Qumica Analtica II - Gua de Coloquios

COLOQUIO N5
ESPECTROFOTOMETRIA

1- Determinacin de X en presencia de interferencia Z

Tcnica: Se pesan 0,5 g de muestra, se desecan en estufa y luego se incineran en mufla. Estas
cenizas se disuelven con 10 mL de HCl 0,1 M, se colocan en un matraz de 25 mL y se completa el
volumen con agua destilada.
De esta ltima solucin se toma 1 mL, se colocan en un matraz de 25 mL y se agregan 10 mL
de reactivo acomplejante de Z (a fin de evitar la reaccin de Z con el reactivo de color), se
homogeiniza, se deja en reposo 1 minuto, se adicionan 5 mL de reactivo de color y finalmente se
enrasa con agua destilada. Finalmente se lee la Absorbancia de esta solucin.
- Efectuar los clculos necesarios para la construccin de una curva de calibrado, sabiendo que
se dispone de una solucin de 100 mg de X/100 mL, matraces de 50 mL y considerando que el
promedio de X en la muestra es del 5 %.

Muestra: 0,5 g 25 mL

1 mL 25 mL
5 x 0,5 g x 1000mL x 1000 mg x 1mL
Considerando que X en la muestra es el 5% =40 ppm
100 x 1 L x 25 mL x 25 mL x 1 g

100 mg
Solucin Patrn: =1000 ppm
100 mL
1 mL 5 mL
Matraz (50 mL) 1 2 3 4 5 6
SP (dil 1/5) - 4 8 12 16 20
HCl (dil 10/25) 2 - - - - -
Rvo. Acomplejante 20 - - - - -
Enrasar con agua destilada

2 Cuantificacin de Creatinina por el mtodo de Jaff

Tcnica: En un tubo de centrfuga colocar 0,75 mL de suero y 3,75 mL de cido pcrico. Mezclar
por inversin, dejar reposar durante 10 minutos y centrifugar como mnimo 5 minutos a 3000 rpm.
Del sobrenadante se toman 3 mL y se agrega 0,5 mL de NaOH, esta solucin se deja en reposo 20
min y posteriormente se lee en espectrofotmetro a 510 nm.
VALORES DE REFERENCIA: En personas adultas: suero: 7 - 14 mg/L

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RENDIMIENTO ANALITICO: Linealidad: se verifica hasta 40 mg/L

- Realizar los clculos necesarios para preparar una curva de calibrado, para
cuantificar la muestra as preparada.
Datos: _Solucin Patrn de Creatinina: 100 ppm.
_Se dispone de matraces de 50 mL

Muestra: 7 - 14 mg 10,5mg
mg
10,5 x 0,75 mL x 3 mL
0,75 mL 4,5 mL L
=1,5 ppm
4,5 mL x 3,5 mL

3 mL 3,5 mL

Solucin Patrn: 100 ppm

mg
100 x 1 mL
L
=10 ppm
10 mL
1 mL 10 mL

Matraz (50 1 2 3 4 5 6
mL)
SP (dil - 3 6 9 12 15
1/10)
Enrasar con agua destilada

Blanco de muestra: en un matraz de 50 mL agregar 35 mL de cido pcrico y 7 mL de NaOH,

enrasar con agua destilada.

3- A 1 mL de suero se le agregaron 4 mL de c. tricloroactico al 10 %. Se centrifuga, y en 3 tubos

se coloca:

(mL) B T D
Sobrenadante del centrifugado - - 1
Sol. Patrn de 60 ppm - 1 -
Reactivo de color 0,2 0,2 0,2
HCl 8 8 8
Agua destilada 1 - -

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Colocar todos los tubos en bao a 37 C, 75 minutos. Enfriar y leer en fototmetro a 520 nm.
Las medidas de absorbancias contra blanco de reactivos fueron:
AT = 0,200 A D = 0,180
Calcular la concentracin de inulina en mg % en suero.
Datos: b = 1 cm. - Se cumple la ley de Beer.

Muestra: 1 mL 5 mL SP: 60 ppm

60 ppm x 1mL
1 mL 9,2 mL 1 mL 9,2 mL =6,52 ppm
9,2 mL

6,52 ppm x 0,18 x 9,2 mL x 5 mL x 100 mL

=26,99 mg
0,2 x 1 mL x 1 mL x 1000 mL

4 - Para determinar la concentracin de X, se colocan 0,166 g de muestra en un matraz de 200

mL, se disuelven con 50 mL de HCl y se enrasa con H 2O destilada. Se homogeniza, se filtra y 10
mL del filtrado se mezclan con 15 mL de H2O destilada, siendo esta la solucin incgnita.
Se dispone de una solucin patrn de 50 ppm.
Se colocan en 5 tubos:
Matraz 1 2 3 4 5
Solucin Patrn Dil 1/5 (mL) 3 - - - -
Solucin Muestra Dil 1/10 (mL) - 2 - - -
Reactivo Color (mL) 2 2 2 2 2
H2O destilada (mL) - 2 3 4 6
Transmitancia %T 22.91 24.83 91.2 92.68 94.41

Las lecturas fueron leidas a 630 nm. La reaccin cumple con la Ley de beer en el rango
trabajado. Calcule el % de X en la muestra.
Muestra: 0.166 g 200 mL SP: 50 ppm

10 mL 25 mL 1 mL 5 mL

2 mL 6 mL 3 mL 5 mL
A: 0,605 0,03 = 0,57 A: 0,64 0,04 = 0,6
50 mg x 1 mL x 3 mL 0,57 x 6 ppm
SP: =6 ppm Muestra: =5,7 ppm
1 L x 5 mL x 5 mL 0,6

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mg
5,7 x 6 mL x 25 mL x 0,2 L x 100
L
=5,15
2 mL x 10 mL x 166 mg
5- Determinacin de cidos grasos esterificados en suero.
En un tubo de centrfuga se colocan 3,8 mL de isopropanol y se aaden 0,2 mL de suero. Se
deja reposar 10 minutos, se lleva a bao mara hirviente y se centrifuga. Se preparan 3 tubos como
B, T y D, de la siguiente manera:

B D T
-1
Sol. deNaOH 13,5 gL 1 1 1
Hidroxilamina 1 1 1
Isopropanol 3 - 2,2
Sobrenadante - 3 -
Solucin Testigo - - 0,8

Los tubos se dejan reposar y luego se agrega a cada uno:

HCl3,8 M 1 1 1
FeCl3 1 1 1
La concentracin del testigo de cidos grasos esterificados (triolena) es de 5 mg %.
Luego de 20 min. se lee en fotmetro a 520 nm.
Frente a un blanco de agua destilada, las absorbancias observadas fueron:
AB = 0,098 AT = 0,280 AD = 0,360
Determinar la concentracin de AG del suero en gL -1.
Muestra (D): 0,2 mL 4 mL

3 mL 7 mL A D AB = 0,360 0,098= 0,262

Testigo (T): 5 mg 100 mL

0,8 mL 7 mL A T AB = 0,280 0,098 = 0,182

5 x 103 g x 0,8 mL x 1000 mL

CT: =5,71 x 103 g / L
100 mL x 7 mL x 1 L

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g
0,262 x 5,71 x 103 x 7 mL x 4 mL
CM: L
=0,384 g/ L
0,182 x 3 nL x 0,2 mL

6- Determinacin de cido ascrbico (Vitamina C).

Esta determinacin se basa en el efecto decolorante de la Vit. C sobre una solucin coloreada
de indofenol-acetato en medio cido. La disminucin de color es proporcional a la cantidad de Vit.C
presente en la muestra.
Tcnica Operatoria: en un tubo de centrfuga, colocar 2 g de muestra, 4 mL de H 2O destilada y 4
mL de c. metafosfrico al 5 %. Agitar y luego centrifugar. Posteriormente en 2 cubetas de
medicin, marcados como 1 y 2, colocar:

Cubeta N 1 2
H2O destilada (mL) 2 -
Sol. deindofenol-acetato (mL) 4 4
c. metafosfrico (mL) 2 -
Lquido sobrenadante (mL) - 4
Homogeneizar, leer dentro de los 30 min. con filtro 53. T % 50 60

Calibracin: en un matraz de 1.000 mL colocar 100 mg de c.ascrbico. Disolver con H 2O,

agregar gotas de tolueno y enrasar. Tomar 25 mL y llevar a 200 mL. En 6 tubos colocar:

Tubo N 1 2 3 4 5 6
Solucin Patrn diluda (mL) 0 1 2 3 4 5
H2O destilada (mL) 5 4 3 2 1 0
c. Metafosfrico (mL) 5 5 5 5 5 5

Homogeneizar. Luego proceder de la siguiente forma para realizar las lecturas de transmitancia:
en una cubeta de medicin colocar 4 mL de solucin de indofenol-acetato y 4 mL del contenido del
tubo N1, realizar la lectura dentro de los 30 min, a 530 nm. En otra cubeta de medicin, colocar 4
mL de solucin de indofenol-acetato y 4 mL del contenido del tubo 2. Leer en las mismas
condiciones anteriores.
De la misma manera se procede con los restantes tubos.
Las lecturas de T (%) obtenidas fueron:
T1 = 50 T2 = 54 T3 = 58 T4 = 63 T5 = 67,5 T6 = 70
Calcular la cantidad de Vit.C que contiene la muestra.

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Muestra : 2 g 8 mL
4 mL 8 mL A B AM = 0,3 0,22 = 0,08
Curva de Calibrado:
Tubo 2 : SP : 100mg 1000 mL
25 mL 200 mL
1 mL 10 mL
4 mL 8 mL
100 mg x 25 mL x 1mL x 4 mL
CT2 : =0,625 ppm
1 L x 200 mL x 10 mL x 8 mL

Tubo C (ppm) A
1 - 0,30
2 0,625 0,03
3 1,250 0,06
4 1,875 0,10
5 2,50 0,13
6 3,125 0,15

Object 27

1,55 mg x 8 mL x 8 mL mg Vit . C
CM : =0,0248
1000 mL x 4 mL 2 g muestra

0,0248mg x 1 g x 100 g 3
CM : =1,24 x 10 g
1000 mg x 2 g
7- Construccin de una curva de calibrado para la cuantificacin de X. Procesamiento de la
muestra: 2 g de muestra orgnica se digieren con aproximadamente 25 mL de una mezcla cida.
Una vez enfriada, se trasvasa a un matraz de 500mL y se enrasa con agua destilada. De esta
solucin se toman 10 mL, se llevan a un matraz de 500 mL, enrasando con agua destilada. Esta
ltima solucin es la que se emplea en la lectura.
Solucin patrn: 1000 mg X L-1
Datos:
- matraces disponibles para construir la curva de calibrado: 50 mL
- valor estimado de X en este tipo de muestras orgnicas 800 mg X /1000 mg de muestra

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Cmo construye la curva de calibrado? Realizar todos los clculos correspondientes. Cmo

hace el blanco de muestra?

Muestra: 2 g 500 mL SP: 1000 ppm

10mL 500 mL 10 mL 200 mL

800 mg X
X
1000 mg Muestra

800 mg x 2 g x 10 mL x 1000 mL
=6,4 ppm
1 g x 500 mL x 500 mL x 1 L

Matraz (50 mL) 1 2 3 4 5 6

SP (dil 1/20) - 2,5 5 7,5 10 12,5
Enrasar con agua destilada
CSP (ppm) 0 2,5 5 7,5 10 12,5

Blanco de muestra: en un matraz de 50 mL colocar 0,5 mL de mezcla cida, enrasar con agua
destilada.

8- A los fines de determinar la concentracin de una sustancia A en una muestra slida, una
porcin de 5 gr se disolvi con 150 mL de agua destilada. A 30 mL de esta solucin se los trat con
un reactivo precipitante y el precipitado formado que contena la sustancia A se disolvi con 30 mL
de agua acidulada. De esta solucin se colocaron 5 mL en dos tubos marcados como B M y D; se
adicionaron 5 mL de agua al primero y 5 mL de reactivo de color al segundo respectivamente.
Se dispone de una curva de calibrado con los siguientes valores, ledos frente a blanco de
reactivos:

A 0,045 0,090 0,136 0,180 0,200

Conc (mgmL-1) 1,5 3 4,5 6 7,5

Desea conocerse el % de A que contiene la muestra si despus de realizar el procedimiento

antes descripto las A observadas fueron:
ABM = 0,005 AD = 0,075

Muestra: 5 g 150 mL
5 mL 10 mL AM ABM = 0,075 0,005 = 0,07

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Object 38

mg
2,3 x 10 mL x 150 mL x 100 mg
Muestra: mL
=13,8 mg
5 mL x 5000 mg

9- Determinacin de B en una muestra slida.

A los fines de determinar la cantidad de B en una muestra slida, se procedi as: 5 g de
muestra se trataron con 50 mL de ter etlico, con el que se extrae totalmente la sustancia B. Luego
se evapora a sequedad y el residuo seco obtenido se disuelve con 15 mL de alcohol. Se toman 5
mL de esta solucin, se le adicionan 3 mL de reactivo de color y se lee. La absorbancia dio 0,390.
En una cubeta compensada, se colocan 2 mL de una solucin patrn de B de 4 gL -1, 3 mL de
reactivo de color y se lee, dando A = 0,220. En la misma cubeta se adicionaron 3 mL de solucin
patrn inicial y dio A = 0,425.
Todas las lecturas se realizaron contra blanco de agua, dando el B R una A = 0,010.
Calcular la cantidad de B expresada en g B/100 g de muestra.
Datos: - se trabaj a 660 nm.
- la reaccin de color no cumple con la ley de Beer.

Muestra: 5 g 15 mL
5 mL 8 mL A M: 0,390 0,210 = 0,380

Cubeta 1: 4 g/L SP Cubeta 2: 4 g /L SP

2 mL 5 mL 5 mL 8 mL
A1: 0,220 0,010 = 0,210 A 2: 0,425 0,010 = 0,415

g g
4 x 2 mL 4 x 5 mL
C1: L C2: L
=1,6 g /L =2,5 g /L
5 mL 8 mL
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[ ]
( 2,51,6 ) g
( 0,4150,38 ) x
L g g
CM : + 2,5 =2,35
( 0,4150,210 ) L L

g
2,35 x 1 L x 8 mL x 15 mL x 100 g
L
CM : =1,13 g B
1000 mL x 5 mL x 5 g

10- Una solucin que contiene 0,5 molL -1 de una especie X, y 0,5 molL-1 de una especie Y,
presenta una A = 0,330 a 560 nm, medidos con un ancho de cubeta de 1,5 cm.
Otra solucin que posee 2 molL -1 de la especie X y 0,5 molL -1 de la especie Y, da una A =
0,660 a 560 nm, medida con un ancho de cubeta de 2 cm.
Se desea saber cul ser la concentracin de una solucin de la especie X cuya A = 0,480 a
560 nm; y qu concentracin tendr una solucin de la especie Y, cuya A = 0,360 a 560 nm. Ambas
medidas de A se realizaron con un ancho de cubeta de 1 cm.

Solucin 1: 0,5 mol X/L = 560 nm b= 1,5 cm

0,5 mol Y/L A= 0,330
Solucin 2: 2 mol X/L = 560 b= 2 cm
0,5 mol Y/L A= 0, 660
mol mol
0,33=x x 1,5 cm x 0,5 + y x 1,5 cm x 0,5
L L
cmxmol
0,33y x 0,75
L L
x = =0,44 y
cmxmol cmxmol
0,75
L
mol mol
0,66=x x 2 x 2cm+y x 0,5 x 2 cm
L L
cmxmol
0,66x x 4
L L
y= =0,66 4 x x
cmxmol cmxmol
1
L
L L
y =0,66 1,76 + 4 y
cmxmol cmxmol
L
y=0,36
cmxmol

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 Qumica Analtica II - Gua de Coloquios

L
x=0,08
cmxmol
0,48
CX : =6 mol /L
L
0,08 x 1 cm
cmxmol
0,36 mol
CY : =1
L L
0,36 x 1 cm
cmxmol

11- Se necesita determinar colorimtricamente la concentracin de una sustancia X, presente

en una muestra de un medicamento, que contiene adems otros componentes que forman
compuestos coloreados con el reactivo de color, que absorben a 489 nm y que no se pueden
eliminar. Por tal motivo se emplea un reactivo desnaturalizante de X, que no absorbe a 489 nm, y
que tampoco lo hace su producto de reaccin con X.
Tcnica operatoria: 1 mL de muestra son tratados con 4 mL de c. perclrico 0,75 M; se filtra y
al filtrado se le agregan 2 mL de c. fosfotngstico. Luego se centrifuga, se desecha el
sobrenadante y se lava el precipitado con 10 mL de etanol. Se centrifuga nuevamente, eliminando
el sobrenadante y redisolviendo con 1,5 mL de HAc 0,1 M. Luego en 4 cubetas de medicin de
caras planas de 0,8 cm de camino ptico, se colocan:

Cubeta N 1 2 3 4
Solucin de precipitado redisuelto con HAc 0,1 N (mL) - - 0,25 0,25
Solucin Testigo de X de 25 mg % (mL) - 0,5 - -
Agua destilada (mL) 1,25 0,75 1 -
Reactivo desnaturalizante de X (mL) - - - 1
Reactivo de color (mL) 3 3 3 3
Leer a los 15 minutos a 489 nm frente a blanco de agua destilada
Absorbancias 0,017 0,625 0,680 0,090
Datos: - A vs concentracin de X es lineal.
Determine: Cuantos g de X / litro hay en la muestra?
Muestra: 1 mL 1,5 mL
0,25 mL 4,25 mL A: 0,68 0,09 0,017 = 0,573

25 mg x 0,5 mL mg
Testigo: =0,0294 A: 0,625 0,017= 0,608
100 mL x 4,25 mL mL

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mg
0,573 x 0,0294
ml mg
CM : =0,027
0,608 mL
mg
0,027 x 4,25 mL x 1,5 mL x 1 g x 1000 mL
mL
CM : =0,69 g
0,25 mL x 1 mL x 1000 mg x 1 L

12- Cuantificacin de la sustancia X en una muestra slida.

Tcnica: 0,5 gr de muestra se disuelven con 10 mL de alcohol amlico, luego se agrega cantidad
suficiente de un buffer pH = 7,2 hasta completar 50 mL. Se toman 5 mL de esta solucin, se le
agregan 2 mL de tungstato de Na y 3 mL de H 2SO4 0,5 N. Se mezcla y se centrifuga. Se toman 2
mL del sobrenadante y se le adicionan 2 mL de reactivo color. Se deja 10 min en reposo y se
realizan las lecturas a 560 nm contra agua destilada. Finalmente se obtuvieron las siguientes
lecturas:
TBLANCO = 98,80 % T DESCONOCIDO = 77,34 %

Calibrado: De una solucin patrn de 1 g de X / 1000 mL, se prepararon 6 matraces de 50 de la

siguiente manera:

Matraz N 1 2 3 4 5 6
Sol. patrn diluda 1/10 (mL) 0 2,5 5,0 7,5 10 12,5
Reactivo color (mL) 2 2 2 2 2 2
Enrasar con agua destilada
Mezclar, dejar 10 min en reposo, luego leer a 560 nm
T (%) 99,54 91,20 83,56 76,56 70,15 68,12

Hallar: mg de X / g de muestra

Muestra: 0,5 g 50 mL
5 mL 10 mL
2 mL 4 mL A = 0,11 0,005 = 0,106

1 g x 1 mL g
SP: =0,1
1000 mL x 10 mL L

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 Qumica Analtica II - Gua de Coloquios

0.16 Matraz SP dil A

0.14
1/10 (g/L)
0.12 1 - 0,002
0.1 2 0,005 0,038
3 0,010 0,076
0.08 4 0,015 0,114
0.06 5 0,020 0,152
6 0,025 0,165
0.04
0.02
0
0 0.01 0.01 0.02 0.02 0.03

mg
0,014 x 4 mL x 10 mL x 50 mL x 1 g
mL mg
CM : =5,8
2 mL x 5 mL x 0,5 g g muestra
13- Determinacin de Fe en jarabe para la tos. Muestra: 5 mL se tratan con 25 mL de H 2SO4 0,5
M, se calienta hasta residuo seco. Luego se lo disuelve con 5 mL de HNO 3 1 M, pasar la totalidad
de este volumen a un matraz de 25 mL y enrasar con agua bidestilada. Tomar 5 mL y llevar a 25
mL (solucin de muestra procesada).
Preparacin de la solucin patrn: disolver 0,2249 g de FeCl 3 (pureza 97 %) en 500 mL de agua
bidestilada. Tomar 10 mL de esta solucin y llevar a 100 mL, quedando as preparada la solucin
patrn.
Reaccin de color y medicin: en 7 matraces de 50 mL, colocar:

Matraz 1 2 3 4 5 6 7
Muestra tratada (mL) 10 10 ---- ---- ---- ---- ----
Sol. patrn (mL) ---- ---- ---- 2 4 6 8
Reactivo color (mL) 5 ---- 5 5 5 5 5
Enrasar con agua bidestilada, leer a 470 nm contra agua.
Transmitancia (%) 24,5 95,5 91,2 61,6 41,7 28,2 21,9

Datos: Masa at. Fe = 55,8 Masa at. Cl = 35,5

Calcular los mg de Fe por 100 mL de jarabe.

Muestra: 5 mL 25 mL
5 mL 25 mL
10 mL 50 mL A: 0,610 0,019 0,04 = 0,551

SP: 0,2249 g FeCl3 500 mL

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10 mL 100mL
0,218 g FeCl 3 x 55,8 g Fe x 10 mL g
SP : =1,5 x 105 = 15 ppm
162,3 g FeCl 3 x 100 mL x 500 mL mL
Matraz SP (ppm) A
4 0,6 0,17
5 1,2 0,34
6 1,8 0,51
7 2,4 0,62

2,1mg x 50 mL x 25 mL x 25 mL x 100 mL
CM : =26,25 mg
1000 mL x 10 mL x 5 mL x 5 mL x 1000
0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3

26