PRACTICA N7

RECUENTO
TOTAL DE
MOHOS Y
LEVADURAS

M.Sc. VIVIANO PAULINO NINAQUISPE ZARE Ing. Agroindustrial

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 I. OBETIVOS.

El alumno ser capaz de realizar diluciones decimales.

Realizar adecuadamente mediante el mtodo de cuenta en placa, el nmero de
mohos y levaduras viables presente en productos alimenticios destinados al
consumo humano.
Comprender el fundamento de todas las etapas de mtodo de deteccin y
cuantificacin de mohos y levaduras en alimentos.
II. MATERIALES Y MTODOS

MATERIALES

Lentejita serrana (Muestra).

Tubos de ensayo.
Placas Petri.
Matraz.
Agar nutritivo.
Pipetas.
Solucin salina fisiolgica.
Rejilla.
Oxitetraciclina (Capsula).
Marcador.
Asa Drigalsky.
Agua destilada.
Mecheros.
Autoclave.
Algodn y pabilo.
Cocina elctrica.
Balanza electrnica.
Estufa.

METODOS.

PRIMERA PARTE.
Preparamos la cantidad de solucin de agar Nutritivo necesaria.
1000ml 35gr
400ml x
x = 14gr
Se dividi 400ml de agua destilada en dos matraces cada uno con 200ml.
Luego diluimos 7 gr de agar en cada matraz con 200ml de agua destilada.
Aseguramos la solucin de agar, con algodn y pabilo.

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 Llevamos a punto de ebullicin las dos soluciones y movemos la muestra, para
obtener una homogenizacin.
Luego llevamos a autoclave las soluciones de agar.
Primero dejamos las vlvulas abiertas hasta que salga vapor, despus de eso
cerramos las vlvulas y apretamos el botn calentar, hasta que llegue a una
temperatura de 121C (pasos para usar la autoclave).
Finalmente sacamos las soluciones de agar y las dejamos enfriarpor un tiempo
aproximado de 20min, evitando la formacin de grumos.
Preparamos la solucin del antibitico de oxitetraciclina usando una capsula para
100ml de agua destilada.
Luego agregamos 10ml de solucin del antibitico oxitetraciclina a cada matraz,
para evitar el crecimiento de bacterias.
Y las vertimos sobre 12 placas Petri, de manera cuidadosa, siempre acompaando un
mechero cerca para esterilizar la zona de trabajo.

Figura n 1: Solucin Agar Figura n2: Agregado de Agar Nutritivo a las

Nutritivo Placas Petri

Figura n4: Solucin de

Figura n 3: Placas Petri con solucin de Agar Nutritivo.
Oxitetraciclina.

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 SEGUNDA PARTE.

En un matraz agregamos 90ml de SSF y 10gr de muestra y diluimos, esta sera

nuestra primera dilucin de 10-1.

Y preparamos 12 tubos de ensayo con 9ml de SSF.

Y agregamos un 1ml de la primera dilucin a 3 tubos de ensayo, a cada uno

respectivamente. Y esta seria nuestra segunda dilucin de 10-2.

Y luego realizamos el mismo paso para el segundo, tercer y cuarto trio de tubos
de ensayo. Obteniendo as las diluciones de 10-3, 10-4 y 10-5.

Luego de realizar las diluciones, sembramos por superficie con el asa Drigalsky,
en cada siembra introducimos el asa en alcohol, y finalmente flameamos el asa y
la dejamos enfriar, de esta manera esterilizamos el asa para cada uso.

Las placas sembradas se incuban finalmente a temperatura ambiente, pero

envueltas en papel.

Figura n6: Tubos de

Figura n5: Solucin de la Figura n7: Siembra por
ensayo con Solucin Salina
muestra. superficie con el Asa
Fisiolgica.
Drigalsky.

Figura n8: Incubacin a Temperatura ambiente

y envueltas en papel.

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III. RESULTADOS.

RECUENTO DE COLONIAS POR DILUCIONEN PLACAS.

DILUCIONES/RECUENTO
Placa N1 Placa N2 Placa N3
EN PLACAS
10-2 8 1 3
10-3 4 3 2
10-4 2 2 156
10-5 6 1 1

FORMULAS.

a. Tomar el promedio de los 3 recuentos de las placas y multiplicar por el factor de

dilucin utilizada.

:
1 + 2 + 3
=
3

DILUCION 10-2.
1: 8102 = 800
2: 1102 = 100
3: 3 102 = 300
800 + 100 + 300
= = 400/
3

DILUCION 10-3.
1: 4 103 = 4000
2: 3 103 = 3000
3: 2 103 = 2000
4000 + 3000 + 2000
= = 3000/
3

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 DILUCION 10-4.
1: 2 104 = 20000
2: 2 104 = 20000
3: 156 104 = 1560000
20000 + 20000 + 1560000
= = 533333,33gr/colonias
3

DILUCION 10-5.
1: 6 105 = 600000
2: 1 105 = 100000
3: 1 105 = 100000
600000 + 100000 + 100000
= = 266666,66gr/colonias
3

TOTAL DE COLONIAS POR DILUCIONEN PLACAS.

DILUCIONES/RECUENTO Placa Placa Placa PROMEDIO DE
DE PLACAS N1 N2 N3 RECUENTO
10-2 8 1 3 400gr/colonias
10-3 4 3 2 3000gr/colonias
10-4 2 2 156 533333,33gr/colonias
10-5 6 1 1 266666,66gr/colonias

b. Si las placas de 2 diluciones consecutivas presentan recuentos menores de 30 y

mayores que 300, tomar el promedio de los 2 recuentos.

c. Si el nmero de colonias de las placas de 2 diluciones consecutivas estn dentro

del rango 30-300 computar el recuentro para cada una de las diluciones y
establecer la relacin de los 2 recuentos. Si el cociente es menor que 2, reportar el
promedio de los 2 valores, pero si el recuento mayor contiene ms de 2, en este
caso se reportara el recuento menor.

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IV. DISCUSIONES

La presencia de microorganismos en los alimentos no representa necesariamente un

peligro para el consumidor o una calidad inferior en estos productos, ms si se tiene en
cuenta que la gran mayora contiene naturalmente levaduras, mohos, bacterias y otros
microorganismos inocuos. La mayor parte de los alimentos se convierten en
potencialmente peligrosos solo despus de que se han violado los principios de higiene,
limpieza y desinfeccin. La puesta en evidencia de estos riesgos se basa en el examen
de muestras de alimentos en busca de los propios agentes causales o indicadores de una
contaminacin no admisible. (ICMSF, 2000). En esta prctica realizamos el recuento
total de hongos y levaduras viables presentes en productos alimenticios, en nuestro caso
en la lenteja verde, conocida como lentejita serrana.

El recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollar una
colonia visible. Pero debido a que una muestra no es totalmente homognea con respecto
a su composicin microbiolgica, es posible que una colonia se origine de un
microorganismo o de cientos de ellos, dando en este ltimo caso un recuento menor del
real (Parker 2007).

Tambin es posible que muchas de las hongos presentes en la muestra no puedan crecer
en las condiciones elegidas (pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo, etc.). En este
caso el recuento tambin ser inferior al real. Lo que s se sabe es que cada colonia
observada se form a partir de por lo menos un microorganismo. Esta es una condicin
necesaria y suficiente. Entonces la colonia se considera una unidad formadora de colonia
(ufc) a los efectos de los clculos (Parker 2007).

Segn Hernndez (2003), dice que se ha desarrollado una serie de tcnicas

microbiolgicas para aislar microorganismo y obtener cultivos puros. Una de estas es la
siembra por superficie en placa Petri, la cual fue utilizada en nuestra prctica de
laboratorio. En este caso nuestros resultados fueron lo deseados, ya que se logr cultivar
hongos en cada placa Petri, lo que sali mal en nuestra practica fue la cantidad de colonias,
estas cantidades no se encontraba en el rango permitido de 30-300 colonias como dice
teora. Lo que se puede explicar con la teora de Parker, ya que nos dice que cada colonia
se desarrolla gracias a la presencia de uno a mas microorganismos, y como se vio en
nuestras placas solo lograron crecen mximo 8 colonias y una nica placa logro obtener
156 colonias, y sabiendo esto los errores pueden ser muchos, tal vez la muestra no fue la
correcta, o quizs al realizar el rotulado hubo errores confundiendo las placas y sus
diluciones aadidas.

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 V. CONCLUSIN.

Once de las doce placas Petri cultivadas no se encuentran en el rango de 30-300

colonias, y el mximo que creci fue de 8 colonias y el mnimo 1. Excepto la
tercera placa con dilucin 10-4 en la cual crecieron 156 colonias, lo cual se
encuentra en el rango.

Con respecto a las diluciones, se supone que por cada dilucin que vaya en
aumento, la cantidad de colonias por cada trio de placas va disminuyendo, pero
en nuestra prctica eso no sucede y las cantidades de colonias no llevan un orden
descendiente.

La oxitetraciclina, cumpli la funcin de inhibir el crecimiento de bacterias

permitiendo solo el crecimiento de hongos (mohos y levaduras).

El crecimiento de microorganismos fue el deseado, en este caso hongos.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

ICMF. 1982. Microbiologa de los alimentos. Tcnicas de anlisis microbiolgicos. Vol
I 2da ed. Edit. Acribia, S.A. Zaragoza, Espaa.

ICMSF, 2000. Microbiologa de los alimentos 1. Su significado y mtodos de

enumeracin. 2da ed. Edit., Acribia, S.A. Zaragoza, Espaa.

Jay, J., Loessner, M y Golden, D. 2009. Microbiologa de los alimentos.

VII. ANEXOS

Figura n9: crecimiento de mohos y levaduras

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