fibroblastos mioblastos
Clulas de tabaco
Epimastigotes de T. cruzi
Clulas VERO Clulas RAW 264.7
Ventajas de los cultivos celulares
Ventajas de los cultivos celulares
Desventajas de los cultivos celulares
Desventajas de los cultivos celulares
Bancos y colecciones de cultivos
celulares
Los 2 bancos de lneas celulares ms importantes son:
- American Type Culture Collection (ATCC)
- European Collection of Cell Cultures (ECACC)
En Argentina:
- Asociacin Banco Argentino de Clulas (ABAC)
- Asociacin Argentina de Bancos de Tejidos (para
transplantes)
- Centro de Investigaciones en Qumica Biolgica
de Crdoba (ciquibic)
Servicios de ABAC