Microscopios:Simples,Compuestos(partes:mecnica:base,platina,tubo ocular,
-especiales:Mejorados(aquellos q c le agregan ciertas sust;agar sangre,agar
revolver,tornillos;Optica:Oculares,objetivos;Sitema iluminacin,espejo,condensador,diafragma.
Observacion microscopia:Ilumine empleando el espejo cncavo o plano,la eleccin depende de la fuente d luz,aumentos
empleados,etc.Enfoque de preferencia con la lent d menor aumento.Una vez enfocado el objeto haga rotar el revolver y utilice
el objetivo deseado.Si va usar d inmersin coloque una gota d aceit d cedro sobre la preparacin.Para el enfoque aproz use el
tornillo macrometrico y para el preciso el tornillo micromtrico.Tener ambos ojos abiertos al observar.Al terminar la observacin
limpie el objetivo con un papel especial para lentes.Si hay impregnacin d aceit,utilize xilol.Las laminas una vez observadasc
depositaran en un recipient q contenga mezcla sulfocronica(Bicromato potasio 100 gr, ac.sulfurico 100 gr y agua destilada 1000
ml.)
Autoclave(calor hmedo a presin,tiene 2 valvulas,la purca o espita y la d seguridad,adems tiene nanmetro,la 1 valvula sirve
para botar aire frio),Horno(esterilizacin calor seco,c llama tambin horno pasteur o popinel),Estufa o incubadora(Da una T q c
mantiene fija mediant un termostato,esta T c elije segn el requerimiento d germen a utilizar),Nevera(Permit conseguir bajas T
y c utiliza con fines d conservacin d germenes,medios cultivo,muestras),Centrifuga(Permit separar una sustancia en suspensin
del liquido respect),Bao Maria(Permit la accin de calor d un liquido sobre sust d menor T a travs d un recipient.Evita el calor
directo.Se emplea para licuar medios,para inactivacin d sueros,incubacin),Potenciometro(Aparato q det la concentracin d
iones d H,Ph,el mas perfeccionado es el d Beckman),Bomba vacio(Produc presin negativa),Contador d colonias(Quebec,c utiliza
para el rencuentro d colonias en una placa d cultivo),Material
vidrio(tubos,balones,matraces,probetas,buretas,pipetas(graduadas,aforadas,pasteur),placas),Limpieza:1 todo material debe ser
esterelizado en autoclave antes d su lavado,2 al sacarlos aun calient quitar los tampones y vaciar contenido,3 lavar con agua
calient y detergent,4 enjuagar con agua cao a chorro hasta la eliminacin detergent,5 dejar secar.Las pipetas,porta y cubre
objetos,c desinfectan sumergindolos en un recipient d base ancha q contenga una solucin bactericida como mezcla
sulfocronica o una solucin d fenol 5% x 24h,cuando el material vidrio tiene manchas usar mezcla sulfocronica.Camara
Neubauer(c usa contaje d cel,en labo micro c usa para contaje d levaduras,esporas(globulos blancos),bacterias(globulos
rojos).Campana desecadora(c usa para el cultivo de m.o).Las cajas d esterelizacion son cajas metalicas o d alumnio.Las
propipetas sirven como medida d seguridad
Acondicionamiento material:1 material debe estar limpio y seco,2las placas petri deben ser envueltas en papel Kraf,3 a los
tubos ensayo debe colocarse tapones d algodn para no permitir el paso d germenes,4 es preferible usar cilindros metalicos
cuando c preparan grandes cant d material.
Las observaciones pueden ser realizadas x muestras humedas sin colorear(fresco),o preparaciones coloreadas.Las muestras
humedas(examinadas con poca luz,condensador bajo y diafragma semicerrado) dan informacin d movilidad d m.o o sirven para
detectar elementos formes,es el mtodo bsico para el estudio parasitoscopico,tambin puede ser observada en campo
oscuro,contrast fases,mtodos d fluoresencia)observacin d preparaciones en fresco (montaje hmedo,preparacin:1 colocar
sobre portaobjetos una gota del cultivo,2cubrir con el cubreobjetos,observar a gran aumento,gota pendiente,estudio
motilidad,preparcion:1 colocar en el porta una gota del cultivo,2untar las esquinas con vaselina,3 colocar la lamina excavada
sobre el cubreobjetos,invertir rapidament y observar a gran aumento),en seco(la distancia focal es minima,colocamos una gota d
aceit inmersin).
Fondo oscuro:permit la visualizacin d m.o en preparaciones en fresco.Observacion:1 hacer una preparacin en fresco,2 colocar
gotas d aceit sobre el condensador y sobre est colocar el porta,3colocar aceit d inmersin sobre cubreobjeto y proceder a
centrar y enfocar el campo microscpico utilizando un objetivo d poco aumento y cambiar el objetivo d inmersin,4 los m.o
aparecern brillantes en el campo microscopio.Contrast d fases:permit visualizar estructuras internas d cel sin
colorear.Observacion:1 hacer una preparacin entre porta y cubre objetos,y colocarlo en platina del microscopio.2 con el ocular
auxiliar centrar el anillo d fase d moviendo los tornillos d centraje del condensador,3 realizar la observacin,4 se observa los m.o
con nitidez y c logra vizualizacion d sus contornos y estructura interna.
Colorantes:naturales(carmn,tornasol,hematoxilina),artificiales o sinteticos:derivados d la hulla lamados tambin
anilinas.(bsicos;azul d metileno,violeta genciana,acidos;ac pcrico,eosina,fucsina acida,neutros;eosinatos,verd
malaquita,safranina,Wright,indiferentes;sudan,rojanilo. Colorantes sinteticos:acidos,lcalis
Soluciones empleadas en coloraciones comunes: Azul d metileno Loeffler(azul d metileno,alcohol etlico,solucin KOH
0.01%),violeta d genciana fenicada(violeta d genciana,acido fenico cristalizado,alcohol etlico,a.d),violeta genciana hucker o
cristal violeta oxalato d amonio(cristal violeta,alcohol etlico,oxalato d amonio,a.d),Fucsina fenicada d Zhiel(fucsina bsica,acido
fenico,alcohol etlico,a.d),solucin yodo yodurada o lugo dbil(yodo,yoduro d potasio,a.d),lugol fuert(yodo,yoduro d
potasio,a.d),alcohol acetona(alcohol 95,acetona),alcohol clohidrico(alcohol clohidrico,alcohol etlico)
Pasos generales d una coloracin:1 extension en lamina porta objeto con asa,el asa debe ser esterelizada al rojo en mechero
antes y despus d su empleo,2 fijacion,su objeto es adherir firmement la preparacin sobre la lamina,c emplea para este fin
calor suave o alcohol ter(indispensable para muestras serosas),3 tincion, con el colorants elegidos,4 lavado chorro,5 secado
puede usarse calor suave,nunca c observ una lamina coloreada antes d q seque,sobre todo cuando c utiliza lent inmersin.
Coloracion Gram:1 colocar una gota d medio liquido con bacterias en porta,2 fijar,3 cubrirla con solucin fenicada d violeta d
gencian,1 min,4 lavar agua chorro ,5 cubrir con lugol y dejar 2-3 min,6 lavar,7 decolorar con alcohol acetona,8 lavar,9 contarstar
safranina,10-30 seg,10 lavar,secar, y observar a inmersin.Los q toman color violeta c llaman Gram + y los rojos Gram -,la accin
del lugol es conseguir una mayor fijacin del violeta x parte d los germenes Gram + x unin dl colorant con el yodo del lugol. Son
gran+ todos cocos excepcin neisserias y son gran- todos los bacilos a excepcin esporulados,mycobacterium y corybacterium.
Objetivos d observacin en seco para pequeos aumentos,a menor aumento c requiere menor iluminacin, lo cual c consigue
bajando el condensador y cerrando parcialment el diafragma.
La observacin d muestras humedas c hace con lentes d menor aumento o sea sin inmersin.
Coloracin diferencial esporas y cel vegetativas:Metodos d Wirtz: procedimiento: 1 hacer extensin y fijar al calor,2 aadir verd
malaquita,3 calentar sin hervir hasta el desprendimiento d vapores x 3-4 veces,4 lavar,5 agregar safranina,6 lavar,7
observar:espora:verde,cuerpo bacteriano:rojo.Metodo moeller:Cultivo de germenes esporulados,reactivos;fucsina fenicada
zhiel y azul d metileno.Procedimiento:1 extension y fijacjion,2 cubrir la extensin con ac clrico y calentar,3 lavar,4 colorear en
calient con fucsina fenicada d zhiel,5 lvar,6 decolorar rapidament con alcohol,7 lavar,recolorar con azul metileno d loeffler,9
lavar,10 secar y observar:espora:roja,cuerpo bacteriano:azul.
Coloracion Zhiel Neelsen:material;cultivo d germenes(Mycobacterium),colorant zhiel,alcohol acido,aul d metileno.Para
germenes acido alcohol resistentes.Procedimiento:1 preparar frotis,2 cubrir con colorant zhiel,3 calentar a la llama hasta el
desprendimiento d vapores,x tres veces consecutivas,4 lavar,5 decolorar con alcohol acido,6 colorear con azul d metileno o ac
pcrico,7 lavar,secar y observar.Los germenes q retienen el rojo a pesar d la decoloracin con alcohol acido son los a.a.r y
destacan en un fondo azul si c usa loeffler,y aquellos no acidos resistentes ceden el color bajo la accin del alcohol acido y tienen
a tomar el colorant d fondo azul o amarillo.Coloracion d capsulas:Material;Cultivo germen capsulado(klebsiella),colorant rojo d
congo,colorant d maneval(fenol,ac actico,cloruro ferrico,fucsina acida).Procedimiento:1 prepara una suspensin turbia d
germenes,2 colocar una gota d rojo d congo en un porta,3 trasladar una azada d la suspensin,mezclar con una gota roja congo y
extender la mezcla sobre la lamina dejando secar,4 agregar colorant maneval sobre la extensin,5 lavar,secar y observar a
inmersin.Capsula sin color,cuerpo bacteriano color rojo y fondo azul.Coloracin negativa: Cepa d diplococus pneumoniae o
klebesiella,colorant nigrosina o tinta china.Procedimiento:1 cerca del extremo d lamina porta coloca una gota d nigrosina,con e
asa transferir algunos m.o y mezclarlos con la gota,2 usando el bord d otro porta,hacer una extensin sobre el porta,3 sacar el
preparado al aire,4 examinar usando el objetivo d inmersin. Germen visible sin coloracin,alrededor d un halo claro en fondo
negro(la extensin pued teirse con zhiel y c observa el germen coloreado y la capsula siemre incolora).
Clasificacin d medios cultivo: La fuent d N es la peptona,q consist en una mezcla d proteasas,polipeptidos y a.a.Las bacterias
mas exigentes pueden necesitar fgactores d crecimiento adicionales,ejem haemophilus influezae precisa d 2 factores,ambos
presentes en la sangre:factor V(NAD) y el x(hernina).Antes d esterelizar es necesario det el y ajustar ph.-Comunes:crecimiento
cualquier tipo m.o(agar nutritivo,caldo nutritivo).
leche),selectivos(Incluye sust especiales q favorecen el crec d det especies;agar mc conkey,agar SS,agar bismuto sulfito,agar
tergitol)diferenciales(pone en manifiesto ciertas prop bioqumicas;agar glucosado,agar lactosado,agar gelatina,agar kliger,agar
nitratado).
Caldo nutritivo(extracto carne,peptona,cloruro sodio,agua destilada.Procedimiento: 1 en un enlermeyer colocar 100 ml d
a.d,agregar los ingredientes para completar volumen 200 ml.2 Disolver en bao maria,dividir la disolucin en 2 partes iguales,3
ajustar el ph d uno d ellos,4 distribuir en tubos,taponar con algodn y esterelizar en autoclave 15 121C 15 lb presin.Agar
nutritivo: 1 a la mitad del caldo preparado anteriorment agregar agar,2 calentar a bao maria hasta q disuelva el agar,3 ajusta
ph,4 distribuir en tubos,taponar y esterelizar,al sacarlos d autoclave dejar enfriar en plano inclinado y en columna,5 c puede
dejar el agar en enlermeyer y esterelizarlo para luego depositarlo en placas llenando 1/3 d la base.Agar sangre: 1 a una cant
conocida d agar nutritivo esteril,licuado y enfriado a 45C,2 agregar sangre oxalatada,3 homogenizar y repartir en placas o tubos
esteriles,4 los tubos c dejan enfriar en pico d flauta.Kliger Iron Agar: 1 pesar la cant convenient y reconstruir con 100 ml d a.d, 2
disolver x calentamiento a bao maria,3 repartir 3 ml aprox en tubos,taponar con algodn y esterelizar,dejar enfriar. El agar
nutritivo es un medio d cultivo definido.El agar sangre es un medio d cultivo no definido,d enriquecimiento y deferencial para
m.o exigentes.
Esterilizacion: Objetivo destruir o separar los m.o y sus formas d resistencia q c encuentran contaminando el material,elimina
forma esporuladas,altas T(bacillus).Agentes fsicos,1calor(seco:es menos efectivo q hmedo,flameo:para agujas,asas
kolle,esptulas;aire calient,c realiza en horno(180 C x 30 min,abrir cuando la T llegue a 40C),para materiales d vidrio q no
contienen soluciones).Humedo(c usa para sust q pueden ser alteradas a T muy elevadas como leche,caldo salenito,medios
cultivo azucarados;vapor agua presin;autoclave,c usa para esterelizar medios cultivo estables.Tyndalizacion:consist en calentar
el material a 100 C x 30 min y depues d 24h y 48h repetimos el calentamiento,c usa para esterelizar medios cultivo y otras
sutancias q no pueden ser sometidos a T superiores a 100c.2 filtracion:C usa membranas porosas las cuales retienen los m.o d
sust liquidas o gaseosa,c usa para sust termolbiles,como suero,carbohidratos y vitaminas.3 radiaciones; ultravioleta(tiene poco
poder d penetracin y produce efectos letales y mutagenicos sobre bacterias),gamma(tiene alto poder d penetracin y suelen
utilizarse para esterelizacion y descontaminacin d materiales d uso medico y en la industria alimentaria)
Aislamiento d colonias: x la tcnica d siembra x estria:1 despues d esterelizar el asa kolle,enfriarla y cargarla con la suspensin d
m.o trazar 5 lineasparalelas sobre la superficie,2 esterelizar asa y enfriar en el agar entre las estrias,3 sin tomar un nuevo inoculo
hacer otra serie d lneas paralelas d tal forma q atraviesen las primeras,esta tcnica sirv para obtener cultivos axenicos,x la
tcnica d siembra x difusin en placa,1 hacer una extensin del inoculo con la esptula d driglasky,2 incubar las placas a 37c x
24h.caracteristicas morfolgicas d
colonias:forma(puntiform,circular,irregular,flamentosa),elevacion(plana,elevada,convexa),margen(entero,filamentoso,enrollado
),superficie(lisa,rugosa,radiada),consistencia(dura,blanda,mucosa,hilant).Carcteristicas pticas d las colonias y
pigmentacin:opaca(no permit el psaje d la luz),traslucida,iridiscent(con relfejos metalicos cuando c expone a luz),butirosa(con
aspecto semejant a grasa),pigmentacin(ninguna o color especif)
Trasplant o resiembra: 1 tomar un tubo con la fuent d inoculo,2 destapar el tubo y sostener el tampn,3 flamear la boca de los
tubos y el asa,4 con el asa picar la colonia y volver a flamear el tubo para colocar el tapon d algodn,5 tomar el tubo con el
medio a sembrar y destaparlo,6 flamear tubo y hacer la simbra del inoculo con picadura en agar recto,estrias en agar
inclinado,suspensin en medio liquido,7 colocar en la estufa para su incubacin 37c x 24h.
Degradacin d carbohidratos:Para detectar si hubo activ enzimtica c analiza la aparicon d productos o la desaparicin
sustrato(productos como acidos,cuya produccin c indica con indicador acido-basico,como rojo d fenol,purpura d
bromocresol,azul d bromotimol).Los carbohidratos diferenciales usados
son:glucosa,maltosa,sacarosa,lactosa,xilosa,arabinosa,manitol,almidon,inulina,salicina.Hidrlisis almidon: C puede hacer sobre
medios liquidos o solidos.Demostrar q el almidon es hidrolizado x enzima alfa amilasa o B amilasa.Procedimiento:1 dividir placa
d agar almidon en tres sectores,2 marque e inocule la superficie del agar,3 incubar a 37c x 24-72h,4 despues del tiempo d
incubacin cubrir la placa con la solucin iodada y elimanr el exceso.Positiva cuando el medio y el lodo forma una aureola
transparent o color marron rojizo alrededor d colonia.Fermentacion azucares: procedimiento: 1 con aguja kolle inocular x
picadura central profunda y x estria en superficie,2 incubar tubos a 37c x 24h.usa tubos con agar kliger.El cambio d color dl
medio d cultivo d rojo a amarillo indica fermenacion d lactosa.El cambio d color en profundidad indica fermentacin glucosa.Si
hay produccin d gas aparecer ruptura del medioPrueba Eijkaman:El sustrato es la lactosa.Positiva cuando hay presencia gas y
si hay viraje d color amarillo indica acidez. Procedimiento:1 inocular tubos del medio cultivo,2 incubar en bao maria 44c x
48h.Prueba rojo d metilo:demostrar q algunos m.o al fermentar la glucosa producen y mantienen alta acidez,mientras q otros
bajan inicialment la acidez y despus viran la neutralidad. materiales;Medio cultivo con caldo MR-VP,reactivo rojo
metilo.Procedimiento: 1 con el asa sembrar medio,2incubar el medio 37c x 72h,3 despues aadir 5 gotas del reactivo rojo
metilo 0.04%,prueba + cuando medio mantiene color rojo, anaranjado considera reaccin intermedia,amarillo reaccin
negativaReaccion Vogues Proskauer:Materiales;caldo MR-VP,creatina,soda,Observar la produccin d acetil-metil carbonil a
partir d glucosa.Procedimiento:1 Con el asa inocular medio MR-VP,2 incubar 37c x 5 dias,3 despues aadir unos mgr d creatina
y 0.5 ml d solucin soda 40%,agitar 2 min.Positiva cuando la coloracin rojo carmn aparece al cabo d 10 m.
La accin dl metabolismo bacteriano sobre protenas;sust nitrogenadas suceptibles a ser descompuestas x los m.o son urea y
sustratos.Hidrlisis gelatina:demostrar q debido a la accin d la enzima gelatinasa un medio gelatinosos puede ser
hidrolizado.Formacion indol: Estudiar algunos m.o q degradan comp proteicos hasta a.a triptfano con produccin indol.reactivo
d Kovacs;Positiva cuando forma un anillo rojo grosella,el anillo c forma x la exposicin del comp
nitrogenado,triptfano.Produccion d Hidrogeno sulfurado(H2S):Materiales;tubos con agar TSI.Demostrar q ac sulfihidrico
producido x reacciones catablicas como la compos d compuestos d azufre organico y la reduccin d comp inorgnicos,pued ser
detectado cuando en el medio c forma una sal d metal pesado.Hidrlisis d la urea: Demostrar q algunos m.o elaboran la enima
ureasa y q esta hidroliza la urea hasta convertirla en amoniaco,materiales;tubos con caldo urea,.Procedimiento: 1 inocular los
medios,2 incubar 37 c x 48h.El viraje medio(ph6.8) a rojo grosella indica hidrlisis d ureaAccion sobre lpidos:Los lpidos como
las grasas son hidrolizadas por lipasas microbianas a glicerol y ac grasos.El glicerol es metabolizado x los m.o x la via conectada
con el metabolismo d los carbohidratos,los ac grasos son oxidados x la remocin sucesiva d acetil-CoAAccion d la Lipasa:
Demostrar la hidrlisis d la grasa x la accin d una enzima lipolitica.Materiales;placas agar grasa,reactivo sulfato d
cobre.Procedimiento:1 dividir la placa d agar grasa en cuatro secciones,2 marcar cada seccin y sembrar,3 incubar x 48h,4
despues cubrir con una solucin d sulfato d cobre y dejar actuar 5 min,5 detectar la act lipolitica d la bacteria x presencia d
precipitado azul o alrededor d zona d crecimiento del m.o.
El dispositivo d contraste de fase transforma las irregularidades en las variaciones correspondientes en la brillantez.
Campo claro:Para aspectos morfolgicos gruesos d bacterias ,levaduras,algas,protozoos.Campo oscuro:Para m.o q exhiban
algn aspecto morfolgico caracterstico en vivo y en suspensin en un liquido xjem esperiquetos.Ultravioleta:Diferenciacion d
componentes celulares.Florescente:tcnicas d diagnostico en las q el colorant flourecent fijado al organismo revela su
identidad.Fase d contraste:Organismo grandes:levaduras,algas,protozoos y algunas bacterias.Electronico:Examen d virus y d la
ultraestructura d las clulas microbianas.
Las preparaciones humedas y en gota pendiente son preferibles en las situaciones sgtes:1.La morfologa d las bacterias en
espiral c altera cuando c tien,deben x lo tato examinarse en estado vivo.Espiroquetas causan la sfilis,las preparaciones
humedas c examinan al microscopio en campo oscuro..2.Para observar los cambios citolgicos y det la veloc q ocurren las
divisiones hay q observar los organismos en estado vivo,igual para la formaciones d esporas.3.Por este mtodo c observan
algunas inclusiones celulares como vacuolas y materias grasas.Las preparaciones fijas y teidas c usan para caract
morfolgicas.Ventajas:1.Las clulas son visibles mas claramente despus d teidas.2.Las diferencias entre clulas d especies
diferentes y dentro d la misma especie c demuestran mediante soluciones colorantes.
La pared celular d las bacteria gram+ es qumicamente mas compleja(contiene mas aminocidos) q la Gram-.Los ac.teicoicos son
propios d la pared de la Gram+.El contenido d lpidos d la Gram- es superior q la Gram+.El lipopolisacarido(endotoxina)
determina la antigenicidad,toxigenicidad y sensibilidad a al infeccin x fagos.Los Gram+ tienen mas peptidoglucan o mureina q
las gran -. Las Gram+ son mas suceptibles a la penicilina y menos a la desintegracin x mtodos mecanicos q las Gram-.Las Gram-
son mas suceptibles a otros antibioticos como estreptomicina.
Tcnicas para demostrar si un m.o tiene mov:1.microscopio d campo oscuro.2.en un portaobjeto poner una gota d agua y Si deseo det m.o psicrofilos debo utilizar la tecnia d 8 placas x extensin incubacin 0C
agregarle el m.o,mezclarlo,ponerle el cubreobjeto y vertis y mirar en el micorscopio.
Para obtener colonia aisladas d m.o debo:sembrar en un medio especifico o hacer siembra x estrias.
Carbohidratados o carbonados:Agar citrato simmons:(sustrato:citrato d sodio,indicador:azul d bromotil),si cambia d color azul a
verde es PH 7.Simbra x estrias a plano inclinado,si cambia a azul es xq hay la enzima citratasa y
Medio d cultivo solido como agente solidificant en proporcin d 15 g/lt.
es+.Brila:Verde(sustrato:lactosa,inhibidores:bilis,verde brillante)Tincubacion:44,5c x 24-48 hPrueba eijkman(coliformes).Se
puede det la deteccin d bacterias coliformes,si hay produccin d gas es +,esta produccin debe ser 10% q ocupe toda la
campana.Son termotolerantes.Mr-vp:amarillo(sustrato:glucosa,indicador:rojo metilo).Si la glucosa es degradad x la bacteria Medio d cultivo q incluye sust especiales favorecen a un m.o inhibiendo ambos:selectivo.
produce acetoina o diacetilo.Si el medio es rojo es + osea hay produccin d acetoina.TSI:rojo
ladrillo(sustrato:glucosa,lactosa,sacarosa;indicador:rojo fenol),medio PH 7 rojo ladrillo,PH acido amarillo.En la part alta es Colorante q tiene afinidad d colorear citoplasma celular:Fucsina acida y eosina.
lactosa,part media es sacarosa,part baja glucosa.La concentracin d manchas negras demuestra la presencia d H2S en el
medio.Produce gas o grietas en el medio.La degradacin d glucosa ocurre en anaerobiosis, y la de la lactosa en aerobiosis.Si
toma color amarillo es xq c ha degradado los 3 azucares.Agar almidon(agar nutritivo+almidon)det enzima Pruebas bioqumicas q demuestran metabolismo bacteriano sobre sust nitrogenadas:indol,gelatina
amilasa:Sustrato:almidon,indicador:lugol.El iodo con el almidon da un color azul cuando c le grega lugol, es - y si es incoloro no
hay presencia d almidon y la prueba es +.Cuando no hay degradacin d almidon las zonas del medio toman color azul. Los medios d cultivo q c preparan comnmente en el labo son para aislar m.o:saprofitos,quimiorganotroficos,hetertrofos

Nitrogenados:Caldo urea:rosado(sustrato:urea(producto alcalino),indicador:rojo d fenol),la prueba es positiva cuando el color es La degradacin d lisina y produccin d H2S x m.o en medio LIA c evidencia x:Su color c aclara a un violeta claro.Su color para la
mas intenso osea tienen la enzima ureasa.La degradacin d la urea conduc a la formacin d NH4,NH2,N2Agar prueba + es negro intenso.
nutritivo:Prueba:catalasa,reactivo:H2O2 peroxido d H o agua oxigenada,finalidad d la siembra q el m.o crezca en un medio con
la menor cant d nutrientes.,Es + cuando produce burbujas o espuma,osea el perxido d H a sido degradado x la enzima
Presion osmtica:Concentracion d sales en el medio dond c desarrolla el m.o
catalasa.Lia:violeta(sustrato:lisina(a.a),indicador:purpura d bromocresol)La degradacin d a.a puede ser x descarboxilacion(hace
q el medio c torne alcalino ph>7 y tome color violeta) o desaminacion(medio c acidifica y toma color amarillo).tambien c puede
ver la produccin d gas igual q TSI,y la produccion d ac sulfidrico.Medio semislido(SIM):incoloro,pruebas:motilidad,produccin La siembra d un m.o en un medio semislido sirve para averiguar si el germen estudiado es mvil,identificacin bioqumicas.
indol(c hace con reactivo d kovac),produccin H2S.Si el m.o es mvil,el m.o c mueve fuera d la lnea d siembra.Produccion d
manchas negras en el medio,produccin d H2S.El medio contiene peptona,esta contiene triptfano,la bacteria la usa,para
El perxido d H lo descomponen bacterias q poseen nitrito o nitrato.(bacillus subtillis,pseudomonas)
detectar este compuesto utilizamos el reactivo d kovacs.Si el color es rojo es +,hay presencia d indol.Caldo nitrato:incoloro xq no
tiene indicador(sustrato:KNO3,reactivo d gries(consistencia seca))es positiva cuando c vuelve d color rojo,el nitrato c a
transformado en nitrito,es cuando la bacteria no tienen la enzima nitartasa. Funcion de la tinta china o negrosina:permit observar clulas levaduriformes osea relevar la presencia d capsulas alrededor d la
cel bacteriana.

Campo claro:Para aspectos morfolgicos gruesos d bacterias ,levaduras,algas,protozoos.Campo oscuro:Para m.o q exhiban
algn aspecto morfolgico caracterstico en vivo y en suspensin en un liquido xjem esperiquetos,para m.o sin Caract colonias bacterianas q c forman en un medio solido:Blanco,lisa,traslucida(forma;puntiforme,elevacin)
teir.Ultravioleta:Diferenciacion d componentes celulares.Florescente:tcnicas d diagnostico en las q el colorant flourecent
fijado al organismo revela su identidad.Fase d contraste:Organismo grandes:levaduras,algas,protozoos y algunas Tecnicas para esterelizar muestra d agua residual:Tecnica d centrifugacin,tratamiento con cloroformo(4c-20),filtracin a
bacterias,observarlos en estado vivo y permite observar su mov.Electronico:Examen d virus y d la ultraestructura d las clulas travs d membranas.T q no pasen d 125c.
microbianas.

El indol es uno d los productos d la degradacin metabolico d triptfano y c evidencia con el reactivo d Kovacs.
Las preparaciones humedas y en gota pendiente son preferibles en las situaciones sgtes:1.La morfologa d las bacterias en
espiral c altera cuando c tien,deben x lo tato examinarse en estado vivo.Espiroquetas causan la sfilis,las preparaciones
humedas c examinan al microscopio en campo oscuro..2.Para observar los cambios citolgicos y det la veloc q ocurren las La catalasa es una enzima q descompone el H2O2 en O2 y H2O.
divisiones hay q observar los organismos en estado vivo,igual para la formaciones d esporas.3.Por este mtodo c observan
algunas inclusiones celulares como vacuolas y materias grasas.Requieren poca iluminacin diafragma semiabierto,condensador En relacin a la composicin d un medio d cultivo selectivo indicador este c caracteriza x:1 la presencia d inhibidores como sales
bajo.Las preparaciones fijas y teidas c usan para caract morfolgicas.Ventajas:1.Las clulas son visibles mas claramente biliares,2 presencia d indicador.
despus d teidas.2.Las diferencias entre clulas d especies diferentes y dentro d la misma especie c demuestran mediante
soluciones colorantes.
La lectura d la degradacin en el medio tsi ocurre en la parte inferior del tubo dond hay ausencia d O2.

Metodo Giemsa:Tiene utilidad sobre todo para poner en manifiesto las ricketsias localizadas dentro d las clulas huspedes.Se
Pasteurizacin es disminuir la carga microbiana(cel vegetativas).
emplea tambin para teir frotes d sangre en el examen para protozoos.

Punto d muert trmica:cuando mata al 90% d bacterias,destruccin trmica es el tiempo necesario para destruir m.o a una T
La pared celular d las bacteria gram+ es qumicamente mas compleja(contiene mas aminocidos) q la Gram-.Los ac.teicoicos son
dada.
propios d la pared de la Gram+.El contenido d lpidos d la Gram- es superior q la Gram+.El lipopolisacarido(endotoxina)
determina la antigenicidad,toxigenicidad y sensibilidad a al infeccin x fagos.
La pasteurizacin a 60cx30 es el proceso utiliza en el tratam del mosto para reducir la carga microbiana despus del inoculo
con la levadura.
Colorantes d acuerdo a su afinidad tintorea:Acidos(fucsina acida,ac pcnico,eosina)colorea el citoplasma d la cel,bsico(fucsina
bsica,azul metileno,violeta de genciana)afinidad x la cromatina nuclear,neutro(cristal violeta,safranina,verde malaquita)colorea
1 el citoplasma y luego el nucleo,indiferentes(Sudan III,rojonilo). El antibiograma es usado en los lab clnicos para det el antibitico a elegir para combatir una enferm infecciosa.Mide la efecto d
los antibioticos frent m.o.

La adicion d componentes como sangre ,suero y plantas al caldo nutritivo las proporciona sust.nutritivas complementarias,para q
el medio pueda soportar el crecimiento d los hetertrofos oxigentes, es denominado Medio Enriquecido.Medio en el cual la El espectro antibitico es utilizado para evaluar la act d una sust antimicrobiana contra bact patgenos.
nica fuent d C es la maltosa,permite seleccionar las bacterias q pueden asimilarla,c caracteriza x tener inhibidores, c denomina
Medios selectivos.ejm bacterias lcticas crecer ph 5,contiene susta inhibidoras,sust qumicas,agar Mac conkey(anlisis microb en
Por cada molec d glucosa c produc 1 mol d etanol y 1 mol d CO2(F),La fermentacin alcoholica la realiza unicament las
agua en medio selectivo para esta bacterias),enterobacteria vieven en tubo digestivo d vertebrados.Los m.artificiales c dividen levaduras(F),Algunas bacterias y algunos mohos son anaerobios abligados(F),El tiosulfato d Na es usado para inactivar metales
en definidos(c conoce con exactitud la composicin,contiene NaCl,Vit A,biotina,KH2PO4,K2HPO4) e indefinidos(contiene
pesados presentes en 1 muestra d agua para anlisis microbiolgicas(F).
peptona,NaCl,extrac carne,agua dest).Los m.simples al ponerse al medio ambiente c deshidratan,varia el ph. Constituye un
medio semi solido y totalment reductivo,q inhibe las reacciones enzimticas destructivos dentro d las clulas, tambin evita los
efectos letales d oxidacin:Medios d Transporte. Medio solido:Permite obtener cultivos puros,c utiliza para cuantificar Se cultiva m.o en cam humeda para:Observar el crecimiento ordenado del moho e identificarlo.
m.o.,permit clasificar los m.o. Los medios selectivos indicadores: Contienen indicador d ph,el indicador del agar mac conkey es
rojo neutro,los selectivos no son 100% efectivos. Los medios complejos o indefinidos o naturales son aquellos q son preparados Tecnicas para det bact coliformes en agua:NMP,membraa filtrant.
a partir d sustan naturales d composicin no rigurosament constant.

Tecnica para evaluar 1 bact q a crecido aislada del suelo con capac antimicrobiana:bicapa
Razones x lo q el agar agar c usa:1 es un gel termorreversible,2 idonea para mezclarse con otros geles,3 resistente a la presin,4
resistente a no malograrse con las bacterias.
Un jugo d frutas pued ser usado en la fermentacin alcoholica debe acondicionarse previo a los sgtes:Ph,Bx,carga
microbiana,inoculac con levaduras.
Condiciones q debe d cumplir un medio cultivo:T optima,grado humedad,ph,presin osmtica,presencia o ausencia O2.

Pruebas bioqumicas para identificar bact coliformes:indol,citrato,VP,RM

Quimiostato:Sirve para separar m.o x mtodo d filtracin.

Demostrar el efecto fungicida de sust,las lect c hacen en base a halo d fusin del colorant y halo d inhibicin del hongo.
Medicion d crecimiento:Directo(contaje d clulas 30min,x medio d cmara neubauer,aqu usamos el azul d metileno,depende d
la habilidad d q c realiza la prueba ,tambin el m.o debe estar en suspension;contaje d viables,desventaja el tiempo
En la pract d elba elaboracin vino c registran los Bx del mosto al inicio y al final d la fermentac para la degradacin d azcar d
24h)Indirecto(peso hmedo;peso seco,solo varia el recipiente;turbidez,c requiere del fotocolormetro,espectrofotmetro)
la formac d etanol mas CO2.Una cepa d levadura para vino debe reunir requisito como:Ser estable,q sea cult puro,levadura
sacharomyces cerevisae,tenga 10*6 cel/ml.
Para mantener m.o en fase logartmica: Se usa un quimiostato,el medio q c obtiene es un cultivo continuo o medio no
definido;el turbiostato tiene sensores,miden la turbidez del medio,c regula para q haya una cant d nutrientes,m.o,bol constante.
Un m.o moderadam halfilo de NaCl necesita poca concentrac d solucin.

Medio discontinuo o tipo Batch:Cuando c conoce el volumen y la concentracin d nutrientes.

La det de la sensibilidad invitro frent a un antibiot es espectro antibotico.

Factores q influyen en la amplitud d microscopio:Poder resolucin(capc q tiene el lent para poder distinguir 2 objetos
separados),apertura numrica(capac lente d poder captar rayos luminosos,esta dado x eje lente y el rayo mas prox),long d Tcnica d cultivo en hongos en portaobjetos es para observacin d estruc y caract.
onda(tipo d radiacin q tiene el espectro,la luz ultravioleta aumenta mas q cualquier otro)
Coliformes provienen d habitar no fecales en el anlisis d agua clorada.
Los medios diferenciales det las carct bioqumicas d los org,contiene 1 o mas sustratos,det su metabolismo,un medio seria
cuando agrego glucosa al agar nutritivo,o le agrego sangre. Desventaja d la tcnica d memb en el anlisis microbiolgico del agua: no c pued dar el n exacto d oliformes presentes.

Tecnicas d cultivo d m.o:Dilusiones sucesivas,incorporacin o placa vertida,extensin o difusin. El acido Diaminopimelico(ADP),acido muramico y ac leicoico estn en la composicion qumica d las bacterias,tambin estn
otros compuestos en la pared como aminocidos,azucares,carbohidratos,lpidos.
Si el Ph es muy bajo c estabiliza con NaCl 0.1N,si es alto con HCl 0.1N.

La siembra d muestras mediant diluciones es para:contaje d m.o.Cuando la muestra contiene tantos m.o q la dilucin no c pued
realizar en 1 sola etapa.