UNIVERSIDAD AUTNOMA DE GUERRERO

Facultad de Ciencias Qumico Biolgicas

P.E: BIOTECNOLOGA

Proyecto biotecnolgico integrador (PBI)

Efecto repelente de Tagetes lucida contra mosquitos Aedes aegypti

Presenta:

Bello Martnez Georgina Venecia

E-mail: vbmtz.pink@gmail.com

Asesor:

Dr. Prez Saldaa Jorge Antonio

rea de conocimiento: Biologa y Qumica.

Disciplina cientfica: Qumica.

Campo de aplicacin: Salud.

Tipo de proyecto: investigacin aplicada

Chilpancingo de los Bravo, Gro. 16 de marzo de 2017

ANLISIS BIOTICO

Este trabajo estar regido por la NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999,

Especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y uso de los animales
de laboratorio. El cual regula las actividades encaminadas al cuidado, manejo y
utilizacin de animales con fines de investigacin cientfica, desarrollo tecnolgico
e innovacin, pruebas de laboratorio y enseanza, han provocado que el cuidado,
el trato y la aplicacin de tcnicas experimentales practicadas en estos animales,
sea ejercida en forma inadecuada, representando graves daos en el bienestar de
los mismos.
INTRODUCCIN

Aedes aegypti es una especie originaria de frica y una de las principales especies
de mosquito causante de la transmisin de diversas enfermedades como el
Dengue, Chicungunya y Zika, se encuentra principalmente en reas urbanas y
suburbanas y se distribuye principalmente en las regiones tropicales y subtropicales
del mundo, reportndose como principal transmisor de diferentes arbovirosis (Bhatt
et al., 2013). Cuando el mosquito ingiere la sangre infectada y ste pica
nuevamente infecta a otro hospedero, lo que puede desencadenar una epidemia en
la poblacin. Adems de constituir un problema de salud pblica, Aedes aegypti es
un mosquito cuyos hbitos lo han llevado a un comportamiento domiciliar, lo que le
ha permitido adaptarse al ambiente del hombre (Kraemer et al., 2015).
Es bien sabido, que solo la hembra tiene hbitos hematfagos, los que se agravan
durante el ciclo gonadotrfico, esto se asocia con la necesidad de una dieta rica
en protenas para la ovognesis. Las hembras ovipositan en pequeos depsitos
de agua, denominados criaderos, estos suelen ser desde llantas, floreros, latas,
botellas, recipientes plsticos e incluso algunos tan pequeos como tapas de
refrescos gaseosos. Una vez que los huevecillos han embrionado, emerge una
larva de primer estado, que mide aproximadamente 1 mm y que madura pasando
por tres estados larvales ms, en los cuales el cambio ms conspicuo es en el
tamao, luego del cuarto estado larval sigue el estado de pupa, del cual emerge
el adulto, esto ltimo toma de uno a tres das (OMS | Dengue y dengue grave,
n.d.). Segn las condiciones ambientales los huevecillos se pueden tornar
resistentes a la desecacin, permaneciendo viables en el ambiente hasta por un
ao, lo cual explica el aumento de la poblacin de mosquitos durante pocas
lluviosas, lo que a su vez se asocia con la recrudescencia de la enfermedad (Day,
2016).
Por mencionar solo un ejemplo sobre algunos aspectos importantes del impacto
que tiene A. aegypti en la salud de la poblacin de acuerdo con la Organizacin
Mundial de la Salud (OMS), dos quintas partes de la poblacin mundial vive en
riesgo de ser infectada por dengue y ms de 100 pases han sido afectados por
epidemias de dengue o dengue hemorrgico (Murray et al., 2013; OMS | Dengue
y dengue grave, n.d.). La OMS estima que anualmente ocurren ms de 50 000
000 de casos de dengue y dengue hemorrgico; 500 000 casos hospitalizados y
20 000 defunciones. El 95% de los casos son nios; las tasas de ataque llegan
hasta 64 por 1 000 habitantes. El control de la enfermedad es costoso y las
epidemias ocasionan un importante impacto negativo en el desarrollo
socioeconmico de los pases (Bhatt et al., 2013; OMS | Dengue y dengue grave,
n.d.).
El estado de Guerrero por otra parte tiene una gran incidencia en la transmisin de
enfermedades por el vector (Aedes aegypti); en el 2016 la Secretara de Salud
en Guerrero report 225 casos de Zika, por lo que esta entidad se ubica en el
segundo lugar en casos de infeccin estos datos son una razn importante por la
que se debe buscar y contar con estrategias efectiva para tratar de controlar la
transmisin de estas enfermedades por A. aegypti.
Las estrategias de erradicacin y control del vector ms usadas, son el uso
de:
Medios fsicos: Aplica la estrategia de vivienda y agua segura, la cual consiste
en promover la instalacin de barreras fsicas en las viviendas para impedir el
acceso de mosquitos a las mismas, al tiempo que se mantiene el patio limpio y se
cuida el agua almacenada (OMS | Dengue y dengue grave, n.d.). Los recipientes
domsticos con agua se manejarn de la siguiente manera: voltear aquellos que no
se estn usando, lavar con jabn y cloro los recipientes en uso con agua,
regularmente una vez por semana, tapar o cubrir los recipientes donde se
almacena agua (cubetas, piletas, tinacos, cisternas y pozos), eliminar los
recipientes que los residentes consideren intiles, poner bajo techo los recipientes
para que no acumulen agua de lluvia y mantener limpios canales de desage y el
drenaje de las viviendas para evitar que el agua quede estancada (Day, 2016;
Lima et al., 2015).
Qumicos: ste se lleva a cabo mediante insecticidas dirigido a diferentes etapas
del ciclo de vida del vector, estadios inmaduros o adultos, aplicando larvicidas o
adulticidas qumicos, biolgicos o biorracionales. Los adulticidas aplicados pueden
ser de accin efmera y/o adulticidas de accin (Day, 2016; Lima et al., 2015).

Biolgicos: Consisten en la utilizacin de organismos patgenos, parsitos,

parasitoides o depredadores, enemigos naturales de las especies biolgicas, plaga
o vectores de enfermedades, para mantener a sus poblaciones a niveles inferiores
de lo que estaran en su ausencia. Entre los agentes de control biolgico se
encuentran las bacterias mosquitocidas Bacillus thuringiensis israelensis y
B.sphaericus, los peces larvvoros como Gambusia affinis, Poecilia sp. y Tilapia
spp., entre otros (Lima et al., 2015).

Las actividades especficas por parte de los servicios de salud y los programas de
control se ven obstaculizados, con diferentes grados de complejidad por la
influencia de factores econmicos, polticos, sociales y administrativos, adems de
que las actividades de control del vector no cuentan con sostenibilidad, lo cual se
relaciona con la carencia de institucionalizacin de programas, falta de integracin
intrasectorial e intersectorial, y de participacin comunitaria (OMS | Por qu se
les dice desatendidas a algunas enfermedades tropicales?, n.d.).

Por otra parte, el uso de insecticidas como control qumico ha generado un cambio
en las poblaciones de vectores, ya que puede llevar al riesgo latente de desarrollo
de fenmenos de resistencia, y contaminacin ambiental. En el ao de 1992 la
lista de especies de vectores resistentes a insecticidas inclua 56 especies de
anofelinos, 39 especies de culicinos, 8 especies de pulgas, 9 especies de
garrapatas, adems de fenmenos de resistencia documentados para piojos del
cuerpo, chinches de cama y triatominos (Bellinato et al., 2016; Lima et al., 2011).

Para minimizar los riesgos, es necesario desarrollar otras estrategias de manejo y

tecnologas que permitan obtener nuevas alternativas qumicas o biolgicas (Bhatt
et al., 2013; Lima et al., 2015). Actualmente existe una importante tendencia en el
uso de plantas como fuentes para la obtencin de compuestos con actividad
biolgica que puedan ser usados para para el tratamiento de enfermedades
microbianas, metablicas y patolgicas (Cspedes et al., 2006; Snchez et al.,
2016).

Una alternativa de control para el manejo integrado de plagas, incluyen

controladores biolgicos, manejo ambiental y la utilizacin de insecticidas de origen
biolgico que proporcionan modos de accin novedosos y reducen el riesgo de
resistencia cruzada (Lima et al., 2015; Snchez et al., 2016).
En este sentido se han utilizado diversas plantas que han mostrado poseer eficacia
para el control de insectos trasmisores de enfermedades que afectan al humano
(Snchez et al., 2016), tal es el caso de Tagetes lucida una planta originaria de
Mxico, Guatemala y Honduras, T. lucida es una hierba erecta de 30cm a 1m
de altura, muy ramificada. Las hojas son de un mismo ancho tanto en la parte
axial, como en la distal, con los bordes dentados y de color verde oscuro, de olor y
sabor a ans, tiene las flores dispuestas en cabezuelas agrupadas en racimos,
estn en las partes terminales de la planta y son de color amarillo (Aquino et al.,
2002; Prez-Ortega et al., 2016).

Esta planta se encuentra ampliamente distribuida en regiones clidas, semiclidas,

secas, semisecas y templadas, se ha visto que posee actividad fungicida, efectiva
contra nematodos y el polvo obtenido de toda la planta controla los piojos de
gallina y repele los mosquitos y otros dpteros, adems se ha observado que el
aceite esencial es efectivo en la eliminacin de larvas de Aedes aegypti, sin
embargo no ha sido evaluado si posee efecto repelente o insecticida sobre moscos
de A. aegypti (Cspedes et al., 2006; Marotti et al., 2010; Oranday et al., 2008).

Los antecedentes anteriores aportan evidencias de que el uso de insecticidas

botnicos representa una alternativa de control accesible y de bajo costo para los
campesinos y comunidades, debido a que varias especies vegetales poseen
actividad insecticida reconocida, adems el uso de insecticidas de origen vegetal
tienen la ventaja sobre sus contra partes sintticas de ser biodegradables, son de
disponibilidad inmediata y de bajo costo, ya que los extractos se pueden preparar
mediante tratamientos caseros y ser aplicados de forma inmediata sin requerir de
la utilizacin de aspersores o implementos costosos. Los resultados de
investigaciones recientes han mostrado que los insecticidas botnicos son blanco
especficos, no afectando por lo tanto la fauna (Aquino et al., 2002; Gross et al.,
2016; Snchez et al., 2016).
Los datos anteriores soportan nuestra idea de que T. lucida, es una alternativa
viable para la obtencin de un repelente, que contribuya a fortalecer las estrategias
de prevencin de las enfermedades trasmitidas por A. aegypti, de esta forma se
pretende contribuir a mejorar las condiciones de salud no solo del Estado de
Guerrero s no tambin de las entidades con altos ndices de casos comprobados
de las enfermedades transmitidas por este vector.

El presente trabajo tiene como objetivo valorar la actividad repelente del aceite
esencial de Tagetes lucida contra el mosquito Aedes aegypti.
MATERIALES Y MTODOS:

a) Diagrama de trabajo.

Obtencin del
Ensayos de efecto Anlisis estadstico
material Vegetal e
repelente. de resultados.
hidrodestilacion.

Software SigmaPlot
Construccin de 11.0
Separacin de las
cmaras para ensayos
flores, hojas y tallos. t- de Student no
de actividad repelente.
pareada.

Secado a la sombra
con aeracin fluida y Rasurado al rea
triturado expuesta a la cepa de
ratones a experimentar

Obtencin del aceite Evaluacin del efecto

esencial por repelente de Tagetes
hidrodestilacin. Lucida sobre la cepa
de ratones rociados
con el repelente.

Separacin mediante
centrifugacin.

Elaboracin del
repelente.
b) Descripcin del rea de estudios
Tagetes lucida (pericn), se recolect en la poblacin llamada Ojitos de Agua,
situado en el Municipio de Tixtla de Guerrero, longitud: -99.344444 Latitud:
17.599167 con 1618 metros de altitud. El clima predominante es semiclido
subhmedo, presenta una temperatura media anual de 25.5C.

Figura b. Recoleccin del material vegetal,

c) Descripcin de los mtodos:

1. Secado del material vegetal.
Previo al secado, el material vegetal se proces separando las flores, las hojas
y los tallos, posterior a esto se llev a cabo el secado a la sombra durante una
semana con aeracin fluida, transcurrido este tiempo se procedi al triturado del
material para ser sometido a hidrodestilacin.

Figura 1. Tallos de Tagetes lucida en deshidratacin.

Figura 2
1.1 Flores deshidratadas de Tagetes lucida.

Figura 1.2 Hojas deshidratadas de Tagetes lucida.

2. Hidrodestilacin.
Se utilizaron 25 g de material siendo hojas, tallos o flores, y agua bidestilada (1:5
peso/volumen) y se sometieron a hidrodestilacin exhaustiva a 90C por 3 horas,
El aceite obtenido fue separado cuidadosamente de la fase acuosa y se centrifug
a 14,000 rpm por 10 min para eliminar la presencia de macropartculas de material
vegetal. El aceite obtenido se almacen a 4 C y se evalu su efecto repelente.

Figura 2. Hojas de Tagetes lucida en matraz pyrex

Figura 2.1 Equipo de hidrodestilacin.

3. Elaboracin del repelente.

Para la elaboracin del repelente a base de Tagetes lucida se utilizaron como
vehculo alcohol etlico al 66.6%, aceite mineral al 33.3% y se homogeniz con
el aceite esencial de Tagetes lucida la cual se utiliz al 0.06 % v/v.

Figura 3. Primeras obtenciones de aceite esencial encontrado

en hojas de Tagetes lucida.

Figura 3.1. Repelente elaborado con

aceite esencial obtenido de T. lucida.
4. Construccin de cmaras.
Se construyeron 4 cmaras de 30 x 30 cm cubiertas con tela mosquitera en la
que se colocaron ratones de la cepa BALB/c, dos cmaras sirvieron para el grupo
control y el otro par se dispuso para el grupo tratado con Tagetes lucida.

Figura 4. Cmaras con tela mosquitera terminadas.

Figura 4.1 Cmara en donde se hicieron los ensayos del efecto

de Tagetes lucida.

5. Ensayos del efecto repelente.

Ratones de la cepa BALB/c de 8 semanas de edad los cuales fueron rasurados
previamente, posteriormente fueron rociados con T. lucida y colocados en las
cmaras que contenan 25 mosquitos hembra de Aedes aegypti los cuales sern
fueron proporcionados por la Unidad de Bioensayos de la S.S.A., como grupo
control, se utilizaron ratones no tratados, el efecto repelente fue evaluado
mediante el conteo de picaduras en los ratones tratados contra el grupo control.
Figura 5. Rociado del vehculo al ratn para su posterior ensayo
en cmara.

Figura 5.1. Evaluacin de efectos repelentes con ratn tratado.

6. Anlisis estadstico.
Todos los resultados sern presentados como la media DE, para determinar la
diferencia significativa se utilizar un valor de significancia de P < 0.005, usando
una prueba t de Student no pareada de dos colas.
RESULTADOS.
Se realizaron pruebas por triplicado; ratn sin tratamiento, ratn con vehculo
(aceite mineral al 33.3%/ etanol al 66.6%), ratn con tratamiento (aceite mineral al
33.3%/ etanol al 66.6%/ aceite esencial de Tagetes lucida 0.06% v/v) y
enumerndolos como ratones 1, 2, y 3, respectivamente.
Posteriormente se realiz un conteo de tiempo de 1 hora, dejando cada ratn
dentro de cada una de las cmaras con 25 mosquitos Aedes aegypti en cada una.
Terminando el tiempo establecido se realiz el conteo de piquetes por cada ratn
para su posterior resultado estadstico.

Ratones expuestos a mosquitos Aedes aegypti

Ratn Nmero de piquetes Tiempo (hrs.)
1 14 1
2 7 1
3 1 1
DISCUSIN

CONCLUSIN

REFERENCIAS.

Aquino, R., Cceres, A., Morelli, S., Rastrelli, L., 2002. An extract of Tagetes
lucida and its phenolic constituents as antioxidants. J. Nat. Prod. 65, 1773
1776. doi:10.1021/np020018i
Bellinato, D.F., Viana-Medeiros, P.F., Arajo, S.C., Martins, A.J., Lima,
J.B.P., Valle, D., 2016. Resistance Status to the Insecticides Temephos,
Deltamethrin, and Diflubenzuron in Brazilian Aedes aegypti
Populations. BioMed Res. Int. 2016, 8603263. doi:10.1155/2016/8603263
Bhatt, S., Gething, P.W., Brady, O.J., Messina, J.P., Farlow, A.W., Moyes, C.L.,
Drake, J.M., Brownstein, J.S., Hoen, A.G., Sankoh, O., Myers, M.F.,
George, D.B., Jaenisch, T., Wint, G.R.W., Simmons, C.P., Scott,
T.W., Farrar, J.J., Hay, S.I., 2013. The global distribution and burden of
dengue. Nature 496, 504507. doi:10.1038/nature12060
Cspedes, C.L., Avila, J.G., Martnez, A., Serrato, B., Caldern-Mugica, J.C.,
Salgado-Garciglia, R., 2006. Antifungal and antibacterial activities of
Mexican tarragon (Tagetes lucida). J. Agric. Food Chem. 54, 35213527.
Day, J.F., 2016. Mosquito Oviposition Behavior and Vector Control. Insects 7.
doi:10.3390/insects7040065
Gross, A.D., Norris, E.J., Kimber, M.J., Bartholomay, L.C., Coats, J.R., 2016.

Essential oils enhance the toxicity of permethrin against Aedes aegypti and

Anopheles gambiae. Med. Vet. Entomol. doi:10.1111/mve.12197

Kraemer, M.U.G., Sinka, M.E., Duda, K.A., Mylne, A.Q.N., Shearer, F.M., Barker,
C.M., Moore, C.G., Carvalho, R.G., Coelho, G.E., Van Bortel,
W., Hendrickx, G., Schaffner, F., Elyazar, I.R.F., Teng, H.-J., Brady, O.J.,
Messina, J.P., Pigott, D.M., Scott, T.W., Smith, D.L., Wint, G.R.W.,
Golding, N., Hay, S.I., 2015. The global distribution of the arbovirus vectors
 Aedes aegypti and Ae. albopictus. eLife 4, e08347.
doi:10.7554/eLife.08347
Lima, E., Paiva, M., de Arajo, A., da Silva, ., da Silva, U., de Oliveira,
L., Santana, A.E.G., Barbosa, C., de Paiva Neto, C.C., Goulart, M.O.,
Wilding, C., Ayres, C., de Melo Santos, M.A.V., 2011. Insecticide resistance
in Aedesaegypti populations from Cear, Brazil. Parasit. Vectors 4, 5.
doi:10.1186/1756-3305-4-5
Lima, E.P., Goulart, M.O.F., Rolim Neto, M.L., 2015. Meta-analysis of studies on
chemical, physical and biological agents in the control of Aedes aegypti.
BMC Public Health 15, 858. doi:10.1186/s12889-015-2199-y
Marotti, I., Marotti, M., Piccaglia, R., Nastri, A., Grandi, S., Dinelli, G., 2010.

Thiophene occurrence in different Tagetes species: agricultural biomasses

as sources of biocidal substances. J. Sci. Food Agric. 90, 12101217.
doi:10.1002/jsfa.3950
Murray, N.E.A., Quam, M.B., Wilder-Smith, A., 2013. Epidemiology of
dengue: past, present and future prospects. Clin. Epidemiol. 5, 299309.
doi:10.2147/CLEP.S34440
OMS | Por qu se les dice desatendidas a algunas enfermedades tropicales?
[WWW Document], n.d. WHO. URL
http://www.who.int/features/qa/58/es/ (accessed 12.5.16).
OMS | Dengue y dengue grave [WWW Document], n.d. WHO. URL

http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs117/es/ (accessed 12.5.16).

Oranday, A., Martinez, G., Nuez, A., Rivas, C., Flores, A.E., 2008.
Coumarin
Isolated from Tagetes lucida Cav. Exhibits Larvicidal Activity in Aedes
aegypti (L.). Southwest. Entomol. 33, 315317. doi:10.3958/0147-
1724-
33.4.31
5

Prez-Ortega, G., Gonzlez-Trujano, M.E., ngeles-Lpez, G.E., Brindis, F.,

Vibrans, H., Reyes-Chilpa, R., 2016. Tagetes lucida Cav.:
Ethnobotany, phytochemistry and pharmacology of its tranquilizing
 properties. J. Ethnopharmacol. 181, 221228.
doi:10.1016/j.jep.2016.01.040
Snchez, E., Rivas Morales, C., Castillo, S., Leos-Rivas, C., Garca-Becerra, L.,
Ortiz Martnez, D.M., 2016. Antibacterial and Antibiofilm Activity
of Methanolic Plant Extracts against Nosocomial Microorganisms. Evid.-
Based Complement. Altern. Med. ECAM 2016, 1572697.
doi:10.1155/2016/15726