UNIVERSIDAD TECNICA DE MANABI

Facultad de ciencias de la salud

ESCUELA DE LABORATORIO CLNICO

BIOQUIMICA
TEMA:
Protenas Especficas

Docente:
Jorge Zambrano

Semestre:
Tercero, Paralelo B

Autoras:
Cedeo Bermdez Gnesis
Castro Garca Stiffany

Periodo Acadmico:
Mayo - Septiembre del 2017
Protenas Especficas
El examen de las protenas del plasma puede proporcionar informacin que refleje
estados patolgicos en numerosas sistemas orgnicos.
La medicin ms irecuente realizada, la de las protenas totales, suele hacerse en
suero, sin fibringeno y sin ningn anticoagulante que pueda diluir ligeramente las
protenas del plasma.
La electroforesis de las protenas separa las globulinas de la albumina y resuelve las
protenas principales del suero en patrones que puedan ser altamente especficos para
algunas enfermedades.

Estructura de las Protenas

El esqueleto de las molculas proteicas es una cadena continua de tomos de carbono
y nitrgeno unido mediante enlaces peptdicos entre aminocidos adyacentes. En un
extremo hay un grupo amino libre (el aminoterminal) y el otro, un grupo carboxilo libre
(el carboxirterminal). Mientras el esqueleto del pptido es cualitativamente invariable
entre las diferencias protenas, las protenas tienen una identidad estructural en virtud
de los grupos laterales o restos de los aminocidos es de 120 daltons.
La secuencia lineal de los aminocidos de una protena se denomina estructura
primaria: esta secuencia de aminocidos determina la identidad de una protena, cul
es su estructura molecular, que funciones puede realizar, como puede unirse a otras
molculas y como puede participar en los procesos de reconocimiento entre las
molculas y clulas.
La estructura secundaria se refiere a las conformaciones tridimensionales regulares
especficas en las que se pliegan las partes de la cadena polipeptdica.

Tcnicas de separacin proteicas

Electroforesis
El conocimiento actual de la composicin de las protenas del suero y
plasma deriva de las tcnicas electroforticas introducidas por
tiselius. Este separa las protenas disueltas en una solucin de
electrolitos mediante las aplicaciones de una corriente elctrica a
travs de un lubo de cuarzo en forma de U que contiene la solucin
proteica. A PH 7,6 fueron identificadas 4 fracciones proteicas en el
suero denominado albumina.
Debido que la separacin se realiz en una solucin homognea sin
medio de soporte slido. Se le ha denominado eleclroloresis libre o de
lmite mvil. La introduccin de un papel de filtro como medio de
soporte anti conveccin permiti la separacin de las tracciones en
bandas proteicas en bandas o zonas delimitada, el acetato de
celulosa y la agarosa ha predominado en el laboratorio clnico.
La aplicacin de muestra se puede hacer en cilios realizados dentro
del gel, aunque este proceso un artefacto caracterstico que se puede
interferir con la exploracin. Un modo de evitar este problema
consiste en empapar la muestra dentro del gel por medio de una
plantilla superpuesta. Cada extremo de gel se sumerge entonces en
cmara de tampn separado, en las cuales se montan los electrodos.
Se aplica un voltaje entre los electrones y se genera una corriente
elctrica que pasa a travs de un gel, normalmente durante 30
minutos.
Las condiciones para una electroforesis de protena es la que
optimiza la separacin de la regin y para separar y detectar bandas
oligocionales de inmunoglobulinas desde el punto de aplicacin hasta
una zona del gel conveniente para la inspeccin visual.
PRECIPITACIN
La precipitacin qumicas de las protenas sricas se idearon para
separar la albumina y las globulinas en dos o ms fracciones, que
posteriormente pudieran medirse para valorar su contenido proteico.
Con la adiccin de sulfato sdico, sulfato amnico o metanol, las
globulinas tienden a precipitarse dejando la albumina en solucin. La
albumina puede bajar debido a cualquier disminucin en su sntesis
(malnutricin, malabsorcin, fallo heptico).o a una perdida
incrementada (proteinuria, enteropata).

SEPARACIONES EN COLUMNAS
Se evalan de acuerdo con los tamaos de los poros, que a su vez
determina que tamaos moleculares pueden pasar a travs del
interior de cada bola o partcula de la columna .tras la aplicacin de
una muestra compuesta de protenas de diversos tamaos en un
solvente acuoso que contiene tampn y sal, se aplica ms tampn
para conducir la muestra a travs de la columnas. Las molculas muy
grandes tienen a fluir a travs de los intersticios de la columna sin
penetrar en las partculas y emergen primero del fondo de la columna
en el volumen vaco. Las molculas ligeramente menores penetran en
los poros ms grandes antes de ser arrastradas a su travs y as
quedan ligeramente retardadas a su paso a travs de la columna.
En este tipo de cromatografa, la fase estacionaria utilizada, es decir,
el absorbente, se coloca en el interior de una columna de vidrio, la
cual finaliza con una llave para controlar el paso de sustancias al
exterior de la columna. La fase estacionaria se impregna con el
eluyente o fase mvil. Seguidamente la mezcla orgnica que nos
interesa separar la depositamos por la parte superior de la fase
estacionaria, y as la fase mvil podr ir atravesando el sistema en el
intercambio inico Se usa para purificar protenas. Separa molculas
en base a su carga inica. La fase estacionaria presenta una matriz
con carga. Al eludir una muestra, las molculas de igual carga salen
con el amortiguador. Las molculas de carga opuesta se adhieren al
material de empaque con distintos grados de afinidad. Para
desprender las protenas adheridas se usa una solucin alta en
cloruro de potasio o de sodio. Esto puede hacerse usando soluciones
con incrementos moderados de salinidad, o de un solo paso, echando
la solucin de mayor concentracin de sal primero. Al subir la
concentracin poco a poco podemos recolectar las muestras desde
las que menos afinidad por la columna tiene hasta las de mayor
afinidad. Durante la elucin, la sal va compitiendo con la protena por
las cargas de la matriz de la columna, hasta que la desprende.

La columna puede ser de matriz negativa (intercambio catinico) o

positiva (intercambio anicnico). El tipo de empaque depender de
qu queremos aislar. En este tipo de columna el pH es importante
porque puede alterar la carga de la columna.

La cromatografa de intercambio cannico se inicia a PH presentando

las protenas cargas positivas y achinndose a la matriz de la columna
cargada negativamente como la carboximeticeluosa.

Otra modalidad de separacin mediante la columna es la

cromatografa hidrfoba en la que se aplica la muestra a
concentracin salina elevada siendo eludidas con niveles bajos de sal.
La cromatografa de afinidad se basa en la fijacin especifica entre
una protena de inters y otra protena que se fija de forma covalente
al medio de soporte solido de una columna.