DETERMINACIN DE LA CALIDAD DEL AGUA MICROBIOLOGA SANITARIA 1

1.-OBJETIVO
Reconocer los factores ms importantes que influyen en el crecimiento de
microorganismos en el agua
Conocer el procedimiento de las mediciones en anlisis y calidad del agua
Determinar la calidad del agua en los diversos ambientes de la Universidad
Nacional de Ingeniera y verificar segn la norma de calidad de agua (DIGESA)

2.-FUNDAMENTO TERICO .

LA IMPORTANCIA DE LA CALIDAD DEL AGUA :

El agua, alimento esencial para los animales incluido el hombre, frecuentemente

acta como vehculo de transmisin de microorganismos entricos. La materia
fecal puede accidentalmente alcanzar una fuente de abastecimiento, siendo la
forma ms comn el ingreso a travs de los sistemas de pozo ciego a napas
profundas .La direccin general de salud ambiental (DIGESA) , la Organizacin
Mundial de la Salud (OMS) en sus Guas para la calidad del agua potable, la
Directiva 98/83/CE1 y otras normas internacionales, establecen o recomiendan
requisitos de calidad para el agua de consumo humano. En general, la normativa
establece que el agua es apta bacteriolgicamente para consumo si se encuentra
exenta de microorganismos patgenos de origen entrico y parasitario intestinal.
Ellos transmiten enfermedades tales como salmonelosis (Salmonella), shigelosis
(Shigella), colera (Vibrio Cholerae), amebiasis (Entamoeba histolytica),
alteraciones gastrointestinales (Aeromonas mesfilas, Helicobacter pylori,
Campylobacter); giardiasis (Giardia lamblia), cristosporidiosis (Crystosporidium),
esquistosomiasis (Schistosoma), desrdenes hepticos (virus de hepatitis), etc. La
presencia de microorganismos patgenos en el agua de bebida es un riesgo que
se incrementa en las reas marginales de mayor densidad poblacional o en zonas
sin disponibilidad de agua potable. La seguridad que un agua contaminada puede
ser causal de enfermedades, ha conducido a la necesidad de controlar
rutinariamente la calidad microbiolgica de muestras de diversos orgenes. Los
controles rutinarios de la totalidad de los microorganismos hdricos,
potencialmente riesgosos para la salud, resultan difciles de llevar a cabo debido a
la gran variedad de bacterias patgenas cultivables, a la complejidad de los
ensayos de aislamientos y a la presencia en baja concentracin de varias especies
altamente agresivas, sin que el orden detallado indique prioridad. Por esta razn,
los anlisis bacteriolgicos apuntan a la bsqueda de microorganismos
indicadores de contaminacin fecal .
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2.1 .- DESARROLLO Y SUPERVIVENCIA DE LOS MICROORGANISMOS EN EL

AGUA :

El crecimiento de microorganismos acuticos est afectado por una gran variedad

de factores fisicos y qumicos que pueden actuar complementaria o
antagnicaniente entre si Estos factores influyen no slo en el tamao y
composicin de las poblaciones microbianas, sino en la morfologa y fisiologa de
sus componentes individuales, pudiendo producir cambios considerables en el
metabolismo, morfologa celular y reproduccin, por todo ello, la supervivencia de
los microorganismos en las aguas es muy variable, incluso para especies
relacionadas

a) La luz: es un importante factor ecologico en el dgua, siendo la fuente de energia

de Id5 algas y bacterias fotosinteticas 511 intensidad disminuye rapidamente n
inedidci que penetra en el agua. pero sin e~nbnrgo resulta bio!ogicamente activa
ha5tLi um profundidad de 100 m o incluso 700 ni en aguas muy claras sin color ni
turbidet La luz solar tiene efectos inhibidores sobre las bacterias no pigmentadas,
debido a la parte ultravioleta del espectro y a las longitudes de onda de la luz
visible Estos efectos dependen de la intensidad de la radiacin y de la turbidez del
agua, siendo mximos en aguas claras de regiones ridas. Las bacterias con
pigmentos carotenoides, tolerantes a la luz en un grado considerable, no son
inhibidas por la luz de intensidad normal. Por esta razn el aire contiene
organismos con fuerte pigmentacin. Como se ha comentado anteriormente las
aguas subterrneas se encuentran en total obscuridad excepto en el caso de
pozos de gran dimetro en los que la luz solar puede llegar a la superficie del
agua.

b) Temperatura La temperatura afecta a los procesos vitales de todos los

microorganismos, concretamente a la velocidad de crecimiento, necesidades de
nutrientes y composicin qumica y actividad enzimtica de las clulas Existe una
diversidad de bacterias capaces de vivir en un amplio rango de temperaturas
Aquellas cuyo ptimo desarrollo se sita a temperaturas medias se denominan
mesfilas, para distinguirlas de las crifilas (adaptadas a bajas temperaturas) y
termfilas (adaptadas a altas temperaturas) A baja temperatura se ralentizan todos
los procesos vitales, de modo que la inultiplicacibn ser ms lenta (por do la
congelacion conserva los alimentos) pero tambin los nutrientes durarn ms y
ser mayor la supervivencia de niicroorganisnos pargenos Aproximadamente, un
aumento de la temperatrira de entre 6 y 15 "C provoca una duplicacin en la
velocidad de los procesos biolgicos. La multiplicacion de a mayora de los
microorganismos si, we esta ley hasta llegar a una temperatura mxima Si se
sobrepasa esta temperatura se produce rpidamente la muerte de la cklula por
danos irreversibles en el citoplasma Por el contrario las bajas temperaturas
raramente son letales. Aunque hay unas pocas bacterias termfilas capaces de
reproducirse a ms de 100 "C (existentes en zonas volcnicas y campos
geotermicos), muchas de ellas no son capaces de sobrevivir coi1 110 'C Por ello la
fiebre es un mecanismo de defensa del cuerpo humano Las aguas subterrneas
tienen una temperatura poco variable y responden a la media anual de las
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teniperaturas atmosfricas incrementando en ei producto de la profundidad por el

gradiente geotrmico

c) Turbidez
Ln ixateria en sucpension juega un papel
importante CORIO sustratc: para muchos
microorganismos, que colonizan su superficie. Los
microorganismos colonizan no slo las partculas
de materia orgnica, que pueden ser utilizadas
directamente como alimento, sino tambin las
partculas inorgnicas. Las partculas en
suspensin, de origen orgnico o mineral,
adsorben a su superficie los nutrientes y como
consecuencia los microorganismos encuentran un
ambiente nutricional ms favorable en esta materia
suspendida que libres en el agua. En aguas
superficiales las partculas en suspensin suponen
tambin una proteccin frente a los efectos dainos
de la luz Las partculas en suspensin, y por tanto
la turbidez, tienen un efecto favorable sobre el
crecimiento microbiano Se ha encontrado un
paralelismo importante entre la turbidez y el contenido en bacterias de las aguas
de los ros, del mar y de aguas subterrneas. Los valores de la turbidez y color
para las aguas subterrneas suelen ser muy bajos, generalmente menores de 1
ppm para la turbidez y 5 ppm Pt para el color.

d) Salinidad : Existen bacterias adaptadas a las aguas dulces y otras a aguas

saladas (halfilas), incluso extremadamente salinas Existen por tanto poblaciones
diferentes en aguas continentales y en el mar Pequeos cambios de salinidad en
las aguas pueden inducir cambios importantes en su poblacin microbiana, en las
aguas subterrneas puede encontrarse un aniplio margen de salinidades, desde
aguas con conductividades inferiores ; I O0 microsiemens de corto tiempo de i-
esidencia y trayecto a travs de materiales poco solubles. ;I aguas que habiendo
atravesado formaciones evaporticas adquieren conductividades de varios miles de
microsiemens. En general las aguas subterrneas tienen una salinidad media

e) Sustancias orgnicas : La materia orgnica es la fuente de nutrientes para las

bacterias hetertrofas presentes en el agua subterrnea Resulta por tanto evidente
que existe una alta correlacin entre contenido en materia orgnica y actividad
biolgica La concentracin de materia orgnica no sio determina el niimer:, de
individuos sino tambin su tipo Existen microorganismos capaces de crecer con
concentraciones muy bajas en nutrientes, mientras que otros se adaptan a altos
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contenidos La presencia de enzimas o sustancias baclericidas, generalmente

producto del metaboiismo de animales y plantas, tambin puede condicionar las
poblaciones microbianas.

2.2-PARMETROS DE CONTROL OBLIGATORIO EN LA CALIDAD DEL AGUA :

a) Coliformes Totales y Termotolerantes- (Parmetros microbiolgicos)

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b.- Color :

Fuente :
Las aguas superficiales pueden parecer
altamente coloreadas debido a la presencia de
materia pigmentada en suspensin, cuando
en realidad el agua no tiene color. El material
colorante resulta del contacto con detritus
orgnicos como hojas, agujas de conferas y
madera, en diversos estados de
descomposicin, est formado por una
considerable variedad de extractos vegetales.

CARACTERISTICAS :El color causado por la

materia en suspensin es llamado color
aparente y es diferente al color debido a
extractos vegetales u orgnicos, que son
coloidales, al que se llama color real. En el
anlisis del agua es importante diferenciar
entre el color aparente y el real.

RIESGOS PARA LA SALUD

- No permite el paso de la luz para el desarrollo de la biodiversidad.
- Su presencia indicara ineficiencia en el tratamiento de aguas y de la
integridad del sistema de distribucin.

METODO DE ANALISIS
Para determinar el color mediante los mtodos actualmente aceptados, es
necesario eliminarla turbidez antes de proceder al anlisis. Tenemos dos
mtodos que son utilizados
- Mtodo de comparacin visual
- Mtodo espectrofotomtrico
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c.- Turbidez:

FUENTE
La turbidez del agua es producida por materias en suspensin, como arcillas, cieno
o materias orgnicas e inorgnicas finamente divididas, compuestos orgnicos
solubles coloreados, plancton, sedimentos procedentes de la erosin y
microorganismos, el tamao de estas partculas vara desde 0,1 a 1.000 nm
(nanmetros) de dimetro. La turbidez se utiliza para indicar la calidad del agua y
la eficiencia de la filtracin para determinar si hay presencia de organismos que
provocan enfermedades. La materia suspendida en el agua absorbe la luz,
haciendo que el agua tenga un aspecto nublado. Esto se llama turbidez. La
turbidez se puede medir con varias diversas tcnicas, esto demuestra la
resistencia a la transmisin de la luz en el agua.

CARACTERSTICAS:
La turbiedad, como medida de las propiedades de transmisin de la luz
de un agua, es otro parmetro que se emplea para indicar la calidad de las
aguas vertidas o de las aguas naturales en relacin con la materia coloidal
y residual en suspensin.
Elevados niveles de turbiedad pueden proteger a los microorganismos de
los efectos de la desinfeccin y estimular la proliferacin de bacteria.

RIESGOS
Una alta turbidez suele asociarse a altos niveles de microorganismos como
virus, parsitos y algunas bacterias. Estos organismos pueden provocar
sntomas tales como nauseas, retortijones, diarreas y dolores de cabeza
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d.-Cloro residual :

FUENTE
La concentracin de cloruros es una medida especfica de la salinidad de
las descargas de la industria petrolera. Los cloruros son los principales
componentes de las salmueras de petrleo. El incremento de cloruro en el
agua ocasiona el aumento de la corrosividad del agua. El alto contenido de
cloruros impide que el agua sea utilizada para el consumo humano o el
ganado. Altos porcentajes de cloruros en los cuerpos de agua tambin
pueden matar a la vegetacin circundante El cloruro, en forma de in (Cl.-)
es uno de los aniones inorgnicos principales en el agua natural y residual.
La infiltracin de aguas subterrnea en las alcantarillas contiguas a aguas
saladas constituyen tambin una potencial fuente de cloruros y sulfatos.

CARACTERSTICAS:
Los cloruros que se encuentran en el agua natural proceden de la
disolucin de suelos y rocas que los contengan y que estn en contacto
con el agua. En el caso de las aguas costeras, su presencia tambin es
debida a la intrusin de aguas saladas. Otra fuente de cloruros es la
descarga de aguas residuales domsticas, agrcolas e industriales a aguas
superficiales.
Las heces humanas, por ejemplo suponen unos 6 gr. de cloruros por
persona da. En lugares donde la dureza del agua sea elevada, los
compuestos que reducen la dureza del agua son tambin una importante
fuente de aportacin de cloruros. Un contenido elevado de cloruro puede
daar las conducciones y estructuras metlicas y perjudicar el crecimiento
vegetal.
El umbral del gusto de los cloruros es de 200 mg/L a 300 mg/L

RIESGOS
Los cloruros no tienen un efecto nocivo en la salud, pero en
concentraciones superiores a 250 mg/L este valor esta basado el sabor del
agua el cual es percibido organolepticamente, y no en algn dao
fisiolgico conocido
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d.-PH :
FUENTE
El pH es el valor que determina si una sustancia es cida, neutra o bsica,
calculando el nmero iones hidrogeno presentes. Se mide en una escala a partir
de 0 a 14, en la escala 7, la sustancia es neutra. Los valores de pH por debajo de 7
indican que una sustancia es cida y los valores de pH por encima de 7 indican que
es bsica. Cuando una sustancia es neutra el nmero de los tomos de hidrgeno
y de oxhidrilos son iguales. Cuando el nmero de tomos de hidrgeno (H+)
excede el nmero de tomos del oxhidrilo (OH-), la sustancia es cida

CARACTERSTICAS
La concentracin de in hidrogeno es un parmetro de calidad de gran
importancia tanto para el caso de calidad de las aguas naturales como
residuales. Todas las fases del tratamiento del agua para suministro y
residual, como o la neutralizacin cido base, suavizado, precipitacin,
coagulacin, desinfeccin y control de la corrosin, depende del pH.
El agua residual con concentracin de in hidrgeno presenta elevadas
dificultades de tratamiento con procesos biolgicos y el efluente puede
modificar la concentracin de in hidrogeno en las aguas naturales si sta
no se modifica antes de la evacuacin de las aguas.
A una temperatura determinadas, la intensidad del carcter cido o
bsico de una solucin viene dada por la actividad del in hidrogeno o pH.
El pH de los sistemas acuosos puede medirse convenientemente con pH-
metro.
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RIESGOS
El pH no ejerce efectos directos en los
consumidores, es uno de los parmetros
indicadores de la calidad del agua. Para que
la desinfeccin con cloro sea eficaz es
preferible que sea un pH inferior a 8
en valores superiores de pH 11 produce
irritacin ocular y agravacin de trastornos
cutneos

e.-TEMPERATURA:
FUENTE
La temperatura del agua es un parmetro muy importante dada su influencia, tanto sobre
el desarrollo de la vida acutica como sobre las reacciones qumicas y velocidades de
reaccin, as como la aptitud del agua para ciertos usos tiles. La temperatura es un
indicador de la calidad del agua, que influye en el comportamiento de otros indicadores de
la calidad del recurso hdrico, como el pH, el dficit de oxgeno, la conductividad elctrica
y otras variables fisicoqumicas.

CARACTERSTICAS
El oxigeno es menos soluble en agua caliente que en agua fra.
El aumento en las velocidades de las reacciones qumicas que produce un aumento de
la temperatura, combinado con la reduccin de oxigeno presente en las aguas
superficiales.
Es causa frecuente del oxigeno presente en las aguas superficiales, reducindose mas
en los meses de verano
Un cambio brusco de temperatura puede conducir a un aumento en la mortalidad de la
vida acutica.
Las temperaturas elevadas pueden dar lugar conducir a un aumento en la mortalidad de
la vida acutica.
La temperatura ptima para el desarrollo de las actividades se detienen cuando se
alcanza los 50C a temperaturas de alrededor de 15C, las bacterias productoras de
metano cesan su actividad. RIESGOS
Las temperaturas anormalmente elevadas puedes dar lugar a una indeseada
proliferacin de plantas acuticas y hongos.
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2.3.-CLCULOS Y NORMA DE CALIDAD DEL AGUA POTABLE (

SEGN DIGESA)

Clculo del Nmero Ms Probable

En el caso del agua tratada, cuando se inoculan cinco porciones con 20 mililitros de
muestra, el Nmero Ms Probable se calcula con ayuda del cuadro 5.2. Si se elige la
siembra de una serie de 10 tubos con 10 mililitros de muestra, el Nmero Ms Probable
se calcular con el cuadro 5.3. En el caso de agua superficial sin tratamiento, si se
selecciona para la prueba la siembra de tres series de cinco tubos con volmenes de 10
mililitros, un mililitro y 0,1 mililitros, el Nmero Ms Probable se obtiene directamente del
cuadro 5.4. Para este clculo, se seleccionan los tubos con resultados positivos en las
pruebas confirmativas de coliformes totales y termotolerantes, obtenidos en las tres series
consecutivas inoculadas. Con los tubos positivos de cada serie se forma una combinacin
de nmeros (tambin denominada cdigo), que corresponde a un valor de Nmero Ms
Probable de coliformes. En el caso de presentarse aguas con alta contaminacin
biolgica, se requiere efectuar un mayor nmero de diluciones y el Nmero Ms Probable
se obtiene mediante una frmula. Cuando se inoculan tres series de cinco tubos en
volmenes de muestra diferentes de los indicados en la tabla, el cdigo se formar con el
nmero de tubos con resultado positivo seleccionado en tres series consecutivas
inoculadas y se verificar el valor de Nmero Ms Probable correspondiente a ellos. El
ndice de Nmero Ms Probable final ser dado a travs de la siguiente formula:
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Mtodo de presencia-ausencia
Es un procedimiento simplificado de la tcnica de fermentacin en tubos mltiples para la
determinacin cualitativa de coliformes en agua destinada al consumo humano. La prueba
de presencia-ausencia considera la siembra de 100 mililitros de muestra en el caldo P-A y
est fundamentada sobre el principio de que los coliformes deben estar ausentes en 100
mililitros de agua potable. Esta prueba consta de dos fases: una presuntiva y otra
confirmativa. Si el resultado del anlisis es positivo, puede ser necesaria la determinacin
cuantitativa en una nueva muestra. El mtodo de presencia-ausencia es una alternativa
para la determinacin cualitativa de coliformes totales y termotolerantes. Es ms simple y
econmica que las tcnicas de tubos mltiples y de filtro de membrana, que son pruebas
cuantitativas. El procedimiento descrito a continuacin es una versin de la tcnica
presence-absence coliform test del Standard Methods (American Public Health
Association-American Water Works Association, 1999).

Mtodo rpido. Tcnica de filtro de membrana con agar m-7 horas FC

El procedimiento simplificado con agar m-7 horas para la determinacin de coliformes
termotolerantes es similar a la tcnica de filtro de membrana para coliformes
termotolerantes en medio m-FC o agar m-FC, pero permite obtener resultados en siete
horas, y la incubacin a una menor temperatura facilita la recuperacin de los coliformes
termotolerantes (41,5 0,2 C). Est tcnica es aceptada por el Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater (American Public Health Association-American
Water Works Association, 1999). Se propone como una alternativa para la determinacin
rpida de coliforms termotolerantes. Se puede aplicar para valorar la calidad de agua de
bebida en situaciones de emergencia. El procedimiento descrito a continuacin es una
versin simplificada de Rapid detection methods. Seven hour fecal coliform test
(specialized) (American Public Health Association-American Water Works Association,
1999).
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3.-PROCEDIMIENTO :

Tomar una muestra de agua en el frasco de prueba

Agitar el frasco 20 veces
Se introduce una cantidad medida de la muestra a una caja de Petri
,haciendo uso de la pipeta .Flamear la pipeta antes y despus de
sacar los 1.1 ml de muestra.
Se adiciona agar,previamente se flamea el tubo
Para que se homogenice,se mueve mediante agitacin rotatoria la
placa,mezclando la muestra y el medio.
Esperar 5 minutos para que el medio se solidifique.
Antes de utilizar las pipetas esterilizadas,flamear el pipetero.
Agregar la cantidad de agua necesaria de la muestra,al agua
peptonada.
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Cultivo de bacterias o
cualquier otra muestra que
contenga bacterias en
suspensin.

Se pone 1 ml en 99ml del

diluyente; se pasa 1ml a
otros 99 ml del diluyente.

Despus de agregar el
inculo a la placa 20 a 30 ml
de agar fundido. La placa se
agita suavemente por
rotacin para que se
distribuya adecuadamente
el inculo en el medio de
cultivo.

Las placas se colocan en

posicin invertida en una
incubadora por 24 horas o
ms.

Se selecciona una placa que

contenga de 30 a 300
colonias.

El nmero de colonias que

se cuentan en la placa se
multiplica por la dilucin de
la muestra igual al nmero
de bacterias por ml.
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4.-RESULTADOS Y DISCUSIN:

Grupo N 1:
Da:
Hora:
Tagua:

Grupo N 1:
Da:
Hora:
Tagua:

Grupo N 1:
Da:
Hora:
Tagua:

Muestra 1ml 10-1 10-2 U.F.C /ml Observaciones

Grupo 1
Estanque de
Arquitectura
Grupo 3:
Grifo del
Gimnasio-
Bao de
Varones
Grupo V:
Grifo FIA
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5.-Observaciones:

-En el grupo 3 se dej la placa en la incubadora por un mayor nmero de tiempo ,lo que se supone
debi haberse encontrado ms colonias de bacterias,pero segn en el experimento este hecho no
ocurri.

-El grupo 3 solo realiz dos tipos de diluciones, debido a que el agar a utilizar se derram en el
autoclave.

-En el agua del estanque de arquitectura tambin se encontraron algas y caracoles.

-En el grupo 3, en la placa 1 se encontr colonias de bacterias del agua pero con diferentes
caractersticas a analizar,hubo contaminacin al momento de realizar el experimento.

6.-Conclusiones:
-Es evidente segn el experimento que existen microorganismos en las muestras tomadas,egn
sea el volumen y las diluciones utilizadas crecen colonias de diferentes tamaos y en diversas
cantidades,esta va disminuyendo segn el nmero de dilucin.

-En el grupo 1 Estanque de arquitectura los factores para el crecimiento y desarrollo de

microorganismos han sido favorables debido a temperatura,nutrientes ,partculas ,turbidez del
agua,etc.

-No se puede comparar los resultados del grupo 3 y grupo 5 con el lmite mximo permisible de
parmetros biolgicos,debido a que las condiciones de la norma segn DIGESA son diferentes al
procedimiento realizado por los grupos en cuanto tiempo de incubacin de placas.Por lo tanto no
se ha podido hallar la calidad del agua en los ambientes del bao del Gimnasio UNI y en .

-Se conoce el procedimiento para el anlisis de calidad de agua ,por tanto ya que el grupo 3 y el
grupo 5 no cumpli dicho objetivo, se reconoce que si se hace nuevamente el experimento se
tomar el promedio de resultados para las conclusiones a tomar.
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7.-Recomendaciones:
-Tener cuidado al momento de tomar las muestras de agua evitando cualquier tipo de
contaminacin externa.

-Anotar las condiciones en las que se encuentran las muestras a tomar.

-Tener cuidado al momento de sacar el agar del autoclave, para poder utilizar el insumo completo
y realizar correctamente el procedimiento de laboratorio.

- Para disminuir la concentracin de microorganismos en el caso del Estanque de Arquitectura ,

podramos hacer un tratamiento con cloro residual, y analizamos el contenido bacterial una vez
terminado el proceso.

-Contar las colonias por lo menos dos veces y escoger a partir de qu tamao estas son
contabilizadas, anotar dimetros y caractersticas para un mejor resultado.

-El tiempo de incubacin debe ser preciso y exacto ,para poder comparar los resultados con los
nmeros mximos permisibles segn la norma del DIGESA.
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BIBLIOGRAFA
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ANEXOS

Potabilizacin del agua

Normas del digesa los pdfs
Fotos.