DIVISIN ACADEMICA DE CIENCIAS DE LA SALUD

CATEDRATICA:
Q.F.B. MARIA MAGDALENA GONZALEZ ORTIZ

MATERIA:
MICROBIOLOGA

GRUPO:
C
 TEMA:

TECNICAS QUE APOYAN

EL ESTUDIO DE LA
MICROBIOLOGIA
TINCIONES
 TINCIONES
Los colorantes son compuestos
qumicos utilizados para aumentar el
contraste.

TIPOS DE COLORANTES:
Casi todos los colorantes son sales, compuestos
por iones cargados.

Colorantes bsicos: son aquellos en los cuales

el agente que tie es el ion cargado
positivamente.

Colorantes cidos: el colorante es el ion

cargado negativamen
 colorantes bsicos ms comunes:
La safranina,
La fucsina bsica,
El cristal violeta,
Y azul de metileno.

colorantes cidos: se utilizan para teir tejidos animales

infectados con microorganismos.

Entre los ms frecuentes estn:

La eosina,
La fucsina cida,
Y el rojo Congo.
 TINCIONES

* COLORANTES VITALES:
- FIJACIN POR CALOR.
- EXTENSIN.
- COLORANTE.
- SE RETIRA EXCESO DE COLORANTE.
- LAVANDO CON AGUA.
* TCNICAS DE TINCIN *
* SIMPLES.

* DIFERENCIALES.

* DE GRAM.
 TINCIN DE GRAM
La tincin de Gram se utiliza para
identificar bacterias tratndolas con
un tinte azul y observando cmo
responden a esta coloracin.

La forma en que se colorean los

distintos tipos de clulas depende de
las variaciones de estructura de la
pared celular.

Las bacterias Gram positivas, como

Lactobacillus acidophilus, retienen
el tinte y se colorean de azul.
EJEMPLOS DE UNA TINCIN DE GRAM

Tincin GRAM: Bacterias Gram-Positivas

cocos
 * ESPECIFICAS

DE ESPORAS DE DE FLAJELOS DE LEIFSON NEGATIVA.

WIRTZ-CONKLIN

En la primera imagen es para detectar endoesporas (tcnica de Wirtz-Conklin),

en la segunda es la tincin de Leifson para detectar flagelos,en la tercera es la
tincin negativa para detectar cpsulas.
 Mordientes: aunque no son colorantes, tienen gran importancia en
algunas tcnicas de tincin.

Se pueden utilizar para producir un engrosamiento de ciertas

estructuras celulares externas.

Existen 3 tipos de tcnicas de tincin:

simples,

diferenciales,

especificas (especiales).
 TINCIONES SIMPLES

se usa un nico colorante, que siempre es de tipo bsico.

se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las

clulas absorbern el colorante y quedarn teidas del mismo
color.

La tincin simple mejora la observacin de la clula completa.

 TINCIONES DIFERENCIALES

se utiliza para distinguir entre tipos de microorganismos.

 Consta de 2 etapas:

tincin primaria (siguiendo el mismo mtodo que en una

tincin simple).
tincin de contraste: se utiliza otro colorante que tie las
clulas no teidas por el primer colorante.

Estas tinciones son muy utilizadas en microbiologa.

Tincin de Gram: fue desarrollada por el bacterilogo dans

Christian Gram en 1884.
Esta tincin clasifica las bacterias en 2 grupos:
o Gram positivas,
o Gram negativas.
 Bacilos Gram-positivos

Las clulas Gram negativas poseen una capa de

peptidoglicano delgada y una membrana externa.

Las bacterias Gram positivas poseen una capa gruesa de

peptidoglicano y carecen de membrana externa.

La tincin de Gram es extraordinariamente til en clnica.

Cocos Gram-negativos Bacilos Gram-negativos

 Tincin de cido-alcohol resistencia:
fue desarrollada por Paul Ehrlich en 1882.
Actualmente se utiliza una modificacin de
la tcnica de Ehrlich que recibe el nombre
de tincin de Ziehl-Neelsen.

Esta tincin sirve para teir bacterias del

gnero Mycobacterium.
* DIFERENCIAL DE CIDO-ALCOHOL
RESISTENCIA.

Con esta tcnica identificamos Mycobacterium, ya que esta bacteria

posee ceras en su pared celular que resisten la decoloracin.
La micrografa muestra masas de clulas de M. Leprae
en el interior de sus clulas hospedadas.
 TINCIONES ESPECFICAS
se utilizan para incrementar el contraste en las clulas microbianas
y revelar estructuras particulares, entre las que se incluyen las
endosporas, los flagelos y las cpsulas.

Tincin de esporas de Wirtz-Conklin: algunas bacterias poseen

endosporas, que son estructuras de resistencia que les permiten
sobrevivir en condiciones ambientales extremas. Y es efectiva.

Tincin de flagelos de Leifson: Esta tincin permite determinar el

nmero y la disposicin de los flagelos de las bacterias, lo que
constituye una informacin esencial para la identificacin de
muchas especies.
 Tincin negativa: algunas bacterias estn
rodeadas por una estructura protectora
denominada cpsula. Para poner de manifiesto
la presencia de una cpsula se utiliza esta
tcnica.
TCNICA DE CULTIVO
 CULTIVO DE
MICROORGANISMOS

* CULTIVAR UN MICROORGANISMO SIGNIFICA

PROPORCIONARLE LAS CONDICIONES
ADECUADAS PARA SU CRECIMIENTO Y
MULTIPLICACIN.
 QU ES CULTIVAR?
Cultivar un microorganismo
significa proporcionarle las
condiciones adecuadas
para su crecimiento y
multiplicacin
 TIPOS DE CULTIVOS

* CULTIVOS AXNICOS.

* CULTIVOS MIXTOS.
 CULTIVO AXNICO

Aportacin de Robert Koch

Consiste en una sola especie

microbiana, proveniente de una
sola clula

Son muy raros en la naturaleza

Se obtienen artificialmente en el
laboratorio

Este mtodo se desarrollan para:

bacterias, hongos, algas,
protozoos y algunos virus.
 CULTIVOS MIXTOS

En este tipo de cultivo viven muchas y diferentes especies de forma

conjunta

Se encuentran en los medios naturales como: el suelo, agua en el

cuerpo humano

Son complicados para la obtencin de resultados exactos

 OBTENCIN DE UN CULTIVO AXNICO

Es un proceso de 2 etapas:

1. Esterilizar todos los materiales

para eliminar todos los
microorganismos presentes en
ellos

2. Aislar y cultivar un solo

microorganismo, para producir
un clon de descendientes
Colonias de bacterias Escherichia coli (ms grande, rosa)

y Proteus vulgaris (ms pequea, de color castao) que crecen juntas en una
placaPetri.

En circunstancias normales estas bacterias son inofensivas y habitan en el

intestino humano favoreciendo la digestin, si bien pueden convertirse en
patgenas y producir infecciones del tracto urinario.
 CONTROL

Los cultivos se mantienen a temperatura constante en incubadores

en baos de agua

Controlados termostticamente

Los incubadores estufas, son cmaras con aire adecuados para el

crecimiento tanto de cultivos slidos como lquidos preparados en
cualquier recipiente, incluyendo placas de Petri, tubos de ensayo
matraces
 CONDICIONES AMBIENTALES PARA EL
CULTIVO EN EL LABORATORIO
TEMPERATURA
* PH

Por medio de una desecacin

(eliminacin de agua)
MANTENIMIENTO DE
LOS CULTIVOS
Almacenamiento a baja temperatura

congelacin
 HEMOCULTIVO

Cultivo sanguneo

Es un examen para determinar si microorganismos como bacterias,

micobacterias u hongos estn presentes en la sangre

Se coloca una muestra de sangre en una preparacin especial de

laboratorio y se incuba en un ambiente controlado por 1 a 7 das

Es importante que la muestra sangunea no se contamine con

organismos de la piel o del equipo utilizado para preparar el examn
 UROCULTIVO

El urocultivo permite la identificacin del nmero y los tipos de bacterias

presentes en la orina.
 COPROCULTIVO

Estudio ordenado por el mdico cuando se sospecha la presencia de

parsitos, larvas, o huevos de diferentes familias de helmintos, amebas,
tenias y protozoos

Se toman 3 muestras de heces en 3 das distintos

Se usa de preferencia en la bsqueda de patgenos intestinales

ESTERILIZACIN
 TIPOS DE
ESTERILIZACIN
* POR CALOR.

* FILTRACIN.

* COMPUESTOS QUMICOS.
 ESTERILIZACIN

Eliminacin de todos los microorganismos.

Hay dos tipos de Mtodos: Fsicos y Qumicos.
 Como medios usuales de
esterilizacin en el laboratorio se
utilizan:
el calor, la filtracin (en
mtodos Fsicos) y
los compuestos qumicos
(Mtodos Qumicos.
 ESTERILIZACIN POR CALOR

El calor es el mtodo de
eleccin para esterilizar el
material de laboratorio resistente
a altas temperaturas.

La temperatura y el tiempo
requeridos para esterilizar un
material depende de que se est
utilizando calor seco o calor
hmedo.

El calor hmedo mata los

microorganismos ms
rpidamente que el calor seco.
Los objetos no pueden esterilizarse hirvindolos en contenedores
abiertos, por que la esterilizacin requiere una temperatura superior a
la de ebullicin del agua.
La esterilizacin por calor hmedo se realiza en cmaras
presurizadas, esta cmara es la autoclave.
Una autoclave utiliza vapor de agua a presin
para esterilizar objetos mediante calor
 ESTERILIZACIN POR FILTRACIN

La filtracin es el mtodo de eleccin para esterilizar soluciones

de: vitaminas, antibiticos y otos compuestos termolbiles.

Las clulas microbianas pueden retirarse de los lquidos o gases

por filtracin. La filtracin es lenta y cara, por esta razn solo se
utiliza solo para lquidos termolbiles, que no se pueden
esterilizar en el autoclave.

Los filtros utilizados se denominan filtros de membrana. Estas

membranas estn compuestas de: intercelulosa, esta es un
derivado de la celulosa que tambin se utiliza como explosivo.
Cmara libre de Oxgeno. Los microorganismos
anaerbicos estrictos mueren cuando se exponen al
oxgeno, incluso cuando la exposicin es breve.
 ESTERILIZACIN POR COMPUESTOS
QUMICOS

La mayora de los compuestos qumicos no se pueden utilizar

para esterilizar medios de cultivos, pues permanecen en ellos y son
txicos para los microorganismos que luego se han de cultivar.

El hipoclorito sdico se utiliza para destruir los cultivos de la

mayora de los microorganismos patgenos, para que no
contaminen el medio ambiente.

Tambin se utiliza para esterilizar la superficie de ciertos

materiales biolgicos, como semillas y los tejidos vegetales.
 FERMENTACIN
GRACIAS A SCHWANN Y KUTZING (1836),
PASTEUR CONCLUY QUE:

- LOS PROCESOS FERMENTATIVOS ERAN DEBIDOS

A LA ACTIVIDAD DE MICROORGANISMOS O
FERMENTOS VIVOS Y NO A PRODUCTOS DE
DESCOMPOSICIN, COMO SOSTENIAN LAS
TEORIAS DE BERZELIUS, LIEBIG Y WHOLER.
El proceso de fermentacin tambin se
utiliza para la elaboracin de vinos.
 PASTEURIZACIN
LA PASTEURIZACIN ES UN TRATAMIENTO POR
CALOR ESPECIAL PARA CONTROLAR LOS
MICROORGANISMOS DE LA LECHE, PRODUCTOS
LCTEOS, VINO Y CERVEZA.

EN LA PASTEURIZACIN NO SE MUEREN TODOS LOS

MICROORGANISMOS PRESENTES, S SE DESTRUYE A
LA MAYORA DE LOS PATGENOS Y DE LOS
MICROORGANISMOS QUE CAUSAN EL DETERIORO
RPIDO DE LOS ALIMENTOS.
 PARA QUE SIRVE LA
PASTEURIZACIN?

LA PASTEURIZACIN DE LA LECHE SE
UTILIZA PRINCIPALMENTE PARA
ELIMINAR LAS BACTERIAS PATGENAS
COMO LO SON:

MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
(AGENTE ETIOLGICO DE LA
TUBERCULOSIS).

* BRUCELLA, CAUSA BRUCELOSIS

(ENFERMEDAD SISTMICA GRAVE).
 Pruebas Inmunolgicas
Estastcnicas de apoyo al estudio de la
microbiologa son reacciones antgeno
Anticuerpo y pueden ser en placa o con
aparatos especializados.
Pruebas de Aglutinacin en placa.

TIFICO O
TIFICO H
PARATIFICO A
PARATIFICO B
PROTEUS OX19
BRUCELLA ABORTUS
Prueba de Hemaglutinacin indirecta en placa con pozos
para
Detectar anticuerpos contra la Entamoeba hystolcia
Prueba de Hemaglutinacin indirecta en placa con
pozos para
Detectar anticuerpos contra el Trypanosoma crusi
PRUEBA DE ELISA.- Tcnica en placa que necesita un
equipo, lavador ,
incubador y lector para realizar la prueba.

TORCH
Incluye:
TOXOPLASMA
RUBEOLA
HERPES
CITOMEGALOVIRUS
HIV
PRUEBA DE ELISA.- Tcnica en placa que NO necesita un equipo,
lavador ,
incubador y lector para realizar la prueba.
PRUEBA DE INMUNOFLUORECENCIA.- Para detectar Chlamydia
trachomatis
con la ayuda de un microscopio de fluorecencia.
EQUIPO AUTOMATIZADO PARA ELISA
EQUIPO AUTOMATIZADO PARA VIROLOGA Y PARASITOLOGA
EQUIPO AUTOMATIZADO PARA VIROLOGA Y PARASITOLOGA
 FIN
Gracias por su atencin