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UNIVERSIDAD POLITCNICA SALESIANA
SEDE QUITO
CARRERA: INGENIERA EN BIOTECNOLOGA DE LOS RECURSOS

NATURALES
Tesis previa a la obtencin del ttulo de: INGENIERO EN

BIOTECNOLOGA DE LOS RECURSOS NATURALES
TEMA:
EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA in vitro DEL
ACEITE ESENCIAL DE HIERBA LUISA (Cymbopogon citratus (DC)
STAPF), POACEAE EN UNA FORMULACIN COSMTICA CON
FINALIDAD ANTIACNECA.
AUTORAS:
KATHERINE LOURDES MEZA ANGOS
GABRIELA GEOCONDA VARGAS DUQUE
DIRECTORA:
TATIANA DE LOS NGELES MOSQUERA TAYUPANTA
Quito, mayo de 2013

DECLARATORIA DE RESPONSABILIDAD
Los conceptos desarrollados, anlisis realizados y las conclusiones del presente

trabajo, son de exclusiva responsabilidad de las autoras.
Quito, mayo de 2013
_____________________
Katherine Lourdes Meza Angos
C.I: 1721415006
_____________________
Gabriela Geoconda Vargas Duque
C.I: 1721971511
DEDICATORIA
A nuestros padres Roberto, Miguel ngel, Myrian y Ximena
A mi esposo Jorge
A nuestros hermanos Hugo, David, Luis Felipe y Mara Jos
A mi hijo Sebastin
Gracias por su apoyo y amor.

AGRADECIMIENTOS
A todas aquellas personas que participaron e hicieron posible esta investigacin;

muchas gracias por su apoyo incondicional:
A la Ing. Tatiana Mosquera, Directora de esta tesis, por su conocimientos, su

experiencia, su paciencia y su motivacin que permitieron culminar nuestros
estudios con xito.
Al Dr. Paco Noriega por su colaboracin en la identificacin qumica del

aceite esencial de hierba luisa.
Al M.Sc. Patricio Ynez por su valiosa colaboracin en el anlisis estadstico

de los datos obtenidos.
A la Ing. Mara Beln Alds, Coordinadora del CIVABI por facilitarnos el

uso de los laboratorios y los equipos.
A la Dra. Katty Arcentales por colaborar con la evaluacin dermatolgica en

el estudio de eficacia cosmtica instrumental.
A los estudiantes que participaron en el Test de Irritabilidad, as como en la

Evaluacin instrumental, gracias por su disponibilidad de tiempo.
NDICE
INTRODUCCIN ....................................................................................................... 1
ANTECEDENTES ....................................................................................................... 2
1.1 Planteamiento del problema ................................................................................... 2
1.2 Justificacin............................................................................................................ 3
1.3 Hiptesis................................................................................................................. 5
1.3.1 Hiptesis alternativa ........................................................................................ 5
1.3.2 Hiptesis nula .................................................................................................. 5
1.4 Objetivos ................................................................................................................ 5
1.4.1 Objetivo general .............................................................................................. 5
1.4.2 Objetivos especficos ....................................................................................... 5
1.5 Variables ................................................................................................................ 6
1.5.1 Variable dependiente ....................................................................................... 6
1.5.2 Variable independiente .................................................................................... 6
CAPTULO II .............................................................................................................. 7
MARCO TEORICO ..................................................................................................... 7
2.1 Hierba luisa ......................................................................................................... 7
2.1.1 Origen .......................................................................................................... 7
2.1.2 Descripcin botnica.................................................................................... 7
2.1.3 Aspectos taxonmicos ................................................................................. 7
2.1.4 Nombres comunes........................................................................................ 8
2.1.5 Usos ............................................................................................................. 8
2.2 Anlisis del material vegetal .............................................................................. 9
2.3 Aceite esencial de hierba luisa ......................................................................... 10
2.3.1 Composicin .............................................................................................. 10

2.3.2 Actividad farmacolgica ............................................................................ 11
2.3.3 Obtencin de los aceites esenciales ........................................................... 11
2.3.4 Anlisis fsico- qumico del aceite esencial ............................................... 12
2.3.5 Precauciones en la utilizacin de aceites esenciales .................................. 13
2.3.6 Caracterizacin qumica de los aceites esenciales ..................................... 13
2.3.6.1 Cromatografa de gases acoplada a masas .......................................... 14
2.4 Patologa cutnea: acn .................................................................................... 15
2.4.1 Factores que influyen la aparicin del acn ............................................... 15
2.4.2 Evolucin del acn ..................................................................................... 16
2.4.3 Tipos de acn ............................................................................................. 16
2.4.4 Tratamientos del acn ................................................................................ 17
2.4.4.1 Tratamiento tpico .............................................................................. 17
2.4.4.2 Tratamiento oral .................................................................................. 18
2.4.4.3 Tratamiento hormonal ......................................................................... 19
2.4.5 Cosmtica del acn .................................................................................... 19
2.5 Lociones ........................................................................................................... 20
2.6 Anlisis organolpticos y fsico - qumicos de productos cosmticos ............. 21
2.7 Estudios de eficacia in vitro: pruebas de antibiograma .................................... 21
2.7.1 Concentracin mnima inhibitoria (CMI) .................................................. 22
2.7.2 Concentracin mnima bactericida (CMB) ................................................ 23
2.7.3 Material biolgico: Propionibacterium acnes ATCC 11827 .................... 23
2.8 Estudio de eficacia in vivo ................................................................................ 23
2.8.1 Test de irritabilidad .................................................................................... 24
2.8.1.1 Criterios de inclusin .......................................................................... 25
2.8.1.2 Criterio de exclusin ........................................................................... 26
2.8.2 Tratamientos no invasivos ......................................................................... 26

2.8.3 Estudio de eficacia cosmtica .................................................................... 27
2.8.3.1 Criterios de inclusin .......................................................................... 27
2.8.3.2 Criterio de exclusin ........................................................................... 28
2.8.4 Visiopor PP 34 N ................................................................................... 28
CAPTULO III ........................................................................................................... 30
MARCO METODOLGICO .................................................................................... 30
3.1 Lugar de investigacin ..................................................................................... 30
3.2 Lugar de recoleccin del material vegetal ........................................................ 30
3.3 Anlisis de material vegetal ............................................................................. 30
3.4 Obtencin del aceite esencial ........................................................................... 37
3.5 Anlisis fsico - qumico del aceite esencial .................................................... 38
3.6 Viabilizacin del material biolgico ................................................................ 44
3.7 Determinacin in vitro de la concentracin mnima inhibitoria (CMI) del aceite

esencial mediante el mtodo de difusin en medio slido. .................................... 45
3.7.1 Preparacin del inculo bacteriano ............................................................ 46
3.7.2 Siembra en cajas de agar e incubacin ...................................................... 46
3.8 Anlisis estadstico de la concentracin mnima inhibitoria del aceite esencial

................................................................................................................................ 47
3.9 Formulacin de la locin con aceite esencial de hierba luisa ........................... 47
3.10 Elaboracin de la locin con aceite esencial de hierba luisa .......................... 49
3.11 Anlisis organolptico y fsico qumico de la locin .................................. 50
3.12 Evaluacin de la actividad antibacteriana de la locin por el mtodo de

difusin en medio slido ........................................................................................ 52
3.13 Anlisis estadstico de la actividad antibacteriana de la locin ...................... 53
3.14 Evaluacin de la inocuidad drmica de la locin (test de irritabilidad) ......... 54
3.15 Evaluacin de la eficacia cosmtica instrumental. ......................................... 61
CAPTULO IV ........................................................................................................... 64
RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS ................................................. 64

4.1 Anlisis del material vegetal ............................................................................ 64
4.2 Obtencin del aceite esencial de hierba luisa ................................................... 65
4.3 Anlisis organolptico y fsico - qumico del aceite esencial .......................... 66
4.3 Anlisis en cromatografa de gases y espectrometra de masas GC-MS.......... 67
4.4 Determinacin in vitro de la concentracin mnima inhibitoria (CMI) del aceite

esencial mediante el mtodo de difusin en medio slido ..................................... 70
4.5. Anlisis de varianza de una va contrastando los halos de inhibicin generados

por las ocho concentraciones de aceite esencial ..................................................... 72
4.6 Anlisis organolptico y fsico - qumico de la locin de hierba luisa ............. 76
4.7 Actividad antibacteriana de la locin ............................................................... 77
4.8 Anlisis de varianza de una va contrastando los halos de inhibicin generados

por la locin sin aceite, locin formulada y el aceite esencial al 5%. .................... 78
4.9 Test de irritabilidad de las lociones formuladas ............................................... 81
4.10 Estudio de eficacia cosmtica instrumental .................................................... 83
4.10.1 Evaluacin instrumental .......................................................................... 83
4.10.2 Evaluacin dermatolgica al inicio y al final del estudio de eficacia

cosmtica instrumental ....................................................................................... 86
4.11 Anlisis multivariado - Community Analysis Program (CAP) contrastando la

disminucin de porfirinas con varios factores como hbitos alimenticios, edad y
gnero de los voluntarios del estudio de eficacia instrumental .............................. 88
CONCLUSIONES ..................................................................................................... 91
RECOMENDACIONES ............................................................................................ 94
LISTA DE REFERENCIAS ...................................................................................... 95
ANEXOS ................................................................................................................. 105

NDICE DE TABLAS
Tabla 1. Composicin qumica del aceite esencial de hierba luisa........10
Tabla 2. Materiales, equipos y reactivos para la determinacin de materias

extraas.......31
Tabla3. Materiales, equipos y reactivos para la determinacin de cenizas totales....32
Tabla 4. Materiales, equipos y reactivos para la determinacin de cenizas solubles en

agua ....33
Tabla 5. Materiales, equipos y reactivos para la determinacin de cenizas insolubles

en cido ..34
Tabla 6. Materiales, equipos y reactivos para la determinacin de contenido de

humedad .36
Tabla 7. Materiales, equipos y reactivos para la obtencin del aceite esencial ....37
Tabla 8. Materiales, reactivos y equipos para determinar el ndice de refraccin.....39
Tabla 9. Materiales, reactivos y equipos para determinar la densidad relativa.39
Tabla 10. Materiales, reactivos y equipos para determinar la solubilidad en agua40
Tabla 11. Materiales, reactivos y equipos para determinar la solubilidad en

alcohol.41
Tabla 12. Materiales, reactivos y equipos para la caracterizacin qumica del aceite
esencial ...42
Tabla 13. Condiciones del espectrmetro de masas .....42
Tabla 14. Condiciones del cromatgrafo de gases.....43
Tabla 15. Materiales, reactivos y equipos para la viabilizacin de P. acnes ............44
Tabla 16. Materiales reactivos y equipos para determinar la CMI del aceite
esencial........45
Tabla 17. Frmula unitaria de la locin antiacneca..48
Tabla 18. Materiales, reactivos y equipos para elaboracin de la locin...49
Tabla 19. Materiales, reactivos y equipos para determinar el ndice de refraccin de

la locin...50
Tabla 20. Materiales, reactivos y equipos para determinar el ndice de refraccin de

la locin...51
Tabla 21. Materiales, reactivos y equipos para evaluacin antibacteriana de la

Locin.52
Tabla 22. Materiales, reactivos y equipos para el test de irritabilidad...55
Tabla 23. Escala de evaluacin de eritema para test de irritabilidad.........57
Tabla 24. Escala de evaluacin de edema para test de irritabilidad.......57
Tabla 25. Escala de evaluacin de ampollas para test de irritabilidad.......58
Tabla 26. Escala de evaluacin de descamacin para test de irritabilidad .......58
Tabla 27. Escala de evaluacin de detergencia para test de irritabilidad.......59
Tabla 28. Escala de evaluacin de reflectividad para test de irritabilidad.....60
Tabla 29. Clasificacin del ndice de irritacin primaria cutnea .....61
Tabla 30. Materiales, reactivos y equipos para la evaluacin de la eficacia cosmtica

instrumental........................................62
Tabla 31. Escala de mejoramiento esttico global.....63
Tabla 32. Resultados del anlisis del material vegetal...64
Tabla 33. Rendimiento del aceite esencial.65
Tabla 34. Resultados del anlisis sensorial del aceite esencial......66
Tabla 35. Resultados del anlisis fsico qumico del aceite esencial..66
Tabla 36. Resultados proporcionados por el equipo de GC MS.....67

Tabla 37. Halos de inhibicin del aceite esencial frente a P. acnes..70
Tabla 38. Categora de sensibilidad de P. acnes....71
Tabla 39. Anlisis de varianza de una va de las concentraciones de aceite esencial

utilizadas en la determinacin de la (CMI).....73
Tabla 40. Test de tukey de las concentraciones de aceite esencial utilizadas en la

determinacin de la (CMI)..75
Tabla 41. Resultados del anlisis organolptico de la locin....76
Tabla 42. Resultados del anlisis fsico qumico de la locin....76
Tabla 43. Anlisis de varianza de una va de la del BP (aceite esencial al 5%), BN

(locin sin aceite) y locin formulada....77
Tabla 44. Test de tukey de las concentraciones de aceite esencial utilizadas en la

Tabla 45. Registro de resultados de los voluntarios sometidos al test de

irritabilidad..80
Tabla 46. Valores de los ndices de irritacin primaria cutnea de las tres lociones.82
Tabla 47. Disminucin del porcentaje de porfirinas generadas por P. acnes despus
de la aplicacin de la locin83
Tabla 48. Grado de acn de los voluntarios participantes en el estudio de eficacia

instrumental.....84
Tabla 49. Porcentaje de adolescentes de gnero masculino y femenino ..........86
Tabla 50. Hbitos alimenticios y txicos de los voluntarios que participaron en el

estudio de eficacia cosmtica instrumental.88
NDICE DE GRFICOS
Grfico 1. Cromatograma del aceite esencial de hierba luisa....68
Grfico 2. Anlisis de varianza de una va de las concentraciones de aceite esencial

utilizadas en la determinacin de la (CMI).72
Grfico 3. Test de tukey de las concentraciones de aceite esencial utilizadas en la

Grfico 4. Anlisis de varianza de una va de la del BP (aceite esencial al 5%), BN

(locin sin aceite) y locin formulada....78
Grfico 5. Test de tukey del BP (aceite esencial al 5%), BN (locin sin aceite) y
locin formulada....80
Grfico 6. Disminucin del porcentaje de porfirinas en los voluntarios...85
Grfico 7. Porcentaje de adolescentes con acn grado I y II.........87
Grfico 8. Porcentaje de adolescentes de gnero masculino y femenino......87
Grfico 9. PCA Plot de disminucin de porfirinas, gnero, edad y hbitos

alimenticios de los voluntarios del estudio de eficacia instrumental..89
NDICE DE FIGURAS
Figura 1. Hojas de hierba luisa .......105
Figura 2. Aceite esencial de hierba luisa ...105
Figura 3. Activacin de P. acnes ............................................................................105
Figura 4. Crecimiento de la bacteria ...105
Figura 5. Concentraciones de aceite esencial .....106
Figura 6. Pellet en 5ml de TSB ...106
Figura 7. Jarra anaerbica ...106
Figura 8. Cajas petri con discos impregnados de aceite esencial ...107
Figura 9. Actividad antibacteriana del aceite esencial ....107
Figura 10. Realizacin de encuestas para el test de irritabilidad ....108
Figura 11. Firma de la carta de consentimiento para formar parte del test de
irritabilidad ...108
Figura 12. Aplicacin de parches para test de irritabilidad ....109
Figura 13. Evaluacin de resultados del test de irritabilidad ......109
Figura 14. Frasco 25 ml de locin ..110
Figura 15. Actividad antibacteriana de la locin ....110
Figura 16. Locin formulada, jabn, algodn e instrucciones para eficacia in vivo
..110
Figura 17. Visualizacin de porfirinas mediante el equipo Visiopor PP34N ..111
Figura 18. Porfirinas antes de la aplicacin de la locin ....111
Figura 19. Porfirinas despus de la primera aplicacin de la locin ......112

Figura 20. Porfirinas al final del estudio.112
Figura 21. Lesiones de acn al inicio del estudio113
Figura 22. Lesiones de acn al final del estudio..113

NDICE DE ANEXOS
Anexo 1. Fotografas de la investigacin ....105
Anexo 2. Encuesta de seleccin de participantes para el test de irritabilidad..114
Anexo 2. Ficha de informacin bsica de los voluntarios a participar en el test de

irritabilidad116
Anexo 3. Carta de consentimiento de los voluntarios para el test de irritabilidad ..117
Anexo 4. Historia clnica de los voluntarios para el test de eficacia cosmtica...121
Anexo 5. Carta de consentimiento de los voluntarios para el test de eficacia

cosmtica...123
Anexo 6. Instrucciones de uso de la locin .........126
Anexo 7. Certificado de evaluacin dermatolgica......127
Anexo 8. Certificado de anlisis de la bacteria Propionibacterium acnes.......128

CARTA DE AUTORIZACIN
Nosotras, Katherine Lourdes Meza Angos con CI: 172141500-6 y Gabriela

Geoconda Vargas Duque con CI: 172197151-1; autorizamos la publicacin de la
presente tesis por parte de la Universidad Politcnica Salesiana.
Quito, mayo de 2013.
_____________________
C.I: 172141500-6
_____________________
C.I: 172197151-1
RESUMEN
La presente investigacin tuvo como objetivos evaluar la actividad antibacteriana in

vitro del aceite esencial de hierba luisa (Cymbopogon citratus) contra
Propionibacterium acnes, bacteria causante del acn, elaborar una locin y evaluar la
eficacia in vitro e in vivo de la locin formulada a partir de este aceite.
El aceite esencial se obtuvo de las hojas de la especie seleccionada, utilizando un

sistema de hidrodestilacin con arrastre de vapor de agua; con el aceite obtenido se
realizaron los ensayos de miscibilidad y determinacin de constantes fsicas, como:
densidad relativa e ndice de refraccin. La composicin qumica se determin por
Cromatografa de Gases acoplado a Espectrometra de Masa (CG/EM), destacndose
en el cromatograma seales espectrales de identificacin en la elucidacin de: -
citral (Geranial), - citral (Neral) y - pineno. La determinacin de la actividad
antibacteriana in vitro del aceite y de la locin se realiz por el mtodo de difusin
en medio slido, demostrando una actividad antibacteriana significativa en
concentraciones desde 0.05% a 5%. Estos resultados permitieron la formulacin de
una locin tpica, la cual fue sometida a una prueba de irritabilidad (Patch Test
Simple nico) y posteriormente a un estudio de eficacia in vivo para determinar la
disminucin de porfirinas, para lo cual se utiliz un mtodo de exploracin no
invasivo, con la ayuda de un instrumento de bioingeniera, Visiopor PP 34N. Los
resultados de los estudios de irritabilidad y eficacia indican que la locin puede
utilizarse de una manera confiable en esta patologa cutnea. El estudio ha permitido
concluir que la locin tiene un efecto antibacteriano contra P. acnes.
Palabras clave: Cymbopogon citratus, aceite esencial, actividad antibacteriana,

Propionibacterium acnes, locin.
ABSTRACT
The present research had as objectives to evaluate the in vitro antibacterial activity of
the essential oil of Lemongrass (Cymbopogon citratus) against Propionibacterium
acnes, bacteria that causes acne, to make a lotion and to evaluate the effectiveness in
vitro and in vivo of the lotion formulated from this oil.
The essential oil obtained from the leaves of the selected species, using a
hydrodistillation system with steam entrainment; with the oil obtained miscibility
tests were performed and determination of physical constants such as: relative
density and refractive index. The chemical composition was determined by Gas
chromatographymass spectrometry (GC / MS), standing out in the chromatogram
spectral signals in the elucidation of: -citral (Geranial) - Citral (Neral) and -
pinene. The determination of the in vitro antibacterial activity of the oil and the
lotion was performed by the method of diffusion in agar, demonstrating a significant
antibacterial activity at concentrations from 0.05% to 5%. These results allowed the
formulation of a topical lotion, which was subjected to a test of irritability (Patch test
simple unique) and then an in vivo efficacy study to determine the decrease of
porphyrins, for which we used a noninvasive screening method, with the help of an
instrument of bioengineering, Visiopor PP34N. The results of irritability and
efficacy studies indicate that the lotion can be used in a reliable manner in this skin
disease. The study has allowed concluding that the lotion has an antibacterial effect
against P. acnes.
Palabras clave: Cymbopogon citratus, essential oil, antibacterial activity,

Propionibacterium acnes, lotion.
INTRODUCCIN
En la actualidad, el acn representa una de las patologas dermatolgicas ms

frecuentes, afecta al 80% de los adolescentes en edades relacionadas con el inicio de
la pubertad; entre los 14 y 17 aos en mujeres, y entre los 16 y 19 aos en hombres.
Diversos autores han descrito un mayor impacto en las mujeres que en los varones,
sin embargo, en ellos el acn se presenta significativamente ms grave desde el
punto de vista clnico.
Adems, esta patologa puede tener complicaciones que van ms all de las estticas,
puesto que, se relaciona tambin con daos psicolgicos sobre todo en los
adolescentes, debido a que en esta etapa se est formando su autoestima y cualquier
problema puede alterarla. El tratamiento del acn debe ajustarse a las condiciones
individuales de cada paciente, lo que incluye el tipo clnico, la severidad y la edad.
En la adolescencia puede ser extremadamente difcil conseguir que el paciente
finalice el tratamiento, ya que, se requiere de un tiempo prolongado para obtener
resultados teraputicos evidentes.
Algunos estudios cientficos sobre el acn tratado con antibiticos, concluyen que
estos no son muy eficaces, puesto que, se han reportado algunos casos de resistencia
bacteriana. La alternativa de una antibioticoterapia de origen natural, resulta
prometedora en este tipo de tratamientos, por lo que, despus de comprobar la
elevada actividad antibacteriana del aceite esencial de hierba luisa, se sugiere su
posible utilizacin en esta patologa dermatolgica.
El presente trabajo propone, el uso del aceite esencial de esta planta como una
opcin de agente antibacteriano natural que permita inhibir el crecimiento de P.
acnes, principal bacteria causante del acn. El estudio se desarrolla in vitro mediante
el mtodo de difusin en medio slido e in vivo utilizando un mtodo de exploracin
no invasivo, con la ayuda de un instrumento de bioingeniera que es el equipo
Visiopor PP 34N.
1
CAPTULO I
ANTECEDENTES
1.1 Planteamiento del problema
La resistencia de P.acnes a los antibiticos constituye un problema muy importante

en el tratamiento del acn. Por ello, se han realizado diversos estudios para esclarecer
esta situacin. Uno es la correlacin entre la disminucin de la poblacin de P. acnes
y la mejora clnica y otro la falta de respuesta clnica a los antibiticos tpicos y
orales, tiles en el tratamiento del acn, en especial la eritromicina. (Kaminsky y
Lago, 2004).
A comienzos de 1980, muy pocas cepas de P. acnes eran resistentes a los antibiticos
utilizados contra el acn. En los ltimos aos se encontr un aumento considerable
que lleg a un 60% en los pacientes tratados con eritromicina y clindamicina y a un
22% en los que usaron tetraciclinas. Para reducir esta resistencia debe limitarse el
uso de antibiticos a perodos cortos; emplear terapias combinadas, en especial con
perxido de benzolo y antibiticos tpicos (Kaminsky y Lago, 2004).
Expertos del Centro de Investigacin sobre Fitoterapia (INFITO) y la Sociedad

Espaola de Quimioterapia (SEQ) afirman que las plantas medicinales pueden
convertirse en una alternativa vlida a los antibiticos sintticos en infecciones
producidas por bacterias o virus resistentes a los tratamientos tradicionales (Medicina
Tradicional China, 2005).
Entre las ventajas de utilizar antibiticos naturales, se ha resaltado la probabilidad de

no generar resistencia por parte de las bacterias, adems de favorecer el proceso de
regeneracin epitelial, estimular los mecanismos naturales de eliminacin, favorecer
el funcionamiento de los rganos en general, inhibir el crecimiento de patgenos y
aumentar las defensas del organismo (Cabrera y otros, 2005).
2
Por esta razn, la presente investigacin tiene como objetivo demostrar el poder
antibacteriano del aceite esencial de hierba luisa, incorporado en una formulacin
cosmtica bsica (locin tpica) que permita demostrar la eficiencia del aceite tanto
in vitro como in vivo en la patologa cutnea, considerndola como una alternativa en
el tratamiento de esta dermatosis y un excelente representante de la cosmtica
natural.
1.2 Justificacin
En Ecuador y en otros pases se usa ampliamente en las comunidades rurales un sin

nmero de plantas medicinales, sin que todas estas tengan un estudio cientfico de
sus propiedades. Tal es el caso de la hierba luisa, que es usada por la poblacin rural
con la creencia de que posee grandes propiedades medicinales para aliviar diferentes
afecciones, siendo utilizada como calmante, antiinflamatorio, contra el dolor de
estmago y afecciones cutneas en general (Cabrera, 2008).
En varios estudios realizados sobre el aceite esencial de hierba luisa se ha

demostrado que tiene gran capacidad antimicrobiana y antimictica, ejerciendo su
poder sobre ciertos patgenos como son: Vibrio cholerae y Salmonella paratyphi,
diferentes dermatofitos: Epidermophyton floceosum, Microsporum canis,
Trichophyton mentagrophytes y T. rubrum, inhibe el desarrollo de bacterias como:
Escherichia coli, Bacillus subtilus y Staphylococcus aureus. Tambin se comprob
que acta sobre el Aspergillus flavus, siendo ms potente que los fungicidas
sintticos (Soto, 2002).
Debido a que el aceite esencial de hierba luisa es usado contra afecciones cutneas se
pretende que este sea una alternativa natural para el tratamiento del acn. El acn es
una enfermedad crnica de la glndula pilosebcea asociada con un aumento en la
secrecin de grasa. Es causada por una infeccin bacteriana. Las principales bacterias
causantes de esta patologa son: Staphylococcus aureus, S. epidermidis y
Propionobacterium acnes. Existen diversos estudios donde se evidencia el poder
antibacteriano del aceite esencial de hierba luisa contra las dos primeras bacterias, sin
3
embargo, an no existen investigaciones sobre la eficacia de este aceite contra P.
acnes. (Purrinos, 2005).
En varias investigaciones realizadas, el aceite esencial de hierba luisa sobre el

Staphylococcus aureus ATCC 25923 tiene una CMI de 0,3 mg/ml y una CMB de
1,25 mg/ml, mientras que, la CMI y la CMB del aceite esencial sobre el
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 tienen un valor similar de 0,63 mg/ml,
demostrando as el poder antibacteriano del aceite esencial de hierba luisa. Adems,
se evalu la actividad antimicrobiana de una crema a base de aceite esencial de
hierba luisa resultando tener una accin bacteriosttica y una CMI de 2,50 mg/ml
sobre S. aureus. Mientras que, la CMI sobre el S. epidermidis es de 1,25 mg/ml y la
CMB es de 2,50 mg/ml (Guerra, 2004).
Existe escasa informacin sobre la accin del aceite esencial de hierba luisa sobre
Propionobacterium acnes ATCC 1951, sin embargo, existe una investigacin
realizada en Tailandia en la que el aceite esencial muestra tener un valor de 0.6 l/ml
tanto para la CMI como para la CMB (Aromdee, 2006).
En otra investigacin realizada en la Escuela Superior Politcnica del Ejrcito

ubicada en la ciudad de Quito, usando el mtodo de la AOAC (Assosation of official
analytical chemists) para determinar la actividad antimicrobiana de S. aureus, se
determin que el aceite esencial de hierba luisa inhibe su crecimiento a los 10
minutos. Adems se concluy que el aceite tiene ms accin antimictica que
antibacteriana, ya que, con Candida albicans y Aspergillus niger este inhibe su
crecimiento al minuto (Del Pozo, 2006).
Con el presente trabajo se busca proponer y difundir el uso de esta planta como una
opcin de agente antibacteriano natural en una formulacin cosmtica para el
tratamiento de patologas acnecas. En funcin de lo ya estudiado con S. aureus y S.
epidermis es importante evaluar la capacidad antibacteriana del aceite esencial sobre
Propionobacterium acnes, bacteria que an no ha sido evaluada en anteriores
investigaciones.
4
1.3 Hiptesis
1.3.1 Hiptesis alternativa
La locin elaborada con aceite esencial de hierba luisa tiene un efecto antibacteriano
contra el Propionibacterium acnes, principal bacteria causante del acn.
1.3.2 Hiptesis nula
La locin elaborada con aceite esencial de hierba luisa no tiene un efecto

antibacteriano contra el Propionibacterium acnes, principal bacteria causante del
acn.
1.4 Objetivos
1.4.1 Objetivo general
Evaluar la actividad antibacteriana in vitro e in vivo del aceite esencial de hierba

luisa en una formulacin cosmtica, con finalidad antiacneca utilizando como
material biolgico Propionobacterium acnes.
1.4.2 Objetivos especficos
Obtener aceite esencial de hierba luisa mediante el proceso de destilacin por

arrastre de vapor.
Caracterizar qumicamente el aceite esencial de hierba luisa obtenido mediante

cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas.
5
Determinar la concentracin mnima inhibitoria (CMI) del aceite esencial de
hierba luisa con uno de los microorganismos responsables de patologas acnecas
como Propionobacterium acnes ATCC 11827.
Formular una locin antiacneca que permita evaluar la eficacia antibacteriana del
aceite esencial de hierba luisa mediante estudios in vivo e in vitro.
Realizar un test de irritabilidad para determinar la capacidad de irritacin cutnea

de la locin.
Realizar un estudio de eficacia cosmtica con la locin elaborada a partir del

aceite esencial de hierba luisa.
1.5 Variables
1.5.1 Variable dependiente
Concentracin del aceite esencial de hierba luisa.
Microorganismo de estudio (Propionibacterium acnes).
1.5.2 Variable independiente
Forma cosmtica (locin).
6
CAPTULO II
MARCO TEORICO
2.1 Hierba luisa
2.1.1 Origen
Originario de la zona tropical del sureste de Asia, India y Sri Lanka. Se cultiva en
regiones tropicales, subtropicales como planta medicinal y como especia, tambin
para controlar erosiones (Jimnez y Fonnegra, 2007).
2.1.2 Descripcin botnica
Es una hierba terrestre perenne de 0,5 a 2 m de altura, aromtica con ligero olor a
limn. Hojas arrosetadas en la base de la planta, lineales, hasta de un metro de
longitud, estrechas, rojizas al secarse. Flores reunidas en panculas de espiguillas y
raramente florece (Jimnez y Fonnegra, 2007).
2.1.3 Aspectos taxonmicos
Reino: Cormobionta
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Liliatae (Liliopsida)
Sub-clase: Commelinidae
Orden: Cyperales
Familia: POACEAE (Gramneas).
Gnero: Cymbopogon Spreng.
Especie: citratus Stapf (Soto y otros, 2002).
7
2.1.4 Nombres comunes
Liwisa, shoshovi, shoshoviomemba, chirichri, hierba buena, hierba luisa, limoncilla,

limoncillo, sanguinaria, lemongrass (De la Torre y otros, 2008).
2.1.5 Usos
Alimenticio: Las hojas se usan para preparar aguas aromticas, refrescos y dulces,
se suele tomar despus de las comidas (De la Torre y otros, 2008).
Aditivo de los alimentos: Las hojas se usan como especera en la chicha de maz y
la colada morada (De la Torre y otros, 2008).
Materiales: En algunas etnias de la regin costa, interandina y el trpico las hojas

se usan como dentfrico, ya que frotadas directamente sobre los dientes ayudan a
mantenerlos blancos. Las hojas son usadas como ornamento corporal por la etnia
Secoya en Sucumbos. Se usa comercialmente en la regin interandina y el trpico
para perfumar y ahuyentar los mosquitos y el jejn. Se emplea tambin para
extraer aceite y fabricar jabn y medicinas en la regin costa (De la Torre y otros,
2008).
Social: La infusin de las hojas se toma por placer o para alejar el miedo en las
etnias mestiza (Pichincha) y Kichwa (Orellana), adems se aplican en baos
energticos. La infusin de hojas se usa como estimulante del sistema nervioso.
Adems los Cofnes en Sucumbos se amarran los hojas en el hombro o en la
mueca cuando se va a beber yaje (bebida preparada a base de ayahuasca) (De la
Torre y otros, 2008).
Medicinal: La infusin de las hojas mezclada con limn y raspadura se toma para
sacar el fro y tratar el escalofro, tambin ayuda a la digestin y es efectiva para
tratar el dolor de cabeza, pecho, estmago, diarreas fuertes, gastritis, lceras,
8
presin baja, afecciones de los nervios, corazn, cncer, reumatismo, se usan
tambin como diurtico, diafortico y para regular el ciclo menstrual (De la Torre
y otros, 2008).
2.2 Anlisis del material vegetal
Mediante el empleo de los mtodos fsico-qumico de anlisis puede determinarse y

establecerse la calidad de una droga, as como completar su identificacin.
Los anlisis que se describen a continuacin corresponden a los Mtodos de Control

de Calidad de las Plantas Medicinales establecidos por la Organizacin Mundial de
la Salud (OMS).
Determinacin de materias extraas: Se entiende por materias extraas aquellas

partes de la droga que no corresponden a las exigencias que seala la monografa
en cuanto a color, tamao, estado y grado de pulverizacin, mezclas de otras
partes de la planta o de otras plantas, polvo, arena, piedra y otras sustancias
minerales. Este ensayo se realiza mediante un mtodo macroscpico, el cual se
basa en el examen visual de la droga cruda con la ayuda de una lupa o un
microscopio estereoscpico (Miranda, 2002).
Determinacin de cenizas totales, solubles en agua e insolubles en cido: Se

denominan cenizas totales al residuo inorgnico que se obtiene al incinerar una
droga. Las cenizas solubles en agua es aquella parte de las cenizas totales que se
disuelven en agua y las insolubles en cido, el residuo que se obtiene despus de
la disolucin de las cenizas totales en cido clorhdrico al 10% y son
determinadas mediante el mtodo gravimtrico (Miranda, 2002).
Determinacin del contenido de humedad: La presencia de exceso de agua en las

drogas vegetales, puede promover el crecimiento de hongos, insectos y la
hidrlisis de constituyentes que pueden provocar el deterioro de la droga. Es
por ello, que el contenido de agua debe ser determinado en drogas vegetales,
9
especialmente en aquellas que absorben fcilmente la humedad. Los lmites de
agua usualmente establecidos en las farmacopeas oscilan entre 8 y 14% con
pocas excepciones. Los dos mtodos ms usados para determinar el
contenido de agua en las drogas vegetales son el gravimtrico (prdida por
desecacin) y el azeotrpico (destilacin con tolueno). El mtodo azeotrpico
requiere de un equipo especial, lo cual comparativamente dificulta su uso, pero
es aplicable a drogas que contengan sustancias voltiles (Miranda, 2002).
2.3 Aceite esencial de hierba luisa
El aceite esencial destilado que se obtiene de esta planta tiene una fragancia
distintiva a limn pero menos intensa que el toronjil (Damian P. y Damian K., 1996).
Est presente en las hojas en una proporcin de 0.25 a 0.35% (Romero, 2004).
2.3.1 Composicin
Tabla 1. Composicin qumica del aceite esencial de hierba luisa.

COMPONENTE PORCENTAJE
Z- Citral (Neral) 31.15%
E- Citral (Geranial) 43.37%
Limoneno 15.59%
Geraniol 4.74%
Linalool 1.10%
Acetato de geranilo 0.64%
Fuente: (Castro y Bedoya, 2011) y (Linares y otros, 2005).
10
2.3.2 Actividad farmacolgica
El aceite esencial de hierba luisa es rico en compuestos aromticos con propiedades

bactericidas (Botanical, 2012). La principal accin del aceite esencial es sobre el
aparato digestivo, por lo que puede aplicarse en casos de colitis, gastroenteritis y
otras afecciones como la gastritis causada por la bacteria Helicobacter pylori (EOP,
s.f.), como se demuestra en un estudio realizado en Kyoto donde se inhibi
totalmente el crecimiento de la bacteria mediante administracin oral del aceite
(Ohno y otros, 2003).
Es tambin til en afecciones de la piel como acn, pie de atleta, para desbloquear los
poros y sarna (EOP, s.f.), ya que en ensayos in vitro el aceite esencial inhibe el 80 %
de las cepas de dermatofitos como es el caso de M. canis (Kishore y otros, 1993),
mientras que, otros ensayos demuestran actividad en algunas especies del gnero
Aspergillus (Mishra y Dubey, 1994).
2.3.3 Obtencin de los aceites esenciales
Los aceites esenciales se pueden obtener de las muestras vegetales mediante

mtodos oficiales como destilacin por arrastre de vapor, mtodos mecnicos
(expresin) y mtodos no oficiales como extraccin con disolventes orgnicos,
extraccin con grasas (enflorado, digestin, mtodo neumtico) y extraccin con
gases licuados (Kuklinski, 2000).
Uno de los mtodos oficiales es la destilacin por arrastre con vapor de agua, debido
a su alto rendimiento, la pureza del aceite obtenido y porque no requiere tecnologa
sofisticada, razn por la cual es empleada en la mayora de investigaciones e
industrias (Martnez, 2003). La tcnica consiste en sumergir la muestra vegetal fresca
previamente lavada y cortada en trozos pequeos de aproximadamente 2 cm,
colocarla en una cmara inerte y someterla a una corriente de vapor de agua
sobrecalentado, la esencia as arrastrada es posteriormente condensada, recolectada y
separada de la fraccin acuosa mediante sulfato de sodio anhidro. El aceite obtenido
11
se conserva en un frasco de vidrio color mbar en refrigeracin a 4C (Segovia y
otros, 2010).
2.3.4 Anlisis fsico- qumico del aceite esencial
La calidad de los aceites esenciales est determinada por su composicin qumica,

caractersticas fisicoqumicas y organolpticas. Por esta razn, las farmacopeas
oficiales, en sus normas sealan que los parmetros analticos utilizados en el control
de calidad de los aceites deben ser los siguientes:
Caractersticas organolpticas: Son aquellas que podemos percibir a travs de los

sentidos: vista, gusto, olfato, tacto, mediante los cuales se pueden determinar las
siguientes propiedades: color, olor, sabor, apariencia, textura, etc. (Escartn,
2006).
Determinacin del ndice de refraccin: El ndice de refraccin es una

constante caracterstica de cada sustancia, la cual representa la relacin entre el
seno del ngulo de incidencia de la luz y el seno del ngulo de refraccin
cuando la luz pasa oblicuamente a travs del medio. El procedimiento ms
empleado para esta determinacin se seala en la United Stated Pharmacopoeia
33, mtodo 831 (USP, 2013). Los refractmetros utilizan como principio de
medicin, la determinacin del ngulo lmite el cual presenta en el campo
visual un contraste claro y otro oscuro. La lnea de separacin entre ambos
campos establece el ngulo lmite de la luz incidente (Miranda, 2002).
Densidad Relativa: Es la relacin entre la masa de un volumen de la

sustancia a ensayar a 25 C y la masa de un volumen igual de agua a
la misma temperatura. Se procede segn el mtodo 841 establecido en la United
Stated Pharmacopoeia 33, donde se determina la densidad de una sustancia con
la ayuda de un picnmetro (USP 33, 2010).
12
Solubilidad en agua y alcohol: La solubilidad de una sustancia orgnica en
diversos disolventes es un fundamento del mtodo de anlisis cualitativo
orgnico desarrollado por Kamm, este mtodo se basa en que una sustancia es
ms soluble en un disolvente cuando sus estructuras estn ntimamente
relacionadas, por lo que para conocer la solubilidad del aceite esencial de hierba
luisa el empleo de un mtodo simple de dilucin es suficiente, ya que, varios
autores indican que los aceites esenciales son ligeramente solubles en agua y
miscibles en etanol absoluto (Albaladejo, 1999).
2.3.5 Precauciones en la utilizacin de aceites esenciales
Antes de utilizar aceites esenciales debemos tener presente que estamos manipulando
sustancias qumicas con propiedades y caractersticas concretas. Por el hecho de
tratarse de aceites esenciales puros no debemos pensar que son productos inocuos
que se pueden utilizar sin ninguna precaucin. Toda sustancia independientemente de
su carcter natural o artificial, puede ser txica dependiendo de las caractersticas
qumicas y de la dosis. Algunos aceites esenciales comunes como los de ans y salvia
contienen anetol y tuyona respectivamente, estos componentes pueden tener cierto
efecto sobre el sistema nervioso o dar lugar a problemas de toxicidad siempre que las
dosis sean altas. Otros componentes tienen efectos narcticos que pueden resultar
txicos dependiendo de la cantidad digerida o absorbida por el organismo (Ortuo,
2006). En el caso particular de la hierba luisa, su aceite esencial ha manifestado tener
leves efectos irritantes por el contacto prolongado con la piel (Bauelos y otros,
2006). Por lo que, el lmite mximo recomendado de aceite esencial en una
formulacin de un producto cosmtico es de 5 % (Normas de Fabricacin de la
Comisin Europea de Cosmticos, 2006).
2.3.6 Caracterizacin qumica de los aceites esenciales
Para la separacin e identificacin de la composicin qumica de aceites esenciales,

la cromatografa en fase gaseosa acoplada a la espectrometra de masas (CG-EM) se
13
ha convertido en la tcnica ms utilizada por la mayora de laboratorios, ya que, es
precisa y cuantificable por lo que permite determinar la composicin qumica del
aceite en funcin del metabolismo vegetativo de la planta y como consecuencia de
estos resultados, el productor de aceites esenciales, puede determinar el perodo
correcto para la obtencin de un producto de composicin y calidad constante, con
rendimientos ptimos (Rivera, 2008).
2.3.6.1 Cromatografa de gases acoplada a masas
Por lo mencionado anteriormente se ha escogido el mtodo CG-EM para la

caracterizacin del aceite empleado en esta investigacin. Esta tcnica combina la
capacidad de separacin que presenta la cromatografa de gases con la sensibilidad y
capacidad selectiva del detector de masas. Esta combinacin permite analizar y
cuantificar compuestos trazas en mezclas complejas con un alto grado de efectividad.
El cromatgrafo de gases utiliza una columna capilar que depende de las
dimensiones de la columna, as como las propiedades de fase. La diferencia de las
propiedades qumicas de las diferentes molculas en una mezcla causa que estas sean
separadas cuando la muestra cruza la longitud de la columna. Las molculas
necesitan diferentes tiempos de retencin para eluir del cromatgrafo de gases. Eso
permite al espectrmetro de masas capturar, ionizar, acelerar, desviar y detectar las
molculas ionizadas de forma separada. Para realizar esto, el espectrmetro de masas
divide cada molcula en fragmentos ionizados y detecta estos fragmentos mediante
su relacin masa- carga (Smiths, 2013). La fragmentacin de la mayor parte de las
molculas produce un gran nmero de picos que permiten la identificacin de
numerosos compuestos y el reconocimiento de ciertos grupos funcionales (UNAM,
s.f.). Donde las reas bajo los picos son directamente proporcionales a la
concentracin de cada componente y se pueden utilizar como parmetro analtico de
cuantificacin por medio de una calibracin adecuada (Museo Nacional de Ciencias
Naturales, 2012).
14
2.4 Patologa cutnea: acn
El acn vulgar es un trastorno de la unidad polisebcea que se observa,

principalmente, en adolescentes. En la mayora de los casos, el acn se presenta
como lesiones polimrficas, que consisten en ndulos, pstulas, ppulas. Aunque la
evolucin del acn puede ser autolimitada, las secuelas pueden durar toda la vida,
con formacin de cicatrices hipertrficas (Wolf, 2009).
2.4.1 Factores que influyen la aparicin del acn
En la patogenia del acn se han identificado tres etapas bsicas:
Excesiva produccin de sebo: Es considerado el factor principal en la patognesis

del acn, con una mayor produccin en personas con esta afeccin. Es causada
por cambios hormonales especficamente los andrgenos, donde estos se unen a
los sebocitos e influyen en su actividad (Falabella, 2002).
Hiperqueratinizacin del infrainfundbulo: Se desarrolla una intensificacin

anormal de la queratinizacin del infrainfundbulo a nivel de la capa granulosa y
la capa cornea. Por tanto se observa una compresin del sebo, una dilatacin del
infrainfundbulo y una hiperqueratosis que produce la obstruccin de la luz del
canal excretor. Todo ello conduce a la aparicin del comedn (Martini, 2005).
Presencia y actividad de Propionibacterium acnes: Es un miembro de la flora

normal de la piel pero se presenta en mayor proporcin en pacientes jvenes con
acn. P. acnes promueve la inflamacin de las lesiones de acn a travs de la
produccin de mediadores inflamatorios, cidos grasos libres y las porfirinas
(coproporfirina III y protoporfirina IX) (Cunliffe, s.f.). Las porfirinas son
fuertemente fluorescentes al ser expuestas a una luz con longitudes de onda
alrededor de 400 a 650 nm (Szepetiuk y otros, 2011). La formacin de porfirinas
que son fluorescentes es el fundamento de los test de eficacia de los productos
15
antiacn, ya que se debe observar una disminucin de la fluorescencia despus de
la aplicacin del producto (Wolf, 2009).
2.4.2 Evolucin del acn
Se observa desde una fase de retencin a un estado inflamatorio, en primer lugar se

desarrolla un microcomedn por acumulacin lenta del sebo a nivel del
infrainfundbulo. En el mejor de los casos conduce a un comedn abierto, as se
produce la expulsin al exterior del sebo y de productos de la composicin del sebo o
de las paredes de la glndula y del folculo. En cambio si el comedn permanece
cerrado conlleva a la aparicin de una ppula la cual es una lesin profunda en la que
se destruye el epitelio folicular y en algunas ocasiones se endurece para formar un
microquiste el mismo que queda encerrado sin posibilidad de resorcin ni de
evacuacin. Posteriormente se puede formar una pstula con carcter inflamatorio
que puede abrirse para liberar pus, queratina y sebo siendo este el peor de los casos
(Martini, 2005).
2.4.3 Tipos de acn
Grado I: Se caracteriza por la presencia de comedones abiertos y despus

cerrados que dan lugar a ppulas y pstulas foliculares y superficiales,
localizadas especialmente en frente y mejillas. sta sera una forma leve de acn.
Grado II: Presenta pstulas foliculares profundas, consecuencia del paso del
contenido folicular en la dermis, junto a los comedones, ppulas y pstulas
superficiales de la primera fase.
Grado III: Presencia de ndulos indurados muy dolorosos y de eritema y edema

en la superficie cutnea.
16
Grado IV: Se da una reaccin inflamatoria alrededor del contenido folicular que
se encuentra en la dermis profunda, lo que constituye elementos noduloqusticos
que, al resolverse, dejarn siempre cicatriz. Es la forma de acn grave o de gran
intensidad (Camacho, 2007).
2.4.4 Tratamientos del acn
El tratamiento debe ir dirigido a corregir factores etiolgicos implicados, es decir,

regular la secrecin sebcea, evitar la obstruccin folicular y formacin de
comedones y eliminar la proliferacin bacteriana y la inflamacin (De Hoyos y
Pascual, 2004).
Existen varios tipos de tratamiento como son: tpico, oral y hormonal.
2.4.4.1 Tratamiento tpico
Es efectivo en formas leves y moderadas tanto no inflamatorias como inflamatorias

(De Hoyos y Pascual, 2004). Su principal accin es prevenir nuevas lesiones, por lo
cual debe aplicarse todos los das y en todas las zonas predispuestas al acn. Sin
embargo, pueden presentarse efectos adversos como la irritacin de la piel, ms an
en los pacientes que usan productos sin prescripcin mdica. Entre estos se puede
mencionar a los retinoides, antimicrobianos y otros medicamentos locales (Ulate,
2004).
Retinoides: Su funcin es inhibir la formacin de microcomedones, comedones

abiertos y cerrados, y reducir los existentes (Kaminski y Lago, 2004), dentro de
este grupo tenemos: tretinoina, isotretinoina, adapaleno, tazatoreno (Ulate, 2004).
Antimicrobianos: Tienen un efecto bacteriosttico o bactericida frente a P. acns

y un efecto antiinflamatorio directo. tiles en las formas leves y moderadas de
acn inflamatorio, pero poco eficaces en los comedones no-inflamatorios. Los
17
ms utilizados son: tetraciclina, eritromicina, clindamicina y perxido de benzolo
(De Hoyos y Pascual, 2004).
Otros medicamentos: Son aquellos que inhiben la comedognesis, son bien

tolerados y su uso es mejor como coadyuvantes de los medicamentos
anteriormente mencionados. Entre estos se encuentran el cido azelaico, la
sulfacetamida o sulfuro de sodio, y el cido saliclico. Los jabones, detergentes y
astringentes no son de valor teraputico pero al ser usados dos veces al da se
obtienen mejores resultados (Ulate, 2004).
2.4.4.2 Tratamiento oral
Esta indicado en las formas inflamatorias intensas y en aquellas en las que no existe
una respuesta adecuada al tratamiento tpico. Generalmente se usan antibiticos
orales, los cuales deben ser tomados de 3 a 6 meses y pueden ser necesarios varios
ciclos para lograr una mejora permanente (Ulate, 2004). Entre los principales se
encuentran:
Tetraciclinas: Son agentes bacteriostticos, con actividad sobre un gran nmero

de microorganismos. por lo que se han convertido en antibiticos de uso habitual
en los seres humanos, animales y en algunas reas de la agricultura (Snchez y
otros, 2004). En el acn vulgar las tetraciclinas son el tratamiento de eleccin, ya
que, alcanzan concentraciones elevadas en el infundbulo pilosebceo, actan
como agente antibacteriano directo y antiinflamatorio, reducen el nmero de P.
acnes y la cantidad de lipasas bacterianas y disminuyen la destruccin de
triglicridos con formacin de cidos grasos libres sobre la superficie cutnea
(Snchez y otros, 2004). Las ms utilizados son doxiciclina y minociclina, a
dosis de 100 mg/da, durante 3 meses. Sin embargo pueden producir efectos
adversos como fotosensibilidad, pigmentacin dentaria e hipertensin
intracraneal benigna (De Hoyos y Pascual, 2004).
18
Eritromicinas: La eritromicina y el resto de macrlidos se consideran de segunda
eleccin y se recomiendan en caso de alergia, intolerancia a las tetraciclinas o
falta de respuesta al tratamiento (Esquius, 2002).
Clindamicinas: Su actividad antibacteriana es similar a la de eritromicina en

contra de estafilococos y estreptococos; adems es efectiva en contra de
bacterias anaerobias (UNAM, s.f.).
2.4.4.3 Tratamiento hormonal
Tienen como finalidad disminuir la produccin de sebo debido a la accin de los

andrgenos sobre el folculo sebceo. Dicha terapia incluye antiandrgenos y agentes
bloqueantes de la produccin de andrgenos de origen suprarrenal y ovrico. Est
indicado en el acn de la mujer adulta, caracterizado por la persistencia de ppulas
inflamatorias y ndulos, cuando los tratamientos con antibiticos no lograron
resultados satisfactorios. El contraconceptivo ms utilizado es la asociacin de
acetato de ciproterona (antiandrgeno progestacional) cuya dosis habitual es 2 mg,
con 35 g o 50 g de etinil estradiol (Kaminsky y Lago, 2004).
2.4.5 Cosmtica del acn
Se recomiendan cremas hidratantes que minimicen la sequedad y la irritacin

causadas por los tratamientos teraputicos. Los cosmticos son productos que tienen
una dbil accin, son tratamientos de acompaamiento por lo que son utilizados en
conjunto con tratamientos mdicos o para mejorar el estado de la piel (Martini,
2005).
19
2.5 Lociones
Es una solucin acuosa o hidroalcohlica que se aplica sobre la piel o las mucosas
(Martini, 2005). Tambin se denominan tnicos, ya que, son lquidos no grasos que
contienen agua, humectantes, tensoactivos, productos de origen vegetal,
conservantes, colorantes y perfumes. Son emulsiones con una viscosidad lo
suficientemente baja para fluir fcilmente bajo la influencia de la gravedad
(Rodrguez, 2004).
Las lociones pueden ser soluciones verdaderas, soluciones coloides, emulsiones o

suspensiones. Para uso dermatolgico se emplean especialmente lociones de tipo
emulsin y suspensin, estas lociones sustituyen las pomadas y las cremas, ya que,
presentan la ventaja de poder removerse de la piel y de la ropa con facilidad. Son
menos irritantes que las cremas o las pomadas y pueden ser aplicadas en reas
extensas de la piel dejando una pelcula de principios activos junto con los
excipientes. Contienen agentes emulsificantes o suspensores, as como estabilizantes
y preservantes (Sharapin, 2000).
Las lociones-emulsiones son de tipo aceite en agua (O/W), donde la fase oleosa
puede contener parafina liquida, aceites vegetales, alcohol cetlico o estearlico, ceras
y lanolina. Normalmente las lociones se destinan a la administracin de frmacos,
antisptico o germicidas usados en el tratamiento de enfermedades de la piel. Se
exige una locin de tipo emulsin que presenta propiedades fsicas cosmticas,
consistencia adecuada, ausencia de olor, buenas propiedades emolientes sin dar
sensacin de untuosidad. Las lociones deben secarse rpidamente despus de su
aplicacin, deben ser ligeramente acidas o neutras, no deben provocar
sensibilizaciones o alergias, deben ser de fcil preparacin y ser compatibles con las
sustancias activas que las componen (Sharapin, 2000).
Como vehculo para la preparacin de lociones se encuentra en primer lugar el agua

purificada a la cual se puede adicionar alcohol en pequea cantidad, glicerina,
polietilenglicol (PEG), sorbitol o propilenglicol, sustancias que permitan una
adhesin ms fcil de la locin a la piel y puedan mejorar la plasticidad de la pelcula
20
que se forma. El alcohol puede usarse como cosolvente o para ayudar a la
evaporacin del agua en la formulacin (Sharapin, 2000).
2.6 Anlisis organolpticos y fsico - qumicos de productos cosmticos
Segn la Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria (2005) los parmetros que

generalmente son evaluados en el control de calidad de los productos cosmticos
dependen de las caractersticas y de los componentes utilizados en la formulacin en
estudio. De manera general se realizan las siguientes pruebas:
Caractersticas organolpticas: Las caractersticas organolpticas determinan los

criterios de aceptacin del producto por el consumidor. Generalmente se
evalan: aspecto, color, olor, sabor y sensacin al tacto.
Caractersticas fsico-qumicas: Los anlisis fsico-qumicos sugeridos son: valor

de pH, viscosidad, densidad, viscosidad y conductividad elctrica.
2.7 Estudios de eficacia in vitro: pruebas de antibiograma
Las bacterias tienen diferente sensibilidad a distintos agentes antibacterianos, por ello
es de gran importancia realizar este tipo de pruebas, las cuales se basan en el
enfrentamiento in vitro de la bacteria con distintas concentraciones del agente. La
evaluacin de esta sensibilidad nos servir para la seleccin del compuesto ms
adecuado en el tratamiento de una infeccin bacteriana (Gamazo, 2000).
Los mtodos ms utilizados para determinar la sensibilidad de una bacteria a agentes

microbianos son la difusin en agar y la dilucin en caldo o agar.
Mtodo de difusin en agar: Se caracteriza por ser fcilmente estandarizable y

estar indicado para microorganismos no exigentes de crecimiento rpido.
Consiste en depositar en la superficie de una placa de agar previamente
21
inoculada con el microorganismo, discos de papel filtro impregnados con los
diferentes antibiticos. Tan pronto el disco impregnado en antibitico se pone en
contacto con la superficie hmeda del agar, el filtro absorbe agua y el antibitico
difunde por el agar, formndose un gradiente de concentracin. Transcurridas 18
a 24 horas de incubacin, los discos pueden o no aparecer rodeados por una zona
de inhibicin de crecimiento bacteriano llamado halo de inhibicin (Taroco y
otros, s.f.).
Mtodo de dilucin en caldo o agar: consiste en exponer a las cepas a estudiar a

diferentes concentraciones de antimicrobiano, y observar el crecimiento de los
microorganismos para luego definir la CIM (Taroco y otros, s.f.). La lectura de
los halos de inhibicin deben interpretarse como sensible (S), intermedio (I) y
resistente (R), segn las categoras establecidas por el National Committee for
Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Adems, el comit establece por regla
general, que un dimetro de inhibicin de 30 a 35 mm es indicativo de una cepa
altamente sensible, mientras que, dimetros de zona de inhibicin inferiores a
15 mm son los que presentan las cepas resistentes (Garca, J y otros, 2002). El
medio que se utiliza es el de Mueller-Hinton pero puede ser suplementado para
bacterias exigentes (Gamazo, 2000).
2.7.1 Concentracin mnima inhibitoria (CMI)
Es la base de la medida de la sensibilidad de una bacteria a un determinado

antibitico. La CMI se define como la menor concentracin de una gama de
diluciones de antibitico que provoca una inhibicin de cualquier crecimiento
bacteriano visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una
escala de actividad del antibitico frente a diferentes especies bacterianas (Gamazo,
2000).
22
2.7.2 Concentracin mnima bactericida (CMB)
Es la menor concentracin de antimicrobiano capaz de eliminar una cepa bacteriana,

es decir producir la muerte celular. Segn la mayor parte de microbilogos clnicos
la CMB se define como la menor concentracin de un antibitico que reduce al 0.1%
o menos el nmero de bacterias del inoculo original, es decir una reduccin de 1000
veces el inoculo original, o lo que es lo mismo reduce el inoculo inicial en un 99.9%
(Gamazo, 2000).
2.7.3 Material biolgico: Propionibacterium acnes ATCC 11827
Es una bacteria difteroide grampositiva anaerbica que se encuentra en el folculo

polisebceo (Jaramillo y Bazalar, 2006). Generalmente crece en la mayora de
medios de cultivo pero pueden tardarse entre 2 y 5 das en evidenciar su crecimiento
(Rivas y Mota, s.f.). El P. acnes ATCC 11827 puede ser identificada mediante las
siguientes caractersticas:
Macroscpicas.- Bacteria pequea puntiforme, de color blanco opaco y

reluciente. Forma colonias circulares de color amarillo.
Microscpicas.- Bacteria Pequea, gram positiva y se presenta como una cadena

con ramificaciones.
Fenotpicas.- Ver Anexo No.8
2.8 Estudio de eficacia in vivo
Los tipos de pruebas que debe superar un producto cosmtico, en funcin de su

naturaleza y antes de ser comercializado, son:
23
Estudios Clnicos de Tolerancia: Utilizados para el estudio de la compatibilidad
cutnea del cosmtico, de irritacin o sensibilizacin, tanto en condiciones
extremas o en condiciones normales, as como para valorar otros aspectos como
la comedogenia, fotosensibilizacin, fotoirritacin, etc (PORTALFARMA,
2012).
Perfil toxicolgico de los ingredientes: Esto significa que los ingredientes se

deben incorporar a la frmula del producto cosmtico en un nivel de
concentracin que presente un margen de seguridad adecuado (Agencia
Nacional de Vigilancia Sanitaria, 2003).
Estudios Clnicos de eficacia: Tienen como objetivo evaluar la eficacia y

seguridad de un producto cuando es administrado bajo una dosis y una
indicacin teraputica determinada, bajo condiciones reales de campo. Dicha
evaluacin puede realizarse a travs de test in vitro, in vivo y tcnicas no
invasivas (Sabate, 2003).
Estudios de complacencia/sensoriales: Para conocer la opinin del consumidor

sobre el cosmtico (PORTALFARMA, 2012).
Con el fin de evaluar estos controles los test se podran realizar de tres modos
diferentes: con animales de experimentacin, in vitro e in vivo con voluntarios
humanos bajo control dermatolgico u otro especialista en funcin del tipo de
cosmtico. Sin embargo, los productos cosmticos necesitan ensayos clnicos en
humanos, para que las empresas puedan ofrecer a los consumidores el mximo
de seguridad con el menor riesgo, garantizando las mejores condiciones de uso
del producto (Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria, 2003).
2.8.1 Test de irritabilidad
La irritacin cutnea es un fenmeno de origen inflamatorio, que puede ser definido

como una agresin a la piel, con lesiones a nivel de la epidermis y la aparicin de
24
una reaccin inflamatoria a nivel de la dermis, provocando signos
macroscpicamente visibles, tales como eritema y edema. (Gonzales, 2005).
La prueba de irritacin en humanos se denomina "Patch Test Simple nico", el cual

consiste en la aplicacin oclusiva de un producto sobre la piel durante 48 horas y
permite verificar en 10 a 20 voluntarios, la ausencia de irritacin primaria cutnea
despus de una sola aplicacin, seguida de un examen macroscpico realizado segn
una escala numrica establecida (Gonzales, 2005).
Segn la Norma Oficial Mexicana NOM-039-SSA1-1993 (1993) esta prueba se lleva

a cabo para determinar las caractersticas de irritacin y de sensibilizacin, con el fin
de que los fabricantes puedan asegurar que sus productos sean "no irritantes" para el
usuario y prevenir los daos a la salud que puedan ocasionar, al aplicarse o usarse
directamente.
La Gua para la Evaluacin de la Seguridad de productos cosmticos (2003) seala

que, el nmero mnimo de personas para este tipo de estudios es de 50, los cuales
deben cumplir los siguientes criterios de inclusin y exclusin:
2.8.1.1 Criterios de inclusin
Hombres y mujeres de 19 a 22 aos de edad.

Fototipos de la piel de I a IV.
Ausencia de cualquier enfermedad visible en la piel que pueda ser confundida
con una reaccin cutnea causada por el producto estudiado.
Firma y entendimiento de la aceptacin de la Carta de Consentimiento.
Capacidad y confiabilidad para seguir las instrucciones impartidas.
Estado de Salud: Ausencia de enfermedad.
Panelistas con auto-reconocimiento de piel normal (Bravo y Luque, 2010).
25
2.8.1.2 Criterio de exclusin
Si presenta psoriasis, eczema u otro tipo de erupciones en cualquier sitio de la

piel, cncer en la piel o alguna enfermedad de sta, que pudiera interferir con las
evaluaciones efectuadas en este estudio, o que pudieran exponer al voluntario a
un riesgo inaceptable.
Si ha sido sometido a algn trasplante de rgano.
Embarazadas y madres lactantes.
Panelistas con auto-reconocimiento de piel sensible.
Personas que hayan usado esteroides tpicos o sistmicos y/o antihistamnicos
por al menos 7 das antes del inicio del estudio o si se est aplicando cualquier
medicamento en el sitio de aplicacin del parche.
Si presenta diabetes y est tomando insulina.
Si presenta asma severa o algn tipo de alergia respiratoria que requiere de una
terapia crnica o frecuente con administracin de medicamentos (Norma Oficial
Mexicana, 1993).
Planes de exposicin intensa a la luz solar o a sesiones de bronceado durante el
periodo de estudio.
Planes de bao en el mar, ir a la piscina o al sauna durante el estudio (Bravo y
Luque, 2010).
2.8.2 Tratamientos no invasivos
Actualmente estn aumentando los test clnicos que valoran la eficacia de los
cosmticos empleando dispositivos de bioingeniera, conocidos como MENI
(Mtodos de exploracin no invasivos). Con el avance de la tecnologa en
bioingeniera, se han desarrollado varios mtodos para medir de modo no invasivo
las propiedades fsicas y fisiolgicas de la piel. Las determinaciones van desde
propiedades fsicas cutneas, como las propiedades mecnicas, elctricas, trmicas,
pticas, ultrasonogrficas y fisiolgicas como la prdida transepidrmica de agua,
sudoracin, secrecin de sebo y flujo sanguneo, las mismas que permiten evaluar la
utilidad de los cosmticos empleados (PORTALFARMA, 2012). Entre los MENI se
26
pueden destacar los siguientes: visin directa o con lupa, epiluminiscencia directa o
con lupa, replicas, fotografas, digitalizacin de imagen, pHmetro, colorimetra,
termografa, sonometra con ultrasonidos, resonancia magntica de imagen,
flujometra, corneometra, sebometra, evaporimetra y elastometra (Olmos, 2005).
2.8.3 Estudio de eficacia cosmtica
La eficacia cosmtica o claim cosmtico es cualquier informacin pblica,

principalmente provista con fines de marketing sobre el contenido, naturaleza, efecto,
propiedades o eficacia del producto (Delivery Technologies, 2013).
El estudio de eficacia cosmtica es uno de los requisitos principales que un

cosmtico de calidad debe poseer para satisfacer los requisitos legislativos y de
mercado (Eurofins, 2013). Los ensayos de eficacia pueden ser abordados desde el
punto de vista clnico, instrumental y sensorial. El presente estudio ser de tipo
instrumental, ya que, se utiliza metodologa no invasiva por bioingeniera
permitiendo cuantificar parmetros biofsicos de las cualidades de la piel (Claim,
2013). Tal es el caso de la cmara con luz ultravioleta Visiopor PP34N, la cual
permite monitorear lesiones de acn mediante fluorescencia en la piel (CK
Electronic, 2013).
Segn el estudio realizado por Claim (2010), se deben seleccionar 20 adolescentes

que presenten acn leve, con edades comprendidas entre 14 - 19 aos, quienes deben
cumplir estrictos criterios de inclusin y de exclusin.
2.8.3.1 Criterios de inclusin
Hombres y mujeres de 14 a 17 y 16 a 19 aos de edad respectivamente.

Los voluntarios debern presentar acn grado II. (Sern evaluados por el
dermatlogo).
27
Los usuarios debern estar dispuestos a utilizar todas las noches y de forma
exclusiva el producto a testear.
2.8.3.2 Criterio de exclusin
Alguna condicin mdica o la utilizacin de alguna medicacin (Ejemplo:

antibiticos orales o tpicos) los cuales pueden confundir o influenciar los
resultados de este estudio.
Presentar alergia o reactividad a productos cosmticos de la misma categora que
el probado.
Alguna condicin dermatolgica, tal como psoriasis, eczema, dermatitis atpica o
foliculitis.
Planes de exponerse al sol de manera intensa (directamente al sol o en cabinas de
rayos UVA) durante el periodo del estudio.
2.8.4 Visiopor PP 34 N
Es una cmara anloga no invasiva que debe estar conectada a una computadora con
el hardware de uno de los siguientes dispositivos (vdeo digitalizador VD 300,
Visiometer SV 600, Dual de Imgenes, el Analizador de belleza CM 2010 o
Multidermacsope. Esta cmara es utilizada para detectar lesiones de acn ya que
determina porfirinas generadas por la bacteria Propionibacterium acnes, la cual
promueve la inflamacin de las lesiones de acn a travs de la produccin de
mediadores inflamatorios, cidos grasos libres y las porfirinas propiamente dichas
(CK electronic, 2012).
La presencia de porfirinas se puede demostrar por fluorescencia de naranja a rojo en

las aberturas de los folculos mediante el examen de la piel con luz ultravioleta. Por
ltimo, es importante recalcar que la intensidad de la fluorescencia folicular y la
medida de la participacin de la cara son proporcionales a la densidad de poblacin
28
de P. acnes y el contenido de porfirinas en la superficie de la piel (CK electronic,
2012).
Por tanto, se ha elegido a esta cmara como la herramienta primordial para el estudio
de eficacia in vivo a realizarse en la presente investigacin, ya que, ha sido
ampliamente utilizada en dermatologa y cosmetologa, especialmente en el campo
del acn para detectar de manera temprana lesiones invisibles, visualizar pequeas
lesiones, probar la eficacia de productos antibacterianos y frmacos contra P. acnes y
determinar la actividad comedognica y comedoltica de productos de aplicacin
tpica (MICROCAYA, 2012).
29
CAPTULO III
MARCO METODOLGICO
3.1 Lugar de investigacin
El trabajo experimental se llev a cabo en los laboratorios del CIVABI (Centro de

Investigacin y Valoracin de la Biodiversidad) de la Universidad Politcnica
Salesiana, Sede Quito, Campus Girn. El test de irritabilidad se desarroll en la
carrera de Biotecnologa de la Universidad Politcnica Salesiana y el estudio de
eficacia cosmtica instrumental de la locin fue realizado en las instalaciones del
Colegio Nacional Tcnico Atahualpa ubicado en el sector de Amaguaa.
3.2 Lugar de recoleccin del material vegetal
Las hojas de hierba luisa fueron recolectadas en la ciudad de Macas, provincia de

Morona Santiago en el mes de mayo del 2012, en las primeras horas de la maana.
Donde se cosecharon 55 Kg de material vegetal aproximadamente.
3.3 Anlisis de material vegetal
Tomando como referencia los procedimientos descritos por Miranda (2002), donde
se emplean mtodos fsico-qumicos de anlisis que permiten determinar y establecer
la calidad del material vegetal, se realizaron los siguientes ensayos:
30
Determinacin de materias extraas
Tabla 2. Materiales, equipos y reactivos para la determinacin de materias extraas
MATERIALES REACTIVOS EQUIPOS
Caja petri 100 g del material Balanza

vegetal semianaltica
marca OHAUS
Pinza metlica
Elaborado por: Katherine Meza y Gabriela Vargas
Procedimiento:
Para determinar el contenido de materias extraas se pes 100 g del material vegetal
en una caja petri con la ayuda de una Balanza semianaltica marca OHAUS, se
procedi a la separacin manual de las partes extraas con una pinza y se pes la
materia extraa. El resultado se expresa en porcentaje y se calcula por la siguiente
frmula:
X
P= x 100
M
Dnde:
P: Porcentaje de materia extraa segn su clasificacin.
X: Peso de la materia extraa.
M: Peso inicial de la droga.
31
Determinacin de cenizas totales
Tabla3. Materiales, equipos y reactivos para la determinacin de cenizas totales
Crisol de 2 g del material Balanza

porcelana vegetal analtica Denver
Mechero Mufla Thermo

Scientific
Desecadora
Procedimiento:
Se emple el mtodo gravimtrico, que consiste en pesar 2.0 g +/- 0.5 mg de la droga
vegetal pulverizada y tamizada en un crisol de porcelana previamente tarado con una
balanza analtica marca Denver. Calentar suavemente la muestra con un mechero
aumentando la temperatura hasta carbonizar y posteriormente e incinerarla en un
o
horno mufla marca Thermo Scientific a una temperatura de 700 C, durante 2h.
Posteriormente se enfra el crisol en una desecadora y se pesa, repitindose el
proceso alcanzar una masa constante, para ello, se necesitan intervalos de 30 minutos
entre calentamiento y pesada. Al final el residuo es de color blanco o casi blanco. Se
calcula mediante la siguiente frmula:
M2 - M
C= x 100
M1 - M
Dnde:
C: porcentaje de cenizas totales en base hidratada.
M: masa del crisol vaco (g)
32
M1: masa del crisol con la porcin de ensayo (g)
M2: masa del crisol con la ceniza (g)
100: factor matemtico para los clculos
Determinacin de cenizas solubles en agua:
Tabla 4. Materiales, equipos y reactivos para la determinacin de cenizas solubles en agua.
Crisol de Cenizas totales Balanza

porcelana analtica marca
Denver
Mechero 20 ml de agua Mufla Thermo

destilada Scientifica
Papel filtro libre

de cenizas
Vidrio reloj
Desecadora
Procedimiento:
A las cenizas totales obtenidas en el punto anterior, se les aadi 20 ml de agua. El

crisol se tap con un vidrio reloj y se hirvi suavemente a la llama del mechero
durante 5 min. La solucin se filtr a travs del papel filtro libre de cenizas y el filtro
con el residuo se transfiri al crisol inicial, se carboniz en un mechero y luego se
inciner en un horno mufla a 700 o C, durante 2h. Posteriormente se coloc en una
desecadora y se pes cuando alcanz la temperatura ambiente. El procedimiento se
repiti hasta alcanzar peso constante. Se calcula mediante la frmula:
33
M2 - Ma
Ca = x 100
M1 - M
Dnde:
Ca: porcentaje de cenizas solubles en agua en base hidratada.
M2: masa del crisol con las cenizas totales (g).
Ma: masa del crisol con las cenizas insolubles en agua (g)
M1: masa del crisol con la muestra de ensayo (g)
M: masa del crisol vaco.
100: factor matemtico.
Determinacin de cenizas insolubles en cido
Tabla 5. Materiales, equipos y reactivos para la determinacin de cenizas insolubles en cido

Crisol de Cenizas totales Balanza analtica

porcelana marca Denver
Mechero 3 ml de cido Mufla Thermo

clorhdrico al 10%. Scientifica
Papel filtro libre 5 ml de agua

de cenizas caliente
Vidrio reloj Solucin de nitrato

de plata 0.1mol/L
Desecadora
34
Procedimiento:
A las cenizas totales, se aadi 3 ml de cido clorhdrico al 10%. El crisol se tap

con un vidrio reloj y se calent sobre un bao de agua hirviente durante 10 min. Se
lav el vidrio reloj con 5 ml de agua caliente y se uni al contenido del crisol. La
solucin se filtr a travs de papel de filtro libre de cenizas; se lav el residuo con
agua caliente hasta que el filtrado acidulado con cido clorhdrico, al cual se le
aadi dos gotas de solucin de nitrato de plata 0.1mol/L, no muestre presencia de
cloruros. El filtrado con el residuo se desec a 105 o C en una estufa marca Shel
Lab, se transfiri al crisol inicial y se inciner en un horno mufla a una temperatura
o
de 700 C, durante 2h. Posteriormente se coloc en una desecadora y se pes a
temperatura ambiente. Se repiti el proceso hasta alcanzar masa constante. Se
calcula mediante la frmula:
M2 - M
B= x 100
M1 - M
Dnde:
B: porcentaje de cenizas insolubles en cido clorhdrico en base hidratada.
M: masa del crisol con la porcin de ensayos (g)
M2: masa del crisol con la ceniza (g)
100: factor matemtico.
35
Determinacin del contenido de humedad
Tabla 6. Materiales, equipos y reactivos para la determinacin de contenido de humedad
Baln de 500 ml 10g de la droga Equipo de

pulverizada determinacin
de humedad.
Mtodo
azeotrpico
Placa calefactora 200 ml de

tolueno
2 ml de agua
destilada
Solucin de
nitrato de plata
0.1mol/L
Procedimiento:
Se coloc 200 ml de tolueno en un baln de 500 ml, se aadi 2 ml de agua, adems

se aadi tolueno al tubo colector hasta el cuello. Se coloc sobre una placa
calefactora y se destil hasta que el volumen de agua en el tubo colector
permaneci constante y se midi el volumen inicial de agua y se dej enfriar el
tolueno saturado. A continuacin se peso 10g de la muestra pulverizada y tamizada y
se transfiri al baln con el tolueno saturado de agua; se coloc el equipo
nuevamente sobre la placa calefactora y se destil hasta que el volumen de agua en el
tubo colector alcanz un volumen constante, y se midi el volumen final de agua.
Los resultados se expresan mediante la siguiente frmula:
36
Vt - V1
H= x 100
M
Dnde:
H: Humedad residual (%)
V1: Volumen de agua inicial (ml)
Vt: Volumen de agua final (ml)
100: Factor matemtico.
3.4 Obtencin del aceite esencial
El aceite esencial de las hojas de hierba luisa (Cymbopogon citratus) fue obtenido
mediante destilacin por arrastre de vapor en las instalaciones de la Fundacin
Chankuap en Macas, provincia de Morona Santiago.
Tabla 7. Materiales, equipos y reactivos para la obtencin del aceite esencial
Caldero Agua Equipo de

destilacin
55 kg de hojas de
Hierba Luisa
Vaso florentino
2 frascos de color
mbar
37
Procedimiento:
Se utiliz un equipo de destilacin de acero inoxidable con una capacidad de 40

libras, donde se mantuvo una temperatura de 25 C a 30 C con la finalidad de evitar
prdidas de aceite esencial por volatilizacin. Se realizaron tres destilaciones, cada
una con una duracin de 2 horas, se utiliz 18 kg de material vegetal en cada
operacin, el aceite esencial con el agua fueron recibidos en un vaso florentino,
donde se logr la separacin fsica por el principio de diferencia de densidades, el
aceite decantado fue envasado en un frasco de vidrio color mbar. Finalmente se
obtuvo un total de 250 ml de aceite esencial.
Para determinar el rendimiento del aceite esencial en cada destilacin se utiliz la

siguiente frmula:
Dnde:
%Re: Porcentaje de rendimiento del aceite esencial (%)
Ca: Cantidad de aceite esencial extrado (ml)
Mp: Cantidad de planta destilada (g.)
3.5 Anlisis fsico - qumico del aceite esencial
De acuerdo a lo indicado en el apartado 2.3.4, se realizaron los siguientes ensayos:
Caractersticas organolpticas.- Se coloc 20 ml de aceite esencial en un tubo de

ensayo y utilizando los rganos de los sentidos se determin las siguientes
propiedades: color, olor y apariencia.
38
Determinacin del ndice de refraccin
Tabla 8. Materiales, reactivos y equipos para determinar el ndice de refraccin
Varilla de vidrio Agua destilada Refractmetro

Atago
Aceite esencial
Procedimiento:
Se utiliz un refractmetro marca Atago el cual fue previamente calibrado, para ello
se coloc una gota de agua destilada con una varilla de vidrio y se seleccion la zona
del espectro visible que aparece en la lnea lmite del campo visual moviendo el
compensador cromtico y colocando la interseccin del retculo sobre la lnea
lmite de los campos claro y oscuro. Una vez calibrado el equipo, se coloc
una gota del aceite sobre el prisma de medicin, se cerr el termoprisma y se
procedi de la misma forma que con el agua.
Densidad Relativa
Tabla 9. Materiales, reactivos y equipos para determinar la densidad relativa

Picnmetro Agua destilada Balanza analtica

marca Denver
Termmetro Aceite esencial
39
Procedimiento:
Se utiliz un picnmetro, el cual se pes vaco y seco a 25 C y se llen con

aceite esencial. Posteriormente, se pes el picnmetro con la muestra a ensayar y
se repiti la operacin con el agua destilada.
La densidad relativa a 25 C se calcula por la siguiente frmula:
M1 - M
D25 =
M2 - M
Dnde:
M1: peso del picnmetro con la muestra (g)
M2: peso del picnmetro con el agua (g)
M: peso el picnmetro vaco (g).
Solubilidad en agua
Tabla 10. Materiales, reactivos y equipos para determinar la solubilidad en agua
MATERIALES REACTIVOS
Matraz Agua destilada

erlenmeyer
Varilla de Aceite esencial

agitacin
40
Procedimiento:
En 5ml de agua destilada se aadi 0.5 ml de aceite esencial, se agit durante un

minuto y se evalu la solubilidad.
Solubilidad en alcohol
Tabla 11. Materiales, reactivos y equipos para determinar la solubilidad en alcohol

Matraz Alcohol etlico

erlenmyer
Varilla de Aceite esencial

agitacin
Procedimiento:
En 5ml de alcohol etlico al 96% se aadi 0.5 ml de aceite esencial, se agit durante
un minuto y se evalu la solubilidad.
41
Anlisis en GC-MS
Tabla 12. Materiales, reactivos y equipos para la caracterizacin qumica del aceite esencial
Vial pequeo Aceite esencial GC Marca Varian

Modelo 3900
Matraz aforado Diclorometano MS Marca Varian

de 10 ml Modelo Saturn 1200D
Microjeringa
Procedimiento:
Se tom 10l de aceite y se diluy en 1 ml de diclorometano, se inyect 2 l de la

muestra en el equipo y se esper 30 minutos para observar el cromatograma
resultante. El equipo trabaj en las condiciones presentadas en las siguientes tablas:
Tabla 13. Caractersticas del espectrmetro de masas.
Condiciones del Equipo MS
Marca Varian
Modelo Saturn 2100D
Energa de Ionizacin 70 eV
Corriente de emisin 10 A
Rango de masa 34-400 m/z
42
Tabla 14. Condiciones del cromatgrafo de gases.
Condiciones del Equipo GC
Marca Varian
Modelo 3900
Serie 100568
Voltaje 220 v
Flujo de gas helio 1 m x min
Temperatura del inyector 280 C
Split Ratio 50
Temperatura Inicial 55C
Temperatura media 100C (1/min)
Temperatura Final 250C (5/min)
Condiciones de la columna
Factor Four Varian

Columna VF-5ms
(5% fenil, 95%
dimetil-polisilossano)
30 m de largo
Dimensiones 0,25 mm de dimetro
interno
0,25 m de pelcula.
43
3.6 Viabilizacin del material biolgico
Se sigui las instrucciones de uso indicadas en el catlogo de la empresa MEDIBAC

para activacin de cepas marca Microbiologics Kwik Stick Duo.
Tabla 15. Materiales, reactivos y equipos para la viabilizacin de P. acnes

2 Tubos de Propionibacterium Estufa marca

ensayo acnes ATCC Memmert
11827
2 Cajas petri 5 ml de Tripticasa

Soya Broth marca
Difco
Jarra anaerbica 25 ml de
marca Gaspak Tripticasa Soya
Agar marca Difco
2 Sobres
generadores de
CO2 marca
Gaspak,
Procedimiento:
El microorganismo a utilizar Propionibacterium acnes ATCC 11827 (American

Type Culture Collection), marca Microbiologics Kwik Stick Duo fue adquirido en
la Empresa MEDIBAC. En primer lugar se abri la envoltura y se retir el Kwik-
Stick, se removi su sello de seguridad y se extrajo el hisopo, el cual se encontraba
sumergido en un fluido hidratante, inmediatamente despus se inocul en dos cajas
petri y en un tubo pico de flauta que contenan agar estril TSA (Tripticasa Soya
Agar) marca Difco, a continuacin este hisopo fui introducido en un tubo de ensayo
44
con 5ml de caldo estril TSB (Tripticasa Soya Broth) marca Difco. Para el
crecimiento de la bacteria los tubos y las cajas petri fueron colocados en una jarra
anaerbica marca Gaspak con dos sobres generadores de CO2 marca Gaspak, e
incubados en una estufa marca Shel Lab a 37C durante 72 horas.
3.7 Determinacin in vitro de la concentracin mnima inhibitoria (CMI) del

aceite esencial mediante el mtodo de difusin en medio slido.
Para determinar la CMI del aceite esencial de hierba luisa contra P. acnes se utiliz
el mtodo de difusin en agar, que consiste en enfrentar a la bacteria a las siguientes
concentraciones de aceite esencial: 5%, 2%, 1%, 0,5%, 0,2%, 0,1%, 0,05% y 0,02%,
las cuales han sido previamente establecidas en el estudio realizado por Guerrini y
otros (2006). Dichas concentraciones fueron diludas en Dimetilsulfoxido (DMSO).
Tabla 16. Materiales, reactivos y equipos para determinar la CMI del aceite esencial
2 Tubos de ensayo con 5ml de medio Centrifugadora

tapa Tripticasa Soya marca Selecta
Broth
12 cajas petri 7 ml de solucin Vortex marca K-

fisiolgica al 0,9% gemmy
Jarra anaerbica marca Agar Nutriente Espectrofotmetro

Gaspak marca Difco Shimadzu
Discos de antibiograma Tetraciclina marca Refrigeradora

marca Whatman Bioanalyse marca Indurama
(18mg/ml)
Asa de vidrio Estufa marca

Memmert

45
Procedimiento:
3.7.1 Preparacin del inculo bacteriano
Se prepar un cultivo over night (cultivo fresco) de la cepa a utilizarse en 5 ml de

medio TSB. Al da siguiente se centrifug a 3500 RPM durante 20 minutos en una
Centrifugadora marca Selecta y se elimin el sobrenadante. Posteriormente, se
aadi 4 ml de solucin fisiolgica al 0,9% al pellet obtenido y se mezcl con ayuda
de un Vortex marca K-gemmy. Este inculo fue diluido hasta alcanzar una
absorbancia de 0,201 a una longitud de onda de 655 nm, regulando la densidad
ptica en un Espectrofotmetro marca Shimadzu, por lo tanto se obtuvo un inculo
bacteriano equivalente a 1 x 108 ufc (unidades formadoras de colonias). Se utiliz un
total de 7 ml de solucin fisiolgica al 0,9%.
3.7.2 Siembra en cajas de agar e incubacin
Cinco minutos despus de haber ajustado la densidad ptica del inculo, se tom con
una micropipeta 100 l de inculo y se procedi a sembrar en 12 placas con Agar
Nutriente marca Difco preparado segn las especificaciones del fabricante. A
continuacin, se dispers el inculo por toda la superficie del agar con la ayuda de un
asa de vidrio estril y en cada caja petri colocamos discos de antibiograma tipo
Whatmann de 6 mm de dimetro embebidos con diferentes concentraciones de aceite
esencial, el blanco positivo (Tetraciclina: 18mg/ml) y negativo (disco vaco),
presionndolos con suavidad sobre la superficie del agar con una pinza estril.
Posteriormente, se llev las cajas a un refrigerador marca Indurama por 10 minutos
para facilitar la difusin de la solucin. Las cajas fueron colocadas en posicin
invertida dentro de una jarra anaerbica marca Gaspak, la cual fue introducida en la
estufa e incubada a 37C por 72 horas. Finalmente, se midieron los halos de
inhibicin y se anotaron los resultados. Esta prueba se realiz por cuadriplicado para
garantizar un error inferior al 10% (Guerrini y otros, 2006).
46
3.8 Anlisis estadstico de la concentracin mnima inhibitoria del aceite esencial
Utilizando el Software Statistix 8.0, se determin la concentracin de aceite esencial

con mayor eficacia antibacteriana, para esto se ingres en el programa todos los
valores de dimetros de los halos de inhibicin generados por el aceite y se realiz la
prueba de Shapiro - Wilks para determinar si los datos provienen de una poblacin
con distribucin normal. Una vez comprobada la distribucin normal de los mismos,
se procedi con el anlisis de varianza de una va (ANOVA) y se plantearon las
siguientes hiptesis:
Hiptesis nula.- Las ocho concentraciones de aceite esencial de hierba luisa

utilizadas en la determinacin in vitro de la CMI, tienen promedios del dimetro
de los halos de inhibicin estadsticamente similares.
Hiptesis alternativa.- Al menos una concentracin de aceite esencial genera un

promedio del dimetro del halo de inhibicin diferente al de las otras
concentraciones de aceite.
Nivel de significancia (alfa).- 0,05
Despus de analizar los datos arrojados por el programa, se acept la hiptesis

alternativa, por lo que se realiz una prueba aposteriori (Tukey HSD All Pairwise
Comparisons Test) para determinar que concentracin gener el halo de inhibicin
diferente.
3.9 Formulacin de la locin con aceite esencial de hierba luisa
Una vez obtenidos los resultados de la CMI, se estableci que a partir del 0.05% de
aceite esencial existe actividad antibacteriana contra P. acnes, pero para la
formulacin de la locin se eligi la mayor concentracin de aceite (5%), ya que, es
la que presenta mayor halo de inhibicin y por la tanto la de mayor eficacia. Al tener
un aceite esencial como principio activo, se prepar una locin de tipo emulsin
47
aceite en agua (O/W) con el fin de obtener una locin estable. En la formulacin se
utilizaron nicamente tres excipientes: agua, propilenglicol y un emulsificante no
inico, para evitar que ms ingredientes interfieran con la actividad antibacteriana
del aceite. En la tabla 7.4 se presenta la formula unitaria de la locin para una
presentacin de 25ml:
Tabla 17. Frmula unitaria de la locin antiacneca
LOCIN ANTIACNECA
SUSTANCIA /INCI PORCENTAJE CANTIDAD
Aceite esencial Cymbopogon citratus 5% 1.25 ml
Propilenglicol / Propylene Glycol 20% 5.00 ml
Tween 80 / Polysorbate 80 25% 6.25 ml
Agua / Water 50% 12.50 ml
TOTAL 100% c.s.p. 25ml
Elaborado por: Katherine Meza y Gabriela Vargas.
48
3.10 Elaboracin de la locin con aceite esencial de hierba luisa
Tabla 18. Materiales, reactivos y equipos para elaboracin de la locin

Probeta graduada Aceite esencial
Pipeta graduada Propilenglicol
Vaso de precipitacin Tween 80
Varilla de vidrio Agua destilada
Frasco de vidrio color mbar con gotero
Procedimiento:
En la elaboracin de la locin se realiz lo siguiente:
1. Se midi con una probeta graduada, cada de uno los ingredientes de la frmula, a
excepcin del aceite esencial, para el cual se utiliz una pipeta graduada.
2. Se coloc el Propilenglicol en un vaso de precipitacin junto con el aceite esencial

y se agit con la ayuda de una varilla de vidrio.
3. Se aadi el Tween 80 sin dejar de agitar.
4. Se adicion lentamente el agua y se agit durante 5 minutos.
5. Se envas en un frasco de vidrio color mbar con gotero.
6. Se realiz los respectivos ensayos organolpticos y fsico- qumicos.
49
3.11 Anlisis organolptico y fsico qumico de la locin
Segn lo descrito en el Apartado 2.6, las pruebas analticas que forman parte del
control de calidad de los productos cosmticos son las siguientes:
Caractersticas organolpticas.- Se determin de manera sensorial, caractersticas

como: color, olor, apariencia y textura.
Densidad Relativa.- Se procedi de la misma forma que con el aceite esencial.
Viscosidad.- Se determin mediante el mtodo de Viscosmetro Rotativo

utilizando un viscosmetro marca Brookfield LV-DVE.
Tabla 19. Materiales, reactivos y equipos para determinar el ndice de refraccin de la locin.
Vaso de precipitacin 600 ml de la Viscosmetro marca

Locin Formulada Brookfield LV-DVE
Procedimiento:
Se configur el equipo a una velocidad de 12 RPM y un spin de 04. Posteriormente,

se midi 600 ml de la locin, y se coloc en un vaso de precipitacin donde se
sumergi la aguja (spin) hasta el meisco de la misma, en forma inclinada para evitar
que queden burbujas en la parte inferior, una vez dentro, se la coloc en el centro de
modo que el oleaje que produzca al girar sea el mismo en todos los puntos alrededor
del spin. Se encendi el viscosmetro y se dej que funcione libremente por 1
minuto. Al cabo de este tiempo, la pantalla mostr el valor de la viscosidad en
centipoises (cps) y se registraron los resultados.
50
Determinacin de pH.- Este ensayo fue realizado mediante el mtodo
electromtrico, para lo cual se utiliz un pH metro marca Mettler Toledo, que
indica exactamente el nivel de acidez o alcalinidad de una sustancia.
Tabla 20. Materiales, reactivos y equipos para determinar el ndice de refraccin de la locin.
Vaso de precipitacin 50 ml de la Locin pH metro marca

Formulada Mettler Toledo
Procedimiento:
Consisti en colocar 50 ml de la locin a una temperatura de 20 C en un vaso de

precipitacin, donde se sumergi el electrodo hasta que la lectura del pH se estabilice
y se visualiz el resultado.
51
3.12 Evaluacin de la actividad antibacteriana de la locin por el mtodo de
difusin en medio slido
Tabla 21. Materiales, reactivos y equipos para evaluacin antibacteriana de la locin

Micropipeta estril de 5 ml TSB Refrigerador marca

100 l Indurama
Cajas petri Solucin Fisiolgica al Estufa marca

0,9 % Memmert
Asa de vidrio Agar nutriente Centrifugadora marca

Pselecto
Pinzas estriles Frmula de la locin Vortex K-gemmy

sin aceite esencial
Discos de Aceite esencial de Espectrofotmetro

antibiograma marca Hierba luisa al 5%), Shimadzu
Whatmann
Jarra Anaerbica Locin con 5% de
GasPak aceite esencial
Pie de Rey
Tubos de ensayo con

tapa
Asa metlica
52
Procedimiento:
Fue realizada de la siguiente manera:
1. Se prepar el inculo de la bacteria siguiendo el mismo procedimiento que para el

aceite esencial sealado en el Apartado 3.7.1.
2. Se tom con una micropipeta estril 100 l del inculo y se coloc sobre la
superficie de placas de agar nutriente, ideal para el crecimiento de bacterias gram + y
se expandi el inculo con un asa de vidrio por toda la placa.
3. Se dejaron secar las cajas por 5 minutos y utilizando pinzas estriles se colocaron
3 discos con 10 l de las siguientes muestras: Locin en estudio, blanco positivo
(aceite esencial de hierba luisa al 5%), y blanco negativo (frmula de la locin sin
aceite esencial). Para facilitar la difusin de las muestras, las placas fueron llevadas a
un refrigerador marca Indurama por 10 minutos.
4. Se colocaron las cajas en posicin invertida en la jarra anaerbica GasPak para

posteriormente ser incubadas en la estufa a 37 C durante 72 horas.
5. Transcurrido este tiempo se midieron los halos de inhibicin con un pie de rey y
se anotaron los resultados.
6. Todo el procedimiento se realiz por cuadriplicado.
3.13 Anlisis estadstico de la actividad antibacteriana de la locin
El anlisis estadstico de los resultados obtenidos en la determinacin de la actividad

antibacteriana de la locin se realiz de la misma manera que con el aceite esencial,
utilizando el Software Statistix 8.0, con el objetivo de establecer diferencias entre las
medias de los halos de inhibicin que presentan las siguientes muestras: blanco
positivo (aceite esencial 5%), blanco negativo (locin si aceite esencial) y la locin
formulada. Para ello se realiz la prueba de Shapiro Wilks para determinar si los
datos provienen de una poblacin con distribucin normal. Una vez comprobada la
53
distribucin normal de los mismos, se procedi con el anlisis de varianza de una va
(ANOVA) y se plantearon las siguientes hiptesis:
Hiptesis nula.- Las muestras utilizadas en la determinacin de la actividad

antibacteriana, tienen promedios del dimetro de los halos de inhibicin
estadsticamente similares.
Hiptesis alternativa.- Al menos una de las muestras tiene un promedio del

dimetro del halo de inhibicin diferente al de las otras.
Nivel de significancia (alfa).- 0,05
Despus de analizar los datos obtenidos en el programa, se acept la hiptesis

alternativa, por lo que se realiz la prueba aposteriori (Tukey HSD All Pairwise
Comparisons Test) para determinar cul es la muestra con el dimetro del halo de
inhibicin diferente.
3.14 Evaluacin de la inocuidad drmica de la locin (test de irritabilidad)
Se demostr que la locin elaborada con 5% de aceite esencial tiene una mayor
eficacia antibacteriana in vitro, sin embargo, al ser la mxima concentracin
permisible fue imprescindible someterla a una prueba de irritabilidad con el fin de
demostrar su inocuidad drmica. Para comparar la capacidad irritante de esta locin
se formularon otras dos lociones con menores concentraciones de aceite (3% y 4%),
para ello se utiliz la tcnica del Patch Test Simple nico.
54
Tabla 22. Materiales, reactivos y equipos para el test de irritabilidad
Cinta Adhesiva Lociones

Hipoalergnica experimentales: A
(3%), B (4%), C (5%).
Papel filtro (1.5 cm x Alcohol antisptico

1.5 cm)
Algodn
Marcador permanente
Guantes Quirrgicos
Cmara fotogrfica
Cuestionarios para los

voluntarios
Cartas de
consentimiento
Escalas de evaluacin
Procedimiento:
1. Se realiz una encuesta (Anexo No.2) a 100 estudiantes para verificar que
cumplan con los criterios de inclusin y exclusin, sealados en el Apartado 2.8.1.1
y 2.8.1.2 respectivamente y puedan ser parte del estudio.
2. Una vez evaluadas las encuestas se escogi a 50 voluntarios aptos, en funcin de

la Gua para la Evaluacin de la Seguridad de productos cosmticos (2003) que
seala que el nmero mnimo de personas para este tipo de estudios es de 50.
55
3. Posteriormente todos los participantes firmaron una carta de consentimiento
(Anexo No.4) para participar voluntariamente en la prueba, la cual consisti en lo
siguiente:
Se utilizaron parches de papel filtro para anlisis cualitativo marca Whatman de

1,5 cm x 1,5 cm; fijados en la piel con cinta adhesiva hipoalergnica marca
Hansaplast.
Previo a la aplicacin de los parches la piel fue limpiada con alcohol al 96.
Las lociones con cada concentracin de aceite esencial en una dosis de 0,02 ml
aproximadamente se aplicaron en su parche respectivo.
Se aplicaron 4 parches en la superficie externa del brazo entre el hombro y el

codo con el brazo en una posicin relajada al lado del cuerpo, tres con las
diferentes concentraciones de aceite esencial y un parche solo (sin producto)
como testigo negativo, con un espacio mnimo entre los bordes de cada parche
de 2 cm.
La forma de aplicacin del parche de papel filtro se realiz desde la parte

inferior presionando de abajo hacia arriba para que salga el aire. Una vez
aplicado el parche, se hizo presin con los dedos para que la locin se distribuya
uniformemente y se apret suavemente con la palma de la mano contra el brazo
especialmente en las esquinas para asegurar una buena adherencia.
Transcurrido el periodo de prueba el parche fue retirado y 30 minutos despus se

evaluaron los resultados de acuerdo a las siguientes escalas utilizadas por el
Instituto Espaol S.A.
56
Tabla 23. Escala de evaluacin de eritema para test de irritabilidad
ERITEMA
Ausencia de eritema 0
Eritema muy ligero (apenas visible) en al 1

menos las 3/4 partes de la zona de aplicacin,
o bien visible en una superficie inferior
Eritema bien visible, repartido de manera 2

uniforme en al menos las 3/4 partes de la
zona de aplicacin
Eritema importante (rojo oscuro) 3
Eritema purprico 4
Fuente: Gonzles, 2005.
Tabla 24. Escala de evaluacin de edema para test de Irritabilidad
EDEMA
Ausencia de edema 0
Edema muy ligero y palpable en al menos las 1

3/4 de la zona de aplicacin, o bien visible en
una superficie inferior
Edema ligero (contornos netos bien definidos) 2

en al menos las 3/4 de la zona de aplicacin
Edema importante (espesor de un mnimo de 3

1 mm) en una superficie ms grande que la
zona de aplicacin
57
Tabla 25. Escala de evaluacin de ampollas para test de irritabilidad
PPULAS/VESCULAS/AMPOLLAS/PSTULAS
Ausencia de ppulas, vesculas, ampollas, 0

pstulas
Ppulas, o pequeas vesculas (menos de 1 1

mm aproximadamente de dimetro)
Vesculas de 1 a 2 mm de dimetro 2
Pstulas 3
Ampollas con lquido claro 4
Tabla 26. Escala de evaluacin de descamacin para test de irritabilidad

SEQUEDAD/DESCAMACIN
Ausencia de sequedad y de descamacin 0
Ligera sequedad = aspecto mate, en al menos 1

las 3/4 de la zona de aplicacin.
Sequedad neta = aspecto pulverulento en al 2

menos las 3/4 de la zona de aplicacin.
Descamacin moderada = aspecto de escamas 3

en al menos 3/4 de la zona de aplicacin.
Descamacin importante = presencia de 4

escamas espesas en al menos las 3/4 de la zona
de aplicacin.
58
Tabla 27. Escala de evaluacin de detergencia para test de irritabilidad
EFECTO DETERGENTE
Ausencia de rugosidad 0
Rugosidad ligera = aspecto ligeramente 1

arrugado sobre al menos 3/4 de la zona de
aplicacin.
Rugosidad neta = aspecto neto de arrugado 2

sobre al menos las 3/4 de la zona de
aplicacin, o muy arrugado (presencia de
arrugas con crestas bien marcadas) sobre una
superficie inferior a los 3/4 de la zona de
aplicacin
Rugosidad moderada = aspecto muy arrugado 3

sobre al menos las 3/4 de la zona de
aplicacin, o presencia de arrugas profundas
en una superficie inferior a los 3/4 de la zona
de aplicacin
Rugosidad importante = presencia de arrugas 4

profundas en al menos las 3/4 de la zona de
aplicacin
59
Tabla 28. Escala de evaluacin de reflectividad para test de irritabilidad
REFLECTIVIDAD
Ausencia de reflectividad 0
Ligera reflectividad = aspecto ligeramente 1

brillante en al menos las 3/4 de la zona de
aplicacin, o claramente brillante en una
superficie inferior a los 3/4 de la zona de
aplicacin
Reflectividad neta = aspecto brillante en al 2

menos las 3/4 de la zona de aplicacin,
o aspecto barniz en una superficie inferior a

los 3/4 de la zona de aplicacin
Reflectividad moderada = aspecto barniz en 3

al menos las 3/4 de la zona de aplicacin, o
aspecto helado en una superficie inferior a
los 3/4 de la zona de aplicacin
Reflectividad importante = aspecto helado, 4

fuertemente reluciente, en al menos las 3/4
de la zona de aplicacin
Para finalizar el estudio se determin el ndice de Irritacin Primaria Cutnea

(I.P.C.), mediante la siguiente frmula que corresponde a la suma ponderada de las
valoraciones de las reacciones eventualmente observadas al nivel del eritema "E", del
edema "O", de la presencia de ppulas/vesculas/ampollas/ pstulas "P", de la
sequedad/descamacin "S", del efecto detergente "D" y de la reflectividad "R",
dividida por el nmero de panelistas examinados:
60
El ndice de Irritacin Primaria Cutnea (I.P.C.) permite clasificar al producto del
modo siguiente:
Tabla 29. Clasificacin del ndice de Irritacin Primaria Cutnea

I.P.C APLICACIN
0 Muy bien tolerado
>0 y 0,5 Bien Tolerado
> 0,5 Mal tolerado

Fuente: Gonzales, 2005
3.15 Evaluacin de la eficacia cosmtica instrumental.
La presente investigacin fue de tipo instrumental, donde se emple una metodologa

no invasiva por bioingeniera para lo cual se utiliz el equipo Visiopor PP34N.
El ensayo fue realizado en el Colegio Nacional Tcnico Atahualpa, ubicado en el

Valle de los Chillos Amaguaa en 20 pacientes diagnosticados con acn grado I y
II por la dermatloga Katty Arcentales. La muestra de individuos fue determinada en
base al estudio de eficacia cosmtica realizado por Claim, (2010).
Posteriormente se les plante la posibilidad de participar en el estudio, una vez que

aceptaron ser parte del mismo, se les inform los detalles.
61
Tabla 30. Materiales, reactivos y equipos para la evaluacin de la eficacia cosmtica instrumental
Torundas de algodn Locin formulada con Visiopor PP34N

5% de aceite esencial.
Toallas Jabn lquido neutro Computador porttil

marca Simonds marca Compaq
Hoja de instrucciones Alcohol antisptico

para la aplicacin de la
locin
Cmara fotogrfica
Cuestionarios para los

voluntarios
Cartas de
consentimiento
Escalas de evaluacin
Procedimiento:
Se procedi de la siguiente manera:
En primer lugar los voluntarios llenaron una ficha con sus datos personales y
antecedentes clnicos.
Se les pidi que se laven la cara con un jabn lquido neutro marca Simonds.
La especialista realiz el diagnstico dermatolgico para determinar el tipo de

acn que corresponda a cada adolescente.
62
A continuacin se tom una fotografa del rostro de cada voluntario para facilitar
la evaluacin del mejoramiento esttico global, la cual fue realizada por la
especialista siete despus de la primera aplicacin del producto.
Posteriormente, se visualiz las porfirinas en la frente de cada uno de los

voluntarios; con la ayuda del equipo Visiopor PP34N antes del uso de la
locin, 24 horas despus y 7 das despus de la primera aplicacin y se
registraron en el software las fotografas y datos de cada paciente.
Al inicio del estudio se les proporcion 25 ml de la locin en un frasco de vidrio,

25 ml del jabn lquido neutro en un envase plstico, 7 torundas de algodn, una
toalla y una hoja con las instrucciones de uso (Anexo No.6).
Se inform a cada paciente el da y horario de cada evaluacin.
Finalmente, se tabularon los datos en funcin de la disminucin del porcentaje

de porfirinas generadas por P. acnes y la mejora esttica global en la zona
testeada, los cuales fueron evaluados por las investigadoras y la dermatloga
respectivamente.
Tabla 31. Escala de mejoramiento esttico global.
Escala de mejoramiento esttico global
Muy mejorado: Marcada mejora en la 4

apariencia con respecto a la condicin inicial,
pero no completamente ptimo.
Mejorado: Mejoramiento obvio en la 3

apariencia con respecto a la condicin inicial.
Sin cambios: La apariencia es esencialmente 2

la misma que en la condicin inicial.
Peor: La apariencia es peor que la condicin 1

inicial.
Fuente: Guevara, 2011
63
CAPTULO IV
RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS
4.1 Anlisis del material vegetal
Tabla 32. Resultados del anlisis del material vegetal.
ANLISIS PORCENTAJE
Materias extraas 4,00%
Cenizas totales 7,16 %
Cenizas solubles en 2,83 %

agua
Cenizas insolubles en 3,04 %

acido
Contenido de humedad 8,00 %
Los lmites mximos de los resultados expresados en la tabla No.4 estn basados en
las normas internacionales para las drogas vegetales (OMS, 2010).
El primer valor en la tabla es de 4% y representa el porcentaje de materias extraas,

entendindose por materias extraas a otras partes de la misma planta, otras plantas,
polvo, arena, etc.
El porcentaje de cenizas totales del material vegetal en estudio es de 7,16 %, el cual

se encuentra por debajo del lmite mximo (37,5%) e indica que el contenido total de
minerales en la muestra es mnimo.
El porcentaje de cenizas solubles en agua seala que el contenido de materia

orgnica en la muestra es de 2,83 % valor que cumple con el lmite establecido (7%).
64
El porcentaje de cenizas insolubles en cido es de 3,04 %, e indica la presencia de
arena o tierra en la muestra, valor que no sobrepasa el lmite permisible (8%).
Los parmetros establecidos por las Farmacopeas para el contenido de humedad

oscilan entre 8% - 14%; en el caso de la muestra es de 8%, aunque se encuentra
dentro de los lmites permisibles posee un valor que se acerca al lmite inferior, lo
que significa que el mtodo elegido para el secado (estufa) de la planta fue eficiente,
ya que, permiti extraer suficiente cantidad de agua de la droga (Gonzlez, 2013).
4.2 Obtencin del aceite esencial de hierba luisa
Tabla 33. Rendimiento del aceite esencial

INDICADORES 1 2 3
Peso del 18250 18250 18200

material vegetal
(g)
Cantidad de 84.5 83 82.5

aceite (ml)
Rendimiento 0.46 0.45 0.45

(%)
El rendimiento promedio del aceite esencial de las hojas de hierba luisa es de 0,45%,
lo que indica que es un valor intermedio entre los parmetros de rendimiento de
aceite esencial que se obtiene de las plantas, los cuales oscilan entre 0,01% - 10%
(Del Pozo, 2006). Adems, la similitud de rendimiento presentado por las tres
extracciones se debe a que todo el material vegetal fue proveniente de una sola
cosecha.
65
En el estudio realizado en Cuba por Soto, R (2002), seala que la concentracin
normal de aceite esencial de hierba luisa rico en citral es de 0,3% 0,5%, lo que
indica que el aceite del presente estudio cumple con esta especificacin.
4.3 Anlisis organolptico y fsico - qumico del aceite esencial
Estos anlisis permiten determinar los parmetros de calidad de un extracto o de un

aceite esencial.
Tabla 34. Resultados del anlisis sensorial del aceite esencial

ANLISIS RESULTADOS
Color Amarillo plido
Olor Fuerte olor a limn
Apariencia Translucido
Los resultados de la Tabla No. 5 muestran que el aceite en estudio presenta

caractersticas organolpticas similares a las descritas por Guerra, M. (2004) y Del
Pozo, X. (2006). En cuanto al anlisis fsico - qumico se obtuvieron los siguientes
resultados:
Tabla 35. Resultados del anlisis fsico qumico del aceite esencial
ANLISIS RESULTADOS
Densidad relativa 0,88
ndice de refraccin 1,4873
Solubilidad en agua Insoluble
Solubilidad en alcohol Soluble
66
La Norma Mexicana NMX-F-366-S-1980 (1980) seala que el aceite esencial de
hierba Luisa debe tener una densidad relativa entre 0,869 0,894, en el caso del
aceite esencial en estudio tiene una densidad de 0,88, por lo que se encuentra dentro
de los parmetros normales de calidad establecidos para los aceites esenciales. La
Norma adems indica que el aceite debe tener un ndice de refraccin entre 1,4830
1,4890, en el caso de la muestra tiene un valor de 1,4873, dicho resultado concuerda
con el anlisis realizado Del Pozo, X. (2006), lo que corrobora la pureza del aceite.
En cuanto a la solubilidad, concuerda con las caractersticas fsicas generales de los

aceites esenciales, donde se seala que son solubles en alcoholes y en disolventes
orgnicos, como ter o cloroformo y muy poco solubles en agua, pero s arrastrables
por el vapor de agua (Lpez, 2004).
Por tanto, los resultados obtenidos se encuentran dentro de los parmetros

establecidos de calidad y pureza; lo que refleja que el aceite es completamente puro.
4.3 Anlisis en cromatografa de gases y espectrometra de masas GC-MS
Tabla 36. Resultados proporcionados por el equipo de GC MS.
No. Tiempo de Nombre del Porcentaje
retencin (min) compuesto
1 11,39 - pineno 8,11%
2 35,40 - citral (Neral) 38,79%
3 39,07 - citral (Geranial) 48,64%
El aceite esencial analizado por GC-MS, tuvo un perfil cromatogrfico similar al

detallado en el marco terico. El compuesto que se encuentra en mayor proporcin es
el Citral (3,7-Dimetil-2,6-octadienal), monoterpeno compuesto por dos ismeros
geomtricos Geranial ( - citral) y Neral ( - citral), alcanzando una concentracin de
67
87,43%. A continuacin aparece el - pineno, con una concentracin de 8,11%. Los
dos compuestos dan en conjunto una composicin de 95,54%, mientras que, el
4,46% restante pertenece a compuestos con mnima concentracin y con escasa
importancia en la industria.
El Citral es el responsable del olor caracterstico del aceite y del poder antibacteriano
y antimictico que este posee, sin embargo, en varios estudios realizados con aceite
esencial de hierba luisa, se detalla que el Citral no acta solo, sino en conjunto con
todos los componentes del aceite.
Grfico 1. Cromatograma del aceite esencial de hierba luisa.
En el grfico 1 se observa el cromatograma del aceite esencial de hierba luisa, en el

cual existen dos espectros mximos y uno de gran longitud con respecto a los dems.
Cada componente necesit un tiempo de retencin para eluir del cromatgrafo de

gases; esto se debe a que cada tiempo de retencin es caracterstico para cada
68
molcula, lo que permite obtener un mayor grado de seguridad al momento de
identificar las sustancias.
Los tiempos de retencin de cada compuesto se detallan a continuacin:
Tiempo de retencin Geranial (48,64 %) = 39,07 min.
Tiempo de retencin Neral (38,79 %) = 35,40 min.
Tiempo de retencin - pineno (8,11 %) =11,39 min.
Varios estudios demuestran que el componente mayoritario del aceite esencial de

hierba luisa es el Citral con una concentracin entre 70% 85% (Castro, J y Bedoya,
I, 2006). De igual manera, Mendoza, D. (2010) en su investigacin seala que el
aceite esencial posee 76,7% de citral (41,8% de Geranial y 34,9 % de Neral).
Por lo que, el porcentaje de citral obtenido en la presente investigacin es superior a

los detallados en la bibliografa, lo que indica que el aceite en estudio es de alta
calidad, y es apto para el aislamiento de dicha sustancia.
69
4.4 Determinacin in vitro de la concentracin mnima inhibitoria (CMI) del
aceite esencial mediante el mtodo de difusin en medio slido
Tabla 37. Halos de inhibicin del aceite esencial frente a P. acnes.
Concentracin de Halos de inhibicin (mm)

aceite esencial (%)
1 2 3 4
5 16.8 17.3 17.8 17.1
2 14.9 13.8 14.1 13.9
1 11.8 12.1 11.1 12.8
0.5 9.5 9.7 8.9 9.3
0.2 8.2 8.5 8.1 7.9
0.1 7.4 7.9 7.2 7.1
0.05 6.9 7.1 6.3 6.5
0.02 0 0 0 0
BP 36.2 35.8 33.8 33.4
BN 0 0 0 0
BP: Blanco positivo; BN: Blanco negativo.

En la Tabla 8 se muestra los resultados de la CMI del aceite esencial de hierba luisa
para P. acnes. Una vez que la bacteria fue sembrada en las ocho concentraciones
preestablecidas de aceite esencial, se observa que existe inhibicin en
concentraciones de aceite esencial superiores a 0,02 %, por tanto la CMI, es la
mnima concentracin de aceite esencial que presenta halo de inhibicin, es decir,
0,05 g/ml.
70
Adems, se puede evidenciar que el blanco positivo (Tetraciclina), posee una
actividad antibacteriana notablemente alta con respecto al aceite esencial; su valor
promedio de inhibicin es de 34, 8 mm. En contraste con esto, el blanco negativo
(disco vaco) muestra ausencia de inhibicin.
Tabla 38. Categora de sensibilidad de P. acnes

Concentracin de Promedio del Categora
aceite esencial (%) Dimetro de los
Halos de Inhibicin
(mm)
BP 34,8 Altamente sensible
5 17,25 Sensible
2 14,17 Resistente
1 11,95 Resistente
0.5 9,35 Resistente
0.2 8,17 Resistente
0.1 7,40 Resistente
0.05 6,70 Resistente
La interpretacin cualitativa de los dimetros de los halos de inhibicin obtenidos

est basada segn lo expuesto en el apartado.
Como se muestra en la Tabla No. 37 el P. acnes presenta sensibilidad en una zona

de inhibicin de 17,25 mm con la concentracin al 5% de aceite esencial, mientras
que, en concentraciones del 2% - 0,05%, presenta resistencia pues posee zonas de
inhibicin menor a 15 mm.
71
En cuanto a la Tetraciclina, al ser un antibitico de amplio espectro (Medizzine,
2009), genera un mayor halo de inhibicin, lo que indica que la bacteria es altamente
sensible al mismo.
4.5. Anlisis de varianza de una va contrastando los halos de inhibicin

generados por las ocho concentraciones de aceite esencial
Los resultados presentados por Statistix 8.0 fueron:
Grfico 2. Anlisis de varianza de una va de las concentraciones de aceite esencial utilizadas en la

determinacin de la (CMI).
72
Tabla 39. Anlisis de varianza de una va de las concentraciones de aceite esencial utilizadas en la
determinacin de la (CMI).
ANALISIS DE VARIANZA DE UNA VA
Concentraciones de Aceite Promedio de los

Esencial Dimetros de los Halos
Tamao de la Muestra
(variables) de Inhibicin (mm)
BP (5% de aceite esencial) 34.80 4
5% 17.25 4
2% 14.18 4
1% 11.95 4
0.5% 9.35 4
0.2% 8.18 4
0.1% 7.40 4
0.05% 6.70 4
0.02% 0.00 4
BN (disco vacio) 0.00 4
Al tener un valor de p = 0.000, y por tanto menor al alfa = 0.05; se acepta la hiptesis
alternativa citada en el Apartado 3.8. Entonces se concluye que, al menos una de las
concentraciones de aceite esencial est generando un halo de inhibicin mucho ms
fuerte que los otros.
Para determinar cul de las concentraciones de aceite esencial est generando tal halo
de inhibicin, se realiz una prueba aposteriori (Tukey HSD All Pairwise
Comparisons Test), la cual al comparar los promedios de todos los pares posibles de
73
concentraciones de aceite esencial permite discriminar cal o cules grupos son
diferentes entre s.
Se obtuvieron los siguientes resultados:
Grfico 3. Test de Tukey de las concentraciones de aceite esencial utilizadas en la determinacin de

la (CMI).
74
Tabla 40. Test de Tukey de las concentraciones de aceite esencial utilizadas en la determinacin de la
(CMI).
TEST DE TUKEY
Concentraciones de Aceite Promedio de los Grupos Homogneos

Esencial Dimetros de los halos de
(Variables) Inhibicin (mm)
BP (5% de aceite esencial) 34.80 A
5% 17.25 B
2% 14.18 C
1% 11.95 D
0.5% 9.35 E
0.2% 8.18 EF
0.1% 7.40 FG
0.05% 6.70 G
0.02% 0.00 H
BN (disco vacio) 0.00 H
Como se observa hay 8 grupos de concentraciones de aceite esencial

estadsticamente afines entre s, por tanto, tambin afines en su eficacia
antibacteriana in vitro contra P.acnes.
Sin duda, el blanco positivo (Tetraciclina) tiene mayor eficacia antibacteriana

que el resto de sustancias.
La concentracin ms eficaz de aceite esencial es al 5%, seguido de la

concentracin al 2% y al 1%.
75
La concentracin al 0,5% y al 0,2% tienen eficacias muy similares entre s.
Las concentraciones al 0,2% y 0,1% tienen eficacias muy similares entre s.
Las concentraciones al 0,1% y 0,05% tienen eficacias muy similares entre s.
La concentracin de aceite al 0,02% y el blanco negativo (disco vaco) tienen

valores iguales entre s, ya que, no generaron inhibicin.
4.6 Anlisis organolptico y fsico - qumico de la locin de hierba luisa
Tabla 41. Resultados del anlisis organolptico de la locin.
ANLISIS RESULTADOS
Color Amarillo plido
Olor Caracterstico
Apariencia Opaco, Homogneo
Textura Ligeramente pegajoso
Tabla 42. Resultados del anlisis fsico qumico de la locin.
ANLISIS RESULTADOS
Densidad relativa 1.02
Viscosidad aparente 8.0 cps
pH 5.6
Al igual que en el aceite esencial, estos anlisis permiten determinar los parmetros
de calidad del producto. La locin elaborada no tiene estndares de referencia, ya
76
que, posee valores caractersticos, sin embargo, se la puede comparar con valores
obtenidos en productos cosmticos. En un estudio realizado por Troncoso, M y otros
(2010) en el cual se elabor una locin a base de Mangifera indica y Psidium
guayava, se obtuvo un valor de pH aproximado a 6; mientras que, la locin
formulada en la presente investigacin es de 5.6, que va acorde con el rango de pH
normal de la piel 5.5 6.5, valor idneo, puesto que, al ser ligeramente cido no
puede atacar al tejido cutneo y no causa trastornos en la piel (Vsquez, 2008).
Por otro lado, Castro, C (1973) en su investigacin seala los siguientes valores
tericos de las propiedades fsico - qumicas en productos cosmticos: densidad (0,9
g/ml 1,01 g/ml) y viscosidad (4.000 cps 18.000 cps). Por tanto, al comparar la
locin del presente estudio con dichas investigaciones, se evidencia que los valores
obtenidos de densidad (1,02 g/ml) y viscosidad (8.0 cps) se encuentran dentro de los
rangos aceptables.
4.7 Actividad antibacteriana de la locin
Tabla 43. Actividad antibacteriana de la locin.

Halos de inhibicin (mm)
INDICADORES 1 2 3 4
BP: Aceite esencial 5% 17.0 15.4 14.8 15.5
BN: Locin sin aceite esencial 0 0 0 0
Locin formulada con 5% de 16.2 13.8 14.1 15.2

aceite esencial
77
En la tabla 10, se muestran los resultados de los halos de inhibicin (mm) que
present la locin elaborada y el blanco positivo (aceite esencial al 5%) y negativo
(locin sin aceite esencial). Se evidencia que la locin y el blanco positivo presentan
halos de inhibicin similares, un valor promedio de 14,83 mm y 15,68 mm,
respectivamente. En contraste, el blanco negativo no presenta ningn halo inhibicin,
esto debido a que no posee ningn excipiente con actividad antibacteriana; lo que
demuestra evidentemente que el aceite esencial de hierba luisa es la sustancia que
inhibe el crecimiento de la bacteria.
4.8 Anlisis de varianza de una va contrastando los halos de inhibicin

generados por la locin sin aceite, locin formulada y el aceite esencial al 5%.
Los resultados presentados por Statistix 8.0 fueron:
Grfico 4. Anlisis de varianza de una va de la del BP (aceite esencial al 5%), BN (locin sin aceite)
y locin formulada.
78
Tabla 44. Anlisis de varianza de una va de la del BP (aceite esencial al 5%), BN (locin sin aceite)
y locin formulada.
ANALISIS DE VARIANZA DE UNA VA
Concentraciones de Aceite Promedio de los Tamao de la Muestra

Esencial Dimetros de los halos de
(Variables) Inhibicin (mm)
BP (5% de aceite esencial) 15.68 4
Locin con 5 % de aceite 14.83 4

esencial
BN (Locin sin aceite) 0.00 4
Al tener un valor de p = 0.000, y por tanto menor al alfa = 0.05; se acepta la hiptesis
alternativa citada en el Apartado 3.12.
Con estos resultados se puede concluir que, al menos una muestra est generando un
halo de inhibicin mucho ms fuerte que la otra.
Para determinar que muestra est generando tal halo de inhibicin, se realiz la
prueba aposteriori (Tukey HSD All Pairwise Comparisons Test). Se obtuvieron los
siguientes resultados:
79
Grfico 5. Test de Tukey del BP (aceite esencial al 5%), BN (locin sin aceite) y locin formulada.
Tabla 45. Test de Tukey de las concentraciones de aceite esencial utilizadas en la determinacin de la
(CMI).
TEST DE TUKEY
Concentraciones de Aceite Promedio de los Grupos Homogneos

Esencial Dimetros de los Halos
(Variables) de Inhibicin (mm)
BP (5% de aceite esencial) 15.68 A
Locin con 5 % de aceite 14.83 A

esencial
BN (Locin sin aceite) 0.00 B
Como se muestra en la Tabla No.33 existen 2 grupos en los cuales sus promedios son
similares; el primer grupo est conformado por el blanco positivo y la locin
formulada, mientras que el segundo grupo de datos pertenece al blanco negativo.
Entonces, se concluye que:
80
La locin formulada y el blanco positivo (aceite esencial al 5%) tienen eficacias
antibacterianas in vitro contra P.acnes. muy similares entre s.
El blanco negativo (locin elaborada sin aceite esencial) evidentemente refleja

que no produjo inhibicin.
4.9 Test de irritabilidad de las lociones formuladas
Despus de la aplicacin nica de tres lociones formuladas con diferentes

concentraciones de aceite esencial (3%, 4% y 5%) bajo parches oclusivos sobre la
piel del antebrazo, durante 48 horas consecutivas en 50 voluntarios adultos, se
procedi con la evaluacin macroscpica de las siguientes reacciones: eritema (E),
edema (O), reflectividad (R), ppulas/vesculas/ampollas/ pstulas (P),
sequedad/descamacin (S) y detergencia (D), cada una con su respectiva escala de
evaluacin detallada en el Apartado 3.13.
81
Tabla 46. Registro de resultados de los voluntarios sometidos al test de irritabilidad
LOCIONES
A B C D
Reflectividad
Reflectividad
Reflectividad
Reflectividad
Detergencia
Detergencia
Detergencia
Detergencia
VOLUNTARIOS GNERO
Sequedad
Sequedad
Sequedad
Sequedad
Ampollas
Ampollas
Ampollas
Ampollas
Eritema
Eritema
Eritema
Eritema
Edema
Edema
Edema
Edema
1 Altamirano Freddy 5 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
2 Arcos Gabriel 5 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
3 Aucapia Cristina 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0
4 Cabadiana David 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
5 Caisapanta Ricardo 5 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
6 Campaa Andrea 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
7 Carlozama Andres 5 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
8 Carrasco Omar 5 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0
9 Cazar Margarita 10 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
10 Chasipanta Eliana 10 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
11 Coronel Daniel 5 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
12 Coronel Johanna 10 1 0 0 2 1 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 1 2 0 0 0 0 0 0 0
13 Cuenca Pal 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
14 Echeverra Andrea 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
15 Flores Mauricio 5 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
16 Fuertes Jacqueline 10 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
17 Gonzalez Abigail 10 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
18 Guayasamn Myrian 10 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
19 Guerrero Priscila 10 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
20 Heredia Katherine 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
21 Jacome Cristian 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
22 Lara Nathaly 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
23 Lpez Pal 5 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
24 Lozada Antonia 10 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
25 Masaquiza Jess 5 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
26 Mena Fernando 10 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
27 Molina Estefania 10 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0
28 Muoz Stalin 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
29 Navarrete Cristian 5 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
30 Nieto Viviana 10 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0
31 acato Carolina 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
32 Ortiz Lizeth 10 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
33 Peralta Natalia 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
34 Pinto Wilmer 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0
35 Ponce Christian 5 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
36 Quelal Alex 5 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
37 Ramos Diana 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
38 Salas Jenny 10 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
39 Salazar Gabriel 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
40 Suasnavas Byron 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
41 Vaca Lisseth 10 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
42 Valdez Santiago 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
43 Valencia Ma. Fernanda 10 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
44 Valladares Priscila 10 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
45 Valle Estefania 10 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
46 Vazquez Tatiana 10 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
47 Vega Andrea 10 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
48 Verdugo Karla 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
49 Villamarn Adrian 5 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
50 Yugsi Elizabeth 10 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
A: Locin con 5% de Aceite esencial; B: Locin con 4% de Aceite esencial; C: Locin con 3% de
Aceite esencial; D: Blanco
82
Una vez obtenidos los valores individuales de cada voluntario con respecto a las
reacciones producidas por las lociones ensayadas, se obtuvo el ndice de Irritacin
Primaria Cutnea (I.P.C.) mediante la frmula indicada en el Apartado 3.13.
Tabla 47. Valores de los ndices de irritacin primaria cutnea de las tres lociones.
LOCIN I.P.C APLICACIN
A (5% aceite) 0.49 Bien tolerado
B (5% aceite) 0.46 Bien tolerado
C (5% aceite) 0.47 Bien tolerado
Los I.P.C. de las lociones en estudio estn entre >0 y 0,5, por lo que son calificadas
como BIEN TOLERADAS (Ver en el Apartado 3.13). Esto demuestra que ninguna
locin produce una significativa reaccin de irritacin debido a una intolerancia
cutnea, lo que indica que la locin con mayor concentracin de aceite esencial (5%)
es igual de inocua que las otras, por lo que puede ser empleada con seguridad en el
estudio de eficacia in vivo.
4.10 Estudio de eficacia cosmtica instrumental
4.10.1 Evaluacin instrumental
Tras la aplicacin puntual de la locin con 5% de aceite esencial de hierba luisa en

las lesiones de acn durante 7 das consecutivos, se cuantific la cantidad de
porfirinas al inicio, 24 horas despus y al final del estudio en voluntarios
adolescentes con la ayuda del equipo Visiopor PP34N.
83
Tabla 48. Disminucin del porcentaje de porfirinas generadas por P. acnes despus de la aplicacin
de la locin.
PORCENTAJE DE DISMINUCIN DE PORFIRINAS
EVALUACION %
EVALUACION EVALUACION DIS MINUCIN
A LOS 7 DAS DIS MINUCIN
No VOLUNTARIO INICIAL A LAS 24h (No.
(No.
DE
DE
(No. Porfirinas) Porfirinas) PORFIRINAS
Porfirinas) PORFIRINAS
1 Amagua Cinthia 7 5 2 5 71,4
2 Bravo Yulissa 8 3 1 7 87,5
3 Belitama Fernando 4 2 0 4 100,0
4 Caiza Cristian 5 2 1 4 80,0
5 Chasipanta Ana 4 0 0 4 100,0
6 Farfan Michelle 1 0 0 1 100,0
7 Guachamin Jairo 10 3 3 7 70,0
8 Gualotua Fabricio 12 7 3 9 75,0
9 Guanotoa Pamela 4 2 2 2 50,0
10 Imbaquinga Brian 1 0 0 1 100,0
11 Imbaquinga Jimmy 1 0 0 1 100,0
12 Iza Fernando 1 0 0 1 100,0
13 acato Franklin 20 0 0 20 100,0
14 ato Miguel 15 0 0 15 100,0
15 Poveda Diego 1 1 0 1 100,0
16 Quionez Brian 1 1 0 1 100,0
17 Sanchez Darwin 2 0 0 2 100,0
18 Santamaria David 14 10 4 10 71,4
19 Suntaxi Danny 9 7 5 4 44,4
20 Viracocha Maritza 3 0 0 3 100
87,5
En la Tabla No. 46 muestra una notable disminucin de porfirinas desde la primera

aplicacin de la locin formulada, teniendo como mximo porcentaje de disminucin
el 100%, un mnimo de 44.4%, y un promedio total del 87.5% entre todos los
adolescentes evaluados; estos datos revelan la efectividad antibacteriana de la misma
contra P. acnes.
84
Grfico 6. Disminucin del porcentaje de porfirinas en los voluntarios.
Como se muestra en el Grfico No.6 existe un 60% de personas con 100% de

disminucin de porfirinas, el 30% con valores de disminucin entre los rangos de
90% - 70% y el 10% restantes entre los valores de 60% 40%. Por lo tanto, el 90%
de las personas tuvieron una disminucin significativa de porfirinas, con un valor
superior al 70%.
85
4.10.2 Evaluacin dermatolgica al inicio y al final del estudio de eficacia
cosmtica instrumental
Tabla 49. Grado de acn de los voluntarios participantes en el estudio de eficacia instrumental
No NOMBRE EDAD GRADO DE ACN

1 Amagua Cinthia 15 II
2 Bravo Yulissa 15 II
3 Belitama Fernando 17 II
4 Caiza Cristian 15 II
5 Chasipanta Ana 15 I
6 Farfan Michelle 14 I
7 Guachamn Jairo 18 II
8 Gualotua Fabricio 19 I
9 Guanotoa Pamela 14 II
10 Imbaquinga Brian 16 II
11 Imbaquinga Jimmy 18 II
12 Iza Fernando 18 II
13 acata Franklin 17 II
14 ato Miguel 19 I
15 Poveda Diego 18 II
16 Quionez Brian 14 II
17 Sanchez Darwin 17 I
18 Santamaria David 15 I
19 Suntaxi Danny 15 I
20 Viracocha Maritza 16 I
La dermatloga diagnostic el grado de acn que presentaba cada uno de los

adolescentes que formaron parte del estudio. La categorizacin dermatolgica fue
realizada en funcin de las caractersticas que identifican a cada tipo de acn, en
casos de acn Grado I se observ la presencia de comedones abiertos, mientras que
en acn Grado II se pudo visualizar comedones, ppulas y pstulas. La Tabla No. 47
indica el grado de acn que present cada voluntario.
86
Grfico 7. Porcentaje de adolescentes con acn grado I y II.
El grfico No. 7 muestra que el 60% del total de adolescentes evaluados presentaron
acn grado II, mientras que, el 40% acn grado I.
Grfico 8. Porcentaje de adolescentes de gnero masculino y femenino
El grfico No.8 indica que del total de adolescentes evaluados el 70% fueron
hombres, mientras que, el 30% mujeres. Al finalizar el estudio de eficacia cosmtica
instrumental la dermatloga evalu la mejora esttica de los adolescentes mediante
87
la escala de mejoramiento esttico global sealada en el Apartado 3.14. Esta
evidenci que el 100% de las personas evaluadas no presentaron mejora a nivel
esttico, es decir, su apariencia fue exactamente la misma que al inici del estudio,
por lo que fueron clasificadas como: SIN CAMBIOS. Dichos resultados son
razonables, ya que, para observar una notable mejora esttica se requiere de un
tiempo prolongado y por lo tanto, de otro tipo de estudio como es el eficacia
cosmtica de tipo clnico.
4.11 Anlisis multivariado - Community Analysis Program (CAP) contrastando

la disminucin de porfirinas con varios factores como hbitos alimenticios, edad
y gnero de los voluntarios del estudio de eficacia instrumental
Tabla 50. Hbitos alimenticios y txicos de los voluntarios que participaron en el estudio de eficacia
cosmtica instrumental
FRECUENCIA DE CONSUMO
No VOLUNTARIO GNERO EDAD
Grasas Alcohol Tabaco Caf
1 Belitama Fernando M 17.5 A veces Nunca Nunca A veces
2 Caiza Cristian M 16 Siempre Nunca A veces Siempre
3 Guachamn Jairo M 19 A veces A veces A veces A veces
4 Gualotua Fabricio M 19 A veces A veces Nunca Nunca
5 Imbaquinga Brian M 17 A veces Nunca Nunca A veces
6 Imbaquinga Jimmy M 15.5 A veces Siempre A veces A veces
7 Iza Fernando M 19 A veces A veces A veces A veces
8 acata Franklin M 18 Siempre A veces Nunca Nunca
9 ato Miguel M 19 A veces A veces Nunca A veces
10 Poveda Diego M 18 Siempre Nunca Nunca A veces
11 Quionez Brian M 15 A veces Nunca Nunca A veces
12 Sanchez Darwin M 17.4 A veces A veces A veces A veces
13 Santamaria David M 16 A veces A veces Nunca Siempre
14 Suntaxi Danny M 16.5 A veces A veces Nunca Siempre
15 Amagua Cinthia F 16 A veces A veces Nunca Siempre
16 Bravo Yulissa F 16 A veces Nunca Nunca Nunca
17 Chasipanta Ana F 15.3 A veces Nunca Nunca A veces
18 Farfan Michelle F 15 A veces Nunca Nunca A veces
19 Guanotoa Pamela F 16 A veces Nunca Nunca Siempre
20 Viracocha Maritza F 17 A veces Nunca Nunca A veces
Masculino, F: Femenino
88
La Tabla No. 48 muestra la frecuencia de consumo de comida grasa, alcohol, tabaco
y caf de las personas que participaron en el estudio de eficacia cosmtica
instrumental, sin embargo, no refleja valores medibles, ya que, no se asignaron
valores cuantitativos, y se utilizaron nicamente indicadores cualitativos como
Siempre, A veces y Nunca.
Grfico 9. PCA Plot de disminucin de porfirinas, gnero, edad y hbitos alimenticios de los
voluntarios del estudio de eficacia instrumental.
Con el objetivo de detectar la tendencia de consumo y determinar la relacin

subjetiva existente entre la disminucin de porfirinas y diferentes factores como la
edad, gnero, hbitos alimenticios y txicos de los voluntarios que formaron parte
del estudio de eficacia instrumental in vivo, se realiz el anlisis multivariado
utilizando el software Community Analysis Package (CAP).
89
El Grfico No.8 indica claramente la relacin antagnica que existe entre la
disminucin de porfirinas y el consumo de caf, ya que, los vectores se encuentran
en sentidos opuestos; esto indica que los voluntarios que consumieron
frecuentemente esta bebida tienen tendencia a presentar menor porcentaje de
disminucin de porfirinas despus del tratamiento con la locin, esto puede ser
debido a que el caf provoca inflamacin en la piel, lo que favorece el desarrollo de
P. acnes (Alimentacin Sana, 2013).
Los factores como gnero y edad son independientes de la disminucin de porfirinas

en los adolescentes, ya que, los vectores no tienen una correlacin positiva ni
negativa. En cuanto al consumo de grasas, tampoco influyen en la disminucin de
porfirinas; esto ratifica lo explicado por la dermatloga, quien indic que la
alimentacin no interviene directamente en la aparicin del acn.
El consumo de tabaco y alcohol tienen una leve correlacin negativa con la

disminucin de porfirinas, es decir, las personas con estos hbitos txicos tuvieron
una menor tendencia de disminucin, pero no tan significativa como los adolescentes
que consumieron caf.
90
CONCLUSIONES
De acuerdo a los resultados obtenidos en la presente investigacin se puede concluir

que:
Al realizar la evaluacin de la actividad antibacteriana in vitro del aceite esencial

de hierba luisa contra Propionibacterium acnes, utilizando concentraciones
desde 0.02% a 5% de aceite se determin que existe inhibicin desde la
concentracin al 0,05% hasta la concentracin del 5%. Por tanto, la
concentracin mnima inhibitoria (CMI) del aceite esencial es 0.05 g/ml.
De acuerdo con el anlisis estadstico realizado mediante el anlisis de varianza

de una va y test de tukey, la concentracin de aceite esencial que posee mayor
eficacia antibacteriana es al 5%, pues presenta un halo de inhibicin superior al
de las dems concentraciones. Por tal motivo, fue la concentracin elegida para
la posterior formulacin y elaboracin de la locin.
A pesar de que estadsticamente la concentracin de aceite esencial elegida para

la formulacin es de 5%, esta representa un porcentaje alto, lo que podra
producir sensibilidad cutnea tras su aplicacin. Basndonos en estudios de
formulaciones naturales con aceites esenciales, se decidi trabajar con tres
lociones que contengan aceite en concentraciones de 3%, 4% y 5% para
someterlas a una prueba de irritabilidad y en funcin de los resultados decidir el
porcentaje final del aceite en la formulacin.
Al realizar el test de irritabilidad (Patch Test Simple nico) se demostr que las
tres lociones formuladas con 3%, 4% y 5% de aceite esencial son Bien
Toleradas, ya que, su ndice de Irritacin Primaria Cutnea est entre >0 y
0,5, es decir, no provocaron ninguna reaccin alrgica en la zona de la piel
testeada y por tanto son inocuas al contacto drmico.
En la evaluacin de la actividad antibacteriana in vitro de la locin formulada

frente a P. acnes, los resultados presentaron una inhibicin similar a la del aceite
91
esencial al 5%; con valores muy cercanos; 14,83 mm y 15,68 mm,
respectivamente. Al contrario, en la locin sin aceite esencial no se observ
inhibicin, lo que permiti comprobar que el nico compuesto responsable de la
actividad antibacteriana en la locin, es el aceite esencial.
Para el estudio de eficacia cosmtica instrumental se emple la locin con mayor

concentracin de aceite esencial (5%) con el fin de obtener mejores resultados;
sin embargo, desde el punto de vista industrial est sera una desventaja, pues
implicara altos costos de fabricacin; por lo que sera interesante analizar la
posibilidad de desarrollar una forma cosmtica con concentraciones de aceite
esencial de 3% y 4%, dada la actividad antibacteriana que poseen.
En el estudio de eficacia in vivo con la ayuda del equipo Visiopor PP34N, se

confirm la elevada actividad antibacteriana de la locin contra P. acnes, ya que,
se observ una significativa disminucin de porfirinas en todos los adolescentes
voluntarios que fueron parte del estudio.
La evaluacin del mejoramiento esttico global por parte de la dermatloga,

demostr que los participantes no tuvieron ninguna mejora clnica y
permanecieron igual que al principio del estudio. Esto se debe a diversas causas,
tales como: la corta duracin del estudio, varios factores difciles de controlar
como la higiene personal, cambios hormonales, edad, gnero, antecedentes
hereditarios, entre otros.
Segn el anlisis multivariado de los datos de la historia clnica de los

Voluntarios para el estudio de eficacia cosmtica, al contrastar la disminucin de
porfirinas con diferentes factores como gnero, edad, hbitos alimenticios y
txicos; se observ mediante la interpretacin del PCA Plot que la accin
antibacteriana de la locin tiende a disminuir en las personas que consumen
frecuentemente caf, provocando una reduccin menor en el porcentaje de
porfirinas; mientras que, el consumo frecuente de grasas no interviene
directamente en la reduccin de las mismas.
92
Concluida la investigacin sobre la evaluacin antibacteriana del aceite esencial
de hierba luisa en la locin formulada, se afirma la hiptesis alternativa, ya que,
existe inhibicin in vitro e in vivo contra Propionibacterium acnes, principal
bacteria causante del acn.
93
RECOMENDACIONES
Elaborar diferentes formas cosmticas de carcter oleoso como cremas,

seleccionando varios excipientes que podran mejorar las caractersticas
organolpticas o incluso influir sobre la solubilidad relativa de la formulacin y
en consecuencia sobre la absorcin percutnea de los ingredientes activos, lo que
permitir conseguir una mejora esttica en personas afectadas con esta patologa
cutnea; considerando que en este estudio se utiliz una mnima cantidad de
excipientes para no producir interferencia y comprobar nicamente la actividad
del aceite.
Realizar un estudio de estabilidad acelerada y a largo plazo de ulteriores formas

cosmticas a desarrollarse, utilizando como principio activo aceite esencial de
hierba luisa, ya que, el Instituto de Salud Pblica de Chile seala que es
indispensable en todo proceso de investigacin y debe hacerse a todo producto
cosmtico que ser puesto a disposicin de la poblacin, con el fin de determinar
el tiempo durante el cual mantiene sus especificaciones de calidad.
Realizar un estudio de eficacia cosmtica clnica, con una duracin mnima de

tres meses, bajo control dermatolgico y con un panel entrenado, con la
consecucin de una frmula cosmtica que demuestre una efectividad completa.
Al determinar una diferencia en el porcentaje de disminucin de porfirinas entre

los adolescentes en relacin a sus hbitos alimenticios y txicos como el
consumo de grasas, caf, tabaco y alcohol; sera interesante realizar un estudio
riguroso en funcin de esto, considerando un mayor nmero de variables que
permitan obtener resultados con mayor nivel de significancia estadstica.
94
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104
ANEXOS
Anexo 1. Fotografas de la investigacin
Figura 1. Hojas de hierba luisa Figura 2. Aceite esencial de hierba luisa

Figura 3. Activacin de P. acnes

Figura 4. Crecimiento de la bacteria
105
Figura 5. Concentraciones de Aceite esencial
Figura 6. Pellet en 5ml de TSB Figura 7. Jarra anaerbica
106
Figura 8. Cajas petri con discos impregnados de aceite esencial
Figura 9. Actividad antibacteriana del aceite esencial
107
Figura 10. Realizacin de encuestas para el test de irritabilidad
Figura 11. Firma de la carta de consentimiento para formar parte del test de irritabilidad
108
Figura 12. Aplicacin de parches para Test de irritabilidad
Figura 13. Evaluacin de resultados del test de irritabilidad
109
Figura 14. Frasco 25 ml de Locin Figura 15. Actividad antibacteriana de la locin
Figura 16. Locin formulada, jabn, algodn e instrucciones para Eficacia in vivo
110
Figura 17. Visualizacin de porfirinas mediante el equipo Visiopor PP34N
Danny Suntaxi
Fecha: 26-Febrero - 2013
Figura 18. Porfirinas antes de la aplicacin de la locin
111
Danny Suntaxi
Fecha: 27 Febrero - 2013
Figura 19. Porfirinas despus de la primera aplicacin de la locin
Danny Suntaxi
Fecha: 5 Marzo - 2013
Figura 20. Porfirinas al final del estudio
112
Danny Suntaxi Fecha: 26-Febrero-2013
Figura 21. Lesiones de acn al inicio del estudio
Danny Suntaxi Fecha: 5-Marzo-2013
Figura 22. Lesiones de acn al final del estudio
113
Anexo 2. Encuesta de seleccin de participantes para el test de irritabilidad
CUESTIONARIO PARA LAS PERSONAS VOLUNTARIAS PREVIO A LA

EVALUACIN
NOMBRE: .. EDAD:
PREGUNTAS
1. Con qu frecuencia ha acudido al mdico en este ltimo ao?

Cada mes Cada 3 meses Cada 6 meses
Una vez al ao
SI NO
2. Est en estado de gestacin o dando de lactar?

3. Hace uso de un medicamento tpico o sistmico (va oral o inyectable)?
Cul?
5. Es alrgico a algn medicamento o producto tpico?
Cul?
6. Tiene alguna enfermedad dermatolgica como psoriasis, eczema u otro tipo de
erupciones?
Cul?
7. Marque el tipo de piel que corresponda a la suya
I.- Piel blanca plida II.- Piel blanca
III.- Piel triguea clara IV.- Piel triguea
8. Se encuentra su piel intacta en la parte lateral del brazo izquierdo entre el hombro
y el codo?
9. Tiene alguna marca o posibles reacciones cutneas en la zona indicada en la

pregunta anterior como: desordenes de pigmentacin, malformaciones vasculares,
114
escaras, pilosidad aumentada, quemaduras solares, etc.?
11. Ha sido sometido a algn trasplante de rgano?

12. Tiene auto-reconocimiento de piel sensible?
13. Ha usado esteroides tpicos o sistmicos y/o antihistamnicos por al menos 7
das antes del inicio del estudio o se est aplicando cualquier medicamento en el sitio
de aplicacin del parche?
14. Presenta asma severa o algn tipo de alergia respiratoria?

15. Padece de diabetes y est tomando insulina?
16. Tiene planes de exposicin intensa a la luz solar o a sesiones de bronceado
durante la semana del 4 al 8 de febrero?
17. Tiene planes de bao en el mar, ir a la piscina o al sauna durante la semana del 4
al 8 de febrero?
ESPACIO RESERVADO PARA EL INVESTIGADOR

El voluntario es aceptado para la evaluacin? SI NO
--------------------------------
Firma del investigador
Fecha:
115
Anexo 3. Ficha de informacin bsica de los voluntarios a participar en el test
de irritabilidad.
Ficha No.
FICHA PERSONAL DEL VOLUNTARIO
Nombre
Apellido Paterno Apellido Materno Nombres
Fecha de
Lugar: Edad:
Nacimiento:
Da/Mes/Ano
No.
Estado
Sexo Cargas
Civil:
familiares:
Masculino Femenino
E-mail:
Telf. casa: Celular
Direccin
Domicilio:
116
Anexo 4. Carta de consentimiento de los voluntarios para el test de irritabilidad
CONSENTIMIENTO INFORMADO DE PARTICIPACIN EN UN

PROYECTO
DE INVESTIGACIN
TTULO DEL PROYECTO
TEST DE IRRITABILIDAD - METODO PATCH TEST SIMPLE UNICO.
EQUIPO DE INVESTIGADORES
Nosotros, Katherine Lourdes Meza Angos y Gabriela Geoconda Vargas Duque,

investigadoras egresadas de la Facultad de Ingeniera en Biotecnologa, asesoradas
por la Ing. Tatiana de los ngeles Mosquera Tayupanta, Directora del CIVABI,
solicitamos a usted su colaboracin para la realizacin de ste trabajo de
investigacin. Le pedimos entender todos los pasos en detalle y, si est de acuerdo,
firmar el consentimiento informado
INTRODUCCIN / PROPSITO
En el presente estudio pretendemos establecer la capacidad de una locin emulsin

para causar irritacin alrgica y/o sensibilizacin, siendo esto de gran importancia
para que los fabricantes puedan asegurar que sus productos sean "no irritantes" para
el usuario y prevenir daos a la salud.
Los propsitos del estudio de investigacin son:
Determinar mediante el contacto epidrmico nico la capacidad potencial del

producto en estudio para inducir irritacin primaria o sensibilizacin alrgica
por contacto.
117
Evaluar el riesgo de irritacin primaria o sensibilizacin alrgica por contacto
de tres lociones con diferente concentracin de aceite esencial de hierba luisa
despus de una aplicacin nica, sobre la superficie externa del brazo bajo
patch test.
Demostrar la inocuidad drmica de las lociones con sus respectivas
concentraciones de aceite esencial.
PARTICIPACIN
Su participacin es completamente voluntaria y puede retirarse en el momento que

usted lo decida. Su participacin en el estudio se inicia con el llenado de una
encuesta, la cual ser evaluada y se verificar que cumpla los criterios de inclusin
para participar en el estudio.
Usted puede retirarse de la investigacin en cualquier momento, si lo desea o as lo
requiere, a discrecin del investigador y sin que el cese de su participacin est sujeta
a castigo alguno o recorte de sus derechos.
PROCEDIMIENTO
El estudio inicia con el llenado de la encuesta, para verificar si es un voluntario apto

para el estudio, dichas personas debern firmar una carta de consentimiento para
participar voluntariamente en la prueba. Previo a la aplicacin de los parches la piel
ser limpiada con alcohol. Luego se aplican tres parches en los cuales se colocarn
las lociones con 3, 4 y 5% de aceite esencial en una dosis de 0,02 ml
aproximadamente en la superficie externa del brazo, adems se aplicar un parche
solo (sin producto) como testigo negativo. Finalmente se debe esperar 48 horas para
retirar los parches y se espera 30 minutos para realizar el examen macroscpico y
registrar los resultados.
RIESGOS / INCOMODIDADES
El voluntario deber informar cualquier molestia o incomodidad que pueda surgir

durante la evaluacin del producto, el encargado del estudio evaluar al voluntario.
118
No debe mojar el parche durante el perodo de aplicacin. Si usted cambia alguno de
sus hbitos, le pedimos que nos mantenga informados, de manera que podamos
interpretar mejor los resultados.
No haga uso de algunos productos (desodorantes o antitranspirantes, talco en polvo,

aceite de bao, cremas, lociones, perfumes, colonias y medicacin tpica) en reas
cercanas a los sitios de estudio. Si usted usa alguno de estos productos o si toma
medicacin sistmica, por favor, hganoslo saber.
Todas las materias primas utilizadas en el producto estn aprobadas para uso tpico y
no son txicas. Sin embargo, de igual manera que con otros productos, pueden causar
inesperadas reacciones como enrojecimiento, hinchazn, picor y escozor en
los sitios de aplicacin del producto; en caso de intenso escozor u otros signos
fuertes de irritacin, por favor, infrmenos inmediatamente, contactndonos va
telefnica al 0983359724 / 0992934306.
PROBLEMAS O PREGUNTAS
Si usted tuviese preguntas adicionales durante el desarrollo de este estudio, acerca de

la investigacin o sus derechos como participante en la investigacin, puede dirigirse
a:
Ing. Ing. Tatiana Mosquera T.
Directora CIVABI.
Universidad Politcnica Salesiana
Tel.: (593-2)39628979
Celular: 095400925
CONSENTIMIENTO / PARTICIPACIN VOLUNTARIA
Su participacin es completamente voluntaria, puede consultar con otras personas

(familiares, mdico o aquella que usted crea conveniente para poder participar en
este estudio) y puede retirarse en el momento que usted lo decida.
119
Una copia de este documento se mantendr en posesin de los investigadores
responsables, y otra ser entregada al sujeto voluntario.
HE LEIDO Y COMPRENDIDO EL PRESENTE DOCUMENTO. HE QUEDADO

SATISFECHO/A Y MIS PREGUNTAS HAN SIDO RESPONDIDAS.
YO, VOLUNTARIAMENTE Y SIN PRESIN ALGUNA, ACEPTO MI
PARTICIPACIN EN EL PRESENTE ESTUDIO.
Quito, . . . . . . . . de . . . . . . . . . . . . de 2013
...
Firma del Participante
Apellidos y Nombres del Participante
...
Firma del Investigador Responsable
Ing. Tatiana de los ngeles Mosquera Tayupanta
Directora del CIVABI
...
...
120
Anexo 5. Historia clnica de los voluntarios para el test de eficacia cosmtica
Ficha No.
FICHA PERSONAL DEL VOLUNTARIO
Nombre
Apellido Paterno Apellido Materno Nombres
Fecha de Lugar de
Edad
Nacimiento nacimiento
Da/Mes/Ano
Ocupacin
Estado No. Cargas

Sexo
Civil familiares
Masculino Femenino
Nivel de
Instruccin
Primaria Secundaria Superior Ninguna
Nivel
econmico
Alto Medio Bajo
E-mail
Telf. Casa Celular
Barrio
121
Direccin
Domicilio
Referencia
HBITOS ALIMENTICIOS Y TXICOS
Frecuencia de consumo Siempre A veces Nunca

Alimentos ricos en grasas
Alcohol
Tabaco
Caf
ANTECEDENTES CLNICOS
Antecedentes personales:
..
..
..
SI NO
Ha usado o est usando anticonceptivos?
Ha utilizado tratamientos para el acn con anterioridad?
Cul?......................................................
Presenta alergia a algn frmaco?
Cul?......................................................
122
Anexo 6. Carta de consentimiento de los voluntarios para el test de eficacia
cosmtica
CONSENTIMIENTO INFORMADO DE PARTICIPACIN
TTULO DEL PROYECTO
Estudio de eficacia cosmtica instrumental de una locin medicamentosa.
EQUIPO DE INVESTIGADORES
Nosotras, las investigadoras Katherine Meza y Gabriela Vargas, asesoradas por la

Ing. Tatiana Mosquera, Directora del Centro de Investigacin y Valoracin de la
Biodiversidad (CIVABI), solicitamos a usted la colaboracin de su representado para
la realizacin de este estudio. Le pedimos entender todos los pasos en detalle y, si
est de acuerdo, firmar el consentimiento informado.
INTRODUCCIN / PROPSITO
En la presente investigacin pretendemos realizar un estudio de eficacia cosmtica in

vivo de un producto natural, mediante un mtodo no invasivo, utilizando un equipo
de bioingeniera (Visiopor PP34N), en voluntarios con acn grado II.
PARTICIPACIN
La participacin de su representado es completamente voluntaria y puede retirarlo en

el momento que usted lo decida. El estudio inicia con el llenado de una ficha
informativa despus de haber sido diagnosticado con acn grado II.
123
PROCEDIMIENTO
El estudio tiene una duracin de 7 das, el cual consiste en una primera evaluacin
antes del uso del producto y 2 evaluaciones posteriores 24 horas y 7 das despus de
la primera aplicacin. Para ello se le proporcionar un frasco con 25 ml de la locin,
un frasco con 25 ml de un jabn neutro, 7 torundas de algodn y una hoja con las
instrucciones de uso. Para evaluar la eficacia cosmtica de la locin medicamentosa
se utilizar el equipo Visiopor PP34N, cmara que permite captar imgenes de la
superficie de la piel utilizando luz ultravioleta y de esta manera medir
cuantitativamente las porfirinas generadas por P. acnes, principal bacteria causante
del acn.
RIESGOS / INCOMODIDADES
El voluntario deber informar cualquier molestia o incomodidad que pueda surgir

durante la aplicacin del producto.
No haga uso de otros productos antibacterianos orales y/o tpicos durante el estudio.
Si usted usa alguno de estos productos o si toma medicacin sistmica, por favor,
hganoslo saber.
Todas las materias primas utilizadas en el producto estn aprobadas para uso tpico y
no son txicas ni irritantes. Sin embargo, de igual manera que con otros productos,
pueden causar inesperadas reacciones como enrojecimiento y picor en los sitios
de aplicacin del producto; en caso de irritacin u otros signos, por favor, infrmenos
inmediatamente, contactndonos va telefnica a los telfonos 0983359724 /
0992934306.
PROBLEMAS O PREGUNTAS
Si usted tuviese preguntas adicionales durante el desarrollo de este estudio, acerca de

la investigacin, puede dirigirse a:
Katherine Meza Gabriela Vargas
Tel.: 2659612 Tel.: 2345512
Celular: 0983359724 Celular: 0992934306
124
CONSENTIMIENTO / PARTICIPACIN VOLUNTARIA
Su participacin es completamente voluntaria, puede consultar con otras personas

(familiares, mdico o aquella que usted crea conveniente para poder participar en
este estudio) y puede retirar a su representado en el momento que usted lo decida
informando previamente a los investigadores.
Una copia de este documento se mantendr en posesin de los investigadores
responsables, y otra ser entregada a usted.
HE LEIDO Y COMPRENDIDO EL PRESENTE DOCUMENTO. HE QUEDADO

SATISFECHO/A Y MIS PREGUNTAS HAN SIDO RESPONDIDAS.
YO, VOLUNTARIAMENTE Y SIN PRESIN ALGUNA, ACEPTO QUE MI
REPRESENTADO PARTICIPACIPE EN EL PRESENTE ESTUDIO.
Quito, 26 de febrero del 2013
...
Firma del Representante
Apellidos y Nombres del Participante
...
Ing. Tatiana Mosquera.
Directora del CIVABI
...
Katherine Meza
...
Gabriela Vargas
125
Anexo 7. Instrucciones de uso de la locin
INSTRUCCIONES DE USO
La locin debe ser aplicada nicamente en las noches a excepcin de

la primera aplicacin, la cual ser al llegar al domicilio.
Lavarse la cara con un jabn neutro previo a cada aplicacin.
Colocar en una torunda de algodn 5 gotas de la locin con la ayuda

del gotero y aplicar puntualmente en cada una de las lesiones de acn.
Esperar hasta que la locin sea absorbida totalmente por la piel antes
de ir a la cama.
Evitar la exposicin intensa al sol por periodos prolongados, sobre

todo despus de la aplicacin de la locin.
126
Anexo 8. Certificado de evaluacin dermatolgica
127
Anexo 9. Certificado de anlisis de la bacteria Propionibacterium acnes
128
129

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UNIVERSIDAD POLITCNICA SALESIANA

CARRERA: INGENIERA EN BIOTECNOLOGA DE LOS RECURSOS

Tesis previa a la obtencin del ttulo de: INGENIERO EN

Quito, mayo de 2013

Los conceptos desarrollados, anlisis realizados y las conclusiones del presente

Quito, mayo de 2013

Katherine Lourdes Meza Angos

Gabriela Geoconda Vargas Duque

A nuestros padres Roberto, Miguel ngel, Myrian y Ximena

A nuestros hermanos Hugo, David, Luis Felipe y Mara Jos

Gracias por su apoyo y amor.

A todas aquellas personas que participaron e hicieron posible esta investigacin;

A la Ing. Tatiana Mosquera, Directora de esta tesis, por su conocimientos, su

Al Dr. Paco Noriega por su colaboracin en la identificacin qumica del

Al M.Sc. Patricio Ynez por su valiosa colaboracin en el anlisis estadstico

A la Ing. Mara Beln Alds, Coordinadora del CIVABI por facilitarnos el

A la Dra. Katty Arcentales por colaborar con la evaluacin dermatolgica en

A los estudiantes que participaron en el Test de Irritabilidad, as como en la

1.1 Planteamiento del problema ................................................................................... 2

1.3.1 Hiptesis alternativa ........................................................................................ 5

1.3.2 Hiptesis nula .................................................................................................. 5

1.4 Objetivos ................................................................................................................ 5

1.4.1 Objetivo general .............................................................................................. 5

1.4.2 Objetivos especficos ....................................................................................... 5

1.5 Variables ................................................................................................................ 6

1.5.1 Variable dependiente ....................................................................................... 6

1.5.2 Variable independiente .................................................................................... 6

MARCO TEORICO ..................................................................................................... 7

2.1 Hierba luisa ......................................................................................................... 7

2.1.1 Origen .......................................................................................................... 7

2.1.2 Descripcin botnica.................................................................................... 7

2.1.3 Aspectos taxonmicos ................................................................................. 7

2.1.4 Nombres comunes........................................................................................ 8

2.1.5 Usos ............................................................................................................. 8

2.2 Anlisis del material vegetal .............................................................................. 9

2.3 Aceite esencial de hierba luisa ......................................................................... 10

2.3.1 Composicin .............................................................................................. 10

2.3.3 Obtencin de los aceites esenciales ........................................................... 11

2.3.4 Anlisis fsico- qumico del aceite esencial ............................................... 12

2.3.5 Precauciones en la utilizacin de aceites esenciales .................................. 13

2.3.6 Caracterizacin qumica de los aceites esenciales ..................................... 13

2.3.6.1 Cromatografa de gases acoplada a masas .......................................... 14

2.4 Patologa cutnea: acn .................................................................................... 15

2.4.1 Factores que influyen la aparicin del acn ............................................... 15

2.4.2 Evolucin del acn ..................................................................................... 16

2.4.3 Tipos de acn ............................................................................................. 16

2.4.4 Tratamientos del acn ................................................................................ 17

2.4.4.1 Tratamiento tpico .............................................................................. 17

2.4.4.2 Tratamiento oral .................................................................................. 18

2.4.4.3 Tratamiento hormonal ......................................................................... 19

2.4.5 Cosmtica del acn .................................................................................... 19

2.5 Lociones ........................................................................................................... 20

2.6 Anlisis organolpticos y fsico - qumicos de productos cosmticos ............. 21

2.7 Estudios de eficacia in vitro: pruebas de antibiograma .................................... 21

2.7.1 Concentracin mnima inhibitoria (CMI) .................................................. 22

2.7.2 Concentracin mnima bactericida (CMB) ................................................ 23

2.7.3 Material biolgico: Propionibacterium acnes ATCC 11827 .................... 23

2.8 Estudio de eficacia in vivo ................................................................................ 23

2.8.1 Test de irritabilidad .................................................................................... 24

2.8.1.1 Criterios de inclusin .......................................................................... 25

2.8.1.2 Criterio de exclusin ........................................................................... 26

2.8.2 Tratamientos no invasivos ......................................................................... 26

2.8.3.1 Criterios de inclusin .......................................................................... 27