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Julio, 2017
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Efecto genotxico temprano de la exposicin a
cobre, plomo y arsnico en dorada (Sparus
aurata, L.) como modelo de monitorizacin
ambiental.
Resumen / Abstract
El siguiente trabajo de fin de grado trata sobre el estudio del efecto genotxico
producido en doradas, Sparus aurata, (Linnaeus, 1758), debido a la exposicin a
metales pesados como el plomo, arsnico y cobre. Los resultados se han obtenido
mediante el ensayo de microncleos, el cual evala la proporcin de estos en los
eritrocitos de sangre perifrica. Los peces fueron tratados con distintas
concentraciones de los metales, y a distintos tiempos de exposicin, 24 y 96 horas.
Estas anomalas han sido cuantificadas y estudiadas, con el fin de establecer la
relacin entre el aumento de la concentracin, y la aparicin de microncleos. El
estudio cuantifica la genotoxicidad producida en esta especie, con el fin de establecer
su idoneidad para la biomonitorizacin ambiental de ecosistemas acuticos.
The objective of these final graduation project work with the study of the genotoxic
effect produced in Sea bream , Sparus aurata, (Linnaeus, 1758), due to exposure to
heavy metals such as lead, arsenic and copper. The results were obtained by the
micronucleus assay, which evaluates the proportion of these in peripheral blood
erythrocytes. The fish were treated with different concentrations of metals, and at
different exposure times, 24 and 96 hours. These anomalies have been quantified and
studied, in order to establish the relationship between the increase in concentration and
the appearance of micronuclei. The study quantifies the genotoxicity produced in this
species, in order to establish its suitability for environmental biomonitoring of aquatic
ecosystems.
Palabras-Clave
Microncleos. Metales pesados. Genotoxicidad. Dao cromosmico. Sparus aurata.
Key-words
Micronuclei. Heavy metals. Genotoxicity. Chromosomic damaged. Sparus aurata.
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INDICE
1. INTRODUCCIN (PG 8)
1.1. LOS METALES PESADOS EN EL AMBIENTE (PAG 8)
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4.1.1. Datos de peces en los test con Cu (juveniles de dorada).
4.1.2. Datos de peces en los test con As (juveniles de dorada).
4.1.3. Datos de peces en los test con Pb (juveniles de dorada).
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NDICE DE CONTENIDOS
TABLAS
3.1.: Concentraciones de cobre en los distintos tanques para 24 h (PAG 18)
FIGURAS
3.1: Tanques para bioensayos de doradas con metales pesados. (PAG 16)
3.2: Tanques para bioensayos con doradas (Sparus aurata, L.) (PAG 17)
ANEXO I
Tabla 1: Datos de tallas y pesos de los peces para los test de toxicidad de Cu a las 24
horas en juveniles de dorada
Tabla 2: Datos de tallas y pesos de los peces para los test de toxicidad de Cu a las 96
horas en juveniles de dorada
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Tabla 3: Datos de tallas y pesos de los peces para los test de toxicidad de As a las 24
horas en juveniles de doradas
Tabla 4: Datos de tallas y pesos de los peces para los test de toxicidad de As a las 96
horas en juveniles de dorada
Tabla 5: Datos de tallas y pesos de los peces para los test de toxicidad de Pb a las 24
horas en juveniles de dorada
Tabla 6: Datos de tallas y pesos de los peces para los test de toxicidad de Pb a las 96
horas en juveniles de dorada
ANEXO II
Tabla 1: Datos de parmetros fsico-qumicos para test de toxicidad de Cu en juveniles
de dorada a las 0 h
ANEXO III
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Tabla 1: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en
los test de toxicidad del Cu a las 24 horas.
Tabla 2: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en
los test de toxicidad del Cu a las 96 horas.
Tabla 3: Comparacin del anlisis de microncleos en dorada (Sparus auratus, L.) en los
test de toxicidad del Cu en los dos tiempos de exposicin analizados (24 y 96 h).
Tabla 4: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en
los test de toxicidad del As a las 24 horas.
Tabla 5: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en
los test de toxicidad del As a las 96 horas.
Tabla 6.. Comparacin del anlisis de microncleos en dorada (Sparus auratus, L.) en los
test de toxicidad del As en los dos tiempos de exposicin analizados (24 y 96 h)
Tabla 7: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en
los test de toxicidad del Pb a las 24 horas.
Tabla 8: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en
los test de toxicidad del Pb a las 96 horas
Tabla 9: Comparacin del anlisis de microncleos en dorada (Sparus auratus, L.) en los
test de toxicidad del Pb en los dos tiempos de exposicin analizados (24 y 96 h)
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1. INTRODUCCIN
1.2. LOS METALES PESADOS EN EL AMBIENTE
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1.3. ORIGEN DEL COBRE, ARSNICO Y PLOMO EN EL MEDIO
1.3.1. Cobre
Hay dos formas en la extraccin del cobre, la mina a cielo abierto y las minas
subterrneas, siendo la primera la ms utilizada a nivel mundial. En las ltimas
dcadas, la industria dedicada al cobre, ha hecho progresos en mejoras tecnolgicas
que reduzcan los impactos ambientales, y aumente el reciclado de los productos. Con
el fin de reducir al mximo posible la contaminacin, el cobre se vuelve realmente
difcil, ya que en el proceso de reciclado, no se degrada ni pierde sus propiedades
fsicas y qumicas.
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1.3.2. Arsnico
1.3.3. Plomo
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Las dos principales maneras en la que el plomo entra en el organismo son, el
tracto gastrointestinal y las vas respiratorias. Un porcentaje de plomo es excretado
con la orina, el resto se establece en el esqueleto seo y es inerte, la parte que va por
el torrente sanguneo se deposita en los tejidos. El plomo puede afectar la sntesis de
la hemoglobina y el tiempo de vida media de los glbulos rojos, as como, al sistema
nervioso central y perifrico. La contaminacin por el plomo en los riones produce
cambios en las mitocondrias e inflamacin de las clulas del epitelio del tbulo
proximal y alteraciones funcionales que provocan aminoaciduria, glucosuria e
hiperfosfaturia, sndrome de Fanconi, segn Seoanez, (1999).
Todos los compuestos que contienen plomo son txicos, aunque a distintos
niveles, dependiendo de la naturaleza qumica y su nivel de solubilidad. Las
variaciones de parmetros hematolgicos como el hematocrito, la concentracin de
hemoglobina, el recuento de leucocitos y la frmula leucocitaria, pueden ser utilizadas
como indicadores de contaminacin (Haider, 1975; Hontela, 1998; Wahli, 2002)
En general, los efectos de los metales pesados en los peces son en gran
medida la asfixia por coagulacin de mucus en las branquias, acumulacin de los
mismos en tejidos y lesiones en los dos casos citados (Anadon et al., 1984).
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usada por el organismo. El dao gentico puede causar cambios tales como,
disfuncin enzimtica, citotoxicidad, inmunotoxicidad, desajustes metablicos, y
reproductivos, inhibicin del crecimiento, o la carcinognesis (Ohe et al, 2004;
Bolognesi y Hayashi, 2010).
La Ley 9/2010, de 30 de julio, de Aguas para Andaluca, regula la calidad de las aguas
y las condiciones de vertido y recuperacin de las aguas. La Ley estatal ya
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contemplaba un ttulo dedicado a la administracin de las aguas en Andaluca. Este
ttulo separa las principales funciones entre administracin y el ente local en materia
de agua. Dentro de la ley encontramos ciertos artculos en relacin a la contaminacin
de agua:
Baha de Cdiz.: los efluentes de la construccin naval y los efluentes urbanos de las
zonas de costa.
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1.7. IMPORTANCIA DEL METODO DE MICRONUCLEOS
El ensayo de microncleo (MN) y el ensayo cometa han demostrado ser muy tiles en
la monitorizacin de la toxicidad (Russo et al., 2004, Ahmed et al, 2011a, Barbosa et al,
2010, Monteiro et al., 2011, Cavas 2011).
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2. OBJETIVOS
El Objetivo principal de este trabajo es evaluar el efecto genotxico temprano
de tres metales pesados, cobre, arsnico y plomo, en dorada, (Sparus aurata,
Linnaeus, 1758), en condiciones controladas de laboratorio, como modelo de
biomonitorizacin ambiental.
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3. MATERIAL Y METODOS
3.1. INDIVIDUOS UTILIZADOS
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3.3. PREPARACIN DE LOS ENSAYOS
Figura 3.2: Tanques para bioensayos con doradas (Sparus aurata, L.)
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3.3.1. Test de toxicidad con cobre en dorada
Muestras en 24 H
Muestras en 96 H
Muestras en 24 H
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Muestras en 96 H :
Muestras en 24 H:
Muestras en 96 H:
Una vez preparados los tanques de los test de toxicidad, se realizaron la toma
de muestras de agua, para determinar in-situ los siguientes parmetros fsico-
qumicos: pH, temperatura, salinidad, conductividad, total de slidos disueltos y
oxgeno disuelto mediante el empleo de una sonda multiparamtrica (HI 9828, Hanna
Instruments).
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Los anlisis fsico-qumicos se realizaron a las 0, 24, 48, 72 y 96 horas, para
tener un seguimiento lo ms exhaustivo posible de las condiciones del agua empleada
en los distintos ensayos de genotoxicidad con los distintos metales.
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La presencia de microncleos indica efecto genotxico del metal sobre el
organismo. Es por tanto el mtodo de los microncleos el ms til en la evaluacin de
toxicidad en sistemas, determinando a partir de ellos el dao cromosmico.
Slo las clulas claramente aisladas del entorno fueron consideradas. Los
criterios para la identificacin de microncleos fueron los siguientes: (a) los
microncleos debe ser menores que un tercio de los ncleos principales, (b) Los
microncleos deben estar claramente separados de los ncleos principales, y (c) los
microncleos deben estar en el mismo plano de foco y tienen el mismo color. Para
evitar el sesgo, las preparaciones de cada tratamiento fueron codificadas y la
evaluacin realizada de forma ciega por parte de la persona investigadora.
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4. RESULTADOS
4.1. CARACTERIZACIN MORFOLGICA EN LOS ENSAYOS CON
JUVENILES DE DORADA.
En las Tabla 3.1 y 3.2, que se muestran en el Anexo I, se presentan los valores
medios de las tallas totales, tallas estndar y pesos de los juveniles de dorada
utilizados en los experimentos de toxicidad del cobre, distribuidos en los distintos
grupos experimentales de 24 horas y 96 horas, utilizados en el test para analizar los
efectos del cobre.
En las Tabla 3.3 y 3.4, que se muestran en el Anexo I, se presentan los valores
medios de las tallas totales, tallas estndar y pesos de los juveniles de dorada
utilizados en los experimentos de toxicidad del arsnico, distribuidos en los distintos
grupos experimentales de 24 horas y 96 horas, utilizados en el test para analizar los
efectos del arsnico.
En las Tabla 3.5 y 3.6, que se muestran en el Anexo I, se presentan los valores
medios de las tallas totales, tallas estndar y pesos de los juveniles de dorada
utilizados en los experimentos de toxicidad del plomo, distribuidos en los distintos
grupos experimentales de 24 horas y 96 horas, utilizados en el test para analizar los
efectos del plomo.
As, en las Tablas 3.7., 3.8., 3.9., 3.10., y 3.11., que se muestran en el Anexo II
se recogen todos los valores obtenidos de cada parmetro fsico-qumico para la
experiencia realizada con doradas sumergidas en tanques que contenan aguas con
Cu. De forma general, en el test de Cu, la temperatura vara entre 15,7 y 18,6C; el pH
se mantiene entre los rangos de 7,5 y 9,5; el oxgeno disuelto vara entre 4,9 y 8,8
ppm; la conductividad, entre 49,5 y 53,0 mScm-1; el total de slidos disueltos, entre
26,9 y 31,4 ppt; y la salinidad entre 38,5 y 53,4 gL-1.
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En las Tablas 3.12., 3.13., 3.14., 3.15., y 3.16., de ese mismo Anexo II se
encuentran los datos para el estudio de As. Hay que destacar que todos los
parmetros entran dentro de los mrgenes considerados adecuados para la
supervivencia de las especies en estudio y no varan significativamente dentro del
tiempo de estudio. Con respecto al test de As, los valores de temperatura varan entre
16,6 y 18,4C, el pH oscila entre 7,6 y 10,4; el oxgeno disuelto est comprendido
entre 6,9 y 9,8 ppm; la conductividad, entre 51,0 y 53,7 mScm-1; el total de slidos
disueltos, entre 29,5 y 38,9 ppt; y la salinidad, entre 32,7 y 42,3 gL-1.
Finalmente, en las Tablas 3.17, 3.18., 3.19, 3.20., y 3.21, del Anexo II se
recogen los valores fsico-qumicos para el estudio de Pb. En el test de Pb para
juveniles de dorada, la temperatura oscila entre 14,9 y 18,6C; el pH est comprendido
entre los valores de 7,3 y 9,7; el oxgeno disuelto vara entre 5,8 y 9,5 ppm; la
conductividad, entre 49,7 y 53,5 mScm-1; el total de slidos disueltos, entre 29,6 y
40,0 ppt; y la salinidad, entre 39,6 y 44,0 gL-1
Hay que destacar que en el test de Cu, las especies en los tanques 15 y 20
murieron a las 72 horas.
Los datos correspondientes a los microncleos observados por efecto del arsnico
se presentan en la Tabla 3.25 (24 horas de tratamiento), en la Tabla 3.26 (96 horas de
tratamiento), Tabla 3.27 (cuadro comparativo del efecto del tiempo de tratamiento) y
en las Figuras 3.3 (24 y 96 horas de tratamiento), 3.5 y 3.6.
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a) Ejemplos de microncleos presentes en eritrocitos perifricos de Sparus aurata L.,
producidos por el efecto genotxico de metales (cobre, arsnico o plomo).
a
b
Las tablas 3.22 y 3.23 del Anexo III muestran la cantidad de microncleos
encontrados en el anlisis de los eritrocitos bajo el efecto de distintas concentraciones
de cobre y para los dos tiempos de exposicin, respectivamente. En la ltima columna
de dichas tablas encontramos los datos normalizados para 1000 clulas analizadas.
Los datos que presentan asteriscos indican que los peces de dichos tanques han
fallecido.
25/73
b
a a a b
Segn la Figura 3.4 y la tabla 3.28 del Anexo III, con una exposicin de 96 h. la
frecuencia de microncleos se mantiene baja y estable en el control y la concentracin
de 0.01 mg/l, para experimentar un descenso en las dos concentraciones siguientes
0.1 y 1 mg/L. En la concentracin ms alta de 10mg/L se produce el leve incremento,
pero significativo, encontrndose el mayor nmero de microncleos.
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Para comparar el potencial de los tres metales pesados para inducir la
aparicin de microncleos, las frecuencias medias microncleos se representaron
frente a las concentraciones reales de metales en el agua (Fig. 3.5 para 24 horas y
Fig. 3.6 para 96 h.).
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a
4.4. ESTADSTICA.
29/73
5. DISCUSIN
Sparus aurata, es una especie autctona eurihalina que habita desde las Islas
Britnicas hasta Cabo Verde y por todo el Mediterrneo, e incluso el Mar menor.
Adems, es uno de los pescados comerciales ms importantes cultivados desde el
Atlntico a la regin mediterrnea, con el consecuente alto consumo humano
(Fernandes et al., 2009). Adems, tienen un gran inters para este tipo de estudios por
tener un elevado valor comercial, ser muy til como modelo para investigacin bsica
y en el caso de la dorada, por tener un notable inters filogentico, lo que representa
un valor aadido para profundizar en el estudio de sus caractersticas biolgicas y en
el efecto de la contaminacin metlica.
En nuestro estudio, la exposicin a los metales se llev a cabo a travs del
agua del tanque porque imita mejor la exposicin natural de los metales usualmente
disueltos o suspendidos en el agua (Rodriguez-Cea et al., 2003). Debido a que
estbamos interesados en dilucidar un biomarcador de respuesta temprana de la
genotoxicidad, y que las exposiciones a largo plazo pueden dar lugar a respuestas
adaptativas en los peces (Cavas et al., 2005, Ahmed et al., 2011a), se seleccion un
perodo experimental de 24 y 96 horas. Adems se prefiri estos modelos de plazo
corto y de cultivo esttico teniendo en cuenta que pueden evitar cualquier alteracin en
las condiciones experimentales que puedan dar lugar a estrs en los peces. Tambin,
se evalu una amplia gama de concentraciones de metales.
Todos los parmetros fsico-qumicos del agua donde se han cultivado los
peces estudiados entran dentro de los mrgenes considerados adecuados para la
supervivencia de las especies en estudio y no varan significativamente dentro del
tiempo de estudio. Por tanto, se puede descartar que los efectos genotxicos que se
observan en este estudio se deban a otros parmetros que no sean los metales
analizados.
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quedan dentro de lo que se considera normal y adecuado para los individuos juveniles
de esta especie, Sparus aurata.
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un efecto significativo en la carpa de Prusia (Carassius gibelio), aunque s provoc una
induccin de microncleos en la carpa comn (Cyprinus carpio).
La presencia del arsnico en los seres vivos difiere a los otros metales
estudiados, puesto que como ya se expuso anteriormente este metal podemos
encontrarlo en los organismos tanto de manera orgnica como inorgnica. Segn Liao
et al. (2003), la cantidad de arsnico inorgnico presente en especies de agua dulce
es superior a la de arsnico orgnico. Esta biodisponibilidad de un tipo de arsnico u
otro habra que tenerla presente a la hora de evaluar su posible efecto txico en
medios acuticos.
Por otra parte, la mayora de los efectos txicos del arsnico a nivel celular y/o
tisular estn relacionados con la produccin de estrs oxidativo y las alteraciones que
este proceso induce en las clulas de los organismos. As, se ha mostrado que
muchos efectos txicos del arsnico se producen va la inhibicin de la enzima
catalasa presente en los peroxisomas, ms que por la inhibicin de la enzima
citoslica (Bhattacharya et al., 2007). Sin embargo, el efecto txico de la peroxidacin
lipdica, a diferencia del cobre, no ocurre siempre de la misma manera sino que
depende de las especies (Schenk, 1997).
Estos resultados estn de acuerdo con los estudios previos realizados en otras
especies. Yadav y Trivedi (2009) observaron un incremento gradual dependiente del
tiempo en la frecuencia de microncleos en clulas sanguneas inducida por As2O3
(6,94 mg/L) desde 24 a 168 h de exposicin en Channa punctata. As mismo, Ahmed
et al. (2011a) encontraron que, en individuos de Oreochromis mossambicus expuestos
a NaAsO2 (3, 28 y 56 mg/L) desde 48 a 192 horas, la frecuencia de microncleos en
clulas sanguneas aument de manera dependiente de la concentracin, y adems el
valor ms alto se registr despus de 96 h. Cabe destacar que en Ramrez y Garca
(2005) tambin se observaron un incremento de 56 veces en la frecuencia de
microncleos en clulas branquiales de peces cebra (Danio rerio), mantenidas en
aguas de pozos con contenido de As entre 0.395 y 0.630 mg/L.
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En nuestro estudio, no se observ mortalidad en peces sometidos a exposicin
a Pb, y la frecuencia de microncleos no present valores altos, pero se observ que
la dosis ms alta (10 mg/L) provoc incrementos significativos, de hasta 2,7 veces
respecto al control, en el dao genotxico a las 24 horas. Por otra parte, tambin se
observ que en determinadas dosis a las 96 horas, la presencia de los microncleos
disminuye con respecto a lo que ocurre a las 24 h., lo cual puede deberse a una
precipitacin del plomo, producindose un descenso de la biodisponibilidad de este
metal para los peces.
Analizando el efecto toxico de cada uno de los tres metales durante 24 horas
podemos determinar que el cobre es el ms daino, seguido del arsnico, y siendo el
plomo el que menos dao produce. Los valores del cobre son los mayores y presentan
muchas diferencias con los otros dos metales, en cambio el arsnico y el plomo
presentan valores muy similares con respecto a la frecuencia de microncleos que
inducen. Por tanto, el potencial genotxico se ordena como: Cu> As > Pb.
Por su parte, cuando se comparan los efectos de cada uno de los tres metales
a las 96 horas de exposicin, se observa que el arsnico induce un fuerte incremento
en la frecuencia de microncleos con la concentracin ms alta (10mg/L), incremento
que llega a ser 5 veces mayor al observado con el plomo, el cual era muy similar al de
las 24 horas. Aun as el que mayor efecto genotxico produce es el cobre (que
adems induce la muerte de todos los peces con esa concentracin ms alta).
Destaca que el arsnico aun presentando mayores valores en las frecuencias de
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microncleos, no produce la muerte de los peces ni en sus dosis ms altas, mientras
que el cobre s provoca la muerte de algn individuo con dosis menores. Por tanto, el
orden del potencial genotxico de estos metales en tiempos de exposicin ms largos
es diferente: As> Cu> Pb en lo que a la capacidad de incrementar la frecuencia de
microncleos se refiere, puesto que si se tiene en cuenta su capacidad letal, el cobre
parece seguir siendo mucho ms txico que los otros dos metales.
6. CONCLUSIONES
Este estudio revel importantes aumentos de la frecuencia de MN en eritrocitos
perifricos de Sparus aurata dependientes de la dosis despus de la exposicin
individual a Cu, As y Pb durante 24 y 96 h.
34/73
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ANEXO I
TABLAS CON LA CARACTERIZACIN MORFOLGICA DE LOS PECES
EMPLEADOS EN LOS DISTINTOS ENSAYOS CON METALES.
42/73
mgL-1 de Sal mgL-1 N
TANQUE Talla Std Talla Total Peso
CuSO45H2O de Cu Peces
TQ 1 0 0 6 11,450,22 14,270,24 40,201,19
TQ 6 0 0 6 11,800,26 14,520,20 44,581,88
TQ 2 0,01 0,01 6 11,530,12 13,750,28 38,901,51
TQ 7 0,01 0,01 6 11,600,15 14,470,19 45,222,32
TQ 3 0,1 0,1 6 11,670,19 14,680,17 46,522,46
TQ 8 0,1 0,1 6 11,530,18 14,120,44 40,724,06
TQ 4 1 1 6 11,420,13 14,530,22 44,602,15
TQ 9 1 1 6 11,820,16 14,850,26 46,923,77
TQ 5 10 10 6 + + +
TQ 10 10 10 6 12,270,28 14,630,32 41,631,84
Tabla 1: Datos de tallas y pesos de los peces para los test de toxicidad de Cu a las 24 horas en
juveniles de dorada
Tabla 2: Datos de tallas y pesos de los peces para los test de toxicidad de Cu a las 96 horas en
juveniles de dorada
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mgL-1 de
Sal mgL-1 N
TANQUE Talla Std Talla Total Peso
de As Peces
(As2O3)
TQ 1 0 0 6 12,980,10 15,370,24 51,722,17
44/73
mgL-1 de Sal mgL-1 N
TANQUE Talla Std Talla Total Peso
(Pb(CH3COOH)2 de Pb Peces
Tabla 5. Datos de tallas y pesos de los peces para los test de toxicidad de Pb a las 24 horas en
juveniles de dorada
mgL-1 de Sal
mgL-1 N
TANQUE Talla Std Talla Total Peso
de Pb Peces
(Pb(CH3COOH)2
TQ 11 0 0 6 12,570,25 14,670,24 42,571,40
Tabla 6. Datos de tallas y pesos de los peces para los test de toxicidad de Pb a las 96 horas en
juveniles de dorada
45/73
ANEXO II
46/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
47/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
48/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
49/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
50/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
51/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
52/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
53/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
54/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
55/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
56/73
O2 % O2 Conductividad STD Salinidad
TANQUE T (C) pH
saturacin ppm (mScm-1) (ppt) (gL-1)
57/73
ANEXO III
58/73
EFECTOS DEL TRATAMIENTO CON COBRE
media de
Nmero de
mg/L Tiempo del Microncleos Microncleos microncleos
Tanque N peces eritrocitos
cobre tratamiento cuantificados (%o) por
analizados
tratamiento
1 0 24 h 1 1079 0,00 0,000
2 1066 3,00 2,814
3 1005 0,00 0,000
0,630
4 1033 1,00 0,968
5 1007 0,00 0,000
6 1018 0,00 0,000
6 0 24 h 1 1013 0,00 0,000
2 1012 3,00 2,964
3 1011 1,00 0,989
1,326
4 1046 1,00 0,956
5 1022 0,00 0,000
6 985 3,00 3,046
2 0,01 24 h 1 1007 3,00 2,979
2 1016 1,00 0,984
3 1124 0,00 0,000
0,661
4 1046 0,00 0,000
5 1007 0,00 0,000
6 706 0,00 0,000
7 0,01 24 h 1 1059 0,00 0,000
2 1012 0,00 0,000
3 1017 0,00 0,000
0,323
4 1003 0,00 0,000
5 1047 0,00 0,000
6 1032 2,00 1,938
3 0,1 24 h 1 1078 1,00 0,928
2 1051 2,00 1,903
3 1045 0,00 0,000
0,793
4 1037 2,00 1,929
5 1069 0,00 0,000
6 1023 0,00 0,000
8 0,1 24 h 1 1064 0,00 0,000
2 1062 0,00 0,000
3 1019 2,00 1,963
0,327
4 1054 0,00 0,000
5 1073 0,00 0,000
6 943 0,00 0,000
4 1 24 h 1 1008 0,00 0,000
1,071
2 1001 1,00 0,999
59/73
3 1151 2,00 1,738
4 1109 3,00 2,705
5 1016 1,00 0,984
6 1061 0,00 0,000
9 1 24 h 1 1027 0,00 0,000
2 1091 1,00 0,917
3 1047 1,00 0,955
3,167
4 1001 1,00 0,999
5 1080 14,00 12,963
6 ** ** **
5 10 24 h 1 1019 2,00 1,963
2 1004 1,00 0,996
3 899 1,00 1,112
1,951
4 1006 0,00 0,000
5 1018 5,00 4,912
6 1102 3,00 2,722
10 10 24 h 1 ** ** **
2 ** ** **
3 ** ** **
4 ** ** **
5 ** ** **
6 ** ** **
Tabla 1: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en los
test de toxicidad del Cu a las 24 horas.
60/73
Nmero Media de
de microncleos
mg/L Tiempo del eritrocitos Microncleos Microncleos por
Tanque cobre tratamiento Npeces analizados cuantificados (%o) tratamiento
1 0 96 h 1 1003 0,00 0,000
2 1030 0,00 0,000
3 1062 2,00 1,883
0,314
4 1003 0,00 0,000
5 1038 0,00 0,000
6 1035 0,00 0,000
6 0 96 h 1 1097 0,00 0,000
2 1052 0,00 0,000
3 1049 0,00 0,000
0,160
4 1065 0,00 0,000
5 1039 1,00 0,962
6 1073 0,00 0,000
2 0,01 96 h 1 1141 0,00 0,000
2 1008 1,00 0,992
3 1046 6,00 5,736
1,346
4 1090 0,00 0,000
5 1086 0,00 0,000
6 ** ** **
7 0,01 96 h 1 1015 0,00 0,000
2 1071 0,00 0,000
3 1047 1,00 0,955
0,159
4 1029 0,00 0,000
5 1014 0,00 0,000
6 1107 0,00 0,000
3 0,1 96 h 1 1028 0 0,000
2 1010 0,00 0,000
3 1047 0,00 0,000
0,000
4 1019 0,00 0,000
5 1067 0,00 0,000
6 1023 0,00 0,000
8 0,1 96 h 1 1095 0,00 0,000
2 1047 0,00 0,000
3 1072 0,00 0,000
0,000
4 1009 0,00 0,000
5 1019 0,00 0,000
6 1054 0,00 0,000
4 1 96 h 1 1029 0,00 0,000
2 1049 0,00 0,000
0,314
3 1061 2,00 1,885
4 1113 0,00 0,000
61/73
5 1029 0,00 0,000
6 1132 0,00 0,000
9 1 96 h 1 1026 6,00 5,848
2 1042 1,00 0,960
3 1015 1,00 0,985
1,559
4 1068 0,00 0,000
5 1103 0,00 0,000
6 ** ** **
5 10 96 h 1 1003 0,00 0,000
2 ** ** **
3 1083 0,00 0,000
0,000
4 1007 0,00 0,000
5 1108 0,00 0,000
6 1099 0,00 0,000
10 10 96 h 1 * * *
2 * * *
3 * * *
4 * * *
5 * * *
6 * * *
Tabla 2: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en los
test de toxicidad del Cu a las 96 horas.
62/73
Total Cantidad de
mg/L Tiempo de N eritrocitos Total microncleos
Tanque cobre tratamiento peces Muertes contados microncleos %0
1 0 24 h 6 0 6208 4 0,644
6 0 24 h 6 0 6089 8 1,314
2 0,01 24 h 6 0 5906 4 0,677
7 0,01 24 h 6 0 6170 2 0,324
3 0,1 24 h 6 0 6303 5 0,793
8 0,1 24 h 6 0 6215 2 0,322
4 1 24 h 6 0 6346 7 1,103
9 1 24 h 6 0 5246 17 3,241
6 10 24 h 6 0 6087 12 1,971
10 10 24 h 6 6 0 0 0,000
11 0 96 h 6 0 6171 2 0,324
16 0 96 h 6 0 6375 1 0,157
12 0,01 96 h 6 0 5371 7 1,303
17 0,01 96 h 6 0 6283 1 0,159
13 0,1 96 h 6 0 6194 0 0,000
18 0,1 96 h 6 0 6296 0 0,000
14 1 96 h 6 0 6413 2 0,312
19 1 96 h 6 0 5254 9 1,713
15 10 96 h 6 1 5300 0 0,000
20 10 96 h 6 6 0 0 0,000
Tabla 3:Comparacin del anlisis de microncleos en dorada (Sparus auratus, L.) en los test de
toxicidad del Cu en los dos tiempos de exposicin analizados (24 y 96 h).
63/73
EFECTOS DEL TRATAMIENTO CON ARSNICO
Nmero media de
de microncleos
mg/L Tiempo del eritrocitos Microncleos Microncleos por
Tanque Arsnico tratamiento Npeces analizados cuantificados (%o) tratamiento
1 0 24 h 1 1040 0,00 0,000
2 1008 0,00 0,000
3 1011 2,00 1,978
0,967
4 1059 0,00 0,000
5 1033 1,00 0,968
6 1050 3,00 2,857
6 0 24 h 1 1060 0,00 0,000
2 1022 0,00 0,000
3 1073 0,00 0,000
0,324
4 1041 0,00 0,000
5 1008 1,00 0,992
6 1051 1,00 0,951
2 0,01 24 h 1 1036 0,00 0,000
2 1057 0,00 0,000
3 1062 0,00 0,000
0,000
4 1009 0,00 0,000
5 989 0,00 0,000
6 1027 0,00 0,000
7 0,01 24 h 1 1017 0,00 0,000
2 1014 0,00 0,000
3 1008 2,00 1,984
1,811
4 1069 0,00 0,000
5 1082 0,00 0,000
6 1013 9,00 8,885
3 0,1 24 h 1 1019 0,00 0,000
2 1004 0,00 0,000
3 1000 0,00 0,000
0,166
4 1143 0,00 0,000
5 1003 1,00 0,997
6 1042 0,00 0,000
8 0,1 24 h 1 1015 2,00 1,970
2 1050 2,00 1,905
3 1003 0,00 0,000
0,646
4 1044 0,00 0,000
5 1026 0,00 0,000
6 1101 0,00 0,000
4 1 24 h 1 1142 0,00 0,000 0,332
64/73
2 1012 0,00 0,000
3 1013 0,00 0,000
4 998 1,00 1,002
5 1010 1,00 0,990
6 1017 0,00 0,000
9 1 24 h 1 1049 0,00 0,000
2 1002 0,00 0,000
3 1080 0,00 0,000
0,622
4 1154 2,00 1,733
5 1001 2,00 1,998
6 1012 0,00 0,000
5 10 24 h 1 996 0,00 0,000
2 10077 0,00 0,000
3 1006 1,00 0,994
0,821
4 1008 3,00 2,976
5 1043 1,00 0,959
6 1035 0,00 0,000
10 10 24 h 1 1020 1,00 0,980
2 1050 0,00 0,000
3 1080 0,00 0,000
1,131
4 1012 0,00 0,000
5 1006 0,00 0,000
6 1034 6,00 5,803
Tabla 4: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en los
test de toxicidad del As a las 24 horas.
65/73
Nmero Media de
de microncleos
mg/L Tiempo del eritrocitos Microncleos Microncleos por
Tanque Arsnico tratamiento Npeces analizados cuantificados (%o) tratamiento
1 0 96 h 1 1022 0,00 0,000
2 1067 0,00 0,000
3 1013 1,00 0,987
0,962
4 1023 1,00 0,978
5 1047 2,00 1,910
6 1053 2,00 1,899
6 0 96 h 1 1077 0,00 0,000
2 1094 2,00 1,828
3 1096 1,00 0,912
0,610
4 1127 0,00 0,000
5 1086 1,00 0,921
6 1102 0,00 0,000
2 0,01 96 h 1 1011 1,00 0,989
2 1011 1,00 0,989
3 1017 1,00 0,983
1,472
4 1098 1,00 0,911
5 1008 4,00 3,968
6 1007 1,00 0,993
7 0,01 96 h 1 1031 0,00 0,000
2 1029 0,00 0,000
3 1049 0,00 0,000
0,483
4 1047 2,00 1,910
5 1067 0,00 0,000
6 1013 1,00 0,987
3 0,1 96 h 1 1070 1,00 0,935
2 1045 1,00 0,957
3 1058 4,00 3,781
0,945
4 1003 0,00 0,000
5 1001 0,00 0,000
6 1034 0,00 0,000
8 0,1 96 h 1 1119 0,00 0,000
2 1039 2,00 1,925
3 1051 1,00 0,951
0,925
4 1022 0,00 0,000
5 1074 0,00 0,000
6 1123 3,00 2,671
4 1 96 h 1 1002 0,00 0,000
2 1038 1,00 0,963 0,637
3 1073 0,00 0,000
66/73
4 1020 1,00 0,980
5 1065 2,00 1,878
6 1049 0,00 0,000
9 1 96 h 1 1068 0,00 0,000
2 1142 3,00 2,627
3 1129 0,00 0,000
0,898
4 1008 0,00 0,000
5 1002 0,00 0,000
6 1087 3,00 2,760
5 10 96 h 1 1033 0,00 0,000
2 1056 1,00 0,947
3 1002 0,00 0,000
0,476
4 1041 0,00 0,000
5 1010 0,00 0,000
6 1047 2,00 1,910
10 10 96 h 1 1044 5,00 4,789
2 1060 0,00 0,000
3 1058 14,00 13,233
6,128
4 1044 8,00 7,663
5 1173 13,00 11,083
6 1072 0,00 0,000
Tabla 5: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en los
test de toxicidad del As a las 96 horas.
67/73
Total
mg/L Tiempo de N eritrocitos Total Cantidad de
Tanque Arsenico tratamiento peces Muertes contados micronucleos micronucleos %0
1 0 24 h 6 0 6201 6 0,968
6 0 24 h 6 0 6255 2 0,320
2 0,01 24 h 6 0 6180 0 0,000
7 0,01 24 h 6 0 6203 11 1,773
3 0,1 24 h 6 0 6211 1 0,161
8 0,1 24 h 6 0 6239 4 0,641
4 1 24 h 6 0 6192 2 0,323
9 1 24 h 6 0 6298 4 0,635
6 10 24 h 6 0 15165 5 0,330
10 10 24 h 6 0 6202 7 1,129
11 0 96 h 6 0 6225 6 0,964
16 0 96 h 6 0 6582 4 0,608
12 0,01 96 h 6 0 6152 9 1,463
17 0,01 96 h 6 0 6236 3 0,481
13 0,1 96 h 6 0 6211 6 0,966
18 0,1 96 h 6 0 6428 6 0,933
14 1 96 h 6 0 6247 4 0,640
19 1 96 h 6 0 6436 6 0,932
15 10 96 h 6 0 6189 3 0,485
20 10 96 h 6 0 6451 32 4,960
Tabla 6.. Comparacin del anlisis de microncleos en dorada (Sparus auratus, L.) en los test
de toxicidad del As en los dos tiempos de exposicin analizados (24 y 96 h)
68/73
EFECTOS DEL TRATAMIENTO CON PLOMO
Nmero
de Media de
mg/L Tiempo del eritrocitos Microncleos Microncleos microncleos
Plomo tratamiento Npeces analizados cuantificados (%o) por tratamiento
0 24 h 1 1027 0,00 0,000
2 1080 1,00 0,926
3 1065 3,00 2,817
0,624
4 1060 0,00 0,000
5 1001 0,00 0,000
6 1096 0,00 0,000
0 24 h 1 1034 0,00 0,000
2 1059 0,00 0,000
3 1008 0,00 0,000
0,158
4 1023 0,00 0,000
5 1056 1,00 0,947
6 1034 0,00 0,000
0,01 24 h 1 1121 0,00 0,000
2 1043 0,00 0,000
3 1102 0,00 0,000
0,000
4 1054 0,00 0,000
5 1057 0,00 0,000
6 1086 0,00 0,000
0,01 24 h 1 1050 0,00 0,000
2 1046 0,00 0,000
3 1088 0,00 0,000
0,313
4 1051 0,00 0,000
5 1175 0,00 0,000
6 1064 2,00 1,880
0,1 24 h 1 1009 1,00 0,991
2 1037 1,00 0,964
3 1043 1,00 0,959
0,486
4 1080 0,00 0,000
5 1089 0,00 0,000
6 1018 0,00 0,000
0,1 24 h 1 1053 2,00 1,899
2 1057 0,00 0,000
3 1078 0,00 0,000
0,814
4 1009 0,00 0,000
5 1006 3,00 2,982
6 1018 0,00 0,000
1 24 h 1 1003 0,00 0,000
0,318
2 1074 1,00 0,931
69/73
3 1082 0,00 0,000
4 1004 0,00 0,000
5 1025 1,00 0,976
6 1068 0,00 0,000
1 24 h 1 1050 0,00 0,000
2 1085 4,00 3,687
3 1083 0,00 0,000
0,614
4 1078 0,00 0,000
5 1098 0,00 0,000
6 1174 0,00 0,000
10 24 h 1 1042 0,00 0,000
2 1165 1,00 0,858
3 1041 1,00 0,961
0,303
4 1073 0,00 0,000
5 1076 0,00 0,000
6 1080 0,00 0,000
10 24 h 1 1018 0,00 0,000
2 1116 6,00 5,376
3 1063 0,00 0,000
0,896
4 1016 0,00 0,000
5 1052 0,00 0,000
6 1084 0,00 0,000
Tabla 7:Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en los test
de toxicidad del Pb a las 24 horas.
70/73
Nmero
de Media de
mg/L Tiempo del eritrocitos Microncleos Microncleos micronucleos
Plomo tratamiento Npeces analizados cuantificados (%o) por tratamiento
0 96 h 1 1039 0,00 0,000
2 1039 1,00 0,962
3 1109 0,00 0,000
0,961
4 1010 0,00 0,000
5 1015 0,00 0,000
6 1041 5,00 4,803
0 96 h 1 1116 0,00 0,000
2 1141 0,00 0,000
3 1100 0,00 0,000
0,000
4 1101 0,00 0,000
5 1054 0,00 0,000
6 1060 0,00 0,000
0,01 96 h 1 1004 0,00 0,000
2 1072 1,00 0,933
3 1020 0,00 0,000
0,474
4 1003 0,00 0,000
5 1065 0,00 0,000
6 1048 2,00 1,908
0,01 96 h 1 1049 1,00 0,953
2 1120 2,00 1,786
3 1042 1,00 0,960
0,616
4 1134 0,00 0,000
5 1188 0,00 0,000
6 1007 0,00 0,000
0,1 96 h 1 1006 0,00 0,000
2 1039 1,00 0,962
3 1027 0,00 0,000
0,316
4 1084 0,00 0,000
5 1074 1,00 0,931
6 1019 0,00 0,000
0,1 96 h 1 1102 0,00 0,000
2 1075 0,00 0,000
3 1135 0,00 0,000
0,301
4 1109 2,00 1,803
5 1051 0,00 0,000
6 1031 0,00 0,000
1 96 h 1 1055 0,00 0,000
2 1016 0,00 0,000 0,000
3 1018 0,00 0,000
71/73
4 1075 0,00 0,000
5 1155 0,00 0,000
6 1057 0,00 0,000
1 96 h 1 1002 0,00 0,000
2 1097 0,00 0,000
3 1030 3,00 2,913
0,642
4 1062 1,00 0,942
5 1025 0,00 0,000
6 1075 0,00 0,000
10 96 h 1 * * 0,000
2 1015 0,00 0,000
3 108 0,00 0,000
0,000
4 1014 0,00 0,000
5 1065 0,00 0,000
6 1051 0,00 0,000
10 96 h 1 1009 2,00 1,982
2 1038 0,00 0,000
3 1085 0,00 0,000
0,330
4 1029 0,00 0,000
5 1194 0,00 0,000
6 1001 0,00 0,000
Tabla 8: Cantidad de Microncleos (por mil eritrocitos) en dorada (Sparus auratus, L.) en los
test de toxicidad del Pb a las 96 horas
72/73
Total Cantidad de
mg/L Tiempo de N eritrocitos Total microncleos
Tanque Plomo tratamiento peces Muertes contados microncleos %0
1 0 24 h 6 0 6329 4 0,632
6 0 24 h 6 0 6214 1 0,161
2 0,01 24 h 6 0 6463 0 0,000
7 0,01 24 h 6 0 6474 2 0,309
3 0,1 24 h 6 0 6276 3 0,478
8 0,1 24 h 6 0 6221 5 0,804
4 1 24 h 6 0 6256 2 0,320
9 1 24 h 6 0 6568 4 0,609
6 10 24 h 6 0 6477 2 0,309
10 10 24 h 6 0 6349 6 0,945
11 0 96 h 6 0 6253 6 0,960
16 0 96 h 6 0 6572 0 0,000
12 0,01 96 h 6 0 6212 3 0,483
17 0,01 96 h 6 0 6540 4 0,612
13 0,1 96 h 6 0 6249 2 0,320
18 0,1 96 h 6 0 6503 2 0,308
14 1 96 h 6 0 6376 0 0,000
19 1 96 h 6 0 6291 4 0,636
15 10 96 h 6 0 4253 0 0,000
20 10 96 h 6 0 6356 2 0,315
Tabla 9 : Comparacin del anlisis de microncleos en dorada (Sparus auratus, L.) en los test
de toxicidad del Pb en los dos tiempos de exposicin analizados (24 y 96 h)
73/73