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ESTANDARIZACIN DE UNA METODOLOGA PARA LA DETERMINACIN
MULTIRESIDUO DE PLAGUICIDAS EN CAF VERDE
HUGO FERNANDO ARIAS LOAIZA
UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA
FACULTAD DE TECNOLOGA
ESCUELA DE QUMICA
PEREIRA
2013
TRABAJO DE GRADO
Requisito final para optar al ttulo de Qumico Industrial
DIRECTOR:
Qco. MSc. JUAN PABLO ARRUBLA VELEZ
UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA
FACULTAD DE TECNOLOGA
ESCUELA DE QUMICA
PEREIRA
2013
NOTA DE ACEPTACIN DEL TRABAJO DE GRADO
Presentado por:
Los suscritos director y jurado del presente trabajo de grado, una vez revisada la
versin escrita y presenciado la sustentacin oral, decidimos otorgar:
La nota de _______________________________________
Con la connotacin _______________________________________
Para constancia firmamos en la ciudad de Pereira hoy:
Director:
Juan Pablo Arrubla Vlez _______________________________________
Jurado:
Firma: _______________________________________
Jurado:
Firma: _______________________________________
A Yenny y Mara.
AGRADECIMIENTOS
Quiero agradecer al Doctor Jos Hiplito Isaza Martnez, gran amigo y maestro, de
quien he aprendido todo lo que se sobre cromatografa y qumica analtica, al
director de este trabajo Juan Pablo Arrubla Vlez docente de la escuela de
qumica de la Universidad Tecnolgica de Pereira por sus acertadas orientaciones
y a Diana Patricia Pelez Manrique, analista del Laboratorio de Calidad de
Productos Naturales por su invaluable colaboracin en la ejecucin de este
trabajo.
TABLA DE CONTENIDO
INDICE DE TABLAS 15
INDICE DE FIGURAS 17
RESUMEN 19
INTRODUCCION 21
JUSTIFICACIN 23
OBJETIVOS 25
1. MARCO TEORICO 27
1.1. EL CAF 27
1.1.1. Caf de Colombia 29
1.1.2. La cadena del caf 30
1.1.3. Principales enfermedades del caf 31
1.1.4. Principales plagas del caf 33
1.2. LOS PLAGUICIDAS 35
1.2.1. Generalidades e historia 35
1.2.2. Qumica de los plaguicidas. 37
1.3. LEGISLACIN PARA EL CONTROL DE PLAGUICIDAS 40
1.3.1. Legislacin internacional 40
1.3.2. Legislacin nacional 41
1.4. TECNICAS ANALTICAS PARA LA DETERMINACIN DE PLAGUICIDAS.

45
1.4.1. Cromatografa de gases 45
1.4.1.1. Instrumentacin para cromatografa de gases 47

1.4.1.2. Puerto de inyeccin 47
1.4.1.3. Horno y columna 48
1.4.1.4. Detector 53
1.4.2. Detector selectivo de masas 55
1.4.2.1. El anlisis cuantitativo con espectrometra de masas 59
1.5. ESTANDARIZACIN DE TCNICAS ANALTICAS 59
1.5.1. Exactitud 60
1.5.2. Precisin 60
1.5.3. Incertidumbre de la medicin 61
1.5.4. Lmite de deteccin 65
1.5.5. Lmite de cuantificacin 65
2. PARTE EXPERIMENTAL 67
2.1. MUESTRAS DE ANLISIS 67
2.2. ANALITOS 67
2.3. ESTANDARES 68
2.3.1. Soluciones patrn individuales 68
2.3.2. Patrones de calibracin 69
2.4. ANLISIS CROMATOGRFICO 69
2.4.1. Anlisis cualitativo 70
2.4.2. Calibracin instrumental 71
2.5. PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS 71
2.5.1. Molienda 71
2.5.2. Extraccin de los plaguicidas de la matriz de caf. 71
2.5.3. Limpieza de los plaguicidas 72

2.6. ANLISIS CUANTITATIVO DE LOS PLAGUICIDAS 74
2.6.1. Evaluacin de la matriz 74
2.6.2. Porcentaje de recuperacin 75
3. DATOS Y RESULTADOS 77
3.1. RESULTADOS DEL ANLISIS CUALITATIVO 77
3.1.1. Determinacin de los tiempos de retencin 77
3.1.2. Obtencin de los espectros de masas 78
3.2. CURVAS DE CALIBRACIN 79
3.3. LIMITES DE DETECCIN Y CUANTIFICACIN 82
3.3.1. Evaluacin de matriz 83
3.4. PORCENTAJES DE RECUPERACIN 86
4. ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE MEDICIN 87
4.1.1. Definicin del mensurando 87
4.1.2. Modelo fsico y modelo matemtico 87
4.1.3. Fuentes de incertidumbre 88
4.1.4. Cuantificacin de las incertidumbres estndar 89
4.1.5. Coeficientes de sensibilidad 92
4.1.6. Incertidumbre combinada y expandida 93
5. CONCLUSIONES 97
BIBLIOGRAFA 99
ANEXOS 103
INDICE DE TABLAS
Tabla 1. Caractersticas qumicas de algunos plaguicidas controlados en caf en

grano por la resolucin 2906 de 2007 del ministerio de la proteccin
social. 38
Tabla 2. Resoluciones vigentes para el control de plaguicidas en Colombia. 41
Tabla 3. Fases estacionarias liquidas ms comunes en cromatografa de gases
capilar 50
Tabla 4. Detectores ms comunes para cromatografa de gases . 53
Tabla 5. Tipos de analizadores de masas. 57
Tabla 6. Analitos en el mtodo para determinacin de plaguicidas en caf verde.67
Tabla 7. Estndares de plaguicidas para la preparacin de patrones de referencia.
Los nmeros de catalogo corresponden a la marca ChemService. 68
Tabla 8. Solventes para la preparacin de soluciones patrn de plaguicidas
individuales. 68
Tabla 9. Concentracin de los patrones de referencia con que se construyeron las
curvas de calibracin. 69
Tabla 10. Condiciones instrumentales en el anlisis cualitativo de los plaguicidas.
70
Tabla 11. Iones de cuantificacin y referencia de los plaguicidas. 71
Tabla 12. Tiempos de retencin de los plaguicidas en la mezcla madre estndar.
77
Tabla 13. Similitud de los espectros experimentales con la base de datos. 79
Tabla 14. Tabla de resultados. rea bajo el pico obtenida por triplicado para
diferentes concentraciones de forato. 80
Tabla 15. Coeficientes de correlacin de las graficas de calibrado de los
plaguicidas. 82
Tabla 16. Relacin seal ruido de los picos de Forato. 82
Tabla 17. Limites de deteccin y de cuantificacin de los plaguicidas. 83
Tabla 18. Relacin seal ruido de los muestras de caf verde en blanco para
evaluar el efecto de la matriz 84
Tabla 19. Lmites de deteccin y cuantificacin finales despus de considerar el
efecto de matriz. 85
Tabla 20. Comparacin de los lmites de cuantificacin. LC-1 es el lmite de
cuantificacin calculado de la grafica de calibracin sin tener en cuenta el
efecto de la matriz en la seal. 85
Tabla 21. Porcentajes de recuperacin en la extraccin de plaguicidas a partir de
muestras de caf verde en grano. 86
Tabla 22. Variabilidad en las reas bajo el pico de forato 90
Tabla 23. Resultados de la cuantificacin de plaguicidas en caf verde. 94
Tabla 24. Error en el clculo de concentracin de plaguicidas en caf verde. 94
INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Esquema de un cromatgrafo de gases. 47
Figura 2. Tipos de insertos para cromatografa de gases. 48
Figura 3. Cromatograma tomado en un cromatgrafo de gases. 54
Figura 4. Esquema de un espectrmetro de masas . 56
Figura 5. Espectro de masas de la cafena. 58
Figura 6. Diagrama para la estimacin de la incertidumbre de la medicin. 63
Figura 7. Esquema del procesamiento de caf verde para la extraccin de

plaguicidas. 73
Figura 8. Limpieza de los plaguicidas en el extracto de caf. 74
Figura 9. Protocolo para la evaluacin de los porcentajes de recuperacin en la

extraccin de plaguicidas en caf verde. 75
Figura 10. Cromatograma de la mezcla madre de plaguicidas. 77
Figura 11. Comparacin del espectro de masas del forato. 78
Figura 12. Grafica de calibrado del Forato. . 81
Figura 13. Diagrama del mtodo de determinacin de plaguicidas en caf verde.

87
RESUMEN
En este documento se presenta la estandarizacin de una tcnica para la

determinacin de plaguicidas organofosforados y triazoles en caf verde, los
plaguicidas se extrajeron con una mezcla de acetonitrilo agua (4:1) seguida de una
particin lquido-lquido y dos extracciones en fase solida con fase reversa RP18 y
con carbn activado-NH2. Se evaluaron los porcentajes de recuperacin, los
cuales estuvieron por encima del 70%. La lectura instrumental se hizo por
cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas con un GCMS QP
2010 de Shimadzu, se evalu la precisin instrumental y la linealidad en un rango
de concentraciones inferior a los lmites mximos de residualidad de cada
plaguicida. Al final se estim la incertidumbre. Todas las incertidumbres
estuvieron por debajo del 15% al igual que los porcentajes de error en las
concentraciones medidas.
19
INTRODUCCION.
El caf ha sido tradicionalmente un rengln importante de la economa colombiana

y constituye el producto ms importante de la agricultura. Colombia se ha
posicionado como productor de unos de los cafs suaves ms apetecidos del
mundo y el 63.4% de sus exportaciones se destinan a Estados Unidos, Alemania y
Japn [1].
Por otro lado, la produccin agrcola mundial se ve afectada por prdidas de hasta
el 45% debido al ataque de una variedad de plagas incluyendo insectos,
nematodos, virus y bacterias, las enfermedades asociadas y la competencia por
malezas lo que ha generado una dependencia de los agricultores a los plaguicidas
qumicos sintticos para la proteccin de cultivos contra la depredacin de los
insectos, sin embargo estos plaguicidas son muy agresivos con el medio ambiente
y solo reducen las perdidas en un 7% [2].
La acumulacin de residuos de plaguicidas en los organismos est altamente

influenciada por el contenido de grasa de dicho organismo y la naturaleza lipoflica
del plaguicida. A pesar de que el contenido de grasa en los tejidos de las plantas
no es tan significativo, algunas especies de plantas han demostrado que tienen
mayores factores de bioacumulacin. Esta acumulacin de plaguicidas en la
planta puede tener graves consecuencias a travs de la cadena alimentaria lo que
representa un potencial de efectos nocivos para la vida silvestre y los seres
humanos [3, 4].
En general, la dieta es la va de exposicin predominante para los plaguicidas, el

consumo de principios activos a travs de la ingestin de alimentos ha demostrado
ser hasta cinco rdenes de magnitud ms alta que otras vas de exposicin como
la inhalacin de aire y la ingestin de agua potable [3].
21
El uso de plaguicidas en la agricultura es por tanto objeto de un seguimiento
permanente debido al riesgo potencial que suponen para la salud pblica y los
ecosistemas. En el cultivo, almacenamiento y trasporte del caf se usan
plaguicidas, como insecticidas, herbicidas, nematicidas, fungicidas, que de no
aplicarse de manera controlada podran aportar residuos al producto final; estos
residuos tienen unos lmites mximos permitidos de acuerdo con parmetros
internacionales, por encima de los cuales podran afectar la salud humana [28].
En Colombia, el Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural y el Ministerio de la

Proteccin Social promulgaron en 2007 la resolucin 2906 por la cual se
establecen los Lmites Mximos de Residuos de Plaguicidas -LMR- en alimentos
para consumo humano entre los cuales se encuentra el caf en grano [5].
Internacionalmente es la FAO (Food and Agriculture Organization of United

Nations) quien establece los LMR para alimentos [6]. Se hace necesario el apoyo
de laboratorios acreditados que cuenten con mtodos de anlisis confiables,
sensibles y robustos como la cromatografa de gases acoplada a la espectrometra
de masas, con la capacidad de cuantificar plaguicidas a las concentraciones
exigidas por la legislacin vigente y que sirvan de apoyo para los organismos de
control en la certificacin de productos agrcolas de exportacin.
22
JUSTIFICACIN
Colombia ha sido tradicionalmente uno de los mayores proveedores de caf suave

en el mercado internacional y est sujeto a legislaciones cada vez ms rigurosas
que controlan los residuos de contaminantes tipo plaguicidas en los productos
agrcolas de exportacin. En Colombia el Ministerio de la Proteccin Social
establece los lmites mximos de residuos de 14 plaguicidas organofosforados,
organoclorados, carbamatos, piretroides y triazoles en caf en grano mediante la
resolucin 2906 de 2007; la Federacin Nacional de Cafeteros es la entidad
encargada de verificar el cumplimiento de la normatividad establecida, para lo cual
se apoya en el Laboratorio de Calidad de Productos Naturales (CPN) de la
Universidad Tecnolgica de Pereira.
Aunque existen diversas metodologas analticas para la determinacin de

plaguicidas, que van desde volumtricas, espectrofotomtricas y cromatogrficas,
la tcnica que brinda mayor selectividad y alta sensibilidad para una amplia gama
de analitos la constituye la cromatografa de gases acoplada a espectrometra de
masas, adems esta tcnica permite el anlisis simultaneo de plaguicidas de
diversa naturaleza qumica.
Para el CPN estandarizar la tcnica multiresiduo para la determinacin de

plaguicidas representa un gran aporte al sector agrcola ya que permite a los
caficultores certificar la calidad de sus productos de exportacin, de igual forma
constituye un apoyo tcnico a las entidades gubernamentales encargadas de
regular los plaguicidas en los alimentos de acuerdo con la legislacin vigente.
La posibilidad de brindar este servicio representa adems un fortalecimiento para

el Laboratorio CPN y para la Universidad Tecnolgica de Pereira por la interaccin
con la comunidad, solucionando problemas especficos y generando recursos para
financiar la investigacin en el campo de la qumica analtica y los productos
naturales.
23
OBJETIVOS.
OBJETIVOGENERAL
Estandarizar una metodologa para la determinacin multiresiduo de plaguicidas

organofosforados y triazoles en caf verde usando extraccin en fase solida
(SPE) y cromatografa de gases acoplado a espectrometra de masas (GC/MS).
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Establecer los atributos del mtodo de cromatografa de gases acoplado a

espectrometra de masas para la determinacin de plaguicidas en caf
verde.
Evaluar la tcnica de extraccin en fase slida por medio de los porcentajes
de recuperacin de los analitos a partir de la matriz de caf.
Evaluar los interferentes de la matriz del caf en la lectura instrumental y
calcular los lmites de deteccin y cuantificacin del mtodo.
Evaluar la precisin global del mtodo mediante la estimacin de la
incertidumbre de la medicin.
25
1. MARCO TERICO.
1.1. EL CAF
Se conocen como caf los granos obtenidos de unas plantas perennes tropicales
(cafetos), morfolgicamente muy variables, los cuales, tostados y molidos, son
usados principalmente para preparar y tomar como una infusin [29].
El gnero pertenece a la familia de las Rubiceas (Rubiaceae), que tiene

alrededor de 500 gneros y ms de 6000 especies, la mayora rboles y arbustos.
Son principalmente de origen tropical, y de una amplia distribucin, a ella
pertenecen plantas medicinales como la ipecacuana (Psichoria ipecacuanha), o la
Cinchona spp., de la cual se extrae la quinina [29].
Taxonmicamente, todas estas plantas se clasifican como del gnero Coffea, y se

caracterizan por una hendidura en la parte central de la semilla. Se encuentran
desde pequeos arbustos hasta rboles de ms de 10 m.; sus hojas, que son
simples, opuestas y con estpulas, varan tanto en tamao como en textura; sus
flores son completas (en la misma flor se encuentran todos los rganos) blancas y
tubulares; y los frutos, son unas drupas de diferentes formas, colores y tamaos,
dentro de las cuales se encuentran la semillas, normalmente dos por fruto [29].
La primera descripcin de una planta de caf fue hecha en 1592 por Prospero
Alpini y, un siglo despus, Antoine de Jussieu (1713) la denomin Jasminum
arabicanum (la consider un jazmn). Fue Linneo (1737) quien la clasific en un
nuevo gnero, el gnero Coffea, con una sola especie conocida: C. arabica. Hoy,
se reconocen 103 especies, sin embargo, slo dos son responsables del 99% del
comercio mundial: Coffea arabica y Coffea canephora. Son originarias de frica, o
de Madagascar (incluido los Comores) [29].
27
Los granos de caf son las semillas de un fruto llamado popularmente cereza.
Estas cerezas estn compuestas por una cubierta exterior, el exocarpio, el cual
determina el color del fruto; en el interior hay diferentes capas: el mesocarpio, es
una goma rica en azcares adherida a las semillas que se conoce como muclago;
el endocarpio es una capa amarillenta que cubre cada grano, llamada pergamino;
la epidermis, una capa muy delgada conocida como la pelcula plateada; y los
granos o semillas, el endosperma, conocidos como el caf verde, que son los que
tuestan para preparar los diferentes tipos de caf [29].
El caf es el principal producto agrcola de exportacin, representa el 52% de las

exportaciones de todo el sector agropecuario con un valor de cosecha cercano a 5
billones de pesos anuales, ingresos que llegan a ms de dos millones de personas
en la zona rural por lo que se considera el principal dinamizador de la economa
rural en Colombia [7].
Las especies del caf ms importantes comercialmente en el mundo son Arbica

(Coffea arabica L) y Robusta o Canephora (Coffea canephora). Coffea canephora
tiene una amplia distribucin geogrfica y se encuentra silvestre en el frica,
como en Congo, Sudn, Uganda, y el Noroeste de Tanzania y Angola.
Aproximadamente, el 35% del caf que se comercializa en el mundo es de esta
especie, conocida como Robusta. Las zonas bajas tropicales de frica,
permitieron que esta especie desarrollara con el paso de los siglos resistencia a
numerosas plagas y enfermedades. Es en consecuencia ms resistente a muchas
de las enfermedades del caf, especialmente a la roya (Hemileia vastatrix), y esta
caracterstica determin su cultivo en el mundo a comienzos del siglo pasado. Se
cultiva generalmente en altitudes por debajo de 1000 m. Es de polinizacin
cruzada, por lo que para su cultivo se deben sembrar varios genotipos
compatibles. No se cultiva en Colombia. Su contenido de cafena es mayor al 2%;
su taza es ms amarga y con sabor a cereal. Investigaciones ms recientes han
podido determinar que la especie Robusta es una de las ms antiguas al
28
originarse hace ms de 5 millones de aos; incluso hay quienes consideran que
puede tener cerca de 25 millones de aos [29].
Coffea arabica L. es actualmente la principal especie del gnero, y constituye ms

del 60% del caf que se comercializa en el mercado internacional. Es una especie
autgama, es decir, se autopoliniza o autofertiliza. Su centro de origen se
encuentra en el Sudeste de Etiopa, el Sur del Sudn y el Norte de Kenya. Es una
especie tetraploide (tiene 44 cromosomas), que proviene de formas antiguas de
dos especies diploides Coffea eugenioides (22 cromosomas), probablemente
como madre, y C. canephora (22 cromosomas), como padre. Estudios cientficos
la catalogan como una especie relativamente "joven", que hizo su aparicin hace
menos de 1 milln de aos. Se considera un caf de altura, que se cultiva bien en
temperatura de 18 a 23 0C. En Colombia las plantaciones estn concentradas en
altitudes que oscilan entre los 1200 y los 1800 m.s.n.m. el contenido de cafena de
los granos est entre 1,0 y 1,4% en base a materia seca, y es menos amargo que
la otra especie cultivada. Es el caf de mejor calidad en taza [29].
Las variedades de caf arbigo que se siembran en Colombia son:
Tpica tambin llamada arbigo, pajarito o nacional.

Borbn.
Tabi que es una variedad de grano grande, tiene una excelente calidad y es
ideal para obtencin de cafs especiales.
Caturra.
Variedad Colombia.
1.1.1. Caf de Colombia.

CAFE DE COLOMBIA es la denominacin que se le otorga al caf 100% arbico
producido en las regiones cafeteras de Colombia, delimitadas entre la latitud
Norte 1 a 1115, Longitud Oeste 72 a 78 y rangos especficos de altitud que
pueden superar los 2.000 metros sobre el nivel del mar (m.s.n.m.). Surge de la
particular combinacin de diversos factores correspondientes a la latitud y altitud
29
de la tierra del caf en Colombia, sus suelos, el origen botnico de la especie y
variedades de caf producidas, el clima caracterizado por el doble paso de la Zona
de Convergencia Intertropical, la cambiante topografa, la luminosidad, rango
favorable de temperaturas, una adecuada cantidad y distribucin de las lluvias
durante el ao y unas prcticas culturales comunes que incluyen procesos de
recoleccin selectiva y de transformacin del fruto mediante su beneficio, lavado y
secado. Estos factores, de manera conjunta, conducen a la produccin de un caf
sobresaliente, suave, de taza limpia con acidez relativamente alta, cuerpo
balanceado, aroma pronunciado y un perfil sensorial de excelente calidad [30].
1.1.2. La cadena del caf.

Cuando se hace referencia al caf se trata de sus formas o estadios: pergamino,
verde, tostado, e incluye el caf molido, descafeinado, liofilizado, lquido y soluble.
En su proceso al mercado el caf recorre diferentes fases, en primer lugar la
cadena comprende las actividades agrcolas que se realizan en finca, tales como
siembra, recoleccin, beneficio y secado, en el proceso de secado el caf pasa de
pergamino mojado a pergamino hmedo y pergamino seco. El pergamino seco se
transporta a la trilladora donde se le extrae la pelcula que lo cubre denominada
endocarpio. Aqu el caf se convierte en caf verde el cual es clasificado segn el
tamao y la calidad del grano. Posteriormente el caf es tostado y el grano
adquiere su color caf caracterstico [1].
El componente agrcola de la cadena productiva de caf (siembra, cosecha,

recoleccin y secado) es altamente generador de empleo con una ocupacin
aproximada de 500.000 empleos directos [1].
En Colombia, el caf verde se destina directamente a exportacin mientras que la

produccin orientada al consumo interno llega hasta la etapa final del proceso:
tostin, molienda y empacado [1].
Durante el primer mes del ao cafetero que arranc en octubre de 2012 y va hasta
septiembre de 2013, las exportaciones mundiales de caf sumaron 8,88 millones
30
de sacos de 60 kilos mientras que en el mismo mes del ao 2011 fue de 7,57
millones, no obstante las exportaciones cafeteras colombianas presentaron una
leve cada de 602.693 a 582.104 sacos [8].
En cuanto a la produccin durante el ao cafetero que termin, Colombia ocup el

cuarto lugar con 7,8 millones de sacos de 60 kilos, el primer lugar lo ocupa Brasil,
con 43,4 millones de sacos; seguido de Vietnam, con 20 millones, e Indonesia,
con 8,2 millones de sacos de caf. El total mundial producido fue de 131,2
millones de sacos [8].
Aunque la participacin en el volumen de produccin mundial ha descendido

frente a Brasil y Vietnam, la participacin en valor de las exportaciones mundiales
se ha mantenido superior al 15%, lo que refleja el posicionamiento del caf de
Colombia en los mercados externos [7].
1.1.3. Principales enfermedades del caf

El control de las principales enfermedades de los cafetales en los Andes de
Colombia es otra fuente de constante trabajo y esfuerzo para las familias
cafeteras. Las enfermedades son causadas por hongos, bacterias, virus y
nemtodos. Las de mayor importancia econmica son: la roya, Hemileia vastratix;
las llagas del tallo y de las races, Ceratocystis fimbriata y Rosellinia bunodes; la
mancha de hierro, Cercospora coffeicola; el mal rosado, Corticium salmonicolor; el
volcamiento, Rhizocytonia solani; la muerte descendente, Phoma sp. y nemtodos
del gnero Meloidogyne [31].
1.1.3.1. La roya
Es un hongo conocido como Hemileia vastratix, que se distingue fcilmente por la
presencia de un polvillo amarillo en el envs de las hojas enfermas. Es una
enfermedad cclica que afecta principalmente el follaje, produce defoliacin y el
dao conocido como "paloteo". Est ligado a los aos de alta produccin con
epidemias severas. En cultivos susceptibles, la enfermedad ha causado prdidas
31
hasta del 23% de la produccin acumulada de cuatro cosechas. La relacin de
caf cereza a caf pergamino seco puede llegar a valores de 8 a 1 [31].
El principal mtodo de manejo es sembrar material resistente a la roya, como la

Variedad Castillo. En los materiales susceptibles como: Borbn, Tpica
Maragogipe y Caturra, se requiere del uso de fungicidas protectores como el
Oxicloruro de Cobre, y sistmicos como el Cyproconazol o Triadimefon [31].
1.1.3.2. Las llagas del cafeto

Se conocen dos tipos de llagas en el cafeto: la llaga macana, Ceratocystis
fimbriata, y las llagas radicales, Rosellinia bunodes y R. pepo. Son hongos
habitantes del suelo que desde hace ms de 30 aos se vienen incrementando en
el pas por las prcticas de renovacin por zoqueo, podas de ramas bajeras,
deschuponadas, descopes o pisoteo en la base de los tallos, cuando no se
protegen las heridas y principalmente en poca hmeda [31].
Causa la muerte de los rboles. En ataques severos puede reducir entre el 20% y
el 40% la densidad de plantas. Se recomienda la desinfeccin de las herramientas
con hipoclorito al 5% o formol al 10% y la proteccin de las heridas con fungicidas
como benomil y carbendazim, en dosis de 4 gramos por litro de agua [31].
El control es bsicamente preventivo. Una vez que ataca la enfermedad, no se

conocen productos curativos. Los rboles enfermos se deben eliminar con todo y
raz y exponer a los rayos del sol mnimo durante 3 meses [31].
1.1.3.3. La mancha de hierro

Es la enfermedad ms generalizada en Colombia, causada por el hongo
Cercospora coffeicola. Afecta el cafeto durante todos sus estados de desarrollo,
desde las hojas cotiledonares hasta los frutos. Se caracteriza porque son
pequeas manchas circulares de color pardo claro o marrn rojizo [31].
Permanentemente, causa la cada de las hojas e incrementa la produccin de caf
32
pasilla, mediacara y guayaba que afectan la calidad. Los cafetales a plena
exposicin y mal fertilizados son los ms susceptibles [31].
1.1.4. Principales plagas del caf

Hay reconocidas ms de 100 especies de insectos que viven en armona en los
cultivo del caf. Slo tres de ellos representan un impacto econmico: la broca,
Hypothenemus hampei, el minador de la hoja, Leucoptera coffeellum, y la
palomilla de las races, Dysmicoccus spp [31].
1.1.4.1. La broca del caf, Hypothenemus hampei

Es la plaga ms daina que ha afectado el cultivo del caf en toda su historia.
Desde septiembre de 1988 se registr en el pas y ha ocasionado grandes
prdidas en todos los departamentos cafeteros; incluso, margin el cultivo de las
zonas bajas. Ataca directamente los frutos de caf, es decir, afecta principalmente
la produccin y la calidad [31].
Es un insecto de difcil manejo con los mtodos tradicionales de control como los
insecticidas, porque permanece protegido la mayor parte de su vida en el interior
de los frutos. Algunos de los adultos son susceptibles a las aspersiones de estos
productos, que tienen efecto nicamente por contacto con la plaga [31].
La broca es un gorgojo de color negro, del tamao de la cabeza de un alfiler. Es

muy perjudicial porque cuando ataca, perfora y daa los granos, para alimentarse
de las almendras del caf. Es una plaga que inicia su ataque en los frutos verdes
del cafeto, entre los 3 y 4 meses despus de la florescencia [31].
Para su control hay diferentes mtodos, de los cuales el ms utilizado es el

conocido como manejo integrado de la broca. ste consiste en un control
cultural, que incluye el manejo en el beneficio, la recoleccin oportuna de los frutos
en el momento de su maduracin y el control biolgico con la utilizacin de
avispas y de hongos. Las avispas se cran y luego se liberan en los cafetales para
que se establezcan y se coman parte de la poblacin de broca, buscndola dentro
33
de los frutos. El hongo es un moho blanco que se espolvorea en los cafetales para
que mate parte de la poblacin de la broca [31].
La broca se expande a otras plantaciones por varias vas: en las semillas y frutos
atacados; cuando el hombre los lleva de un lugar a otro; en la ropa, sombrero o
calzado de las personas que transitan por las plantaciones; en herramientas y
equipos, tales como machetes, costales y canastos; en los vehculos; y en el agua
que se usa durante el lavado del caf, etc [31].
1.1.4.2. El minador de la hoja, Leucoptera coffeellum

Es una plaga muy daina que afecta principalmente el rea fotosinttica y causa la
defoliacin de los rboles, y ha obligado a los agricultores de las zonas bajas al
uso de insecticidas [31].
Es conocida como una especie monfaga porque slo ataca el gnero Coffea. Se
ha encontrado resistencia en las especies diploides como Coffea stenophylla. Los
daos son causados durante su estado de larva, cuando consume entre 1,0 y 2,0
cm de rea foliar durante su proceso evolutivo. Si concurren varias larvas en una
sola hoja puede llegar a causar necrosamiento en el 90% de su estructura [31].
1.1.4.3. La palomilla de la raz

Son varias especies: Dismicoccus alazon, D. brevipes y D. criptus que
generalmente estn asociadas con el hongo Septobasidium y las hormigas del
gnero Solenopsis.
Las colonias se inician desde el almcigo, donde afectan el cuello de la raz de las
plantas, y en el campo su poblacin aumenta y es cuidada por las hormigas. Los
sntomas externos en el rbol son similares a los producidos por un ataque de
llagas, que ocasionan el marchitamiento generalizado de la planta [31].
Su control es preventivo. Una vez establecida en los lotes es muy costoso y

dispendioso manejarla, y en muchos casos es mejor sustituir los rboles atacados.
34
1.2. LOS PLAGUICIDAS
1.2.1. Generalidades e historia

Plaguicida: Sustancia o mezcla de sustancias qumicas de origen organosinttico,
de naturaleza txica y por consiguiente con un alto poder para alterar en forma
drstica la fisiologa de los organismos. Se utilizan en la actividad agrcola como
medio de control para enfermedades, plagas y malezas. Normalmente, la accin
del plaguicida no es especfica para la especie objetivo y en consecuencia se
producen efectos de diferentes magnitudes sobre otras especies y sobre los
mbitos expuestos a su accin [9].
Existe evidencia histrica que la primera civilizacin en utilizar plaguicidas, fueron

los egipcios a orillas del ro Nilo. Existen papiros que detallan el uso de soluciones
de cobre para el control de hongos en cebada y el uso de soluciones acuosas de
compuestos arsenicales para el control de la langosta. En Estados Unidos, para el
ao 1922, ya se utilizaba a orillas del Delta del Mississippi compuestos arsenicales
espolvoreados para el control de insectos en algodn [10].
En 1942, el qumico Suizo Paul Hermann Mller (1925-1965), descubri las

propiedades insecticidas de un compuesto orgnico clorado llamado
dicloro,difenil,tricloroetano, DDT. Paul Mller recibi en 1948 el premio Nobel de la
Medicina por este descubrimiento. Aunque la molcula ya haba sido sintetizada
antes por el qumico Othmar Zeidler, en 1874, fue el trabajo investigativo de Mller
quin hizo que esta molcula se convirtiera en el insecticida de mayor uso desde
1942 hasta 1970 [10].
El trabajo de investigacin de Paul Mller ayud al descubrimiento de otros

insecticidas organoclorados, entre ellos el aldrin, el cual fue introducido al mercado
en 1948, el clordano (1945), el dieldrin (1948), el endrin (1951), el heptacloro
(1948) y el toxafeno, que fue presentado al mercado de agroqumicos en 1948
[10].
35
Aunque el insecticida DDT de Mller empez con mucho xito a mediados del
siglo 20, al final cay vctima de las mismas propiedades que lo haban logrado
llevar a la fama. Su extrema estabilidad qumica le confera una persistencia
inaceptable en el ambiente; y aunque su toxicidad aguda para los mamferos era
relativamente baja, su alta solubilidad en lpidos le confera una alta toxicidad
crnica y una alta tendencia a la bioacumulacin y la biomagnificacin. Se estima
que para el ao 1963, ya se haban fabricado y aplicado al ambiente un total de
453 millones de Kilogramos de DDT a nivel mundial [10].
El uso masivo de este insecticida empez a mostrar un nuevo problema en la

proteccin de cultivos, la resistencia biolgica de los insectos. En 1950, se
empez a notar que las dosis normales de DDT en los cultivos de algodn de
Estados Unidos, no estaban controlando las plagas como lo hacan antes. Los
bilogos del USFDA reportaron que se estaban formando razas de insectos
resistentes al DDT. Adems, el uso indiscriminado del insecticida haba
disminuido las poblaciones de depredadores naturales de insectos que no se
consideraban plagas, pero con el tiempo, y sin la presencia de un control natural,
insectos que no eran plagas, lo eran ahora [10].
Durante la Segunda Guerra Mundial, se llevaron a cabo muchas investigaciones

en el desarrollo de gases txicos para ser empleados por el Tercer Reich como
armas de destruccin humana masiva. Estos trabajos llevaron al descubrimiento
de un grupo de insecticidas ms efectivos que los organoclorados como el DDT,
este nuevo grupo se denomin organofosforados [10].
Los insecticidas organofosforados presentaron una nueva variante en el mundo de

los plaguicidas, ya que estos tenan propiedades sistmicas; lo cual significa que
aunque las sustancias podan eliminar las plagas a su contacto, tambin eran
absorbidas por la misma planta (sistmica), volvindose ellas mismas txicas a los
insectos [10].
36
El primer insecticida sistmico de este tipo fue el dietilparanitrofenilmonotiofosfato,
llamado comnmente parathion. Estos insecticidas resultaron muy efectivos para
el control de plagas, especialmente por sus propiedades sistmicas, eran bajos en
costo, pero presentaban riesgos para la salud humana. Estos insecticidas eran
altamente txicos para los mamferos, podan ser absorbidos por la piel y a travs
de las vas respiratorias de los operarios del equipo de aplicacin. Adems,
algunos de ellos presentaban propiedades teratognicas [10].
Nuevas investigaciones dieron lugar a molculas con estructuras ms complejas,

actualmente existen cerca de 10 clasificaciones de plaguicidas en cuanto a su
estructura qumica [10]:
Organoclorados: presentan cloro en su molcula

Organofosforados: son fundamentalmente steres del cido fosfrico
Carbamatos: derivados del cido N-metil-carbmico
Piretrinas: productos naturales del Pyrethrum cinaerefolium
Piretroides: productos sintticos
Derivados del cido fenoxiactico
Bipiridilos: compuestos de amonio cuaternario
Derivados triaznicos
Fenoles halogenados
Organobromados
Fosfaminas
1.2.2. Qumica de los plaguicidas

En la tabla 1 se resumen las principales caractersticas qumicas de los
plaguicidas mencionados en la resolucin 2906 y que son objeto de este estudio
[32,33,34]
37
Tabla 1. Caractersticas qumicas de algunos plaguicidas controlados en caf en grano
por la resolucin 2906 de 2007 del ministerio de la proteccin social.
Forato S S
Terbufos
S
S S
S
P
P
O
O O
O
Acido ditiofosforico S-ter-butilsulfanilmetil O,O'-dietil ester
Acido ditiofosforico O,O'-dietil S-etilsulfanilmetil ester FM: C9H21O2PS3
FM: C7H17O2PS3 PM : 288.45
PM : 260.39 LD50: 5 mg/Kg
LD50: 2 mg/Kg CAS: 13071-79-9
CAS: 298-02-2 INSECTICIDA
INSECTICIDA Nombre comercial: Counter
Nombre comercial: Thimet Clasificacin: Organofosforado
Clasificacin: Organofosforado Clase: 1A (extremadamente peligroso)
Clase: 1A (extremadamente peligroso)
Cl
Clorpirifos
O N
S Disulfoton
P Cl O
O
O
P
S
S
Cl O
S
Acido tiofosforico O,O'-dietil O''-(3,5,6-tricloro-2-piridinil) ester
FM: C9H11Cl3NO3PS
Acido ditiofosforico O,O'-dietil S-(2-etilsulfanil-etil) ester PM : 350.59
FM: C8H19O2PS3 LD50: 82 mg/Kg
PM : 260.39 CAS: 2921-88-2
LD50: 2 mg/Kg INSECTICIDA
Nombre comercial: Dursban, Lorsban
CAS: 298-02-2
Clasificacin: Organofosforado
INSECTICIDA Clase: II (moderadamente peligroso)
Nombre comercial: Thimet
Clasificacin: Organofosforado
Clase: 1A (extremadamente peligroso)
38
Continuacin Tabla 1. Caractersticas qumicas de algunos plaguicidas controlados en
caf en grano por la resolucin 2906 de 2007 del ministerio de la proteccin social.
N N N
N
Triadimefon
O N
Triadimenol
OH N
C
O Cl
O Cl
1-(4-Cloro-fenoxi)-3,3-dimetil-1-[1,2,4]triazol-1-il-2-butanona
FM: C14H16ClN3O2 1-(4-Cloro-fenoxi)-3,3-dimetil-1-[1,2,4]triazol-1-il-2-butanol
PM : 293.78 FM: C14H18ClN3O2
LD50: 363 mg/Kg PM : 295.80
CAS: 43121-43-3 LD50: 700 mg/Kg
FUNGICIDA CAS: 55219-65-3
Nombre comercial: Amiral, Bayleton FUNGICIDA
Clasificacin: Triazol
Nombre comercial: Bayfidan, Baytan, Summit
Clase: III (ligeramente peligroso)
Clase: III (ligeramente peligroso)
Cl
Propiconazol
O
Cl
O
N
N
N
1-[2-(2,4-Dicloro-fenil)-4-propil-[1,3]dioxolan-2-ilmetil]-1H-[1,2,4]triazol
FM: C15H17Cl2N3O2
PM : 342.25
LD50: 1517 mg/Kg
CAS: 60207-90-1
FUNGICIDA
Nombre comercial: Banner, Tilt
Clase: II (moderadamente peligroso)
39
1.3. LEGISLACIN PARA EL CONTROL DE PLAGUICIDAS
1.3.1. Legislacin Internacional
Codex Alimentarius, es una coleccin reconocida internacionalmente de

estndares, cdigos de prcticas, guas y otras recomendaciones relativas
a los alimentos, su produccin y seguridad alimentaria bajo el objetivo de la
proteccin del consumidor. Oficialmente este cdigo es mantenido al da
por la Comisin del Codex Alimentarius, un cuerpo conjunto con la Food
and Agriculture Organization (FAO) organismo perteneciente a las Naciones
Unidas y a la Organizacin Mundial de la Salud (WHO) cuyo objeto ya
desde 1963 es la proteccin de la salud de los consumidores y asegurar las
prcticas en el transporte internacional de alimentos. El Codex Alimentarius
enlista los alimentos que no deben contener una cantidad mayor de
residuos de plaguicidas (definidos, individualmente, en la definicin del
residuo) que la que seala el lmite mximo de residualidad (LMR) en mg/kg
en a) el punto de entrada en un pas o b) el punto de entrada en los canales
comerciales de un pas [6].
Convenio de Basilea para el control de los desplazamientos transfronterizos
de desechos peligrosos y su eliminacin, es el tratado multilateral de medio
ambiente que se ocupa ms exhaustivamente de los desechos peligrosos y
otros desechos. Cuenta con 170 pases miembros (Partes) y su objetivo es
proteger el medio ambiente y la salud humana contra los efectos nocivos
derivados de la generacin, el manejo, los movimientos trasfronterizos y la
eliminacin de los desechos peligrosos y otros desechos, fue aprobado en
1989 y entr en vigor en 1992 [9].
Convenio de Estocolmo sobre contaminantes orgnicos persistentes
(COPs) es un acuerdo internacional que regula el tratamiento de las
sustancias txicas. Fue firmado en 2001 en Estocolmo y entr en vigor el
17 de mayo del 2004. Inicialmente el convenio regulaba doce productos
qumicos incluyendo productos producidos intencionadamente, tales como:
40
plaguicidas, PCBs; dioxinas y furanos. Actualmente hay 172 pases que han
ratificado el convenio [9].
Resolucin 630 de 2002. Manual tcnico andino para el registro y control de
plaguicidas qumicos de uso agrcola [9].
Convenio de Rtterdam para la aplicacin del procedimiento de
consentimiento fundamentado previo aplicable a ciertos plaguicidas y
productos qumicos peligrosos objeto del comercio internacional entr en
vigor el 24 de febrero de 2004 [9].
1.3.2. Legislacin Nacional

Ya sea por solicitud de los Ministerios de Salud o de Agricultura y mediante
Resolucin de la Gerencia General del ICA, o del Ministerio de Agricultura, desde
1974 hasta la fecha, se han venido restringiendo o prohibiendo el uso en el pas
de algunos plaguicidas sealados a continuacin en la tabla 2 [5,11,12,13,14].
Tabla 2. Resoluciones vigentes para el control de plaguicidas en Colombia.

LEY,
RESOLUCIN, AO DE
ENTIDAD QUE EMITE OBJETO DE LA NORMA
DECRETO O EMISIN
ACUERDO #
Ministerio de Prohbe el uso y venta de plaguicidas clorados
R-447 1974 agricultura para el cultivo de tabaco.
Instituto Colombiano Cancela registro de fungicidas a base de
R-2189 1974 Agriopecuario ICA compuestos de mercurio.
Instituto Colombiano Cancela registro de plaguicidas a base de
R-1042 1977 Agriopecuario ICA leptophos (Phosvel)
Ministerio de Prohbe el uso de plaguicidas organoclorados en
R-209 1978 agricultura el cultivo del cafeto
Establece las normas generales que sirven de
base a las disposiciones y reglamentaciones
emitidas para preservar, restaurar y mejorar las
condiciones sanitarias en lo que se relaciona a la
salud humana. Incluye normas generales sobre
la produccin, formulacin, almacenamiento,
Congreso de la distribucin, movilizacin y aplicacin area de
Ley 9 1979 Republica los plaguicidas
41
Continuacin Tabla 2. Resoluciones vigentes para control de plaguicidas en Colombia.
LEY,
RESOLUCIN, AO DE
DECRETO O EMISIN
ACUERDO #
Instituto Colombiano Cancela registro de venta de productos a base

R-749 1979 Agropecuario ICA de 2,4,5-T y 2,4,5-TP
Prohbe la produccin, importacin y venta de
Instituto Colombiano plaguicidas a base de Dibromocloropropano
R-243 1982 Agropecuario ICA (DBCP)
Prohbe la produccin, importacin y venta de
Instituto Colombiano plaguicidas a base de Dibromuro de etileno
R-1158 1985 Agropecuario ICA (EBD)
Instituto Colombiano Prohbe la produccin, importacin y venta de
R-1849 1985 Agropecuario ICA plaguicidas a base de Endrin
Presidencia de la Prohbe el uso de DDT, sus derivados y
D-704 1986 Republica compuestos.
Instituto Colombiano Prohbe la produccin, importacin y venta de
R-930 1987 Agropecuario ICA plaguicidas a base de Dinoseb
Prohbe el uso y manejo de los plaguicidas a
R-19408 1987 Ministerio de salud base de Clordimefon y sus sales
Prohbe la importacin, produccin y
Presidencia de la formulacin de plaguicidas a base de aldrin,
D-305 1988 Republica heptacloro, dieldrin, clordano y canfecloro.
Instituto Colombiano cancela la licencia de venta de plaguicidas que
R-47 1988 Agropecuario ICA contienen clordimeform en su composicin
prohbe la aplicacin por va area en el
Instituto Colombiano territorio nacional de los herbicidas que
R-3028 1989 Agropecuario ICA contienen Paraquat
Cancela licencia de venta correspondiente al
Instituto Colombiano fungicida de uso agrcola denominado Dithane
R-4863 1989 Agriopecuario ICA M-22 (Maneb)
Cancela licencias de venta a los plaguicidas de
Instituto Colombiano uso agrcola denominados Manzate D y
R-5052 1989 Agriopecuario ICA Manzate.
42
Continuacin Tabla 2. Resoluciones vigentes para control de plaguicidas en Colombia
LEY,
RESOLUCIN, AO DE
DECRETO O EMISIN
ACUERDO #
Prohbe la importacin, produccin y venta de
Instituto Colombiano plaguicidas que contengan en su composicin el
R-5053 1989 Agriopecuario ICA ingrediente activo Captafol
Prohbe la importacin, produccin, venta y
Instituto Colombiano aplicacin en el territorio nacional de los
R-2308 1990 Agriopecuario ICA fungicidas que contengan Terbuconazol
Reglamenta parcialmente los ttulos III, V, VI, VII
y XI de la Ley 9 de 1979 sobre uso y manejo de
plaguicidas con el objeto de evitar que afecten
la salud de la comunidad, la sanidad animal y
D-1843 1991 Ministerio de Salud vegetal o causen deterioro al medio ambiente
Instituto Colombiano Cancela las Licencias de Venta de los
R-2156 1991 Agriopecuario ICA insecticidas a base de LINDANO
Restringe los usos de PARATHION, nicamente a

plagas de algodn y pastos tecnificados y del
Instituto Colombiano METIL PARATHION nicamente a plagas del
R-2471 1991 Agriopecuario ICA algodn y arroz tecnificado.
Instituto Colombiano Prohbe el uso de insecticidas para uso agrcola
R-29 1992 Agriopecuario ICA a base de Fonofos.
Prohbe la importacin, produccin y aplicacin
de los Fungicidas Maneb, Zineb y sus
R-9913 1993 Ministerio de salud compuestos relacionados.
Prohbe la importacin, produccin,

formulacin, comercializacin, uso y manejo de
los siguientes productos: DIELDRIN, CLORDANO,
DODECACLORO o MIREX, PENTACLOROFENOL,
DICOFOL, DDT, BHC HEPTACLORO, LINDANO y
sus compuestos relacionados usados contra la
R-10255 1993 Ministerio de salud broca del caf.
Prohbe la importacin, fabricacin,
comercializacin y uso de los plaguicidas con
base en Bromuro de Metilo, solo o en
R-138 1996 Ministerio de salud combinacin.
43
Continuacin Tabla 2. Resoluciones vigentes para control de plaguicidas en Colombia
LEY,
RESOLUCIN, AO DE
DECRETO O EMISIN
ACUERDO #
Por la cual se autoriza el uso de productos con

base en ENDOSULFAN nicamente para el
control de la broca del cafeto (Hipotenemus
R-1669 1997 Ministerio de salud hampei).
Por la cual se cancela el registro de venta No.
Instituto Colombiano 0852 correspondiente al insecticida biolgico
R-1559 1999 Agriopecuario ICA denominado DIPEL WP.
Instituto Colombiano Cancela registro de venta del producto Thionex
R-.1312 2001 Agriopecuario ICA 35 EC, formulado a base de endosulfan
suspender el registro de venta de los productos
Instituto Colombiano TESS 50 EW (deltametrin) y LARVIN 375 SC
R-1681 2002 Agriopecuario ICA (tiodicarb)
Instituto Colombiano Por la cual se cancela registro de venta al
R-1973 2004 Agriopecuario ICA fungicida Benlate WP a base de Benomyl.
Por el cual se adopta el manual de
Instituto Colombiano procedimientos de regulacin y control de
R-1756 2006 Agriopecuario ICA plaguicidas qumicos de uso agrcola.
Establece los Lmites Mximos de Residuos de
Ministerio de la Plaguicidas -LMR- en alimentos para consumo
R-2906 2007 proteccin social humano y en piensos o forrajes
Por el cual se establecen obligaciones sobre la
desnaturalizacin, almacenamiento y
Instituto Colombiano disposicin final de desechos peligrosos e
R-228 2007 Agriopecuario ICA insumos agrcolas.
Por la cual se establecen requisitos para
Instituto Colombiano ampliacin de uso de plaguicidas qumicos de
R-4754 2011 Agriopecuario ICA uso agrcola en cultivos menores.
Por el cual se establecen los requisitos para
Instituto Colombiano otorgar el registro de importador de plaguicidas
R-5469 2012 Agriopecuario ICA de uso agrcola para uso directo.
44
1.4. TECNICAS ANALTICAS PARA LA DETERMINACION DE PLAGUICIDAS
Las primeras etapas en el control de plaguicidas se hizo con tcnicas

gravimtricas y volumtricas que permitan la cuantificacin de contaminantes
pero no la identificacin individual de los mismos, posteriormente se introdujeron
tcnicas de laboratorio que permitan la separacin identificacin y cuantificacin
de los plaguicidas:
1.4.1. Cromatografa de gases

La cromatografa de gases es una de las tcnicas ms utilizadas en la qumica
analtica moderna, la posibilidad de analizar simultneamente cientos de analitos
en unos pocos minutos, de trabajar con cantidades de muestra extremadamente
pequeas y de poder detectar cantidades tambin muy pequeas de analito, del
orden de picogramos en muchos casos; as como su aplicabilidad en una gran
variedad de disciplinas como la bioqumica, agronoma, qumica forense,
fitoqumica entre otras, ha hecho de la cromatografa de gases una herramienta
indispensable en casi cualquier laboratorio qumico tanto de control de calidad
como de investigacin [15].
La cromatografa de gases ha mostrado ser una tcnica sensible, selectiva y

reproducible, por lo que es ampliamente utilizada para el anlisis de sustancias
controladas por las autoridades como los plaguicidas entre otras [16,17,18].
Para ser analizadas por cromatografa de gases las molculas deben ser
relativamente voltiles o debe ser posible convertirlas en un derivado que lo sea.
Con pocas excepciones, casi todos los plaguicidas se analizan por cromatografa
de gases.
El proceso comprende varios pasos: extraccin de los plaguicidas de la matriz con

un solvente orgnico; los ms usados son acetona, acetato de etilo y acetonitrilo.
Limpieza del extracto, para minimizar las interferencias de la matriz; puede
hacerse con extraccin liquido-liquido (LLE), en fase solida (SPE) o
45
microextraccin en fase solida (SPME). Finalmente la separacin cromatogrfica
y la cuantificacin. Del extracto conteniendo los plaguicidas se toma una alcuota
y se introduce al cromatgrafo a travs del puerto de inyeccin donde los analitos
se vaporizan y se mezclan con el gas de arrastre, generalmente helio (tambin se
usa en ocasiones nitrgeno o argn), cuya funcin es la de introducir y transportar
los analitos de la columna para que sean separados por la fase estacionaria. A la
salida de la columna se instala un sistema de deteccin que entrega alguna seal
en funcin de la cantidad de masa de cada componente y del tiempo [15,19].
La cromatografa de gases se puede clasificar en dos tipos, cromatografa gas

slido y cromatografa gas lquido, en la cromatografa gas slido, como su
nombre lo indica, la fase estacionaria es un slido que retiene los analitos por
medio de la adsorcin fsica, con el inconveniente de que se presenta adsorcin
semipermanente de muchas molculas activas o polares, por esta razn,
actualmente encuentra poca aplicacin, su uso se limita al anlisis de muestras
gaseosas principalmente [15].
La cromatografa gas lquido por el contrario, tiene gran aplicacin en todos los
campos de la ciencia, aqu la separacin se produce por la distribucin de los
analitos entre la fase mvil gaseosa y una fase liquida inmovilizada sobre la
superficie de un slido inerte. La cromatografa gas lquido fue desarrollada por
Martin y Synge en 1941 y en 1952 recibieron el premio nobel por la invencin de
esta tcnica. En 1955 apareci en el mercado el primer aparato comercial de
cromatografa gas lquido [15].
46
1.4.1.1. Instrumentacin para cromatografa de gases
En la figura 1 se muestra un esquema de un cromatgrafo de gases
Figura 1. Esquema de un cromatgrafo de gases
1.4.1.2. Puerto de inyeccin

La puerta de entrada de la muestra al sistema es el puerto de inyeccin, consiste
en una cmara cilndrica de pared metlica que al momento de introduccin de la
muestra est por encima de los 200C, su funcin es vaporizar la mezcla [15,19].
Para evitar el contacto de las molculas con la pared metlica caliente, lo que
puede causar descomposicin y perdida de analito, se usa un pequeo dispositivo
cilndrico construido en vidrio denominado inserto, al interior del inserto se produce
la vaporizacin de la muestra y es donde esta se mezcla con el gas de arrastre,
existen insertos con diferentes geometras internas para diversas aplicaciones o
modos de inyeccin. Los ms comunes se muestran en la figura 2.
47
(a) (b)
Figura 2. Tipos de insertos para cromatografa de gases. (a) Split (b) splitless
El modo Split (con divisin de muestra) se usa para el anlisis de muestras a altas
concentraciones (del orden del 1%), en este modo, despus de la vaporizacin de
la muestra, parte de ella se dirige a la columna para el anlisis y otra parte (la
mayora) se desecha por la salida Split. Cuando se trabajan muestras que se
encuentran en el nivel de trazas como en el caso de los plaguicidas, se usa el
modo de inyeccin splitless, aqu toda la muestra que se inyecta se lleva a la
columna para su separacin y posterior determinacin [15,19].
1.4.1.3. Horno y columna
A la salida del puerto de inyeccin se conecta la columna que se encuentra al

interior del horno, existen columnas empaquetadas con dimetros internos de 3 a
5 mm con longitudes que van de los 3 a los 15 metros, se construyen en vidrio,
acero inoxidable, cobre o tefln y normalmente se configuran como helicoides de
10 a 15 cm a fin de poder ser introducidas en el horno, estn rellenas con un
soporte solido finamente dividido y homogneo sobre el cual se inmoviliza la fase
48
estacionaria liquida. Las columnas capilares, de mayor uso, tienen dimetros
internos de 0,25 0,32 y 0,53 mm y longitudes desde 15 hasta 120 metros, las
columnas capilares son de ms amplio uso pues son ms eficientes y reducen el
tamao de muestra, el tiempo de anlisis y el consumo de gas de arrastre,
mientras con columnas empaquetadas se manejan flujos del orden de los 15
mL/min con columnas capilares el consumo est alrededor de 1 mL/min [15,19].
Las columnas capilares fueron introducidas en 1959, pero no entraron en pleno

uso sino hacia 1980, a partir de entonces han ganado gran popularidad; se estima
que hoy en da mas del 90% de las aplicacin en CG se hacen con columnas
capilares [19].
La columna capilar original inventada y patentada por el Doctor Marcel Golay,

consisti en un tubo capilar con una capa delgada de fase liquida recubriendo la
pared interna del tubo, razn por la cual se le llamo columna tubular abierta con
pared recubierta, o WCOT por sus siglas en ingles [19].
Otros dos tipos de columnas capilares se encuentran disponibles comercialmente,

la columna tubular abierta con soporte recubierto (o SCOT, support-coated open
tubular) y la columna tubular abierta de capa porosa (o PLOT, porous layer open
tubular). Las columnas SCOT tienen una delgada capa de un soporte solido
absorbente recubierto de fase liquida, estas columnas tienen mayor cantidad de
fase mvil y por ende mayor capacidad de carga que una columna comn WCOT
[19].
Las columnas PLOT contienen una capa porosa de un slido absorbente como
almina o tamiz molecular. Las columnas PLOT son adecuadas para el anlisis de
gases livianos, por ejemplo la separacin de nen, argn, oxigeno, nitrgeno y
xenn se hace con una columna PLOT de tamiz molecular [19].
49
En la tabla 3 se muestran las fases liquidas ms comunes. Existen bsicamente
dos tipos de fases estacionarias liquidas: los polmeros de siloxanos y las de
polietilenglicol.
Tabla 3. Fases estacionarias liquidas ms comunes en cromatografa de gases capilar

Cdigo Caractersticas (nombre, estructura, Algunas referencias comerciales
USP Polaridad y usos)
G1 dimetilpolisiloxano 100 % Rtx/MXT 1 (Restek)

CH3
DB/HP 1 (AGILENT)
Si O
SPB 1 (Supelco)
CH3
100%
Polaridad: no polar
Usos: solventes, productos de petroleo,
muestras farmaceuticas.
G27 difenil 5% Rtx/MXT 5 (Restek)

dimetilpolisiloxano 95%
DB/HP 5 (AGILENT)
CH3
SPB 5 (Supelco)
Si O Si O
CH3
5% 95%
Polaridad: no polar
Usos: saborizantes, muestras ambientales
hidrocarburos aromaticos.
NO polisilfenileno 5% Rtx - 5sil MS

dimetilpolisiloxano 95%
APLICA Rtx 5Sil MS (Restek)
CH3 CH3 CH3
DB 5 MS (AGILENT)
Si O Si Si O
x y SLB 5 MS (Supelco)
CH3 CH3 CH3
Polaridad: no polar
Usos: saborizantes, muestras
ambientales, pesticidas,
PCBs, hidrocarburos aromaticos.
50
Continuacin Tabla 3. Fases estacionarias liquidas ms comunes en cromatografa de
gases capilar
cianopropilfenil 6%
G43 dimetilpolisiloxano 94% Rtx/MXT - 1301, Rtx/MXT - 624
CN
CH3 (Restek)
(CH2)3
Si O HP 1301, HP 624 (AGILENT)
Si O
SPB 624 (Supelco)
CH3
6% 94%
Polaridad: lijeramente polar
Usos: compuestos volatiles, insecticidas,
residuos de solventes en productos
farmaceuticos.
difenil 20%
G32 dimetilpolisiloxano 80% Rtx/MXT 20 (Restek)
CH3 SPB 20 (Supelco)
Si O Si O
CH3
20% 80%
Polaridad: lijeramente polar
Usos: compuesos volatiles, alcoholes.
difenil 35%
CH3 DB/HP 35 (AGILENT)
Si O Si O SPB 35 (Supelco)
CH3
35% 65%
Polaridad: medianamente polar
Usos: pesticidas, PCB, aminas.
cianopropilfenil 14%
CN
(CH2)3
Si O SPB 1701 (Supelco)
Si O
CH3
14% 86%
Usos: pesticidas, PCB, alcoholes oxigenados.
51
Continuacin Tabla 3. Fases estacionarias liquidas ms comunes en cromatografa de
gases capilar
difenil 50%
Si O Si O SPB 50 (Supelco)
CH3
50% 50%
Usos: triglicridos, steres de ftalato,
esteroides, fenoles.
trifluoropropilmetilpolisiloxano 100%
G6 CF3 Rtx/MXT 200 (Restek)
C2H4 DB/HP 200 (AGILENT)
Si O
CH3
100%
Polaridad: selectivo para pares de electrones libres
Usos: muestras ambientales, solventes, gases
drogas, cetonas, alcoholes
G7 cianopropilmetil 50% Rtx 225 (Restek)

fenilmetilpolisiloxano 50%
CN DB/HP 225 (AGILENT)
(CH2)3
Si O Si O
CH3 CH3
50% 50%
Polaridad: polar
Usos: FAMEs, carbohidratos.
G16 polietilenglicol Stabilwax / Carbowax 20M (ResteK)

H H DB WAX (AGILENT)
C C O Supelcowax10 (Supelco)
H H
Polaridad: polar
Usos: FAMEs, acidos, aminas, solventes,
isomeros del xileno.
52
1.4.1.4. Detector
Al final de la columna se encuentra el detector, existen gran variedad de

detectores que se basan en diversidad de fenmenos fsicos.
Con pocas excepciones, la mayora de detectores para cromatografa de gases

fueron inventados especficamente para esta tcnica. Las mayores excepciones
son el detector de conductividad trmica, que ya exista como un analizador de
gases cuando comenz la CG; y el espectrmetro de masas (o detector selectivo
de masas), que fue adaptado para las altas velocidades de escaneo necesaria
para los picos cromatogrficos [19].
En total, hay probablemente ms de 60 detectores que han sido usados en CG.

Muchos de ellos se basan en la formacin de iones por uno u otro medio; y de
estos, el detector de ionizacin de llama es el ms popular. En la tabla 4 se
enlistan los detectores ms comunes para CG [19].
Tabla 4. Detectores ms comunes para cromatografa de gases

Nombre selectivo para
Detector de ionizacin de llama (FID) NO
Detector de conductividad trmica (TCD) NO
Detector de captura electrnica (ECD) X*
Detector de nitrgeno/fosforo (NPD) N,P,X
Detector de fotoionizacin (PID) Aromticos
Detector de ionizacin de Helio (HID) NO
Detector fotomtrico de llama (FPD) S,P
Detector de emisin atmica de plasma (AED) Metales, X,C,O
Quimioluminiscencia S
Detector de densidad de gas (GADE) NO
3
Detector de radioactividad H, 14C
Espectrmetro de masas (MSD) SI
Infrarrojo con transformada de Fourier (FTIR) SI
*X = halgeno
Con la mayora de detectores la identificacin de un componente se hace

comparando el tiempo de retencin del pico cromatogrfico con el de un patrn
53
corrido a las mismas condiciones, esto implica que se debe tener informacin
previa sobre la identidad de los analitos, es decir, la comparacin de los tiempos
de retencin se hace solo con fines de verificacin y el uso de los detectores se
limita principalmente al anlisis cuantitativo. El detector selectivo de masas tiene
la ventaja de que a la vez que genera una seal cromatogrfica puede obtener y
registrar el espectro de masas de cada uno de los analitos facilitando su
identificacin ya sea por medio de la interpretacin de su espectro de masas o con
la simple comparacin en una base de datos. Esto lo hace idneo para el anlisis
cualitativo en los diversos campos de la investigacin [20].
En los sistemas modernos el detector est comunicado con un ordenador el cual a

travs de un software interpreta la seal y la registra en una grfica llamada
cromatograma. La figura 3 muestra un cromatograma tpico.
Figura 3.Cromatograma tomado en un cromatgrafo de gases.
En el cromatograma, cada pico corresponde a un compuesto de la mezcla, en el

eje de las abscisas se registra el tiempo de retencin, esto es, el tiempo que tarda
54
un analito desde la inyeccin para efluir de la columna y llegar al detector. La
altura de cada pico depende de la cantidad de analito que llega al detector
1.4.2. Detector selectivo de masas.

Como se dijo anteriormente, la cromatografa de gases es la principal tcnica
analtica para la separacin de compuestos voltiles. Esta tcnica combina
velocidad de anlisis, alta resolucin, fcil operacin, excelentes resultados
cuantitativos y bajo costo, sin embargo, desafortunadamente la CG no puede
confirmar la identidad o estructura de ningn pico. Los tiempos de retencin estn
relacionados con los coeficientes de particin, y aunque esta es una caracterstica
para definir un buen sistema, los datos obtenidos por si solos no pueden ser
usados para identificar un pico [19].
El espectrmetro de masas por otro lado, es uno de los detectores ms ricos en

informacin. Esta tcnica requiere unos pocos microgramos de muestra para el
anlisis pero provee informacin tanto para la identificacin cualitativa de
compuestos desconocidos como para su cuantificacin. Adems es fcilmente
acoplado a sistemas de cromatografa de gases [19].
La figura 4 es un esquema de un espectrmetro de masas de baja resolucin

usado comnmente en CG. Debido a su pequeo tamao, a menudo es referido
como espectrmetro de masas de mesa [19].
55
ENTRADA
DE LA MUESTRA
FUENTE DE ANALIZADOR
DETECTOR
IONIZACIN DE MASAS
VACIO
ESPECTRO DE MASAS
SISTEMA
DE DATOS
m/z
Figura 4. Esquema de un espectrmetro de masas
Para uso con cromatografa de gases una interface comunica la salida de la

columna cromatogrfica con la fuente de iones, en general el CG y el EM son muy
compatibles ya que ambos sistemas trabajan a alta temperatura, ambos trabajan
con compuestos en estado vapor y ambos trabajan con pequeas cantidades de
muestra, sin embrago, el nico problema que presenta este acoplamiento es que
la presin atmosfrica a la salida de la columna cromatogrfica debe reducirse
hasta unos 10-5 a 10-6 torr en la entrada del EM [19].
Despus de separadas por el cromatgrafo, las molculas de analito deben ser

ionizadas y fragmentadas para su anlisis, esto se consigue en la fuente de iones.
Existen diversas formas de ionizacin, pero el impacto electrnico es el tipo de
ionizacin ms utilizado, casi la totalidad de las bibliotecas o bases de datos de
espectros comerciales son construidas con este mtodo. Se consigue
bombardeando las molculas del compuesto con electrones de alta energa (70
56
eV), con el fin de remover un electrn de su estructura. Las molculas, por la
prdida del electrn y por el exceso de energa ganado en la colisin, se rompen
generando tanto especies neutras como especies cargadas (iones). El impacto
electrnico es el tipo de ionizacin ms energtico, por ende, con el que se
obtiene mayores rompimientos. Las dems tcnicas de ionizacin se denominan
tcnicas blandas, producen ionizaciones menos energticas y menor
fragmentacin de la molcula. El impacto electrnico es el modo de ionizacin
ms usado en el anlisis de plaguicidas aunque en algunos casos se usa tambin
la ionizacin qumica negativa [16].
Despus de la ionizacin los iones producidos se aceleran a travs de campos

elctricos conducindolos hacia el analizador. En el analizador los iones son
desviados de su trayectoria por la aplicacin de campos elctricos o magnticos,
que dependiendo de la masa del ion le suministran diferentes velocidades; la
magnitud de la desviacin depende de la masa y velocidad de cada ion. Existen
tambin diversos tipos de analizadores. Ver tabla 5 [20].
Tabla 5. Tipos de analizadores de masas

de enfoque
simple
Magnticos
de doble
enfoque
Cuadrupolares
De tiempo de vuelo
Trampa de iones
La mayora de los CG-EM de mesa usan analizadores de masas de cuadrupolo,

trampa de iones o tiempo de vuelo. Los de tipo cuadrupolo representan cerca del
80% de los equipos comercializados en el mundo. Sistemas con analizadores de
masas magnticos de doble enfoque tambin estn disponibles en el mercado, sin
embargo son ms costosos y no pueden considerarse de mesa por su tamao
[19].
57
Por ltimo los iones formados a partir de las molculas de la muestra y separados
por el analizador, son colectados en el detector produciendo una seal elctrica
que convenientemente amplificada, se registra y representa grficamente en el
espectro de masas. Figura 5.
Figura 5. Espectro de masas de la cafena
En el eje horizontal (abscisas) del espectro de masas se registra la relacin entre

la masa y la carga de cada ion (m/z, donde m es la masa del ion y z su carga
elctrica), por lo general la carga producida por el impacto de los electrones es
igual a la unidad por lo tanto puede leerse la masa de cada ion directamente en la
escala de las abscisas. En el eje vertical se lee la cantidad de los iones que se
expresa como abundancia relativa.
Los dos iones ms caractersticos de un espectro de masas son: el denominado

pico base, que es el ms alto de todos los picos y representa el ion en mayor
cantidad, y el pico de ion molecular que no representa exactamente un fragmento,
sino la molcula entera, cargada por la prdida de su electrn y justo antes de su
primera fragmentacin; el pico de ion molecular es, por tanto, el de mayor valor de
m/z en el espectro. Al pico base se le asigna una abundancia relativa del 100% y
con respecto a l se miden las abundancias del resto de los fragmentos [20].
58
As, cada barra o pico en el espectro de masas representa un ion cuya posicin en
el grafico depende de su masa y su altura de su abundancia. En condiciones de
reproducibilidad las molculas de un mismo compuesto siempre se fragmentaran
produciendo los mismos iones en iguales cantidades. El espectro de masas se
considera por esta razn la huella digital de un compuesto [20].
1.4.2.1. El anlisis cuantitativo con espectrometra de masas.

Los espectrmetros de masas cuadrupolares tienen la ventaja de poderse
configurar tanto para anlisis cualitativo como para anlisis cuantitativo.
El analizador cuadrupolar puede ajustarse para que separe y registre la totalidad

de los iones generados en la fragmentacin, as se obtiene el espectro de masas
completo con el que se hace la identificacin del compuesto. Este modo de trabajo
del espectrmetro se conoce como full scan y se usa para el anlisis cualitativo.
Para el anlisis cuantitativo, el cuadrupolo se configura de manera que solo

permita el paso hacia el detector de los fragmentos ms representativos de cada
analito. Este procedimiento se conoce como monitoreo de iones seleccionados
(SIM) y tiene la ventaja de que se evita la llegada al detector de fragmentos de
molculas diferentes a los analitos, que pueden estar presentes en la matriz y que
generan interferencia. Adems la respuesta por unidad de masa es mayor por SIM
[20].
1.5. ESTANDARIZACIN DE TCNICAS ANALTICAS
Estandarizar o validar una tcnica de anlisis es verificar y documentar que esta

conduce con un alto grado de confiabilidad a datos altamente precisos y exactos
dentro de las especificaciones y atributos de calidad previamente establecidas
[21].
59
Los atributos de calidad pueden ser de tipo estadstico o de tipo
operativo/econmico. Entre los primeros figuran los parmetros fundamentales de
exactitud (relacionado con la trazabilidad) y precisin (relacionado con la
incertidumbre) y los secundarios de selectividad, sensibilidad, lmites de deteccin
y cuantificacin o robustez. Entre los criterios de tipo operativo/econmico se
encuentran la facilidad de comprensin del mtodo y manejo de la
instrumentacin, la rapidez del anlisis, su costo, la inversin, el mantenimiento,
etc. [22].
1.5.1. Exactitud
La exactitud de un procedimiento analtico expresa la proximidad entre el valor que
es aceptado convencionalmente como valor verdadero o un valor de referencia y
el valor experimentalmente encontrado [21].
La exactitud se expresa como porcentaje de recuperacin en la valoracin de una

cantidad conocida de analito aadida sobre la muestra. La recuperacin esperada
depende del tipo de matriz, del procedimiento de preparacin de la muestra y de la
concentracin del analito en la misma. Aunque es deseable alcanzar valores de
recuperacin cercanos al 100%, esto no es posible debido a los errores
sistemticos inherentes a todo mtodo de ensayo, por ejemplo, las prdidas de
analito en las extracciones liquido-liquido o liquido-solido durante el procesamiento
de la muestra [21].
1.5.2. Precisin
Para que un dato obtenido mediante una medicin sea de utilidad se debe tener
una idea de la precisin del mtodo con que se realiz dicha medicin.
La precisin determina el grado de concordancia (grado de dispersin) entre una

serie de medidas de tomas mltiples a partir de una misma muestra homognea
en las condiciones prescritas. Usualmente se expresa en trminos de desviacin
estndar (SD) o de desviacin estndar relativa (RSD). La dispersin de los datos
60
obtenidos es debida a errores aleatorios presentes en todo proceso de medicin.
Como consecuencia de la existencia de estos errores, los anlisis realizados sobre
muestras idnticas, en las mismas circunstancias, no conducen generalmente a
resultados idnticos [21,23].
En un mtodo de ensayo se involucran ms de una medicin: el pesaje de la

muestra, la medicin del volumen final de extracto, la medicin instrumental. Cada
una de estas mediciones est sujeta a errores aleatorios que afectan la precisin
del mtodo
Una forma de evaluar la precisin del mtodo es mediante la estimacin de la

incertidumbre de la medicin.
1.5.3. Incertidumbre de la medicin:

El propsito de una medicin es determinar el valor de una magnitud, llamada el
mensurando, que de acuerdo al Vocabulario Internacional de Trminos Bsicos y
Generales de Metrologa (VIM), es el atributo sujeto a medicin de un fenmeno,
cuerpo o sustancia que puede ser distinguido cualitativamente y determinado
cuantitativamente [24].
La imperfeccin natural de la realizacin de las mediciones, hace imposible

conocer con certeza absoluta el valor verdadero del mensurando. Toda medicin
lleva implcita una incertidumbre. La incertidumbre es el parmetro asociado con
el resultado de la medicin, que caracteriza la dispersin de los valores que
razonablemente podra ser atribuido al mensurando. Este parmetro podra ser
una desviacin estndar u otra parte de un intervalo que indica un cierto intervalo
de confianza o de distribucin ms probable de los valores repetitivos de una
medicin [24,25].
Este parmetro de la medicin refleja la calidad de todo el proceso usado para la

medicin y permite identificar los puntos clave del proceso o las etapas
susceptibles de mejora, existen diversas normas internacionales que sirven de
61
gua para el clculo de la incertidumbre y especficamente para los ensayos
qumicos se pueden mencionar las guas desarrolladas por IUPAC, EURACHEM,
CITAC y NIST, en ellas se plantean metodologas especficas para estimar la
incertidumbre en este tipo de mediciones [24].
El diagrama de la figura 6 describe los pasos para la estimacin de la

incertidumbre [24].
La definicin del mensurando es vital para obtener buenos resultados de la

medicin. En no pocas ocasiones se mide algo distinto al propsito original [24].
Un modelo fsico de la medicin consiste en el conjunto de suposiciones sobre el

propio mensurando y las variables fsicas o qumicas relevantes para la medicin
[24].
En la literatura se distinguen dos mtodos principales para cuantificar las fuentes

de incertidumbre: El Mtodo de Evaluacin Tipo A est basado en un anlisis
estadstico de una serie de mediciones, mientras el Mtodo de Evaluacin Tipo B
comprende todas las dems maneras de estimar la incertidumbre [24].
62
Definir el mensurando Y
Establecer el modelo fsico

Identificar las magnitudes de entrada Xi
Establecer el modelo matemtico
Identificar las fuentes de incertidumbre
Cuantificar la variabilidad de cada fuente

y asociarle una distribucin
Reducir. Obtener la incertidumbre estndar u(xi)
Estimar correlaciones
Calcular la incertidumbre estndar combinada uc
Elegir el nivel de confianza p
SI Cuantificar NO
el nmero de
grados?
Estimar los grados de libertad vi
Calcular el nmero efectivo

de grados de libertad vef
Determinar el
Determinar tp(vef) factor decobertura k
Calcular la incertidumbre expandida U
FIN
Figura 6. Diagrama para la estimacin de la incertidumbre de la medicin
63
Cabe mencionar que esta clasificacin no significa que exista alguna diferencia en
la naturaleza de los componentes que resultan de cada uno de los dos tipos de
evaluacin, puesto que ambos tipos estn basados en distribuciones de
probabilidad. La nica diferencia es que en las evaluaciones tipo A se estima esta
distribucin basndose en mediciones repetidas obtenidas del mismo proceso de
medicin mientras en el caso de tipo B se supone una distribucin con base en
experiencia o informacin externa al metrlogo [24].
En la prctica esta clasificacin no tiene consecuencia alguna en las etapas para

obtener una estimacin de la incertidumbre combinada.
En este trabajo las incertidumbres de tipo A son las debidas a:
El volumen final del extracto

La inyeccin
La recuperacin
La dispersin de los datos se expresa mediante la desviacin estndar y para

convertir la dispersin en incertidumbre estndar se divide la desviacin estndar
entre n donde n es el nmero de mediciones.
Las incertidumbres de tipo B son las que se obtienen de informacin externa como
certificados de calibracin, manuales o especificaciones de los instrumentos,
valores de mediciones anteriores, entre otros:
Masa de muestra
Error en la interpolacin.
Cuando la incertidumbre se obtiene de un certificado, como el caso de la

incertidumbre en la masa de muestra, el dato ledo debe dividirse por el factor de
cobertura, este depender de las distribuciones de probabilidad. Esto se debe a
que la incertidumbre estndar representa un intervalo de valores que contiene el
valor verdadero con una probabilidad de 68% asumiendo una distribucin normal
64
de los datos, cuando se desea un nivel de confianza o de probabilidad mayor se
debe expandir el intervalo multiplicndolo por el factor de cobertura y la
incertidumbre as obtenida se llama incertidumbre expandida. El factor de
cobertura k, como ya se mencion, depende del nivel de confianza requerido, en
una distribucin normal k = 1 para una probabilidad de 68,27% y con k = 2, la
probabilidad es 95,45%. En un certificado de calibracin las incertidumbres
reportadas son incertidumbres expandidas y quien emite el reporte debe
especificar el factor de cobertura (es decir, el nivel de confianza) [27]
1.5.4. Lmite de Deteccin

Se puede describir el lmite de deteccin de un analito como aquella concentracin
que proporciona una seal en el instrumento significativamente diferente de la
seal de una muestra en blanco o seal de fondo [26].
Esta descripcin brinda al analista un amplio margen de libertad para decidir la

definicin exacta del lmite de deteccin basada en una adecuada interpretacin
de la frase significativamente diferente. En la prctica existe muy poco acuerdo
entre los profesionales y los organismos oficiales sobre este punto. Una definicin
que se usa comnmente en la qumica analtica es que el lmite de deteccin es la
concentracin de analito que proporciona una seal igual a tres veces la seal de
fondo [26].
1.5.5. Lmite de cuantificacin.

El lmite de cuantificacin de un mtodo es la mnima cantidad de analito que se
puede cuantificar con suficiente precisin y exactitud.
Entre los lmites de deteccin y cuantificacin hay un rango de concentraciones

del analito en que si bien no puede cuantificarse con precisin, si puede ser
detectado sin incurrir en falsos positivos [21].
65
2. PARTE EXPERIMENTAL.
2.1. MUESTRAS DE ANLISIS.
Se analizaron muestras de caf verde en grano calidad excelso tipo exportacin

suministradas por la Federacin Nacional de Cafeteros, se conservaron en bolsas
de polietileno a temperatura ambiente.
Para la evaluacin de los porcentajes de recuperacin y de los interferentes de

matriz se usaron muestras de caf verde en grano, libres de plaguicidas evaluadas
previamente.
2.2. ANALITOS.
Los plaguicidas objeto de anlisis se enlistan en la tabla 6 con su respectivos

nmeros CAS y lmites mximos de residuos (LMR), segn resolucin 2906 de
2007 del Ministerio de la Proteccin Social.
Tabla 6. Analitos en el mtodo para determinacin de plaguicidas en caf verde

Formula MRL
ITEM Nombre Qumica Cas # (mg/kg)
1 Forato C7H17O2PS3 298-02-2 0,02
2 Terbufos C9H21O2PS3 13071-79-9 0,05
3 Disulfoton C8H19O2PS3 298-04-4 0,2
4 Clorpirifos C9H11Cl3NO3PS 2921-88-2 0,05
5 Triadimefon C14H16ClN3O2 43121-43-3 0,05
6 Triadimenol C14H18ClN3O2 55219-65-3 0,1
7 Propiconazol I & II C15H17Cl2N3O2 60207-90-1 0,1
67
2.3. ESTNDARES.
Se usaron estndares de alta pureza de cada pesticida de marca ChemService,

en la tabla 7 se relacionan los nmeros de catlogo y grado de pureza. El anexo 1
contiene las fichas tcnicas de cada estndar emitidas por el fabricante.
Tabla 7. Estndares de plaguicidas para la preparacin de patrones de referencia. Los

nmeros de catalogo corresponden a la marca ChemService
Numero
de
ITEM Nombre % Pureza
catalogo
1 Forato PS-654 97,5
2 Terbufos PS-680 99,1
3 Disulfoton PS-652 98,2
4 Clorpirifos PS-674 99,5
5 Triadimefon PS-1013 99,2
6 Triadimenol PS-1064 99,5
7 Propiconazol I & II PS-1075 98,2*
*Mezcla de ismeros
2.3.1. Soluciones patrn individuales.

A partir de los estndares se prepar una solucin patrn de aproximadamente
5.000 partes por milln (mg/L) por cada plaguicida. En la tabla 8 se relacionan los
solventes que se utilizaron para cada plaguicida.
Tabla 8. Solventes para la preparacin de soluciones patrn de plaguicidas individuales

ITEM Nombre Solvente
1 Forato Tolueno
2 Terbufos Metanol
3 Disulfoton Metanol
4 Clorpirifos Acetona-Hexano (1:1)
5 Triadimefon Acetona-Hexano (1:1)
6 Triadimenol Tolueno-Acetonitrilo (1:1)
7 Propiconazol I & II Acetona-Hexano (1:1)
68
2.3.2. Niveles de Calibracin.
Se prepar una mezcla de los plaguicidas denominada mezcla madre agregando
los volmenes necesarios de solucin patrn para que cada componente quedara
a una concentracin igual a 200 veces su lmite mximo de residualidad (LMR) en
acetona hexano (1:1). Para el disulfoton su concentracin en la mezcla madre es
igual a 100 veces su LMR. A partir de esta mezcla se hicieron las diluciones para
los niveles de calibracin en acetona-hexano (1:1) usando el mtodo de diluciones
sucesivas, en la tabla 9 se registran las concentraciones de los diferentes
plaguicidas en cada nivel de calibracin.
Tabla 9. Concentracin de los patrones de referencia con que se construyeron las curvas
de calibracin.
LMR* Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 Nivel 6 Madre
Nombre mg/Kg mg/L mg/L mg/L mg/L mg/L mg/L mg/L
Forato 0,0200 0,0050 0,0100 0,0200 0,0400 0,0800 0,1600 4,0
Terbufos 0,0500 0,0125 0,0250 0,0500 0,1000 0,2000 0,4000 10
Disulfoton 0,2000 0,0250 0,0500 0,1000 0,2000 0,4000 0,8000 20
Clorpirifos 0,0500 0,0125 0,0250 0,0500 0,1000 0,2000 0,4000 10
Triadimefon 0,0500 0,0125 0,0250 0,0500 0,1000 0,2000 0,4000 10
Triadimenol 0,1000 0,0250 0,0500 0,1000 0,2000 0,4000 0,8000 20
Propiconazol I & II 0,1000 0,0250 0,0500 0,1000 0,2000 0,4000 0,8000 20
*Lmite Mximo de Residualidad
2.4. ANLISIS CROMATOGRFICO
La mediciones se realizaron en un cromatgrafo de gases acoplado a

espectrometra de masas marca SHIMADZU, referencia QP 2010, equipado con
inyector automtico referencia AOC 20i+s y se us para el anlisis de los
cromatogramas el software GCMSsolution versin 2.5. Se utiliz una columna
capilar marca RESTEK, referencia RTX 5Sil MS (30m x 0,25mm I.D.; 0,25m fd).
69
2.4.1. Anlisis cualitativo.
Se inyectaron 2 L de la mezcla madre en el cromatgrafo para medir los tiempos
de retencin y tomar los espectros de masas de cada pesticida. En la tabla 10 se
relacionan las condiciones de corrida.
Tabla 10. Condiciones instrumentales en el anlisis cualitativo de los plaguicidas

puerto de inyeccin
Temperatura de inyeccin 250C
Modo de inyeccin Split
relacin Split 10
Gas de arrastre Helio
flujo por columna 1 mL/min
flujo de purga 3 mL/min
Horno
Temperatura 1 120C
tiempo 1 2 minutos
Rampa 1 10C/min
Temperatura 2 270C
tiempo 2 0 minutos
Rampa 2 25C/min
Temperatura final 320C
tiempo final 2 minutos
Detector
Temperatura de interface 280C
Temperatura fuente de iones 260C
Modo de ionizacin impacto electrnico (70eV)
modo de lectura Scan
Rango de masas 40 a 350 uma
Para evitar la contaminacin cruzada se program el autoinyector para realizar

tres lavados previos a la inyeccin con acetona, metanol y hexano (1 con cada
solvente) y seis lavados posteriores (2 con cada solvente). El volumen de lavado
fue 6 L. Adicionalmente se programaron tres purgas con la muestra.
Se integraron los picos cromatogrficos y los plaguicidas se identificaron por

comparacin de sus espectros de masas con la base de datos WileyAccessPak
7th Edition. John Wiley&Sons, Inc.
70
2.4.2. Calibracin instrumental
Los patrones de calibracin se inyectaron con las mismas condiciones
cromatogrficas que la mezcla madre pero se configur el espectrmetro de
masas en el modo de adquisicin SIM (monitoreo selectivo de iones). Los iones
que se monitorearon para cada pesticida se relacionan en la tabla 11.
Tabla 11. Iones de cuantificacin y referencia de los plaguicidas

Ion de Ion de Ion de
ion de
PLAGUICIDA referencia referencia referencia
cuantificacin
1 2 3
Forato 75 121 260 231
Terbufos 231 288 153
Disulfoton 88 186 153
Clorpirifos 314 197 286
Triadimefon 208 181
Triadimenol 168 112 128
Propiconazol I & II 173 259
Se realizaron tres inyecciones de 2 L por cada concentracin y se usaron 6

concentraciones, se integraron los picos cromatogrficos y se grafic el promedio
de las reas bajo el pico contra la concentracin correspondiente.
2.5. PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS.
2.5.1. Molienda
Se tomaron 15 gramos de caf verde y se molieron en un molino marca IKA
referencia MF 10 Basic equipado con un cabezal de martillos a 5500 revoluciones
por minuto.
2.5.2. Extraccin de los plaguicidas de la matriz de caf.

Se pesaron con la mayor exactitud posible 10 gramos (g) de muestra molida en un
erlenmeyer de 250 mililitros (mL), se adicionaron 30 mL de Acetonitrilo-Agua (5:2)
y se puso la mezcla en el bao ultrasnico durante 15 minutos, luego se filtr y el
filtrado se colect en un embudo de separacin de 250 mL, al residuo slido en el
71
erlenmeyer se adicionaron 20 mL de acetonitrilo y se agit durante 15 minutos en
el agitador orbital, se filtr nuevamente en el embudo de separacin. Se hizo una
extraccin liquido-liquido al filtrado con 30 mL de solucin salina en buffer fosfato
pH 7.
Se desech la fase acuosa y la fase en acetonitrilo se pas a travs de un

cartucho para extraccin en fase solida RP18 (1000 mg, 6 mL). (El cartucho fue
previamente acondicionado con 10 mL de acetonitrilo). El efluente conteniendo
los plaguicidas se recogi en un matraz volumtrico (clase A) de 50 mL, luego se
adicionaron al matraz 12.5 mL de tolueno y se afor el volumen con acetonitrilo.
Se verti la mezcla resultante a un erlenmeyer de 100 mL y se sec con 5 g
sulfato de sodio anhidro.
2.5.3. Limpieza de los plaguicidas.

La mezcla de acetonitrilo-tolueno seca, conteniendo los plaguicidas, se pas a
travs de un cartucho para extraccin en fase slida Envicarb-NH2 (500 mg/500
mg, 6 mL). (El cartucho fue acondicionado previamente con 10 mL de acetonitrilo-
tolueno (3:1)). El efluente se recogi en un baln para rotaevaporador de 100 mL.
Se rotaevapor el efluente hasta un mL (sin llevar a sequedad). Luego se
adicionaron 10 mL de acetona al baln y se rotaevapor de nuevo sin llevar a
sequedad, se adicionaron 5 mL ms de acetona y se rotaevapor hasta sequedad.
Luego se adicionaron 1,5 mL de una mezcla de acetona-hexano (1:1), con la cual
se lav bien el baln hacindola pasar por las paredes y se dej reposar por unos
pocos minutos, finalmente se transfiri el lavado a un vial de inyeccin ajustando
el volumen a 1 mL. En la figura 7 se observa el diagrama de flujo correspondiente
a la extraccin de los plaguicidas y en la figura 8 se presenta el diagrama de flujo
para el proceso de limpieza.
72
A. EXTRACCION DE LOS PLAGUICIDAS
Pesar aprox. 15 g de Caf verde
Moler a 5500 rpm
Pesar 10 g muestra molida
Acetonitrilo-Agua (5:2) 30 mL
homogenizar 15 min. en ultrasonido
Filtrar Residuo
Acetonitrilo 20 mL
Homogenizar 15 min en agitador
Filtrar
Combinar los filtrados

Residuo Desechar
NaCl 20% en Buffer Fosfato 0.5M, pH 7 - 30 mL
Fase Fase
Acuosa Acetonitrilo
Columna cromatografica ODS (RP-18)

Acondicionada con 10 mL de acetonitrilo
Desechar
1. adicionar 12.5 ml de Tolueno

2. Aforar a 50 mL con ACN
Secar con Na2SO4 anhidro
Extracto en
Acetonitrilo-Tolueno
Figura 7. Esquema del procesamiento de caf verde para la extraccin de plaguicidas.
73
B. LIMPIEZA DE LOS PLAGUICIDAS
Extracto en
Acetonitrilo-Tolueno
Columna cromatografica ENVI-carb/LC-NH2 500mg/500mg

Acondicionada con 10 mL de tolueno acetonitrilo 1:3
Concentrar a 1 mL
Adicionar 10 mL de acetona y concentrar a 1 mL
Adicionar 5 mL de acetona y llevar a sequedad
Disolver el residuo en 1.5 mL de acetona hexano (1:1)
Agitar y reposar
Ajustar el volumen a 1 mL exactamente
GC/MS
Figura 8. Limpieza de los plaguicidas en el extracto de caf.
2.6. ANLISIS CUANTITATIVO DE LOS PLAGUICIDAS
2.6.1. Evaluacin de la matriz

Muestras de caf verde en grano libre de plaguicidas se sometieron a extraccin,
se inyectaron 2 L de los extractos en modo SIM y bajo las mismas condiciones
que los patrones de calibracin.
74
2.6.2. Porcentaje de recuperacin
Se prepararon 5 mililitros de una solucin en la que cada plaguicida se encontraba
a una concentracin igual a 5 veces su lmite mximo de residualidad (LMR). Se
molieron tres muestras de caf verde en grano, libres de plaguicidas. Se pesaron
10 gramos de cada muestra molida y se doparon con 1 mL de la solucin medido
volumtricamente. Cada muestra contaminada se proces segn la metodologa
propuesta en este trabajo. Se inyect en el cromatgrafo 2 L del extracto final
obtenido usando las mismas condiciones instrumentales con que se inyectaron los
niveles de calibracin, se inyect adems 2 L de la solucin de dopaje restante
para usarse como referencia. El porcentaje de recuperacin se calcul como el
porcentaje de rea en la muestra relativo al rea en la referencia bajo el pico
correspondiente a cada plaguicida. En la figura 9 se resume el protocolo seguido
para medir los porcentajes de recuperacin.
muestra 1 muestra 2 muestra 3

cafe verde cafe verde cafe verde
10 gramos 10 gramos 10 gramos
Referencia Adicionar Adicionar Adicionar

1 mL de 1 mL de 1 mL de 1 mL de
solucion dopaje solucion dopaje solucion dopaje solucion dopaje
PROCESAMIENTO PARA EXTRACCION

Y LIMPIEZA DE LOS PLAGUICIDAS
LECTURA INSTRUMENTAL
Figura 9. Protocolo para la evaluacin de los porcentajes de recuperacin en la
extraccin de plaguicidas en caf verde.
75
3. DATOS Y RESULTADOS
3.1. RESULTADOS DEL ANLISIS CUALITATIVO.
3.1.1. Determinacin de los tiempos de retencin

En la figura 10 se muestra el cromatograma de la mezcla madre de los plaguicidas
y en la tabla 12 se registran los tiempos de retencin.
Figura 10. Cromatograma de la mezcla madre de plaguicidas.
Tabla 12. Tiempos de retencin de los plaguicidas en la mezcla madre estndar

TIEMPO DE RETENCIN
PLAGUICIDA
(minutos)
Forato 9,333
Terbufos 10,221
Disulfoton 10,588
Clorpirifos 12,306
Triadimefon 12,519
Triadimenol 13,356
Propiconazol I 15,648
Propiconazol II 15,760
77
3.1.2. Obtencin de los espectros de masas.
Para verificar la identidad de los plaguicidas y asignar los nombres a los picos
cromatogrficos correspondientes, se tomaron sus espectros de masas en full
scan y se compararon con los de la base de datos verificando que los ndices de
similitud fueran superiores al 80%. En figura 11 se muestra la comparacin entre
el espectro del forato tomado experimentalmente y el de la base de datos. En el
anexo 2 estn los espectros de todos los plaguicidas.
B
Figura 11. Comparacin del espectro de masas del forato. A) Espectro de masas tomado
experimentalmente. B) Espectro de masas del forato en la base de datos.
78
Puesto que se trata de estndares certificados esta comparacin se hace con
fines de verificacin nicamente. El ndice de similitud es el dato con base en el
cual el software asigna los nombres a los picos cromatogrficos para la creacin
de la tabla de compuestos. No se realiz el anlisis de fragmentogramas puesto
que esta fuera del propsito de este trabajo, adems se trata de estndares
certificados cuya identidad se conoce plenamente. En la tabla 13 se presentan los
ndices de similitud encontrados para cada plaguicida.
Tabla 13. Similitud de los espectros experimentales con la base de datos.

Plaguicida ndice de similitud
Forato 94%
Terbufos 95%
Disulfoton 96%
Clorpirifos 90%
Triadimefon 94%
Triadimenol 93%
Propiconazol I & II 81%
3.2. CURVAS DE CALIBRACIN.
Con la informacin obtenida en la construccin de las curvas de calibracin se

evaluaron las caractersticas instrumentales.
Como cada concentracin se inyect por triplicado, se evalu la precisin

instrumental en los diferentes puntos de las curvas de calibracin con base en la
desviacin estndar de las reas bajo cada pico correspondiente, en general, las
desviaciones estndar relativas (%DER), se mantuvieron por debajo del 5% con la
excepcin de forato y propiconazol para quienes en el primer nivel fue de 5,94 y
6,49% respectivamente, sin embargo, teniendo en cuenta que la variacin en los
extremos de la curva es mayor que en el centro de gravedad de la misma [26],
cabria esperar mayor variabilidad en los primeros niveles, adems porque los
datos se acercan al ruido instrumental. En conclusin los valores de %DER para
forato y propiconazol en el primer nivel son aceptables.
79
Por otro lado, en el nivel cuatro todos los plaguicidas presentaron en la primera
rplica un dato notoriamente distinto de los otros dos, lo que result en %DER
superiores al 25% para algunos de ellos en ese nivel de concentracin, esto pudo
deberse a un error aleatorio en la inyeccin de esa replica, como por ejemplo una
burbuja en la jeringa de inyeccin.
Existen pruebas estadsticas que permiten determinar si el dato diferente o

anmalo se puede atribuir a un error aleatorio y en consecuencia desecharse, sin
embargo en este caso no fue posible aplicar dicha prueba, pues se requiere para
ello mnimo cuatro datos [26], luego, se conservaron los datos anmalos.
En la tabla 14 se muestran las concentraciones y las reas medidas para el forato,

en el anexo 3 se presentan los datos para todos los plaguicidas.
Tabla 14. Tabla de resultados. rea bajo el pico obtenida por triplicado para diferentes
concentraciones de forato
Desviacin
Desviacin estndar
Concentracin estndar de relativa de
Nivel (mg/L) rea promedio rea rea rea
1 0,0050 13098,33 778,51 5,94 13242
12258
13795
2 0,0100 17015,67 777,05 4,57 16383
17883
16781
3 0,0200 43941,00 507,99 1,16 43795
44506
43522
4 0,0400 68915,33 20503,01 29,75 45399
83042
78305
5 0,0800 176158,33 5607,74 3,18 170110
181185
177180
6 0,1600 345393,00 8242,78 2,39 339028
354704
342447
El rango de concentraciones en que se evalu la linealidad fue bastante amplio, la

relacin entre las concentraciones del nivel 1 y 6 fue de 1 a 32, una inspeccin
80
visual de la grfica de calibrado permite observar la relacin lineal entre la seal y
la concentracin, en la figura 12 se muestra la grfica de calibrado del forato.
Nombre: Forato
f(x) = 2179914.24x 3692.88
r=0,998240 r2=0,996484
Figura 12. Grafica de calibrado del Forato.
Se observa en la figura 12 que la grfica de calibrado del forato corresponde a una

lnea recta, pero los puntos no caen exactamente sobre la lnea debido a las
desviaciones en la exactitud instrumental. Aunque es evidente que la respuesta
del instrumento es dependiente de la concentracin, el clculo del coeficiente de
correlacin es ms adecuado para cuantificar el grado de relacin entre las dos
variables. En la tabla 15 se registran los coeficientes de correlacin de cada
analito y en el anexo 3 se muestran las grficas de calibrado de todos los analitos
con sus respectivas ecuaciones.
Se puede observar, que aunque se conservo el dato anmalo los coeficientes de

correlacin son bastante buenos, todos estn por encima de 0.997, esto
demuestra que la respuesta del detector es lineal y proporcional a la concentracin
en el rango establecido.
81
Tabla 15. Coeficientes de correlacin de las graficas de calibrado de los plaguicidas.
PLAGUICIDA R* R2
Forato 0,998240 0,996484
Terbufos 0,999078 0,998157
Disulfoton 0,999316 0,998633
Clorpirifos 0,999102 0,998204
Triadimefon 0,999571 0,999141
Triadimenol 0,997010 0,994029
Propiconazol I & II 0,998692 0,997385
*R: coeficiente de correlacin
3.3. LMITES DE DETECCIN Y CUANTIFICACIN.
Se calcul la relacin seal ruido (S/R) de todos los picos cromatogrficos en cada
uno de los niveles de calibracin. De cada plaguicida se obtuvo tres datos de
relacin seal ruido por cada concentracin. Se tabul la concentracin contra el
promedio de relacin seal ruido. En la tabla 16 se muestran los resultados para
el forato.
Tabla 16. Relacin seal ruido de los picos de Forato

Forato
Promedio
Concentracin.
nivel seal ruido
(mg/L)
(S/R)
N1 0,0050 151,71
N2 0,0100 173,87
N3 0,0200 533,30
N4 0,0400 995,11
N5 0,0800 2228,45
N6 0,1600 5065,07
Con los datos de concentracin y relacin seal ruido promedio se hizo una
regresin lineal y con la ecuacin resultante se calcul la concentracin necesaria
para obtener las relaciones seal ruido de 3 y 10 correspondientes al lmite de
deteccin y cuantificacin respectivamente.
82
En la tabla 17 se muestran los resultados para todos los plaguicidas.
Tabla 17. Limites de deteccin y de cuantificacin de los plaguicidas

Limite de Limite de
Plaguicida deteccin cuantificacin
(mg/L) (mg/L)
Forato 0,0048 0,0051
Terbufos 0,0078 0,0080
Disulfoton 0,0146 0,0147
Clorpirifos 0,0163 0,0167
Triadimefon 0,0131 0,0154
Triadimenol 0,0207 0,0211
Todos los lmites de cuantificacin estuvieron por debajo de la concentracin

menor en la curva, menos clorpirifos y triadimefon, sin embargo, la precisin del
instrumento en los niveles menores de estos dos plaguicidas son inferiores a 5%
lo que significa que se puede cuantificar confiablemente en estas concentraciones
a pesar de que el lmite de cuantificacin calculado sea mayor. Los limites de
cuantificacin y deteccin calculados a partir de las graficas de calibrado, estn
bastante influenciados por la desviacin de los puntos con respecto a la lnea; el
error aleatorio que se present en el nivel cuatro desvi significativamente los
puntos, se puede asegurar que esta es la razn por la cual los limites de
cuantificacin resulta mayor que el nivel uno de calibracin en los casos en que
as sucedi.
3.3.1. Evaluacin de Matriz

Los patrones con los que se construy la curva de calibracin fueron soluciones
en las que solo estuvieron presentes los analitos y el solvente, por tanto la relacin
seal ruido calculada sobre estos patrones no refleja el efecto de la matriz sobre la
seal de fondo del instrumento. Si bien el procesamiento de la muestra busca,
adems de extraer los analitos, retirar la mayor cantidad posible de constituyentes
de matriz, algo de estos constituyentes logran llegar al extracto final. Por tanto se
83
hizo necesario evaluar el efecto que estos interferentes tienen sobre el ruido y las
consecuencias sobre los lmites de deteccin y cuantificacin. Para esto se
procesaron 15 muestras de caf verde libre de plaguicidas y se calcul la relacin
seal ruido en los intervalos de tiempo en que aparecen los picos de los
plaguicidas. El promedio de estos datos se multiplic por 3 y 10 para recalcular los
lmites de deteccin y cuantificacin. Los resultados se muestran en las tablas 18
y 19.
Tabla 18. Relacin seal ruido de los muestras de caf verde en blanco para evaluar el
efecto de la matriz
Forato Terbufos Disulfoton Clorpirifos Triadimefon Triadimenol Propiconazol
Replica
S/R S/R S/R S/R S/R S/R S/R
1 2,47 18,84 0,29 5,47 4,52 1,10 0,77
2 2,11 20,39 0,15 16,12 3,12 0,03 0,64
3 2,69 11,71 0,47 8,64 2,95 1,48 2,43
4 2,51 24,07 0,37 11,30 6,10 1,56 1,24
5 0,98 18,84 2,81 15,09 1,14 0,16 2,01
6 1,53 4,61 1,11 2,68 2,39 2,08 0,43
7 1,33 13,65 1,28 24,14 5,08 0,92 0,98
8 1,39 7,91 0,96 13,79 4,24 1,50 0,79
9 0,87 17,14 1,91 17,68 1,69 1,13 1,68
10 2,70 26,43 0,12 5,67 0,97 3,67 0,56
11 1,70 21,56 0,21 19,39 1,65 1,31 2,46
12 1,21 11,45 2,01 11,76 4,95 0,42 1,55
13 2,57 14,87 1,57 21,40 2,79 2,63 1,96
14 1,47 9,89 1,68 9,32 0,52 0,57 0,59
15 0,79 10,54 3,51 14,87 2,48 1,08 1,47
Promedio 1,75 15,46 1,23 13,15 2,97 1,31 1,30
(S/R)*3 5,26 46,38 3,69 39,46 8,92 3.93 3,91
(S/R)*10 17,55 154,60 12,30 131,54 29,73 13,10 13,04
Ntese en la tabla 18 que el resultado de multiplicar la relacin seal ruido por 3,

nunca supera ninguno de los datos individuales, lo que es conforme con la
definicin y sobre todo con la justificacin de limite de deteccin. La alta
variabilidad en los datos es de esperarse puesto que nos encontramos en el nivel
del ruido.
84
Tabla 19. Lmites de deteccin y cuantificacin finales despus de considerar el efecto de
matriz.
Limite de Limite de
Plaguicida deteccin cuantificacin
(mg/L) (mg/L)
Forato 0,0049 0,0053
Terbufos 0,0094 0,0135
Disulfoton 0,0146 0,0147
Clorpirifos 0,0187 0,0247
Triadimefon 0,0151 0,0219
Triadimenol 0,0207 0,0213
La tabla 20 presenta la comparacin entre el lmite de cuantificacin calculado a

partir de la curva de calibracin (LC-1), el lmite de cuantificacin con el efecto de
matriz (LC-2) y el valor de concentracin mnimo de la curva de calibracin (N1).
Tabla 20. Comparacin de los lmites de cuantificacin. LC-1 es el lmite de cuantificacin

calculado de la grafica de calibracin sin tener en cuenta el efecto de la matriz en la seal.
LC-2 es el lmite de cuantificacin considerando el efecto de la matriz en la seal. N1 es el
nivel de menor concentracin usado en la curva de calibracin.
LC-1 LC-2 N1
Pesticida
(mg/L) (mg/L) (mg/L)
Forato 0,0051 0,0053 0,0050
Terbufos 0,0080 0,0135 0,0130
Disulfoton 0,0147 0,0147 0,0250
Clorpirifos 0,0167 0,0247 0,0130
Triadimefon 0,0154 0,0219 0,0130
Triadimenol 0,0211 0,0213 0,0250
Propiconazol I & II 0,0148 0,0156 0,0250
Se observa en la tabla 18 que la mayor afectacin por matriz la sufrieron terbufos,

clorpirifos y triadimefon, esto no representa un problema puesto que el lmite de
cuantificacin a pesar de todo se mantiene 20 veces por debajo del LMR.
85
3.4. PORCENTAJES DE RECUPERACIN.
Segn el protocolo de la figura 7, los extractos finales contienen los plaguicidas a

una concentracin igual a cinco veces sus LMR, lo que equivale a la mitad del
LMR en las muestras de caf puesto que en el proceso de extraccin y
purificacin los analitos se concentran 10 veces, es decir, los analitos contenidos
en 10 gramos de caf terminan en un mililitro de extracto. Los porcentajes de
recuperacin se calcularon por la relacin de reas de cada muestra y la
referencia en vez de usar la curva de calibracin para cuantificar, de esta manera
se evita el error por la interpolacin.
En la tabla 21 se muestran los resultados de los porcentajes de recuperacin para

cada plaguicida.
Tabla 21. Porcentajes de recuperacin en la extraccin de plaguicidas a partir de

muestras de caf verde en grano
Replica Replica Replica Desviacin
Plaguicida 1 2 3 Promedio estndar %DER*
Forato 73,5 81,4 67,9 74,3 6,8 9,13
Terbufos 84,3 91,8 89,9 88,7 3,9 4,43
Disulfoton 87,6 96,0 98,0 93,9 5,5 5,88
Clorpirifos 92,7 85,4 78,5 85,5 7,1 8,30
Triadimefon 68,0 75,4 72,4 71,9 3,7 5,13
Triadimenol 81,0 86,2 93,2 86,8 6,1 7,04
Propiconazol I & II 88,0 97,9 93,7 93,2 5,0 5,35
*%DER: desviacin estndar relativa
Todos los porcentajes de recuperacin promedio estuvieron entre 70% y 95% con
una baja dispersin de los datos (%DER por debajo del 10%). Es importante que
las desviaciones estndar relativas (dispersiones) sean pequeas ya que influyen
directamente en la incertidumbre de medicin, es decir, en la precisin del mtodo,
adems da una idea de la reproducibilidad en la extraccin.
86
4. ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE MEDICIN.
Se realiz la estimacin de la incertidumbre para el forato a manera de ejemplo y

al final de esta seccin se presentan los resultados para todos los analitos.
4.1.1. Definicin del mensurando

Aqu el mensurando es la concentracin de Forato expresada en miligramos de
Forato por cada kilogramo de caf verde.
4.1.2. Modelo fsico y modelo matemtico.

En primer lugar se hizo un esquema del proceso identificando de manera
independiente sus etapas. Ver figura 13.
Figura 13. Diagrama del mtodo de determinacin de plaguicidas en caf verde
Las molculas de plaguicidas estn contenidas en un medio solido que constituye

la matriz, en este caso el caf. Para ser cuantificadas, se extrajeron con un
solvente adecuado para la medicin instrumental, el porcentaje de recuperacin
en la extraccin y el volumen final de extracto, as como la masa inicial de matriz,
constituyen variables de entrada en el clculo de la concentracin que es la
variable de salida. La otra variable de entrada es la concentracin de plaguicida
en el extracto determinada en la lectura instrumental. El modelo matemtico se
describe a continuacin:
87
Dnde:
Cm = concentracin de plaguicida en la muestra (mg/kg)
Cext= concentracin de plaguicida en el extracto (mg/L)
Vext = volumen de extracto (mL)
%R = porcentaje de recuperacin (no tiene unidades)
mm = masa de la muestra (g)
4.1.3. Fuentes de incertidumbre

Con base en el modelo matemtico se construy el diagrama causa efecto que se
muestra en la figura 14.
Figura 14. Diagrama causa efecto en el clculo de la concentracin de Forato en caf.
De acuerdo con el diagrama causa efecto se identificaron las siguientes fuentes de

incertidumbre:
En primer lugar est la pesada de la muestra cuya variabilidad se obtuvo del

certificado de calibracin, luego la muestra se someti al proceso de extraccin y
limpieza de los plaguicidas, este proceso conllev perdidas de analito que se
evaluaron procesando por triplicado muestras contaminadas con concentraciones
conocidas, todas las incertidumbres resultantes de las mediciones de volumen
durante el proceso, (es decir del uso de pipetas, probetas, etc.), quedaron
88
incluidas en el clculo de incertidumbre por recuperacin. Al final de la extraccin
y limpieza, los analitos se transfirieron al vial de inyeccin y se ajust el volumen
de extracto a 1 ml, estos viales fueron calibrados por pesada y la incertidumbre en
el volumen se calcul a partir de la dispersin de las masas resultantes. Despus
de esto, el extracto se inyect en el instrumento para la obtencin de los
respectivos picos cromatogrficos y sus reas las cuales se interpolaron en la
grfica de calibrado del instrumento para determinar la concentracin de
plaguicida en el extracto. La medicin del volumen de inyeccin, las prdidas de
analito en el puerto de inyeccin, la eficiencia de la ionizacin en la fuente, la
perdida de iones en el cuadrupolo y la respuesta del detector suponen fuentes de
incertidumbre en el rea medida bajo el pico, todas estas se cuantificaron de
manera global inyectando 6 repeticiones del patrn de referencia con el que se
doparon las muestras para evaluar el porcentaje de recuperacin y determinando
la dispersin de las reas resultantes. En cuanto a la interpolacin, por ser la
grfica de calibrado un instrumento de medida, tiene una incertidumbre asociada
que se cuantific con clculos matemticos basados en los residuales (las
diferencias entre los valores de rea medidos y los valores de rea calculados a
partir de la ecuacin resultante de la regresin lineal). De manera que el error en
la concentracin del extracto se cuantific combinando la incertidumbre en el rea
con el error en la interpolacin [24,26].
4.1.4. Cuantificacin de las incertidumbres estndar.
Pesada de la muestra
De acuerdo con el certificado de calibracin la incertidumbre expandida esta

expresada por:
U= (0,0001 + 0,0000013m)
89
Y el factor de cobertura es 2, entonces la incertidumbre estndar en la pesada es:
u(m) = (0,0001 + 0,0000013(10,0))/2 = 0,0000565 g
Recuperacin
Para el Forato se obtuvo una recuperacin promedio de 74,3% con una desviacin
estndar de 6,8% para tres repeticiones, entonces:
u(%R) = 6,8/3 = 3,9259818305
Volumen del extracto
Como se mencion anteriormente el vial de inyeccin se someti a calibracin por

gravimetra, la desviacin estndar de los valores medidos fue de 0,06006008 ml
con 80 mediciones:
u(vol.) = 0,06006008/80 = 0,00671492108070378 ml
concentracin en el extracto
La incertidumbre en la concentracin del extracto se estim por la combinacin de

las incertidumbres en el rea y en la interpolacin. La desviacin estndar de las
reas en las 6 repeticiones fue 3953 unidades en la tabla 22 se muestran los
resultados.
Tabla 22. Variabilidad en las reas bajo el pico de forato
Incertidumbre en la inyeccin
Replica rea
1 205.947
2 214.007
3 202.871
4 208.763
5 204.969
6 209.538
Promedio 207.683
Desviacin estndar 3.953
%RSD 1,9
90
La incertidumbre estndar en la inyeccin es:
u(iny) = 3953/6 = 1613,84876924698 unidades de rea.
Para combinar la incertidumbre de las reas con la incertidumbre en la

interpolacin se multiplic por su coeficiente de sensibilidad, para calcularlo se
deriv la concentracin con respecto al rea en la ecuacin de la lnea de
calibrado:
El clculo de la incertidumbre en la interpolacin es un poco ms complejo, en

primer lugar se calcula el estadstico Sy/x segn:
Donde yi es el rea medida para cada concentracin usada en la curva de

calibracin (en este caso corresponde al promedio de tres repeticiones), ^yi es
el valor de rea corregido o calculado con la ecuacin de la grfica resultante y n
es el nmero de puntos de calibracin, 6 en este caso. Obtenido Sy/x el error en la
interpolacin se calcula con:
Donde b es la pendiente de la grfica de calibrado, m es el nmero de mediciones

del extracto (en este caso se hicieron 6 mediciones pero en el trabajo de rutina las
91
muestras se miden, por lo general, una sola vez), n nuevamente es el nmero de
puntos de calibrado, y0 es el rea medida o promedio de reas medidas para el
extracto y es el promedio de las reas de los patrones de calibracin [26].
Para el Forato se obtuvieron los siguientes valores:
Sy/x = 8586,14226584211 unidades de rea
u(int) = Sx0 = 0,002847438 mg/L
Finalmente:
u(ext.) = 0,002942106 mg/L
4.1.5. Coeficientes de sensibilidad

El coeficiente de sensibilidad describe qu tan sensible es el mensurando con
respecto a variaciones de la magnitud de entrada correspondiente, se calcula
mediante la derivada parcial de la funcin que relaciona las variables de entrada
con respecto a la correspondiente variable de entrada [24].
Coeficiente de sensibilidad de la pesada
Coeficiente de sensibilidad de la recuperacin
92
Coeficiente de sensibilidad de volumen de extracto
Coeficiente de sensibilidad de concentracin del extracto
4.1.6. Incertidumbre combinada y expandida

Para obtener la incertidumbre combinada, que a la vez es la incertidumbre
estndar de la variable de salida (concentracin de Forato en la muestra de caf
verde), se estim el peso que cada una de las incertidumbres estndar calculadas
anteriormente, tienen sobre el resultado final. Esto se consigui calculando el
producto de cada incertidumbre estndar por el coeficiente de sensibilidad,
entonces la incertidumbre combinada se obtuvo mediante:
u(Cm) = 0,00065254 mg/Kg
Se utiliz el factor de cobertura k = 2 para calcular la incertidumbre expandida con

un nivel de confianza del 95,45%
U(Cm) = u(Cm) x 2 = 0,00130507 mg/Kg
93
El resultado final para la concentracin de Forato en la muestra se calcul con la
ecuacin planteada como modelo matemtico, el resultado final fu:
Cm = 0,0097552 + 0,00130507 mg/kg.
En la tabla 23 se relacionan los resultados para todos los plaguicidas evaluados
Tabla 23. Resultados de la cuantificacin de plaguicidas en caf verde

Resultados
Pesticida Concentracin U* U Relativa
Forato 0,0098 0,0013 13,4
Terbufos 0,0256 0,0020 7,7
Disulfoton 0,0511 0,0041 8,0
Clorpirifos 0,0253 0,0030 12,0
Triadimefon 0,0260 0,0020 7,6
Triadimenol 0,0471 0,0059 12,5
*U: Incertidumbre en cuantificacin de plaguicidas en caf verde
La ltima columna de la tabla 23 muestra las incertidumbres relativas, para el

forato, la concentracin final es de 0,0098 mg por Kg de caf verde con una
incertidumbre de 0,0013 mg/Kg que corresponde al 13,4% del valor de
concentracin. Para evaluar la exactitud final del mtodo se calcul el porcentaje
de error en la concentracin, los resultados se muestran en la tabla 24
Tabla 24. Error en el clculo de concentracin de plaguicidas en caf verde

Resultados
Concentracin Concentracin
Pesticida % Error
esperada calculada
Forato 0,0100 0,0098 2,0
Terbufos 0,0250 0,0256 2,4
Disulfoton 0,0500 0,0511 2,2
Clorpirifos 0,0250 0,0253 1,2
Triadimefon 0,0250 0,0260 4,0
Triadimenol 0,0500 0,0471 5,8
94
Se puede observar en las tablas 21 y 22 que el mtodo es preciso y exacto, los
porcentajes de error en la concentracin medida estuvieron por debajo del 6% con
incertidumbres inferiores al 13.5% a un grado de confiabilidad del 95%. En
consecuencia, la metodologa propuesta en este trabajo es vlida para cuantificar
los plaguicidas Forato, terbufos, disulfoton, clorpirifos, triadimefon, triadimenol y
Propiconazol en caf verde tipo exportacin.
95
5. COCLUSIONES
Se estandariz la tcnica multiresiduo para determinar plaguicidas en caf verde

tipo exportacin.
Se obtuvieron los atributos del mtodo, la exactitud (% de error) en todos los

casos fue mayor al 94% y la precisin (%RSD) fue mayor al 94% para cinco
niveles de concentracin. Las correlaciones de las curvas de calibracin oscilaron
entre 0,996 y 0.999 para rangos lineales de trabajo entre 0,005 y 0,8000 ppm. Los
lmites de deteccin fueron en todos los casos inferiores a 0.025 ppm cumpliendo
con las necesidades legislativas.
La tcnica de extraccin en fase solida arroj porcentajes de recuperacin

oscilaron entre el 71,9 y 93,9%, con dispersiones inferiores al 9.13%. El efecto de
matriz influy sobre los plaguicidas terbufos, clorpirifos y triadimefon en donde sus
lmites de deteccin se duplicaron.
Para el clculo global de la incertidumbre se tuvo en cuenta las fuentes ms

significativas del proceso y el resultado final fue, para todos, inferior al 13.5% de
incertidumbre cumpliendo con los criterios de aceptacin en anlisis de residuos
de plaguicidas.
97
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102
ANEXOS
Anexo 1. Fichas tcnicas de los estndares de plaguicidas
103
104
105
106
107
108
+
109
Anexo 2. Espectros de masas
Comparacin del espectro de masas del Forato. A) Espectro de masas tomado

experimentalmente. B) Espectro de masas del Forato en la base de datos.
110
A
Comparacin del espectro de masas del Terbufos. A) Espectro de masas tomado

experimentalmente. B) Espectro de masas del Terbufos en la base de datos.
111
A
Comparacin del espectro de masas del Disulfoton. A) Espectro de masas tomado

experimentalmente. B) Espectro de masas del Disulfoton en la base de datos.
112
A
Comparacin del espectro de masas del Clorpirifos. A) Espectro de masas tomado

experimentalmente. B) Espectro de masas del Clorpirifos en la base de datos.
113
A
Comparacin del espectro de masas del Triadimefon. A) Espectro de masas tomado

experimentalmente. B) Espectro de masas del Triadimefon en la base de datos.
114
A
Comparacin del espectro de masas del Triadimenol. A) Espectro de masas tomado

experimentalmente. B) Espectro de masas del Triadimenol en la base de datos.
115
A
Comparacin del espectro de masas del Propiconazol. A) Espectro de masas tomado

experimentalmente. B) Espectro de masas del Propiconazol en la base de datos.
116
Anexo 3. Curvas de Calibracin.
Nombre: Forato M/Z: 75
f(x) = 2179914.24*x - 3691.88
r=0.998240 r2=0.996484
Desviacin
Desviacin
Concentracin rea estndar
Nivel estndar de rea
(mg/L) promedio relativa de
rea
rea
1 0,0050 13098,33 778,51 5,94 13242
12258
13795
2 0,0100 17015,67 777,05 4,57 16383
17883
16781
3 0,0200 43941,00 507,99 1,16 43795
44506
43522
4 0,0400 68915,33 20503,01 29,75 45399
83042
78305
5 0,0800 176158,33 5607,74 3,18 170110
181185
177180
6 0,1600 345393,00 8242,78 2,39 339028
354704
342447
117
Nombre: Terbufos M/Z: 231
f(x) = 558827.81*x 2181.10
r=0.999078 r2=0.998157
Desviacin
Desviacin
rea
rea
1 0,0130 6866,00 195,10 2,84 7038
6654
6906
2 0,0250 11951,67 151,19 1,26 11895
12123
11837
3 0,0500 27852,00 66,55 0,24 27904
27875
27777
4 0,1000 46736,67 12090,93 25,87 32871
55083
52256
5 0,2000 112073,00 4160,00 3,71 107746
117043
112430
6 0,4000 221511,00 6346,22 2,86 215579
228203
220751
118
Nombre: Disulfoton M/Z: 88
f(x) = 1684304.23*x 13601.59
r=0.999316 r2=0.998633
Desviacin
Desviacin
rea
rea
1 0,0250 40856,67 96,55 0,24 40806
40968
40796
2 0,0500 69621,67 1819,11 2,61 68596
71722
68547
3 0,1000 164294,67 497,52 0,3 163737
164454
164693
4 0,2000 287845,33 67626,52 23,49 210549
336101
316886
5 0,4000 674606,33 23427,34 3,47 648841
694627
680351
6 0,8000 1333945,00 31224,07 2,34 1304531
1366709
1330595
119
Nombre: Clorpirifos M/Z: 314
f(x) = 167324.88*x 1921.45
r=0.999102 r2=0.998204
Desviacin
Desviacin
rea
rea
1 0,0130 1215,00 58,39 4,81 1150
1232
1263
2 0,0250 2624 104,80 3,99 2511
2643
2718
3 0,0500 6554,67 79,06 1,1 6565
6621
6478
4 0,1000 12774,67 3024,50 23,68 9297
14791
14236
5 0,2000 31702,00 1270,51 4,01 30257
32644
32205
6 0,4000 65369,33 1065,90 1,63 64538
66571
64999
120
Nombre: Triadimefon M/Z: 208
f(x) = 359967.85*x 1170.89
r=0.999571 r2=0.999141
Desviacin
Desviacin
rea
rea
1 0,0130 3204,00 43,58 1,36 3201
3249
3162
2 0,0250 7075,33 274,05 3,87 6760
7210
7256
3 0,0500 17733,00 351,40 1,98 17339
17846
18014
4 0,1000 33110 4714,53 14,24 27743
36583
35004
5 0,2000 73465,33 1997,17 2,72 71243
75110
74043
6 0,4000 141861,67 1861,77 1,31 139982
143705
141898
121
Nombre: Triadimenol M/Z: 168
f(x) = 305145.57*x 9085.66
r=0.997010 r2=0.994029
Desviacin
Desviacin
rea
rea
1 0,0250 4111,67 100,73 2,45 4001
4198
4136
2 0,0500 11094,33 114,46 1,03 10994
11219
11070
3 0,1000 22788,33 633,33 2,78 22086
22963
23316
4 0,2000 42312,67 11620,78 27,46 28928
48180
49830
5 0,4000 105020,33 2973,74 2,83 101607
107051
106403
6 0,8000 240763,00 2109,93 0,88 242195
238340
241754
122
Nombre: Propiconazole I & II M/Z: 173
f(x) = 542550.24*x 8425.16
r=0.998692 r2=0.997385
Desviacin
Desviacin
rea
rea
1 0,0250 10852,67 805,17 7,42 11000
9984
11574
2 0,0500 23714 385,00 1,62 23716
24098
23328
3 0,1000 49596,00 765,40 1,54 49227
50476
49085
4 0,2000 87887,33 21363,30 24,31 63302
98406
101954
5 0,4000 199832,67 2724,08 1,36 199011
202873
197614
6 0,8000 432083,00 3171,37 0,73 431780
433395
429074
123

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ESTANDARIZACIN DE UNA METODOLOGA PARA LA DETERMINACIN

MULTIRESIDUO DE PLAGUICIDAS EN CAF VERDE

HUGO FERNANDO ARIAS LOAIZA

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

HUGO FERNANDO ARIAS LOAIZA

Requisito final para optar al ttulo de Qumico Industrial

Qco. MSc. JUAN PABLO ARRUBLA VELEZ

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

HUGO FERNANDO ARIAS LOAIZA

Con la connotacin _______________________________________

Para constancia firmamos en la ciudad de Pereira hoy:

1.1.1. Caf de Colombia 29

1.1.2. La cadena del caf 30

1.1.3. Principales enfermedades del caf 31

1.1.4. Principales plagas del caf 33

1.2. LOS PLAGUICIDAS 35

1.2.1. Generalidades e historia 35

1.2.2. Qumica de los plaguicidas. 37

1.3. LEGISLACIN PARA EL CONTROL DE PLAGUICIDAS 40

1.3.1. Legislacin internacional 40

1.3.2. Legislacin nacional 41

1.4. TECNICAS ANALTICAS PARA LA DETERMINACIN DE PLAGUICIDAS.

1.4.1. Cromatografa de gases 45

1.4.1.1. Instrumentacin para cromatografa de gases 47

1.4.1.3. Horno y columna 48

1.4.2. Detector selectivo de masas 55

1.4.2.1. El anlisis cuantitativo con espectrometra de masas 59

1.5. ESTANDARIZACIN DE TCNICAS ANALTICAS 59

1.5.3. Incertidumbre de la medicin 61

1.5.4. Lmite de deteccin 65

1.5.5. Lmite de cuantificacin 65

2.1. MUESTRAS DE ANLISIS 67

2.3.1. Soluciones patrn individuales 68

2.3.2. Patrones de calibracin 69

2.4. ANLISIS CROMATOGRFICO 69

2.4.1. Anlisis cualitativo 70

2.4.2. Calibracin instrumental 71

2.5. PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS 71

2.5.2. Extraccin de los plaguicidas de la matriz de caf. 71

2.5.3. Limpieza de los plaguicidas 72

2.6.1. Evaluacin de la matriz 74

2.6.2. Porcentaje de recuperacin 75

3.1. RESULTADOS DEL ANLISIS CUALITATIVO 77

3.1.1. Determinacin de los tiempos de retencin 77

3.1.2. Obtencin de los espectros de masas 78

3.2. CURVAS DE CALIBRACIN 79

3.3. LIMITES DE DETECCIN Y CUANTIFICACIN 82

3.3.1. Evaluacin de matriz 83

3.4. PORCENTAJES DE RECUPERACIN 86

4. ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE MEDICIN 87

4.1.1. Definicin del mensurando 87

4.1.2. Modelo fsico y modelo matemtico 87

4.1.3. Fuentes de incertidumbre 88

4.1.4. Cuantificacin de las incertidumbres estndar 89

4.1.5. Coeficientes de sensibilidad 92

4.1.6. Incertidumbre combinada y expandida 93

Tabla 1. Caractersticas qumicas de algunos plaguicidas controlados en caf en

Figura 1. Esquema de un cromatgrafo de gases. 47

Figura 2. Tipos de insertos para cromatografa de gases. 48

Figura 3. Cromatograma tomado en un cromatgrafo de gases. 54

Figura 4. Esquema de un espectrmetro de masas . 56

Figura 5. Espectro de masas de la cafena. 58

Figura 6. Diagrama para la estimacin de la incertidumbre de la medicin. 63