RESUMEN

El estrs salino es el principal problema en la produccin agrcola, causando grandes prdidas

financieras. El estrs salino es un estrs inico, que utiliza y modula el transporte inico de
una clula vegetal. Las poliaminas putrescina, espermidina y espermina y las especies
reactivas de oxigeno, perxido de hidrgeno y radical hidroxilo regulan varios procesos
fisiolgicos. Se ha visto un aumento en sus niveles en tejidos vegetales ante diferentes
estreses, ayudando a la tolerancia. Los mecanismos especficos de su integracin a la respuesta
a estrs aun no estn establecidos. En esta revisin veremos como stas molculas,
participando en varias rutas de sealizacin y modulando el transporte inico pueden brindan
tolerancia al estrs salino.

ABSTRACT

The salt stress is a major problem in the agricultural production, causing great financial losses.
The salt stress is a ionic stress, that use and modulate the ionic transport in a vegetal cell. The
polyamines putrescine, spermidine, and spermine and the reactive oxygen species, hydrogen
peroxide and hydroxyl radical, regulate many physiological processes. The polyamines and
the reactive oxygen species increasing its production in many stress, and help tolerance. In this
review we will see how these molecules participate in various signaling pathways and how
that ionic modulation may provide tolerance to salt stress.

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INTRODUCCIN

Actualmente la poblacin mundial es de 6,400 millones, se espera que a principios de 2012 se

alcancen los 7,000 millones, cifra que llegara en 2050 a 9,000 millones, mientras que la
produccin de cultivos decrece rpidamente, gracias al creciente impacto negativo de varios
estreses. Segn la ONU estima que para el 2030 la demanda de productos agrcolas ser 60%
mayor que el actual (La Jornada, en lnea).
Los estreses se dividen en:
Estrs abitico causado por radiaciones, hiperoxia, anoxia, deficiencia mineral, fro,
calor, sequa, NaCl, choque osmtico y por las especies reactivas de oxigeno (ERO).
Estrs bitico causado por patgenos (bacterias, hongos y virus), insectos, herbvoros
y roedores.
Estrs por xenobiticos causado por herbicidas redox-cclicos (paraquat y diquat),
contaminantes atmosfricos (SO2, NO, NO2 y O3) y metales pesados (Cd2+).
El estrs abitico es la principal causa de dao a cultivos y el problema de la salinidad es el
ms severo (Mahaja y Tuteja, 2005). Las fuentes de este problema se dividen en:
Fuentes naturales: erosin hdrica (los minerales presentes en las rocas, sedimentos y
suelos, producen sales minerales disueltas, cuya principal va de desembocadura
despus de las lluvias son los ocanos). Aunque si en los lugares hay mayor
evaporacin de agua que lluvias, los suelos no pueden ser lavados, formndose reas
con alto contenido en sales, tal como sucede en las zonas ridas. Los vientos de estas
regiones, arrastran gran cantidad de sales a otras reas, salinizndolas, lo que se
denomina erosin elica. Los cambios climticos mayores, como el calentamiento
global que derrite los polos rapidamente y los huracanes, pueden introducir a la tierra
considerable cantidad de sales provenientes del mar (Fitzpatrick et al., 1994).
Fuentes antropognicas: sales presentes en los desechos animales, uso de fertilizantes
qumicos y regar la tierra con agua de mala calidad. La extraccin intensiva de aguas
subterrneas y la utilizacin de estas para fines ms rentables y exigentes que el
agrcola, causan que se produzcan agua con contenidos cada vez ms elevados en sales
solubles. La demanda de alimentos ha provocado la extensin del regado incluso a

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 suelos marginales hasta ahora no cultivados y al regar tierras agrcolas con el agua de
mala calidad, las convertimos en salinas.
Las diferentes especies vegetales difieren notablemente en sus respuestas de desarrollo frente a
la salinidad, clasificndose en:
Halfitas (plantas saladas) algunas especies toleran hasta 200 mM NaCl:
Plantas muy tolerantes: csped alcalino, esprrago, palmera y tamariz.
Plantas moderadamente tolerantes: pino, olivo ruso, betabel, cebada y algodn.
Glicfitas (plantas dulces) toleran bajas concentraciones salinas (50-100 mM):
Plantas moderadamente sensibles: alfalfa, tomate, calabaza, lechuga, uva, papa,
espinaca, avena, mostaza, pimiento, caa de azcar, maz, canola, apio, brcoli,
pepino, flores en general, coliflor, sanda, rbano, chcharo, chayote, nabo y pimienta.
Plantas muy sensibles: A. thaliana, manzana, grosella, cereza, pera, ciruela, frambuesa,
rosa, frijol, zanahoria, berenjena, chiriva, fresa, los ctricos y cebolla (Blaylock, 1994).
Ya que la mayora de las plantas son glicfitas y el problema de la salinidad aumenta, es
necesario aplicar biotecnologa vegetal para poder crear cultivos de plantas transgnicas
tolerantes al estrs, con alto rendimiento y sin afectar sus etapas de desarrollo, germinacin,
crecimiento y reproduccin.
Para producir estas especies, debemos de entender tanto a nivel gentico, molecular como en
la planta entera, los eventos que suceden ante salinidad u otros estreses, o la combinacin
entre stos, como ocurre en la vida real. Por ejemplo ante salinidad, donde las plantas sufren
estrs inico, osmtico-hdrico, nutrimental y oxidativo.
Si bien Drosophila melanogaster siguen siendo el modelo gentico animal ms empleado en
el mundo, A. thaliana es el caballo de batalla para toda clase de estudios vegetales, solo por su
valor cientfico definido, ya que no tiene utilidad alimenticia, medicinal ni industrial. Aunque
recientemente se ha obtenido el genoma completo del arroz (Oryza sativa). Pese a que los
genomas de otros cereales tardarn en llegar, se ha indicado que el maz tiene seis veces ms
ADN que el arroz y el del trigo casi 50 veces ms.
Si bien cada tipo de estrs presenta sus caractersticas, todas tienen en comn la acumulacin
de poliaminas (PAs) y de ERO. Estas molculas por mecanismos aun no dilucidados del todo
ayudan a la tolerancia al estrs salino en las plantas. En esta revisin veremos cuales son los
posibles mecanismos para este fin, por ejemplo, las PAs modulando varios canales inicos,

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mejoran la homeostasis K+/Na+ citoslica (Zhao et al., 2007) y junto con las ERO promueven
el cierre de estomas para aliviar el estrs hdrico que se da ante salinidad (Zhu, 2003).
Las PAs actan como atrapadoras de las ERO. Las PAs y ERO promueven la expresin de
enzimas antioxidantes para reducir el estrs oxidativo y prevenir la peroxidacin lipdica
(Yang y Poovaiah, 2002; Verma y Mishra, 2005; Rhee et al., 2007; Mittler et al., 2004; Tang y
Newton, 2005), as como tambin regulan la expresin de genes para ayudar a la tolerancia a
la salinidad. Las PAs pueden estabilizar la membrana plasmtica (MP), restaurando el nivel de
fosfolipdos daados ante el estrs salino, as como tambin mantienen la estructura de varias
enzimas (Zhao y Qin, 2004; Mansour et al., 2002).
Entendiendo el mecanismo de accin de estas molculas en respuesta al estrs, sera posible
desarrollar nuevas estrategias enfocadas a incrementar la supervivencia de las plantas ante
diferentes condiciones ambientales adversas.

CAPTULO 1. ESTRS SALINO

1.1 Problema de salinidad en suelos para agricultura

El estrs abitico es la principal causa de dao a cultivos y el problema de la salinidad es el

ms severo (Mahaja y Tuteja, 2005).
La salinidad en los suelos se estima de acuerdo a la habilidad para conducir la electricidad del
extracto de pasta saturada (conductividad elctrica: ECe). Las unidades se dan en
deciSiemens/metro (dS/m). Si el suelo tiene una ECe 4 dS/m ( 40 mM NaCl; Marschner
1995) se considera un suelo salino, con esto se determino que una tercera parte de las reas de
regado del mundo, que suponen unos 300 millones ha, estn afectadas por la salinidad, de
estas, 70 millones ha fueron causadas por la actividad humana (FAO, 2005).
La Repblica Mexicana cuenta con una superficie de 1 milln 958 mil 201 km2, de los cuales
el 52% corresponde a regiones ridas y semiridas, con predomino de climas secos (Conaza,
1994).
La productividad promedio nacional de Phaseolus vulgaris (frijol comn) es de alrededor de
200-500 kg/ha en condiciones de temporal, cuando en condiciones ptimas de riego y manejo

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de plagas y malezas es de 3-5 ton/ha. Ya que existen variables de frijol como el Pinto Villa
que pueden vivir a las orillas del mar, obtener la secuencia del genoma del frijol representa per
se una prioridad nacional (Estrada et al., 2006).

1.2 La Salinidad Produce Estrs Inico, Osmtico-Hdrico, Nutrimental y Oxidativo en

Plantas

Osmtico: en condiciones de salinidad, se sufre un estrs osmtico por la gran [solutos]

disueltos en la zona radicular. Entre ms solutos existan ms se reduce el potencial del soluto
(s) o potencial osmtico.
Hdrico: el potencial hdrico (w) se define como el estado de energa libre de las molculas
de agua y depende principalmente del s, como vimos, ante salinidad se disminuye el s por
lo que tambin se reduce el w del suelo, lo que significa que las molculas de agua irn de
una solucin menos concentrada (clula) a una ms concentrada (suelo), resultando en
plasmlisis (disminucin de la turgencia de la planta). Por ello se habla que la salinidad es un
problema osmtico que provoca un estrs por dficit hdrico.
Inico: la excesiva absorcin de Na+ y Cl- pueden ayudar al potencial osmtico de las clulas
de la planta, aunque desencadena problemas de toxicidad si estos iones no son
compartimentalizados, exportados o secretados apropiadamente.
Nutricional: se afecta el crecimiento y desarrollo de las plantas por la disminucin en la
absorcin de K+, NO3 y agua (McCue y Hanson, 1990).
Oxidativo: todos los estreses anteriores causan estrs oxidativo.
A continuacin se explicar en detalle cada uno de estos estreses.

1.3 Estrs inico

Bajo condiciones fisiolgicas normales, las plantas mantienen una [K+]cit alta (100-200 mM)
(Cuin et at., 2003) y de [Na+ ]cit baja (1-10 mM) (Sairam y Tyagi, 2004).
Veremos a continuacin, las principales vas por las que se da el masivo influjo de Na+ y el
eflujo de K+ ante el estrs salino en las plantas. Este desbalance en la homeostasis inica

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intracelular (K+/Na+) provoca el llamado estrs inico, adems de que la alta concentracin de
Na+ resulta toxica para cualquier clula.

1.3.1 Mecanismos de transporte inico durante el estrs

El gran potencial negativo (-140 mV) de la MP de las clulas vegetales favorece el transporte
de Na+ a las clulas de la epidermis y corteza de la raz (ver Cap. 4). En salinidad la gran
concentracin de Na+ en los suelos penetra a las clulas principalmente por canales catinicos
no selectivos independientes de voltaje (NSCC-IV) (1), que nosotros llamamos VIC situados
en la MP de las clulas de la raz (Amtmann y Sanders, 1999; Demidchik y Tester, 2002). Otro
canal responsable del influjo de Na+ a la clula son los canales HKT (transportador histidina
kinasa) (2), que normalmente permiten el influjo del esencial K+ (Rus et al., 2002; Mser et
al., 2002; Platten et al., 2006).
El gran influjo de Na+ causa una significativa despolarizacin de la MP (60-80 mV) (3)
(Shabala et al., 2003, 2005, 2006; Cuin et al., 2008), esta despolarizacin reduce la fuerza
electroqumica para la toma de Na+, pero principalmente activa a los canales KOR
dependientes de despolarizacin, causando un drstico eflujo de K+ tanto en clulas de raz (4)
(Shabala y Cuin, 2008), como de mesfilo (Shabala, 2000; Shabala et al., 2006). El tetraetil
amonio (TEA) es un bloqueador de estos canales (5). La despolarizacin (DA) tambin activa
a los NSCC activados por DA (NSCC-DA), con la concomitante entrada de Na+ y la salida de
K+ (6). Sin embargo, la elevada [Na+] y [Ca2+] externas pueden bloquear a KOR y prevenir la
perdida de K+ (Shabala et al., 2006).
El aumento en la [Ca2+]cit durante el estrs salino se da va receptores presentes en la
membrana de las plantas que perciben el estrs salino, la seal es transmitida y activa a la
fosfolipasa C (PLC) y a protenas G, las cuales generan segundos mensajeros como el inositol
trifosfato (IP3), este ultimo puede aumentar la [Ca2+]cit (Mahajan y Tuteja, 2005), una posible
va es por la activacin de canales de Ca2+ dependientes de fosfoinositidos presentes en el RE.
El Ca2+ entra al citoplasma tambin a travs del los NSCC (VIC) (1), que no discriminan entre
Na+, K+ y Ca2+ (Demidchik et al., 2002a).
Recientemente, en A. thaliana se ha visto que ante NaCl en la clula se aumentan los niveles
de GMPc, no se sabe muy bien el mecanismo, pero este GMPc puede activar a un tipo de

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NSCC activado por GMPc (CNGC) (7), este canal permite el influjo de Ca2+ y no permite la
entrada de Na+ a la clula (Donaldson et al., 2004), contribuyendo a la tolerancia a la salinidad
y al gran aumento en la [Ca2+]cit.

Figura 1. Modelo que explica los efectos inicos y celulares implicados en el estrs salino en las plantas, as
como los mecanismos que median la tolerancia.

La alta [Ca2+]cit produce estrs oxidativo al activar a la NADH oxidasa (NOX) (8), esta enzima
es una fuente para la produccin de ERO (9), a partir del O2 produce grandes cantidades de
O2 - en el apoplasto, el O2 - es dismutado por la SOD para producir H2O2 (Densen y Wirtz,
2001) y a partir de H2O2 mediante una reaccin tipo Fenton se genera HO (Thannickal y
Fanburg, 2000). Esta ultima ERO puede activar al NSCC-HO (10) que media tanto la entrada
de ms Ca2+ y Na+ a la clula, como la prdida de ms K+ (11) (Demidchik et al., 2003). No
obstante a altas concentraciones, el HO es muy daino, puede inducir a la peroxidacin
lipdica y a la muerte celular programada (PCD) (Affenzeller et al., 2009).

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La resultante cada en la [K+]cit (12) por varios tipos de NSCC y KOR podra activar a las
caspasas guiando a la PCD (13) (Hughes y Cidlowski, 1999; Affenzeller et al., 2009). En el
sistema animal, la caspasa-3 induce a la apoptosis celular. No se han identificado caspasas en
el genoma de la planta, sin embargo, ocho enzimas parecidas a las caspasas han sido
reportadas (Bonneau et al., 2008).
Li et al. (2007) mostr que el tratamiento con 10 M La3+ fue efectivo para prevenir la PCD
inducida por estrs salino en races de arroz. El La3+ es un bloqueador inespecfico de los
NSCC (14), por lo que se confirma la participacin de estos canales y que su bloqueo es
benfico para la relacin K+/Na+ citoplasmtica.

1.3.2 Elementos Celulares y Inicos de la Tolerancia ante Estrs Salino

La homeostasis K+/Na+ citoslica es crucial para el metabolismo celular y es considerada un

componente clave de la tolerancia a la salinidad en las plantas (Niu et al., 1995; Maathuis y
Amtmann, 1999; Hasegawa et al., 2000; Shabala, 2000; Carden et al., 2003; Tester y
Davenport, 2003; Volkov et al., 2004; Chen et al., 2007; Cuin et al., 2008). Uno de los
mecanismos que se activa ante salinidad para ayudar a la tolerancia a la salinidad, incluye una
una cascada de sealizacin, inicia con la seal del Ca2+ e intervienen protenas codificadas
por el sistema de alta sensibilidad a la sal (SOS) (Zhu, 2002). A continuacin se explicarn los
elementos celulares y inicos activados:
Ante el aumento en la [Ca2+]cit bajo salinidad, una protena de unin al Ca2+ llamada CBL, por
su parecido a la calcineurina B (CBL) y a los sensores de Ca2+ neuronales (NCS), censa el
Ca2+ (1) (Bartels y Sunkar, 2005). La CBL con ayuda del Ca2+ interacta fsicamente con una
serina/treonina kinasa (CIPK) y la activa (Halfter et al., 2000), este complejo es llevado a la
MP va una unin covalente de una cadena de acido graso miristoilo o palmitoilo (2). El
complejo CBL/CIPK en la MP es capaz de fosforilar a un antiportador H+/Na+ de la MP que
exporta Na+ fuera de la clula (3) (Munns y Tester, 2008).
El complejo CBL/CIPK inhibe a HKT, un transportador histidina kinasa que media la entrada
de Na+ en la MP en condiciones de salinidad (4) y puede activar a AKT1, canal que permite el
influjo de K+ (5) (Zhang et al., 2004; Zhu, 2002; Mahajan y Tuteja, 2005).

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En el tonoplasto, los blancos de activacin del complejo CBL/CIPK son un antiportador
H+/Ca2+ de la familia CAX, que introduce Ca2+ a la vacuola para ayudar a la homeostasis del
Ca2+ (Sies y Haeussinger, 2009, Zhang et al., 2004; Zhu, 2002) y el antiportador H+/Na+ de la
familia NHX (6) (Sies y Haeussinger, 2009) que se encarga de compartimentalizar el exceso
de Na+ txico en la vacuola (Shi y Zhu, 2002).
En A. thaliana al suprimir CBL o CIPK se incrementa la acumulacin de Na+ en el citoplasma
(Zhu, 2002) y al sobreexpresar el antiportador H+/Na+ de la MP se aumenta la tolerancia a la
salinidad (Shi et al., 2003).
Adems de la CBL, la actina F que se encuentra formando parte del citoesqueleto, tambin
podra constituir una seal de estrs, ya que algunos trabajos mostraron una regulacin de la
organizacin de los microtbulos por la presin de turgencia (Iwata et al., 2001). Los
microtbulos y los microfilamentos del citoesqueleto han estado implicados en el desarrollo de
seales en plantas bajo estrs por fro (Viswanathan y Zhu, 2002). Esto podra estar dado a que
el citoesqueleto conecta diferentes organelos de la clula con la MP, y este podra detectar
cambios en el volumen celular por estrs osmtico y transducir la seal de cambio a otros
componentes de sealizacin.
La Ca2+-ATPasa del RE (ACA2) y de la vacuola (ACA4) encontradas en A. thaliana, son dos
bombas importantes activadas en mayor medida ante estrs salino, estas depletan el Ca2+
citoslico (7). Mediante la sealizacin de este ion o mediante la calmodulina (CaM), se ha
visto que se activa a NHX vacuolar, de esta forma se da una tolerancia alternativa al estrs por
NaCl (Anil et al., 2008).
Tanto el complejo CBL/CIPK como ACA4 activan a NHX mediante sealizacin con el Ca2+
(8), aunque hay reportes que indican que cuando la CaM se une al C-terminal de NHX
vacuolar, se disminuye la Vmax de antitransporte (Yamaguchi et al., 2005).
Las rutas de sealizacin que son dependientes al Ca2+ envuelven a c-Jun N-terminal kinasas,
PKC, MAPK (9) y a rutas de calcineurina (Shim y Karin, 2002). AtMPK6 y AtMPK3 son dos
kinasas que se activan bajo estrs osmtico en A. thaliana. Otras MAPK aun no identificadas
pueden activar genes para la produccin de enzimas antioxidantes como SOD, APX, TPX
(Amaya et al., 1999) y CAT (10) (Sekmen et al., 2007). Las MAPK puede activar la sntesis
de solutos compatibles (Sairam y Tyagi, 2004) llamados osmoprotectores porque
proporcionan proteccin al estrs osmtico (ver 1.4.1).

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Chung et al. (2008) reportaron que la produccin de ERO mediaba la regulacin de la
estabilidad del RNAm del antiportador H+/Na+ de la MP. El H2O2 puede activar a OXI1, una
protena serina/tirosina kinasa responsable de la activacin de MPK3 y MPK6 (Rentel et al.,
2004).
El sistema de transporte electrnico de la mitocondria es afectado por la salinidad y produce
ERO (11). El estrs salino y la sequa aumentan la actividad de PmitoKATP (canal selectivo a
K+ sensible a ATP situado en la membrana interna de la mitocondria), ya que ante tales
estreses se aumenta la produccin de O2 - y esta puede estimular a PmitoKATP, aunque la
activacin de PmitoKATP puede reducir hasta en un 60% la produccin de ERO (Pastore et al.,
1999). Sugirindose que PmitoKATP mediante una retroalimentacin negativa protege a la
mitocondria y a la clula del exceso de produccin de ERO bajo estrs.
El hecho de que el citoplasma ocupa nicamente un 5-10% del volumen del protoplasma, y el
apoplasto ~3% del volumen del mesfilo, la vacuola es un organelo muy importante para
acumular azucares, aminocidos y sales txicas, como el Na+. ste organelo ayuda a mantener
baja la [Na+] y aumenta la [K+] en el citoplasma.
Los niveles de K+ en la vacuola son variables (10-200 mM). En ella se compartimentaliza el
Na+ gracias a un antiportador H+/Na+ de la familia NHX (Shi y Zhu, 2002), pero el canal SV
media la salida de Na+ de la vacuola (12). Finalmente en la vacuola, el canal VK se encarga
del eflujo de K+ (13).
Los antiportadores H+/Na+ de la MP y NHX del tonoplasto utilizan como fuente de energa el
gradiente de protones establecido por la bomba de protones H+-ATPasa de la MP (14) y del
tonoplasto respectivamente (15) (Shi y Zhu, 2002). Las pirofosfatasas (PP-ATPasa) del
tonoplasto contribuyen en menor medida, para la generacin del gradiente de protones.

1.4 Estrs osmtico e hdrico

Una de las primeras respuestas fisiolgicas ante la prdida de la turgencia ocurrida ante el
estrs osmtico e hdrico provocado por el estrs salino es el aumento en la sntesis y
redistribucin de la fitohormona, acido abscsico (ABA), la cual es tambin llamada hormona
de la sequa o antitranspirante.

10
En la fotosntesis, el CO2 tomado por los estomas, brinda los carbonos para la produccin de
compuestos orgnicos, como azucares, el alimento de la planta.
ABA inicia la activacin del cierre de estomas ante estrs salino, por lo que se disminuyen los
niveles de CO2 y por consiguiente la fotosntesis, conduciendo al estrs oxidativo.

1.4.1 Sealizacin Mediada por ABA y Especies Reactivas de Oxigeno

ABA inicia una complicada red de sealizacin con el fin de que los estomas se cierren para
que no haya ms prdida de agua (Vry et al., 1998). Los estomas son como grandes
ventanas que por ejemplo, durante la transpiracin, donde los estomas estn abiertos,
permiten la perdida de ~95% de agua de las clulas guarda y la entrada de grandes cantidades
de CO2 y Na+.
Los estomas estn situados en la epidermis de las hojas, tallos jvenes y races. Estn
flanqueadas por dos clulas epidrmicas especializadas que reciben el nombre de clulas
guarda.
Recientemente, el H2O2 y especies reactivas del NO han sido identificadas como molculas
clave para el cierre de estomas inducido por ABA, se ha identificado a la NADH oxidasa de la
MP como la responsable de la generacin de O2.- en el apoplasto (Sagi y Fluhr, 2006; Bedard y
Krause, 2007), mientras que la nitrato reductasa (NR) ha sido identificada como una fuente
para NO.
ABA activa a un receptor aun no identificado en la MP (1) y ante esto se activa a la NADH
oxidasa (NOX) (2) (Kwak et al., 2003), enzima que produce O2.- (3) a partir de O2, el O2.- es
precursor para la conversin a H2O2 y OH en el apoplasto, aunque estas ERO se piensa que
participan en la sealizacin en el citoplasma de las clulas guarda ya que el H2O2 puede
atravesar la membrana del estoma (4).
El H2O2 activa a canales HACC- H2O2 (5), y HO activa a HACC- HO (Foreman, 2003;
Khler et al., 2003; Pei, 2000) los cuales permiten la entrada de Ca2+ al citoplasma (6).
Paralelamente, ante la seal de ABA, se da la activacin de la subunidad de las protenas G
que puede activar a la PLC (7), aunque se ha observado que ABA activa directamente a PLC
(Wang et al., 2001), la PLC sintetiza IP3 (8), el cual puede activar canales de Ca2+
dependientes de IP3 intracelulares, esto resulta en una elevacin adicional de la [Ca2+]cit (9).

11
ltimos estudios, reportan al fosfolpido esfingosina-1-fosfato (SIP) (una molcula
movilizadora de Ca2+) (10) activada ante la sealizacin por ABA para el cierre de estomas
(Hetherington, 2001).
La elevacin en la [Ca2+]cit y H2O2 activan a dos tipos de canales aninicos (Hedrich, 1994;
Trouverie et al., 2008), a los tipo-S (Schroeder y Keller, 1992) y R (Grabov et al., 1997)
directamente (11) o a travs de fosforilacin va una protena kinasa dependiente de Ca2+
(CDPK). Ambos canales median la liberacin de aniones desde la clula guarda (12). La
entrada de Ca2+ por los NSCC-MP y el eflujo de aniones por los canales S y R de la MP
causan la despolarizacin de la MP (13).
Otra causa de despolarizacin de la MP es la inactivacin de la bomba H+-ATPasa de la MP
tanto por las ERO (14), como por la alta [Ca2+]cit (15) (Kinoshita et al., 1995).
La despolarizacin causa la desactivacin de canales de K+ rectificadores entrantes (KIR) (16)
(abiertos por la hiperpolarizacin mediada por la H+-ATPasa-MP), pero causa la activacin de
canales rectificadores salientes en las clulas guarda (GORK) (17) (Blatt, 1992). La activacin
de GORK resulta en un eflujo masivo de K+ desde las clulas guarda. Adems de que los
canales KOR son activados directamente por la alcalinizacin del medio efectuada por las
ERO (Miedema y Assmann, 1996). La alcalinizacin regula a la baja a los canales aninicos
tipo R (Schulz-Lessdorf et al., 1996).
El eflujo sostenido de aniones y K+ por los canales aninicos y por los GORK
respectivamente, contribuyen a la prdida de turgencia, la cual conlleva al cierre de estomas.
Pero para poder salir de la clula, tanto los aniones y K+, primero deben de salir de la vacuola.
Las vacuolas tienen cerca del 90% del volumen de las clulas guarda, ms del 90% de iones
deben ser exportados desde la vacuola al citosol.
La elevada [Ca2+]cit activa a los canales vacuolares aninicos aumentando el eflujo de Cl- y
malato y a VK que media la liberacin al citosol de K+ (18). Las bombas del tonoplasto crean
un gradiente mediante la entrada de H+ a la vacuola, accin realizada principalmente por la H+-
ATPasa del tonoplasto (19), permitiendo que se den los eflujos tanto de aniones como de K+
del tonoplasto. El aumento en la compartimentalizacin de H+ por las bombas del tonoplasto
provoca que se aumente el pH citoplasmtico, lo que activa ms a los canales GORK (20).
Se ha reconocido que se induce una reorganizacin del citoesqueleto durante el movimiento de
estomas (Schroeder et al., 2001).

12
La deshidratacin causa plasmlisis (disminucin de la turgencia) de las clulas y acelera la
biosntesis de ABA tanto en hojas como en raz, como lo estudiamos anteriormente. La
plasmlisis tambin destruye a los microtbulos del citoesqueleto y a la geometra de la pared
celular (PC), esta informacin se transmite a los microtbulos para que respondan.

Figura 2. Modelo de la sealizacin mediada por ABA y especies reactivas de oxigeno ante estrs por
deshidratacin causado por la salinidad y los mecanismos de defensa activados en la clula.

ABA provoca la ruptura de microtbulos corticales, mediante la sealizacin de AtRac1, se

rompen las cadenas de actina (21) (Jiang et al., 1996) provocando el cierre de estomas en las
clulas guarda.
Las Rho GTPasas (Rhops) en plantas son una familia con 11 miembros de pequeas GTPasa
en las plantas, y algunos estn implicados en la reorganizacin del citoesqueleto. Dos
miembros de esta familia, ROP6 (tambin llamado AtRAC1) (Lemichez, et al., 2001) y
ROP10, han sido implicados en la respuesta de ABA en clulas guarda. Estudios con lneas de

13
A. thaliana transgnicos, indican que ROP6 y ROP10 son reguladores negativos en la
respuesta de ABA y estas especies la germinacin de las semillas y la elongacin de la raz se
ven afectadas, ya que las ROP son reguladores de la germinacin, crecimiento y desarrollo de
las plantas (Zheng et al., 2002).
La respuesta adaptativa de la planta conlleva a encender genes de respuesta al estrs, de
hecho ms de 1000 genes son regulados por ABA para hacer frente al estrs hdrico.
Las MAPK pueden activar la sntesis de solutos compatibles (Sairam y Tyagi, 2004), por
ejemplo, carbohidratos (sucrosa, sorbitol, manitol, glicerol y polioles cclicos como el mio-
inositol), compuestos nitrogenados [protenas, glicinabetaina (Mahajan y Tuteja, 2005), PAs
(Cuin y Shabala, 2007), glutamato, glicina, colina] y cidos orgnicos e inorgnicos (oxalato,
malato y prolina) (Hasegawa et al., 2000). Estos compuestos son llamados osmoprotectores
porque proporcionan proteccin al estrs osmtico-hdrico, ya que siendo osmolitos, regulan
el s y facilitan la retencin de agua en el citoplasma. Aunque hay controversias, ya que la
suma de todos los osmolitos no parece ser necesaria para contrarrestar la gran concentracin
de solutos en el suelo. Se ha visto que los polioles permiten el secuestro de Na+ en la vacuola y
en el apoplasto (Bohnert, 1995) y tambin protegen a las membranas celulares del dao
oxidativo provocado por las ERO, sobreregulando las actividades de varios antioxidantes (Yan
et al., 2000).
El estrs osmtico inhibe la divisin celular y la expansin directamente. Algunas plantas son
tan sensibles al estrs que el solo pnico resulta en que cese el crecimiento cuando ocurre un
leve estrs. Por lo contrario, algunas plantas que no son sensibles corren el riesgo de morir por
continuar creciendo cuando el estrs es serio.
Un importante enlace entre el estrs y la divisin celular fue revelado por la induccin de
ICK1 en Arabidopsis por ABA. ICK1 es un inhibidor de protena kinasa dependiente de
ciclina necesaria para la divisin celular. Ms an, ante sequa o fro se expresan los genes
CBF1, DREB1 y ATHB7, genes que no se expresan en condiciones normales de crecimiento y
causan bajo crecimiento en plantas transgnicas (Zhu, 2001).

1.5 Estrs Nutrimental

Por las similaridades qumicas entre el Na+ y el K+ se asume generalmente que compiten por

14
los mismos sitios de absorcin en la raz, resultando ante salinidad una deficiencia de K+.
El K+ es un mineral nutritivo, en plantas glicfitas, contribuye a ms del 6% del peso seco de
la planta.
Se requieren grandes cantidades de este catin en el citoplasma de las clulas vegetales para el
metabolismo, osmoregulacin, mantenimiento de la turgencia, expansin celular, transporte
floemtico, crecimiento (Zhu, 2003; Marschner, 1995) movimiento de estomas, tropismo,
movimiento celular, funcin de enzimas donde se requieren 10-50 mM K+ para su mxima
actividad (mientras que 100 mM Na+ inhibe las enzimas), y 100 mM K+ o ms para la sntesis
de protenas (Zhu, 2003; Niu et al. 1995).
Varios genes relacionados con el metabolismo de las ERO son significativamente
sobreregulados por la deficiencia de K+ citoplasmtica y se da un aumento en la produccin de
ERO en la raz, justo debajo de la zona de elongacin. La inhibicin de la NADPH oxidasa en
A. thaliana (rhd2), la cual es una fuente para la produccin de ERO, previene la
sobreregulacin de genes que normalmente son inducidos por la deficiencia de K+, esos genes
estn relacionados con el transporte de K+ a la clula (Shin y Schachtman, 2004). Por lo que la
aplicacin de H2O2 reestablece la expresin de genes y ayuda a la homeostasis del K+.
Este catin pude neutralizar el efecto de los aniones, en el caso de estrs por NaCl al Cl-.
El Na+ no se debe considerar solo como un ion txico para las clulas vegetales, sino que a
bajas concentraciones, se ha probado que el Na+ estimula el crecimiento en esprrago, brcoli,
algodn, chcharo, tomate, rbano, apio, betabel, entre otras (Harmer y Benne, 1945), aunque
en todas las plantas, altos niveles de Na+ si son txicos.

CAPITULO 2. ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO

2.1 Particularidades de las Especies Reactivas de Oxigeno

Parece ser que la vida se origin espontneamente hace 3.500 millones de aos a partir de los
aminocidos, nucletidos y otras sustancias qumicas bsicas. Estas molculas fueron el

15
producto de componentes simples reducidos de la atmsfera primitiva, sometidos a reacciones
por radicales libres, iniciadas esencialmente por la intensa radiacin ionizante del sol.

Figura 3. Generacin de diferentes especies reactivas de oxigeno (ERO). Por excitacin 1O2 o por la reduccin
univalente secuencial del oxigeno.

Debido a que los organismos se desarrollan en presencia de oxgeno, estn expuestos a la

generacin de especies reactivas de oxigeno (ERO).
La mayora de las ERO derivan del oxgeno, que en la naturaleza aparece en forma molecular
o diatmica (O2) y otras ERO derivan del N.
Las ERO incluyen al singlete de oxgeno (1O2) que puede ser formado por absorcin directa de
radiacin, que despus es secuencialmente reducido a O2 - (radical superxido), perxido de
hidrgeno (H2O2) y radical hidroxilo (HO ), para finalmente producirse dos molculas de H2O
(Fig. 3). En las plantas las ERO son continuamente producidas como bioproductos en varias
rutas metablicas localizadas en diferentes compartimentos celulares, especialmente donde se
da la transferencia de electrones, como en las mitocondrias y cloroplastos. En los peroxisomas,
glioxisomas (un tipo de peroxisomas), RE, apoplasto, pared celular (PC), MP y citoplasma
tambin hay produccin de ERO (Amirsadeghi et al., 2007; Van Breusegem y Dat, 2006). El
equilibrio entre la produccin y atrapamiento de las ERO puede ser perturbado por un gran
nmero de efectos adversos ambientales. Como resultado de estos disturbios, los niveles
intracelulares de ERO pueden aumentar rpidamente.
La ERO son responsables del dao oxidativo de macromolculas biolgicas como el DNA,
lpidos, carbohidratos y protenas (Halliwell y Gutteridge, 2007).

16
Tabla 1. Particularidades de las especies reactivas de oxigeno
ERO Particularidades

HO Se desplaza no ms de 3-5 radios moleculares y destruye lo que encuentra
en ese corto recorrido, como lpidos, protenas y cidos nucleicos
(Fridovich, 1998). Puesto que la formacin de HO requiere un metal de
transicin, la mayor parte del dao tiene lugar en sitios de unin de este
metal a biomolculas. Entre las protenas, Rubisco y glutamina sintetasa
son blancos preferidos, pero es concebible que la mayor parte del dao
ocurra a nivel del ADN, por daos a la doble hlice en regiones donde se
ha unido hierro (Fridovich, 1998).
Tiene gran afinidad por las molculas biolgicas en su sitio de produccin,
reaccionando con velocidades controladas de difusin (K>109 M-1 s-1).
Puede captar los electrones de los tioles, por lo que interacta con las
bases nitrogenadas del ADN.
Puede sustraer un H+ de un cido graso insaturado (AGI), iniciando la
reaccin de la peroxidacin lipdica daando as a las protenas (Halliwell
y Gutteridge, 2007).

H2O2 Es relativamente estable, no es tan reactivo y es elctricamente neutro, es

capaz de atravesar membranas y de alcanzar lugares remotos desde su
sitio de produccin (Dat et al., 2000). Se encuentra en clulas en
lignificacin (Thordal- Christensen et al., 1997). Tiene baja toxicidad, si
reacciona con Fe2+ y Cu2+ se produce HO .

(R , RO , Se producen cuando una ERO ataca molculas orgnicas (particularmente

ROO ) a los cidos grasos poliinsaturados, AGPI), lo que produce formas
reactivas de estas molculas, que pueden a su vez daar a molculas
vecinas, en una reaccin en cadena.
1
O2 Es el O2 en el primer estado excitado. Tiene la capacidad para sustraer un
H+ de un AGPI, iniciando la reaccin de peroxidacin lipdica. 1O2 puede
ya sea transferir su energa de excitacin a otra molcula o continuar con
ella, y formar endoperoxidasas o hidroperoxidasas (Halliwell y
Gutteridge, 2007).

O2- No ataca de manera significativa a AGPI o al ADN. No puede pasar por

las membranas y es rpidamente dismutado a H2O2. Por otro lado, puede
actuar como una base de Brnsted, captando un electrn y dando lugar al
radical perhidroxilo o hidroperxido (HO2 ). Es el primer ERO formado
en la mitocondria y se utiliza como precursor para H2O2 y HO (Fridovich,
1998).
O3 Disminuye la asimilacin de CO2 en clulas guarda. En la atmsfera alta
es altamente benfico como filtro UV, pero en la tierra es un contaminante
serio (Torsethaugen, Pell y Assmann, 1999).

NO Puede actuar como pro-oxidante al generar NO y ONOO-, o como

17
 antioxidante al unirse al Fe2+ cataltico y O2- evitando as reacciones tipo
Fenton. Participa en procesos como el cierre estomtico, biosntesis de
etileno, cido jasmnico (AJ) y cido saliclico (SA), modulacin en la
expresin gnica, desarrollo y senescencia, y en la respuesta de las plantas
a estreses abiticos y biticos.
El efecto del NO reside en su capacidad de reaccin con el hierro de
protenas intracelulares, principalmente mitocondriales, siendo inactivadas
por l. Puede reaccionar con el ADN dando lugar a mutaciones y roturas.

Tabla 2. Tiempo de vida media y origen de las especies reactivas de oxigeno

ERO t1/2 Origen
37C (s)
HO 10-9 Reaccin de Haber-Weiss:
-
O2 + H2O2 HO + OH- + O2

Reaccin de Fenton (ms efectivo):

H2O2 + Fe2+ (Cu+) Fe3+ (Cu2+) + HO + OH-

O2 - 10-6 Formado en reacciones de auto-oxidacin (flavoprotenas,

como la NOX y en el ciclo redox):

NO 1-10 Se origina por la reduccin del nitrato o nitrito, catalizada por la

nitrato o nitrito reductasa (NR), repectivamente.

NO2 NO

H2O2 Estable Se origina a partir de peroxidasas de la pared celular.

o 10-3 Dismutacin del O2- (espontnea o catalizada por SOD). K>
4 105 M-1 s-1, pH 7.

2O2- + 2 H+ H2O2 + O2

Origen: Reduccin enzimtica de O2

O2 + 2e- + H+ H2O2

(R , RO , 10-8, 10- R-H + 1O2

ROO ) 6
) y 10-2
R-H R ROO ROOH RO
+2
HO H2O O2 RH R Fe Fe + OH-
+3

18
 1
O2 10-6 hv
O2 1O2
O2 >102

2.2 Antioxidantes

Todas las clulas aerbicas estn sujetas a estrs oxidativo. El organismo ha desarrollado una
serie de mecanismos de defensa antioxidante enzimtica y no enzimtica, diseados para
protegerse de la accin de las ERO. Halliwell, defini antioxidante como cualquier sustancia
que, en bajas concentraciones comparado con el sustrato oxidable, disminuye
significativamente o inhibe la oxidacin de este sustrato.

Tabla 3. Particularidades y localizacin de los agentes antioxidantes

Antioxidante Particularidades Localizacin
cido Es la molcula antioxidante ms abundante en las plantas. Apo, cit, chl,
ascrbico Se sintetiza en la mitocondria, aunque est presente en mit, per.
todos los compartimentos celulares. Casi todos los
animales pueden sintetizarlo, excepto los seres humanos y
alguna otra excepcin. La forma reducida del cido
ascrbico inactiva directamente a las ERO, o acta como
sustrato de enzimas antioxidantes, aunque puede actuar
tambin como pro-oxidante (Foyer et al., 1994). Cuando el
Asc se oxida, se forman sus derivados MDHA y DHA.

AOX Acepta electrones del sistema de ubiquinona y los usa para Chl y mit.
reducir el O2 a H2O, sin conservacin de la energa a travs
de la formacin de un gradiente de protones en la
membrana mitocondrial interna.
Bajo varios estreses (oxidativo) se aumenta la produccin
de ERO en los tejidos y los niveles de AOX (Foyer et al.,
1994).

APX Usa la forma de ascorbato reducido como un reductor en el Apo, cit, chl
primer paso del ciclo, siendo la PX ms importante en la (mem
detoxificacin del H2O2. Su velocidad de reaccin es de 2 tilacoidal,
M-1s-1. lumen y
estroma), per y
2Asc + H2O2 2DHA + 2H2O estroma mit.
Carotenoide Sistema de atrapamiento no enzimtico. Chl (mem
tilacoidal).
CAT Es el mayor antioxidante en A. thaliana (Yang y Poovaiah, Per,
2002). Su Km es relativamente baja ~ 8x10-10 mM, sin glioxisomas.

19
 embargo su Vmax es muy alta. Por lo que slo es activa
cuando se encuentran altas concentraciones de H2O2. Se
inhibe a T bajas y ante shock trmico (Dat et al., 2000).

2H2O2 2H2O + O2 (sin necesidad de un poder reductor)

DHAR Ciclo del ascorbato-glutatin Cit, chl y mit.

DHA + 2GSH Asc + GSSG

Fd Sistema de atrapamiento no enzimtico

GPX Catalizan la reduccin de hidroperxidos orgnicos y Cit, chl, mit y

perxidos de lpidos, tales como los que se originan en las RE.
membranas en situacin de estrs, utilizando GSH como
donador de electrones:

ROOH + GSH ROH + GSSG

H2O2 + 2GSH 2H2O + GSSG
Se inducen por la salinidad y otros estreses abiticos y
biticos (Eshdat et al., 1997).

GR Ciclo del ascorbato-glutatin Apo, cit, chl y

mit.
GSSG + NAD(P)H 2GSH + NAD(P)-

MDAR Ciclo del ascorbato-glutatin Cit, chl y mit.

MDHA + NAD(P)H + H+ 2Asc + NAD(P)-

PrxR Son una familia de PX no hmicas, que catalizan la Cit, chl, mit,
reduccin del H2O2 a H2O, depende de la presencia de al mem, ncleo.
menos una cisteina en su centro cataltico. Esta cisteina es
regenerada por la accin de las tiorredoxinas o
glutarredoxinas (Vieira Dos Santos y Rey, 2006)

2P-SH + H2O2 P-S-S-P + 2 H2O

Y de los perxidos orgnicos a los correspondientes

alcoholes:

ROOH + R(SH)2 ROH + H2O + RS2

PX Necesitan un agente reductor para llevar a cabo su reaccin Cit, chl, mit,
(H2A: ascorbato, glutatin, etc.), pero tienen mayor PC, per, vac.
afinidad por el H2O2 que la CAT.

20
 Funciones:
a) Oxidan compuestos en reacciones con un sentido
fisiolgico sin relacin con el estrs oxidativo (ej.
lignificacin de las paredes vegetales)
b) Eliminan H2O2 u otros radicales orgnicos, derivados de
procesos de estrs oxidativo. Existen peroxidasas que son
capaces de realizar ambas funciones.

H2A + H2O2 A + 2H2O

H2A + ROOH A + ROH + H2O

SOD La reaccin catalizada por SOD es 10000 veces ms rpida MnSOD: mit,
que la dismutacin espontnea. La velocidad de reaccin per.
de CuZn-SOD es de 2x109 M-1s-1 (Mittler et al., 2004). FeSOD: chl.
CuZnSOD:
2O2- + 2H+ H2O2 + O2 chl, cit, apo y
per. No hay en
espacio EC.

Trx Disulfuro oxidoreductasa con dos grupos cistena en su Trx-h:cit

dominio conservado. Cataliza las reacciones de reduccin Trx-f y Trx-m:
que incluyen la conversin de los puentes S-S a los grupos Chl.
SH.

-tocoferol Una molcula de tocoferol es capaz de proteger a 1000 Mem, plastos,

molculas lipdicas de la propagacin en cadena de la cit.
peroxidacin lipdica.

AOX: Oxidasa alterna; Apo: Apoplasto; APX: Ascorbato peroxidasa; Asc: Ascorbato; CAT: Catalasa; Chl:
Cloroplastos; Cit: Citoplasma; DHA: Dehidroascorbato; DHAR: Dehidroascorbato reductasa; EC: Extracelular;
Fd: Ferredoxina; GPX: Glutatin peroxidasa; GR: Glutatin reductasa; GSH: Glutatin reducido; GSSG: Oxi-
glutatin; LOOH: Hidroperoxisomas; LOH: Lpido estable (cido graso); MDHA: Monodehidroascorbato; Mem:
Membrana; Mit: Mitocondria; MR: Monodehidroascorbato reductasa; Per: Peroxisomas; PX: Peroxidasas; PrxR:
Peroxiredoxina; SOD: Superxido dismutasa; Trx: Tiorredoxina; Vac: Vacuola.

2.3 Fuentes Fisiolgicas de Especies Reactivas de Oxigeno y su Remocin Mediante

Molculas Antioxidantes

2.3.1 Cloroplasto

21
En los cloroplastos se producen O2- y H2O2 durante la fotosntesis (Fig. 4), por lo que es
natural que los componentes plastdicos se conviertan en blancos preferidos del dao
oxidativo, aunque tambin cuentan con varios mecanismos antioxidantes, por ejemplo,
comparado con otros compartimentos celulares, los cloroplastos contienen altos niveles de
acido ascrbico y glutatin, 25 y 5 mM, respectivamente (Noctor y Foyer, 1998).

Figura 4. Fotosntesis con la concomitante generacin de ERO y la participacin de sus antioxidantes.

En el interior de los cloroplastos, en el fotosistema II (PSII), bajo condiciones anaerbicas,

pero con la adicin de 3O2, el centro de reaccin cloroflico absorbe la energa luminosa a una
longitud de onda de 680 nm excitndose (3P680*), despus transfiere la energa de excitacin
al O2 cayendo a 1P680 y generando 1O2 (Apel y Hirt, 2004; Halliwell y Gutteridge, 2007). El
1
O2 degrada rpidamente lpidos, pigmentos y protenas que se encuentren prximas a su sitio
de produccin. El complejo citocromo b6/f recibe los electrones de PSII transfirindolos a la
plastocianina (PC) y esta los cede al P700, convirtindose en P700*, AOX puede impedir esta
exitacin. Se ha visto en plantas transgnicas que la falta de AOX hace que aumente la
susceptibilidad al estrs oxidativo causando la PCD. El PSI (P700*) transfiere los electrones a
la ferredoxina soluble (Fd). Por ltimo, una flavoprotena soluble asociada a la membrana, la
ferredoxina-NADP reductasa (FNR), reduce el NADP+ a NADPH en el estroma. El
fotosistema I (PSI) es especialmente vulnerable al dao por ERO. La Fd aceptora de los
electrones de PSI es un reductor muy fuerte que puede reducir fcilmente el O2 a O2-, a travs
de la reaccin de Mehler. El O2 - es el causante de la peroxidacin lipdica. Pero en el

22
cloroplasto existen enzimas como CuZn-SOD y Fe-SOD que convierten el O2- a O2 y H2O2,
esta ultima ERO es convertido a H2O por PrxR y por el ciclo de ascorbato-glutatin catalizado
por APX del estroma, lumen y membrana (Asada, 1999).

2.3.2 Mitocondria

Figura 5. Cadena de transporte electrnico en la respiracin mitocondrial como la responsable en la generacin

de ERO y la participacin de sus antioxidantes.

Los organismos aerobios utilizan el O2 como aceptor final de electrones durante el proceso de
la respiracin mitocondrial que tiene como fin la sntesis de energa en forma de ATP (Fig. 5).
El O2 involucrado en la respiracin celular es utilizado por la citocromo oxidasa en un 95-
99%, mientras que la produccin de ERO corresponde al 1- 5% restante (Boveris y Chance,
1973). Este hecho es conocido como la paradoja del oxgeno, ya que el O2 es imprescindible
para la vida en los organismos aerobios, pero puede al mismo tiempo matarlos. La mitocondria
es la fuente principal de especies como: O2 -, HO , H2O2, NO y ONOO-.

23
El complejo I o NADH deshidrogenasa es un gran complejo multienzimtico que cataliza la
transferencia de electrones de NADH a la ubiquinona o coenzima Q en la cadena respiratoria.
El complejo II o succinato deshidrogenasa dona tambin sus electrones a la ubiquinona. El
complejo III o complejo citocromo bc1, obtiene dos electrones desde QH2 y se los transfiere a
dos molculas de citocromo c en el espacio intermembranal (EIM) de la mitocondria. El
complejo IV o citocromo c oxidasa; capta cuatro electrones del citocromo c y los transfieren al
oxgeno (O2), para producir dos molculas de agua. Al mismo tiempo se translocan cuatro H+
al EIM por los cuatro electrones. Adems "desaparecen" de la matriz cuatro H+ que forman
parte del H2O. Finalmente a partir de ADP se forma ATP gracias a la ATP sintasa.
La reduccin directa de O2 a O2- tiene lugar en la regin flavoprotena del segmento NADH
deshidrogenasa y en la ubiquinona.
La MnSOD mitocondrial acta sobre el radical O2 - transformndolo en H2O2, que a su vez
puede ser reducido por iones Fe2+ o Cu+ a radicales HO en reacciones tipo Fenton (Thannickal
y Fanburg, 2000), causando dao oxidativo a lpidos, protenas y ADN, si el dao es mayor se
causa la disfuncin y muerte celular (Fig. 5).
En las mitocondrias tambin se genera NO que puede interferir con la actividad del complejo
III.
La mitocondria vegetal censa el estrs celular tempranamente y regula la PCD (Rhoads et al.,
2006).
La mitocondria juega el papel ms importante en el entrecruzamiento entre los organelos bajo
estrs ambiental/oxidativo por sealizacin con cloroplastos (Millar et al., 2001) y por inducir
alteracin en la expresin de genes a travs de sealizacin desde la mitocondria hasta el
ncleo. Al menos tres diferentes enzimas de rutas de antioxidantes de plantas se han visto que
son blanco en la mitocondria y cloroplastos, sugiriendo un alto grado de coordinacin en la
respuesta defensiva entre estos dos compartimentos (Rhoads et al., 2006).

2.3.2.1 Ciclo Ascorbato-Glutatin

El ciclo ascorbato-GSH o ciclo de Halliwell-Asada est constituido por cuatro enzimas, siendo
la ms abundante la APX, que requiere ascorbato para reducir el H2O2 a H2O. El MDHA
puede ser reducido a ascorbato de nuevo por la monodeshidroascorbato reductasa (MR), que

24
requiere NADH, o bien puede desproporcionarse a ascorbato y DHA. A continuacin, la
deshidroascorbato reductasa (DR) regenera el ascorbato a partir de DHA utilizando GSH
como reductor. El ciclo se completa con la reduccin del GSSG a GSH mediante la actividad
glutatin reductasa (GR) utilizando la NADPH (Sairam y Tyagi, 2004).

2.3.3 Peroxisoma

Figura 6. Produccin de ERO en los peroxisomas y su remocin.

Los peroxisomas son organelos derivados del RE que llevan a cabo una gama de actividades
metablicas en respuesta a cambios ambientales y demanda celular.
Una gran interaccin metablica existe entre los peroxisomas, mitocondrias y cloroplastos en
las hojas de las plantas en donde los peroxisomas convierten el glicolato, formado en la
fotosntesis en glicoxalato (Reumann y Weber, 2006), pero un porcentaje de glicolato es
convertido a H2O2 en los peroxisomas por accin de la glicolato oxidasa (Fig. 6). Los
glioxisomas, un tipo de peroxisomas, se caracterizan por la presencia de una serie de enzimas
que llevan a cabo el ciclo del glioxilato y al igual que en los peroxisomas se produce H2O2.

25
El H2O2 puede ser degradado por la CAT o convertirse en HO . El HO e hidroperoxidasas
pueden inducir a la peroxidacin lipdica. Los hidroperxidos formados en este proceso
pueden ser neutralizados por la GPX. Algo de H2O2 puede escapar al citoplasma y puede ser
convertido a H2O por AOX o GPX, o tambin puede ser atrapado por AOX de la membrana de
los peroxisomas o del citoplasma. El O2- pueden convertirse en H2O2 tanto por la Mn-SOD y
por la CuZn-SOD (Densen y Wirtz, 2001).
El O2 - se origina en la matriz por accin de la xantina oxidasa y puede salir al citoplasma (Fig.
6). En cambio, no se ha identificado todava la enzima productora de NO que est presente en
peroxisomas de hojas de guisante, pero se sabe que tanto O2- y NO participan en la
sealizacin celular.

2.3.4 Apoplasto y Citoplasma

Figura 7. Diagrama esquemtico de la NADH oxidasa vegetal.

La familia de NADH oxidasas (NOX) son protenas situadas en la MP de clulas animales,

plantas y hongos, y catalizan la produccin de las ERO. La NOX2 induce la produccin de
ERO en humanos por activacin de las clulas fagocticas en la sangre ayudando as a la
destruccin del patgeno. En plantas, los homlogos de la NOX han sido llamados homlogos
de la oxidasa de la explosin respiratoria (Rboh) y participan en la produccin de ERO ante la

26
respuesta a patgenos (Sagi y Fluhr, 2001; Torres et al., 2006). El descubrimiento de nuevos
tipos de genes para la NOX animal y nuevas funciones para los genes Rboh de plantas, nos
indican que adems estas protenas participan en el desarrollo, biosntesis hormonal y
transduccin de seales celulares (Foreman et al., 2003; Kwak et al., 2003). Las NOX
contienen dominios de unin a NADPH y FAD (Fig. 7). En general el aceptor final es el O2 y
el producto en el apoplasto de la transferencia de electrones es el O2 - (Sagi y Fluhr, 2006;
Bedard y Krause, 2007). En plantas la NOX es estimulada directamente por Ca2+, mediado por
motivos de unin Ca2+ (EF-hand) situados en el dominio N-terminal de la NOX (Sagi y Flur,
2001) (Fig. 7). El O2- es dismutado para generar H2O2 en el apoplasto, ya que como sabemos,
esta ERO puede viajar a ms distancia que el O2-.
Otras fuentes de H2O2 en el apoplasto son gracias a enzimas como amino peroxidasas de la
PC, amino oxidasas (PAO y DAO), otras enzimas que contengan flavina y oxalato oxidasas
(Apel y Hirt, 2004; Mittler et al., 2004; Bowler y Fluhr, 2000; Cona et al., 2006).
Intracelularmente, H2O2 puede ser producido por PAO citoplasmtica (Cona et al., 2006;
Moschou et al., 2008) o difundir en el citosol desde organelos.
La cuantificacin zonal de H2O2 en el apoplasto durante el crecimiento de las races todava no
se ha registrado, pero todo el H2O2 del apoplasto en A. thaliana se ha estimado entre 0.6 y 7
mM (Veljovic-Jovanovic et al., 2001). En las semillas de Zea, es cerca de 0.1-0.2 mM,
aumentando a 10 mM despus de estrs por fro (Prasad et al., 1994).
Otra importante fuente de ERO que ha recibido poca atencin son las reacciones de
detoxificacin catalizadas por el citocromo P450 en el citoplasma y RE (Dybing et al., 1976).
Un jugador annimo en la red de sealizacin de ERO es la vacuola, sus antioxidantes y
productores potenciales de ERO no se conocen aun. Es posible que este organelo, por tener un
gran volumen, juegue un inesperado papel esencial en el control del metabolismo de ERO. Al
mismo tiempo la capacidad antioxidante y papel de sealizacin del apoplasto y peroxisomas
apenas se estn descubriendo.

2.4 Evaluacin de las Especies Reactivas de Oxigeno

Debido a la gran reactividad de las ERO y a su escasa vida media (ver Tabla 2), estas especies
no han podido ser detectadas experimentalmente hasta el advenimiento de las tcnicas de

27
citometra de flujo y microscopa confocal. Estas tcnicas han permitido mediante el uso de un
amplio nmero de molculas fluorescentes como la rodamina 123 (Rh123),
diclorofluorescena (DCF), hidroetidio (HE), entre otros, detectar especficamente a las ERO
en el momento de su generacin en las clulas vivas.
El diacetato de 2, 7-dihidro dicloro fluorescena (H2DCF-DA) es un compuesto apolar que
entra a las clulas (Allan y Fluhr, 1997), donde se convierte en un compuesto ms polar, el
diclorodihidrofluorescena (H2DCF), por accin de unas esterasas intracelulares. Este
compuesto no presenta fluorescencia, pero al ser oxidado por el H2O2, catalizado por las
peroxidasas, se convierte en fluorescena (DCF) altamente fluorescente (verde) (Cathcart et
al., 1983).

2.5 Papel Fisiolgico de las Especies Reactivas de Oxigeno

Las ERO no solo deben de ser consideradas como agentes txicos producidos por el
metabolismo aerobio, sino que ahora se han reconocido como agentes regulatorios y de
sealizacin (Apel y Hirt, 2004; Mittler et al., 2004; Foyer y Noctor, 2005). Las ERO estn
envueltas en la regulacin de respuestas de defensa y muerte celular (Zhang et al., 2003),
gravitropismo (Joo et al., 2001), apertura de estomas (Kwak et al., 2003; McAinsh et al., 1996;
Murata et al., 2001; Pei et al., 2000; Zhang et al., 2001a, b, c); crecimiento polar y expansin
celular (Coelho et al., 2002; Foreman et al., 2003; Gapper y Dolan, 2006) crecimiento y
desarrollo floral y crecimiento de los pelos radicales (Foreman et al., 2003).
Las ERO producidas ante el estrs abitico actan como seales de cambio, regulan la
expresin de genes (Pei et al., 2000; Desikan et al., 2001; Pastori y Foyer, 2002; Mittler et al.,
2004; Shin y Schachtman, 2004) y regulan la actividad de canales inicos (Foreman et al.,
2003). As como se da una acumulacin de estas molculas ante el estrs bitico, las ERO
pueden ayudar o matar al patgeno (Sagi y Fluhr, 2006; Torres et al., 2006).
Los mecanismo mediante los cuales llevan a cabo estas distintas respuestas, se complementa
con la produccin de enzimas y de antioxidantes (Mittler et al., 2004), adems de que
necesitan una serie de protenas y lpidos para poder transmitir las respuestas, como
fosfolipasas y cidos fosfatdicos (Zhang et al., 2003), ROP GTPases y MAP kinasas (Rentel y
Knight, 2004).

28
2.6 Estrs oxidativo

2.6.1 Peroxidacin Lipdica

Los mecanismos por los cuales ERO inducen modificaciones en la permeabilidad en la

membrana se piensa que envuelven la peroxidacin de los fosfolipdos de la membrana (Fig,
8), la oxidacin de grupos sulfihidrilo localizados en las protenas (Fig. 9), la inhibicin de
enzimas regulatorias unidas a la membrana e interrupcin de fosforilacin oxidativa y niveles
de ATP (Kourie, 1998).
Los AGPI son fundamentales para la clula, ya que forman parte de los fosfolpidos,
constituyentes principales de la bicapa lipdica de todas las membranas y son los responsables,
en buena medida, de la fluidez e integridad de estas. Los AGPI son molculas biolgicas ms
susceptibles al estrs oxidativo y su degradacin se denomina peroxidacin lipdica.
Esta peroxidacin oxidativa es el efecto ms importante de las ERO sobre la clula, ya que la
destruccin de los AGPI de la MP junto con la formacin de puentes disulfuro de las cadenas
proteicas y la ruptura de stas, provoca un desmoronamiento de la estructura de la membrana
conduciendo a una prdida de la permeabilidad y, posteriormente, a la muerte celular. La
susceptibilidad de las membranas biolgicas a la peroxidacin depende, en gran medida, del
grado de instauracin y de la posicin de los dobles enlaces y del Fe2+.
La primera etapa de peroxidacin lipdica se denomina iniciacin (Fig. 8), comienza cuando el
HO ataca a un carbono de la cadena aliftica de una cido graso, y se extrae un tomo de
hidrogeno para producir H2O y el radical alqulico. Esta reaccin se produce
significativamente en los carbonos contiguos a doble enlaces de los AGPI, ya que los radicales
formados se estabilizan por resonancia con el doble enlace del resto acilo y se forman los
conjugados dienos. El HO no es una molcula muy estable, por lo que reacciona rpidamente
con O2 y forma un ROO que tampoco es estable, este reacciona con otros cidos grasos libres
produciendo otras molculas como ROOH, endoperxidos y cicloperxidos, si reacciona con
el mismo (Curtis et al., 1984), de este modo se produce la propagacin (Fig. 8). Cuando un
radical reacciona, siempre produce otro radical, lo que es llamado mecanismo de reaccin en
cadena, la reaccin solo termina cuando una ERO reacciona con otro y producen una especie
no reactiva, esto solo pasa cuando la concentracin de ERO es suficientemente alta para que

29
halla la probabilidad de que las dos ERO reaccionen. Tambin se termina la peroxidacin
lipdica cuando las ERO interaccionan con molculas antioxidantes, o bien mediante la
fragmentacin de los cidos grasos en gran nmero de productos hasta que se agota el sustrato,
lo que implica la muerte celular (Halliwell y Gutteridge, 2007).

Figura 8. Pasos de la peroxidacin lipdica. De forma esquemtica, la reaccin de la peroxidacin lipdica se

divide en: iniciacin, propagacin, ramificacin y terminacin.

En plantas la peroxidacin lipdica tambin puede ser iniciada por lipoxigenasas. La prdida
de uniones Fe2+ son tambin capaces de catalizar la descomposicin de perxidos lipdicos
resultando en la formacin de radicales alcoxilo y peroxilo que estimulan las reacciones de
peroxidacin lipdica. La estructura fsica de la membrana que tiene los cidos grasos muy
prximos facilitan la propagacin autocataltica de la peroxidacin lipdica (Halliwell y
Gutteridge, 2007).
En la peroxidacin lipdica por ataque de un radical X (Fig. 9b, c y d) se forman un radical
peroxilo y un conjugado dieno. El radical peroxilo es convertido a hidroperxido lipdico
mediante la adicin de tocoferol (Fig. 9e) y el radical tocoferol resultante puede ser reparado

30
por el ascorbato (Fig. 9f) y el radical ascorbato puede ser regenerado por un sistema
enzimtico. La PLA2, GPX, y A-CoA cooperan para la detoxificacin y reparacin de las
cadenas de acido graso oxidadas de los fosfolipdos. A medida que se produce el dao se
activan los sistemas de defensa (Buettner, 1993).

2.6.2 Dao Oxidativo a Protenas

Figura 9. Modificacin de protenas por ERO. Peroxidacin lipdica y reparacin por antioxidantes.

La modificacin de protenas puede ser por formacin de puentes disulfuro entre una protena
y otra, entre la misma protena ya sea creando puentes intra o extramoleculares, reacciones
mediadas por H2O2. Tambin se puede dar la oxidacin de residuos cistena por H2O2 o O2.-,
aunque tambin son susceptibles a modificacin oxidativa los residuos tirosina, metionina,
triptfano e histidina sin la formacin de grupos carbonilo (Drge, 2002; Stadtman, 1992).
Algunos aminocidos como lisina, prolina y arginina, se oxidan dando lugar a grupos
carbonilo, de modo que el contenido en carbonilos de las protenas se puede emplear como un
indicador de dao oxidativo a las mismas (Stadtman, 1992).
La oxidacin de protenas puede dar lugar a un cambio conformacional irreversible de la
protena y, por tanto, a una prdida o modificacin de su funcin biolgica o puede darse la
desnaturalizacin de sta. Se pueden formar puentes disulfuro entre una misma protena o
entre una protena u otra que contengan aminocidos como la cistena (Fig. 8a).

31
CAPTULO 3. POLIAMINAS

3.1 Propiedades Qumicas y Funciones Fisiolgicas de las Poliaminas

Las poliaminas (PAs) son abundantes compuestos policatinicos de bajo peso molecular
teniendo grupos amino primarios y/o secundarios, se encuentran desde bacterias y algas hasta
plantas y animales superiores, en plantas las cantidades presentes varan desde micromolares
hasta ms de milimolares (Kusano et al., 2008). Las principales PAs son putrescina (Put2+)
(butano-1,4-diamina), espermidina (Spd3+) [N-(3-aminopropilo) butano-1,4-diamina] y
espermina (Spm4+) [N,N-bis(3-aminopropilo) butano-1,4-diamina]. Su historia se remonta a
1678, cuando Anton Van Leeuwenhoek al observar al microscopio muestras de semen
desecadas describi los cristales de Spm, sta y su precursor Spd se encuentran en gran
cantidad en el lquido seminal y son los responsables de su tpico olor (Dudley et al., 1927).
Put y Cad son llamadas as por contribuir al olor de lo putrefacto o del cadver
respectivamente (Goldberg, 1994).
Las PAs son compuestos que a pH fisiolgico estn cargados positivamente, esto los convierte
en compuestos de inters ya que pueden interactuar ms fuerte y especficamente que otros
cationes como Mg2+ o Ca2+ con protenas, esto es porque sus cargas positivas en distancias
definidas participan en ms interacciones hidrofbicas (Thomas y Thomas, 2001). Las PAs
pueden interactuar electrostticamente con macromolculas con cargas negativas y modular su
actividad, como con algunas protenas, por ejemplo, canales inicos, transportadores y
bombas, as como con fosfolpidos, pectinas, cromatina, ADN, ARN, entre otros (Feuerstein et
al., 1990; Apel y Hirt, 2004).
El genoma de E. Coli no contiene un gen que codifique para SPMS, por lo que la sntesis de
Spm no es necesaria para el crecimiento normal de stas clulas (Xie et al., 1993) y
mutaciones en un gen para la sntesis de Spm el Saccharomyces cerevisia indican que tampoco
es necesaria esta PA para el crecimiento de las levaduras. En contraste, mutacin en el splice
del gen de SPMS en clulas humanas, se ha asociado con el sndrome Snyder-Robinson, un
desorden de retraso mental (Cason et al., 2003). Este descubrimiento sugiere que Spm si se

32
requiere para el crecimiento en clulas eucarioticas. De hecho en las plantas, las PAs son
clasificadas como molculas reguladores del crecimiento.
La PAs modulan la divisin celular, proliferacin y diferenciacin, dormancia o dormicin de
las semillas, morfognesis, desarrollo floral, maduracin de frutos, regula la expresin de
genes, participa en la PCD y responden ante estrs ambiental (Evans y Malmberg, 1989). Se
ha reportado que las PAs tambin poseen actividad antioxidante (Drolet et al., 1986; Tiburcio
et al., 1994; Rhee et al., 2007).

3.2 Biosntesis y Degradacin de las Poliaminas

Figura 10. Biosntesis y degradacin de poliaminas. Abreviaturas. Enzimas de sntesis de PA estn indicados en
azul: ADC: Arginina descarboxilasa; ODC: Ornitina descarboxilasa; AIH: Iminoil iminohidrolasa; CPA: N-
carbamoilputrescina amidohidrolasa; SPDS: Espermidina sintetasa; SPMS: Espermina sintetasa; SAMS: S-
adenosilmetionina sintetasa; SAMDC: S-adenosilmetionina descarboxilasa; LDC: Lisina descarboxilasa.
Enzimas de degradacin de PA estn indicados en morado: DAO: Diamina oxidasa; PAO: Poliamina oxidasa.
Inhibidores especficos de la sntesis de PA estn indicados en rojo: DFMA: -Difluorometilarginina; DFMO: -
Difluorometilornitina (Zepeda-Jazo et al., 2008).

33
Hay dos rutas para la biosntesis de las PAs, la descarboxilacin de la Arginina por la ADC y
la descarboxilacin de la Ornitina por la ODC, para obtener en ambas Put, y con las enzimas
SPDS y SPMS, se agregan dos grupos aminopropilo a la Put y se produce Spd y Spm
respectivamente, el grupo aminopropilo se obtiene por la descarboxilacin de la S-
adenosilmetionina que es sintetizada desde la metionina en dos reacciones secuenciales por
SAMS y SAMDC (Dudley et al., 1927; Slocum y Flores, 1991).
La ruta ODC puede ser inhibido por la -difluorometilornitina (DFMO) (Metcalf, 1978) y la
ADC por la -difluorometilarginina (DFMA) (Kallio, 1981). Metilgliosal-bis-guanilidrazona
(MGBG) puede inhibir a la SAMDC y la ciclohexilamina (CHA) puede inhibir a la SPDS
(McCann, 1987) (Fig. 10).
En A. thaliana no existen genes ODC (Hanfrey et al., 2001), pero se han reportado dos para
ADC, ADC1 y ADC2 (Watson et al., 1997). La ruta ADC es la mayor activada bajo estrs. La
actividad de ADC y ODC se localiza en el citosol, cloroplasto, mitocondria y ncleo, por lo
que es en estos sitios donde se encuentran las PAs, adems de encontrarse en el apoplasto y
PC (Kumar et al., 1997).
Los genes SPDS1 y SPDS2 codifican para SPDS (Hanzawa et al., 2002) y SAMDC1,
SAMDC2, SAMDC3 y SAMDC4 para SAMDC (Urano et al., 2003).
En plantas, las enzimas DAO y PAO catalizan la oxidacin de las PAs con la concomitante
produccin de H2O2 (Tang y Newton, 2005; Zimmermann et al., 2004).

Impacto de Poliaminas sobre la Resistencia de Plantas a la Salinidad

Se da aumento en la sntesis de PAs en las clulas vegetales en respuesta a una variedad de

estreses, por ejemplo, Spd aumenta significativamente ante estrs hdrico, congelamiento,
salinidad, hiperosmosis y paraquat.
Ante NaCl, sequa y deshidratacin se aumenta la expresin de los genes:
ADC1 y ADC2 (Urano et al., 2003; Hummel et al., 2004; Zimmermann et al. 2004;
Alczar et al., 2005),
SPMS, SAMDC1 y SAMDC2 (Li y Chen, 2000; Urano et al., 2003; Zimmermann et al.
2004)
DAO y PAO.

34
El aumento de PAs no es justamente colateral, pero representa un componente integral de la
tolerancia al estrs.
La ausencia de enzimas para la biosntesis de Spm en A. thaliana causa un defecto en la
homeostasis del Ca2+, resultando en una hipersensibilidad en el estrs inico inducido por
estrs salino (Yamaguchi et al., 2006). Sin embargo la acumulacin de PAs parece ser toxico
en las plantas bajo condiciones normales y por lo tanto su sobreexpresin constitutiva tal vez
no sea la forma apropiada para obtener tolerancia al estrs (Bartels y Sunkar, 2005).
Las PAs protegen a la clula del estrs salino modulando de manera directa o indirecta el
transporte inico, con el fin de mantener baja [Na+] y alta [K+] en el citosol (Zhao et al., 2007)
(ver Cap. 6) y ayudan a la compartimentalizacin del Na+ (Zhao y Qin, 2004).
Ya que ante salinidad hay ms soluto en el suelo que en las clulas de la planta, las clulas
pierden su turgencia y las PAs y otros solutos compatibles, actan como osmoprotectores
restableciendo el s y protegiendo a las clulas de la perdida de agua. Sin embargo esto no ha
sido probado del todo (Cuin y Shabala, 2007).
Las PAs tambin actan como antioxidantes (Drolet et al., 1986; Tiburcio et al., 1994; Rhee et
al., 2007) o inducen la expresin de enzimas antioxidantes como, APX, GR, CAT y SOD
(Verma y Mishra, 2005) y disminuyen la peroxidacin lipdica en Virginia Pine (Tang y
Newton, 2005).
Ante salinidad, se disminuye el contenido de fosfolipdos de la MP y vacuolar, provocando la
prdida de la integridad de las membranas biolgicas y haciendo a las clulas ms sensibles a
la salinidad (Mansour et al., 2002). La aplicacin de PAs puede restablecer los niveles de
fosfolipidos y estabilizar de esta manera las membranas, restaurando el dao producido por la
salinidad, as como mantienen la estructura y actividad de varias enzimas (Zhao y Qin, 2004;
Mansour et al., 2002).
Cuando la planta tiene poca agua tiende a cerrar los estomas, resultando en una reduccin de
la toma de CO2 en las hojas. Esto permite que los electrones en lugar de ser usados en la
cadena de transporte electrnico para la fotosntesis, sean usados para la produccin de ERO.
Sin embargo Farooq et al., (2009), determinaron que la aplicacin de Spm aumenta la
tolerancia a la sequa (condicin dada ante salinidad), mejorando el estatus del agua de las
hojas, la fotosntesis y las propiedades de membrana.

35
CAPTULO 4. CARACTERSTICAS GENERALES DEL TRANSPORTE INICO EN
PLANTAS

4.1 Sistemas de Transporte Inico

El K+ es movido desde el suelo a la superficie de las races predominantemente por difusin y

entra al simplasto va canales y transportadores en la MP. Desde ah, puede viaja a los tejidos
vasculares, es descargado desde el xilema por varios transportadores a distancia hasta llegar a
las hojas.

Figura 11. Transporte de Na+ a travs de la membrana plasmtica. Las mismas rutas para el infujo de K+ son
utilizadas por el Na+ y el antiportador SOS1 media la salida de Na+ utilizando el gradiente de H+ generado por la
bomba H+-ATPasa.

Existen dos mecanismos para el transporte de K+, uno media la entrada de K+ con gran
afinidad, a concentraciones externas de K+ > 1mM (sistema I o transportadores). El otro
(sistema II o canales inicos) opera bajo altas concentraciones de K+ externo y es un
mecanismo de toma de K+ de baja afinidad.
En el sistema I ante bajo K+, se aumenta la expresin de genes y la actividad de este sistema,
mientras que el sistema II no se ve influenciado por el estado de K+ en la planta, ni discrimina
entre K+ y Na+.
Dentro del sistema I est el cotransportador K+/H+ (HKT) permite el influjo de K+ junto con
H+, con una estequiometria 1:1 (Maathuis y Sanders, 1993). El HKT se activa a
concentraciones micromolares externas de K+. El antiportador Na+/ H+ (SOS1) permite el

36
eflujo de Na+ (Fig. 11). En el tonoplasto est un sistema parecido al SOS1, es el NHX (Fig.
12) (Yamaguchi et al., 2005).
El sistema II incluye a los canales inicos, en el caso del K+, este es transportado a travs de la
MP por los canales NORC, NSCC (VIC y HACC) y AKT (Fig. 11). Y en el tonoplasto solo se
han encontrado tres tipos de canales que median el transporte de cationes, los canales SV, FV
y el selectivo a K+, el VK (Fig. 12).
El transporte inico y de solutos a travs de la MP y tonoplasto es dependiente de la actividad
de las H+-ATPasas de la MP (Fig. 11) y tonoplasto (Fig. 12) y de la PPi-asa del tonoplasto.
Estas bombas transportan los H+ hacia afuera del citosol, estableciendo el gradiente elctrico y
de protones a travs de la membrana, estos gradientes constituyen la fuerza protn motriz a
travs de la membrana que es usada para procesos de transporte secundario de varios solutos y
iones en contra de su gradiente electroqumico.

Figura 12. Transporte de Na+ a travs del tonoplasto. El canal SV y el antiportador NHX podran ayudar a la
compartimentalizacin del Na+ y el canal VK principalmente media el influjo de K+. El antiportador NHX utiliza
el gradiente de H+ generado por las bombas de protones (H+-ATPasa y PP-ATPasa del tonoplasto).

En la Tabla 4 se muestran los principales canales, transportadores y bombas presentes tanto en

la MP y en tonoplasto, su correlato molecular, lugar de expresin y segn el sitio, la funcin
que desempea. Tambin se incluye su dependencia de voltaje.

37
Tabla 4. Poliaminas y especies reactivas de oxigeno como reguladoras del transporte inico
en plantas

Clase Genes Expresin Dependencia Funcin Sensible a

de Voltaje ERO/PA

Canales AKT1 CG 1 Apertura de estoma ND

de K+
tipo Raz Toma de K+2 ND
Shaker madura 2 KIR-HP

Mesfilo Balance de carga3 ND

Floema, Carga floemtica,

xilema, balance de carga,
AKT2/3 osmoregulacin,
mesfilo y WIR ND
epidermis4 transporte a grandes
distancias4

CG1 ? ND
AKT5/6 ? ?
CG y flor5 ND
KAT1/2 CG 1, 6,11 Apertura de (-) H2O27,8, O39
estomas1 y PA10
KIR
Sistema Carga de K+ en el ND
vascular11 floema

CG12 Cierre de estomas13 (-) H2O27,8 y O3

9
GORK
Tallo, pelos Eflujo y censo de ND
radicales y K+
epidermis13 KOR

SKOR Periciclo de
la raz y Carga del xilema14
clulas ND
parnqui-
matosas

Canales KCO2- Polen, CG, IV

K+- 2P 6 raz y ND
mesfilo15

38
NSCC- Censa el K+ en el
MP xilema.
Homeostasis de
DA cationes
Mesfilo, DA ND
epidermis monovalentes y
de raz toma de divalentes.
madura, Redistribucin de
CG, xilema K+ en semillas.
de raz Perdida de K+ en
salinidad. Toma
+ 16-20
Na

Toma de nutrientes
Ca2+ (zona de
Mesfilo, 2+
elongacin), Mg ,
HACC- CG,
IR y OR NH4+, Mn2+ y Zn2+ (+) HO 31
HO epidermis
y iones malignos
de hojas y
(Na+, Pb+2, Cd+2)17.
raz 21,22

El crecimiento y
Tomate24, nutricin del pice
de la raz para la (+) H2O2 zona
CG25,26, madura26,23,7
HP elongacin polar
pelos
radicales27 depende del influjo
zona de de Ca2+ 23, 27,28
HACC- elongacin
H2O2 de la
epidermis y Crecimiento y (+) HO zona
madura 28-31 elongacin. Censan de elongacin
y en clulas los metales de > madura30, (-)
rizoides de IV transicin. Cierre PA60
alga32 de estomas. Entra
Na+27,33,47 Eflujo de
VIC
K+22.

NSCC-
vacuolar 34
(-) H2O235 y
TCP Sealizacin por
Vacuolas PA36, 38, 39
SV DA/HA Ca2+?29

39
 CNGC Potencial del (-) PA36, 38, 39
o Vacuolas tonoplasto,
FV GLR?40, intercambio de
41
cationes
monovalentes?37,42

Canal TPK43/ Vacuolas, Afecta la

selectivo KCO44 solo TPK4 homeostasis del K+, (-) PA45
+
aK en MP43,44 germinacin de
VK semillas, funcin de
estomas
Canal BCC146 RE46 Trans: (-) H2O2
selectivo Cis: H2O2 no
a Ca2+ efecto46
Canales
aninicos

AC-DA Epidermis y OR, rpida ND

raz activacin29

ARAC Raz47yCG
48
DA tipo R ND

IRAC Raz49 IR-ID (-) PA50

QUAC Raz49 IR/OR-DV (-) PA50

Raz49 y CG DA tipo S En CG permite el (+) H2O251

eflujo de aniones
SLAC
que conlleva al
cierre de estomas

IRAC ND
Raz22 IR-HP

H+- AHA MP Proporciona la (-) H2O252,

ATPasa- fuerza motriz para (+)Spm53,54
MP la realizacin de
varios procesos
fisiolgicos
V- vacuola Proporciona fuerza (-) ERO55, (-)
ATPasa motriz Put o Spd56 o
(+) PA57, 58,59
CG: clulas guarda; DA: despolarizacin; HP: hiperpolarizacin; IR: rectificador entrante; WIR: dbil
rectificador entrante; IV: independiente de voltaje; DV: dependiente de voltaje; P: poro; ND: no
determinado; AC-DA: canal aninico activado por despolarizacin; IRAC: canal aninico rectificador

40
entrante; QUAC: conductancia aninica activado rpidamente; SLAC: conductancia aninica activado
lentamente; BCC1: Canal de Ca2+ de Bryonia dioica; (+): activado; (-): inhibido.

Szyroki et al, 20011; Lagarde et al., 19962; Dennison et al., 20013; Marten et al., 19994; Dietrich et al., 20015;
Anderson et al., 19926; Khler et al., 20037; Zhang et al., 2001b8; Torsethaugen et al., 19999; Liu, 200010; Pilot et
al., 200111; Mser et al., 200112; Hosy et al., 200313; Gaymard al., 199814; Czempinski et al., 200215; Zhang et al.
200016, 200217, 200418; White, 200019; Wang et al. 200620; Vry, 199821; Shabala et al., 200622; Demidchik et al.
200723; Gelli y Blumwald, 199724; Hamilton et al., 200025; Pei et al., 200026; Vry y Davies, 200027; Kiegle et al.,
200028; Demidchik et al., 2002a29, 200330; Foreman et al., 200331; Coelho et al., 200232; White y Tester, 199233;
Peiter et al., 200534; Pottosin et al., 200935; Brggemann et al., 199836, 199937; Dobrovinskaya et al., 1999a38,b39;
Leng et al., 200240; Demidchik et al., 2002b41; Maathuis y Sanders, 200142; Voelker et al., 200643; Bihler et al.,
200544; Hamamoto et al., 200845; Klsener, 199746; Demidchik y Tester, 200247; Schroeder y Keller, 199248;
White y Davenport, 200249; Zepeda-Jazo, 2006 50; Trouverie et al., 200851; Lie et al., 200452; Garufi et al.,
200753; Roy et al., 200554; Feng y Forgac, 199455; Tang y Newton, 200556; Liu et al., 200657; Zhao et al., 200458;
Zhao y Qin, 200459; Shabala, 200760.

4.2 H+-ATPasa de la Membrana Plasmtica

4.2.1 Caractersticas de la H+-ATPasa de la Membrana Plasmtica

Recordando que en clulas vegetales no existe la bomba Na+/K+ de clulas animales, la H+-
ATPasa de la MP o plasmalema es la mayor fuente de energa para estas clulas.
La H+-ATPasa-MP es una enzima electrognica, expulsa 1 protn por cada ATP hidrolizado,
su activacin expulsando protones sin ninguna carga entrante que lo compense provoca una
hiperpolarizacin de la MP de entre -160 a -250 mV segn la especie, as como la
acidificacin del apoplasto. Con el gradiente creado por esta bomba se proporciona la fuerza
motriz para el transporte de nutrientes y la salida de iones de la clula ya que se encuentra
acoplada a cotransportadores de sucrosa, aminocidos y nitratos dependientes de H+ (Sussman,
1994; Palmgren, 1998), carga floemtica (Zhao et al., 2000), sistemas de crecimiento en pice
(Obermeyer, 1992), turgor, tamao celular y apertura de estomas (Schulz-Lessdorf et al.,
1994), movimiento de las plantas, proporciona tolerancia ante estrs salino (Roldn et al.,
1991, Fukuhara et al, 1996), regula el pH intracelular (Espen et al., 1995), ayuda al
crecimiento acido, distribuye el Na+ y K+ en ambos lados de la MP (Fig. 11), etc.
Esta fuente de poder est sujeta a modulacin por varios factores ambientales, como,
toxinas, luz, nutrientes minerales (Morsomme y Boutry, 2000), ERO (Feng y Forgac, 1994) y
PA (Garufi et al., 2007; Tang y Newton, 2005; Liu et al., 2006; Zhao et al., 2004).
La H+-ATPasa-MP pertenece a la familia tipo P de ATPasas que se caracterizan por formar un
intermediario fosforilado (por eso su clasificacin de tipo P) y son exclusivas de plantas y

41
hongos. En plantas se encuentra en todos los tipos celulares, pero en diferentes
concentraciones (Palmgren, 2001). El peso molecular de la bomba como monmero es ~100
kDa. Est formado por 10-12 hlices transmembranales.
La H+-ATPasa-MP tiene 5 dominios (Fig. 13), los cuales consisten en:
A: dominio actuador, consiste en el segmento N terminal y una asa pequea,
M: segmento transmembranal,
N: dominio de unin al nucletido,
P: dominio de fosforilacin, el cual contiene el residuo Asp fosforilado cataltico,
R: segmento C terminal que acta como dominio autoinhibitorio.

Figura 13. Dominios de la bomba H+-ATPasa de la membrana plasmtica.

El dominio R en el estado inhibido se encuentra unido al dominio N (Morsomme y Boutry,

2000; Duby y Boutry, 2008), cuando se fosforila se entra al estado activado E1 donde el
dominio R se despega del N, permitiendo al protn accesar al sitio de ligadura del dominio M.
Asimismo, en esta conformacin, el ATP tiene acceso al dominio N y se da la fosforilacin en
el dominio P. El protn ligado provoca un cambio conformacional que es transmitido a travs
de M4 y M5 a los dominios A y P que se reorientan y se reduce la afinidad de los protones en
los sitios de ligadura en el dominio M transmembranal, por lo que los protones son liberados
hacia el exterior. Luego, la enzima retorna al estado E1, previo paso por el E2 desfosforilado,
y comienza un nuevo ciclo de bombeo.

CAPTULO 5. ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO COMO REGULADORAS

DEL TRANSPORTE INICO ANTE ESTRS SALINO

42
5.1 Regulacin de Canales Inicos de la Membrana Plasmtica por Especies Reactivas de
Oxigeno

Figura 14. Especies reactivas de oxigeno como reguladoras del transporte inico en plantas.

5.1.1 Canales NSCC

Rentel y Knight (2004), observaron el efecto de H2O2 en la clula por luminometra,

concluyendo que la adicin de 1mM de H2O2 provoca un aumento de 0.05 a 0.43 M de Ca2+.

43
Utilizando tcnicas electrofisiolgicas (patch-clamp) varios investigadores han estudiado el
efecto de H2O2 y HO en las clulas y han observado un aumento en la concentracin
citoplasmtica de Na+, Ca2+ y una salida de K+, por lo que podra tratarse de canales de K+ o
NSCC. Para discernir el canal responsable, podemos hacer uso de herramientas
farmacolgicas, adicionando bloqueadores del canal NSCC (Zn2+, La3+, Gd3+, quinidina y
modificadores del residuo histidina) o del canal de K+ (TEA+), comparar las caractersticas
electrofisiolgicas, corriente especfica y selectividad inica.
Al observar que el canal no es bloqueado por TEA+ y comparando las caractersticas
electrofisiolgicas se piensa que los responsables de los flujos anteriores, correspondan a al
menos dos canales catinicos no selectivos (NSCC) activados por ERO (VIC y HACC) (Fig.
14). Estos canales no discriminan entre los diferentes cationes, pero no permiten el paso de
aniones.
Los NSCC activados por HO (NSCC-HO ) encontrados en todos los tipos de clulas
de raz analizados, que nosotros llamamos NSCC independiente de voltaje (VIC), por
que se activa tanto a potenciales despolarizantes como hiperpolarizantes (Demidchik et
al., 2003). Este canal permite la masiva entrada de Na+ y Ca2+ ante salinidad
(Amtmann y Sanders, 1999; Demidchik y Tester, 2002) y la prdida de K+ (Cuin y
Shabala, 2007). En varios estudios en crecimiento de raz la activacin del canal VIC-
HO vara segn el estado de desarrollo, disminuyendo desde la epidermis al periciclo,
y desde la zona de elongacin a la epidermis madura. Este canal permite pasar el Ca2+
en mayor medida en la zona de elongacin, ya que este ion es necesario para el
crecimiento y elongacin de la raz (Demidchik et al., 2003).

Los NSCC activados por HO son encontrados en mayor medida en la zona de
elongacin de la raz y se activa solo a potenciales hiperpolarizantes, por lo que se
denomina HACC-HO (Foreman et al., 2003), este canal permite la entrada de Na+ y
Ca2+, pero no la salida de K+.

Los NSCC activados por H2O2 (HACC-H2O2), localizados mayormente en la zona
madura de la raz (Pei et al., 2000; Demidchik et al., 2002, 2007; Khler et al., 2003).
Estos canales no son inhibidos por Ba2+ sino que lo conduce, indicando que no se trata
de un canal de K+. La corriente generada con Ba2+ fue mayor que con Ca2+, esto es
tpico en los canales de Ca2+ regulados por voltaje de clulas animales y de HACC

44
 vegetales (White, 2000). El canal es muy poco permeable al Zn2+ el cual puede actuar
como bloqueador del canal (Demidchik et al., 2007).
Todos estos NSCC-ERO permiten el influjo de Ca2+ que es un nutriente esencial para las
plantas (Demidchik et al., 2002, 2007; Vry y Davies, 2000; Kiegle et al., 2000), esto es
importante ya que en las plantas no se han encontrado canales selectivos a Ca2+ (Bothwell y
Ng, 2005). Los NSCC-ERO tambin regulan la apertura de estomas, expansin celular,
crecimiento y nutricin de la raz (Coelho et al., 2002; Foreman et al., 2003; Kwak et al.,
2003; Murata et al., 2001; Pei et al., 2000).
La seal de ABA o la fosforilacin de protenas activan a HACC y se podra pensar que H2O2
al activar los mismos canales, participan como segundos mensajeros para que se d la
sealizacin por ABA (Hamilton et al., 2000).
El pretratamiento con DEPC (dietilpirocarbonato) un agente alquilante del residuo histidina,
disminuye de 4 a 6 veces la corriente los NSCC, sugiriendo la existencia de un grupo(s)
histidil en la cara externa del canal, el cual es importante para el funcionamiento de NSCC.
Por lo que se puede esperar que los ERO actan a nivel de los residuos de histidina
(Demidchik et al., 2002).

5.1.2 Canales de K+ (KIR)

No es sorprendente que los canales de K+ en las clulas guarda sean sensibles a ERO porque,
como en varias protenas, parece que ellas conservan aminocidos reactivos.
KAT pertenece a la familia de canales de K+ tipo Shaker, los cuales conservan una cistena en
una posicin particular en el segmento S6 y una histidina en otra subunidad, por lo que el
H2O2 puede crear puentes disulfuro en este canal (Anderson et al., 1992) e inhibir su actividad
(Fig. 13). La seal de ABA y el ozono (O3), tambin inducen la inhibicin de canales KIR
(Zhang et al., 2001b; Khler et al., 2003; Torsethaugen et al., 1999) interrumpiendo la apertura
de estomas (Torsethaugen et al., 1999).
Los canales de K+ son 100 veces ms sensibles a H2O2 comparados con los canales
permeables a Ca2+ (Khler et al., 2003), sugiriendo que el H2O2 acta de modo diferente.
Varios estudios sugieren que ABI1 y protenas fosfatasa (PP2C y PP2B) participan en la
regulacin de los canales de K+, estas protenas son escenciales intermediarios en la ruta de

45
sealizacin de cierre de estomas por ABA (Merlot et al., 2001). ABI1, PP2C, PP2B, CaM,
PTP y una calcineurina bovina son inhibidos por H2O2. En el caso de PTP y PP2C, un residuo
de cistena conservado puede sufrir una oxidacin (Meinhard y Grill, 2002), en la calcineurina
puede formarse puentes disulfuro (Sommer et al., 2002), la inhibicin de esta fosfatasa
dependiente de Ca2+ y moduladora de los canales KIR, puede ser la causa de que H2O2 inhiba a
los canales KIR activados por Ca2+ (Luan et al., 1993).
Antes y despus de tratar con O3 a los protoplastos de clulas guarda V. faba, se observo que
la corriente de KOR es reducida solo un poco, pero el O3 si causa una inhibicin significativa
en los canales KIR (Fig. 14). Esta inhibicin del canal por O3 no haba sido demostrada
anteriormente para ningn sistema biolgico. Con esto se asume que el O3 no solo promueve
el cierre de estomas, como ya se haba asumido, sino que el O3 es un potente inhibidor de la
apertura estomtica (Torsethaugen et al. 1999).
Un posible mecanismo para el efecto de O3 observado en los canales de K+ es la directa
oxidacin de los aminocidos del canal (Torsethaugen et al. 1999).

5.1.3 Canales de K+ (KOR)

Mediante la tcnica no invasiva (MIFE) se vio que ante salinidad se da un eflujo de K+ al

medir la corriente especfica y al compararla con la corriente medida en patch-clamp se
observo que se trata del mismo canal, y al observar sus caractersticas electrofisiolgicas y su
sensibilidad a TEA+, se concluyo que se trata de un canal KOR (Chen et al., 2007).
Khler et al., (2003) y Zhang et al., (2001b) probaron que H2O2 suprime al canal GORK (Fig.
14), esto es sorprendente ya H2O2 induce al cierre de estomas y por lo tanto, se esperara que
se estimulara la perdida de K+ desde las clulas. Sin embargo, se han reportado otras vas para
el eflujo de K+ y su respuesta ante el H2O2 no se conoce.

5.2 Canales Inicos del Tonoplasto Regulados por Especies Reactivas de Oxigeno

5.2.1 Canales SV

46
Considerando los cationes fisiolgicos ms abundantes, el canal SV (canal vacuolar lento)
puede mediar el intercambio pasivo entre la vacuola y el citosol de Na+, K+, Mg2+, Ca2+ y
NH4+, sin embargo aniones como el Cl- casi no permean, esto es porque la superficie del poro
del canal SV es negativa y esto contribuye probablemente a mecanismos de selectividad de la
carga, atrayendo cationes y rechazando aniones (Pottosin et al., 2001). Este canal es el ms
abundante y uno de los ms grandes en el tonoplasto y se ha encontrado en todos los tejidos y
de todas las plantas probadas (Pottosin y Schnknecht, 2007).
Factores citoslicos que afectan positiva o negativamente a la actividad del canal SV son Ca2+
> 1M (Hedrich y Neher, 1987), protenas que fosforilan al canal (Allen y Sanders, 1995), pH
(Schulz-Lessdorf et al., 1996), protenas 14-3-3 (Van Der Wijngaard et al., 2001), H2O2
(Pottosin et al., 2009), metales pesados y PAs (Dobrovinskaya et al., 1999a,b).
La aplicacin exgena de H2O2 inhiben al canal SV, esta inhibicin en condiciones de
salinidad es benfica para que el Na+ siga compartimentalizado en la vacuola, ya que el canal
SV permite la salida de Na+ al citoplasma (Fig. 14) (Pottosin et al., 2009). Se propone que
H2O2, debido a sus efectos oxidantes en CaM y calcineurina, tengan impacto en la actividad
del canal SV (Scholz et al., 2005).

5.3 Otros Canales Inicos Intracelulares Regulados por Especies Reactivas de Oxigeno

5.3.1 Canales BCC1

Aplicando H2O2 (>mM) desde el compartimento trans (lado citoplasmtico del canal) se
muestra un efecto inhibitorio para el canal de Ca2+ del RE (BCC1) (Fig. 14), cerrando casi por
completo al canal. No obstante, la aplicacin de H2O2 en el compartimento cis no mostr
ningn efecto (Klsener, 1997). Aun no se sabe su implicacin en la tolerancia ante estrs
salino.

5.4 Bombas de Protones Reguladas por Especies Reactivas de Oxigeno

5.4.1 H+-ATPasa de la Membrana Plasmtica

47
Ante salinidad se reporta una inhibicin de la H+-ATPasa-MP, tal vez por el aumento de
Ca2+cit y/o por las ERO (Fig. 13). Las ERO oxidan los grupos tiol de la bomba inactivndola
(Zhao y Blumwald, 1998), causando una acidificacin en el citosol y una alcalinizacin en el
apoplasto. Esto muestra que el H2O2 imita al efecto de ABA en la inhibicin del bombeo de
protones, sugiriendo que H2O2 acta como un intermediario potencial de la sealizacin por
ABA (Trouverie et al., 2008).

5.4.2 Ca2+-ATPasa de la Membrana Plasmtica

Se ha visto que el H2O2 provoca la oxidacin de metionina en calmodulina, inhibiendo la

activacin dependiente de CaM de la Ca2+-ATPasa de la MP (Gao et al., 2001; Yao et al.,
1996).

CAPTULO 6. Poliaminas como reguladoras del transporte inico ante estrs salino

6.1 Regulacin de Canales Inicos de la Membrana Plasmtica por Poliaminas

6.1.1 Canales NSCC tipo VIC

Los canales NSCC tipo VIC, son susceptibles a las PAs. La aplicacin externa de 1 mM Put o
Spd en mesfilo y de 1 mM Spd en clulas epidermales de la raz inhiben las corrientes
entrantes (Na+) y salientes (K+) mediadas por NSCC (Fig. 15) (Shabala et al., 2007). En
experimentos de corriente con mesfilo se propuso, basndose en la cintica lenta del efecto
de PAs, que las PAs pueden actuar desde el lado intracelular y/o que sus efectos en NSCC son
indirectos (Shabala et al., 2007).

6.1.2 Canales de K+ (KIR)

Todas las PAs (Cad, Put, Spd y Spm) inhiben fuertemente la apertura e inducen el cierre de
estomas (Liu, 2000). Ante la salinidad se da el estrs hdrico y se necesita el cierre de estomas
en las clulas guarda, para que no se pierda ms agua y la planta no muera marchitada.

48
El canal KAT, un canal tipo Shaker, que tiene caractersticas de rectificacin entrante, situado
en la MP de las clulas guarda permite la entrada de K+, esto ayuda a la apertura de estomas.
Liu et al. (2000) encontraron que 1 mM Spm inhibe a KAT (Fig. 15) y que la inhibicin es
mayor por PAs con mayor carga: Spm4+ > Spd3+ > Put2+, esta misma tendencia fue observada
en clulas del parnquima del xilema de la raz (Zhao et al., 2007). Esta inhibicin tiene un
posible beneficio para situaciones de estrs, como en sequa (Schroeder et al., 2001).

Figura 15. Poliaminas como reguladoras del transporte inico en plantas.

49
El contenido de PIP2 y Ca2+ intracelular, actan como cofactores para la activacin de los
canales de K+ tipo Shaker. Spm y Spd estimulan la sobreproduccin de PIP2 va actividad
lpido- kinasa (Dureja-Munjal, 1992), aunque en algunas preparaciones la Spm fue capaz de
estimular la actividad de la PLC, aumentando el consumo de PIP2 y produciendo IP3, el cual
puede provocar la liberacin de Ca2+ intracelular (Echevarra-Machado et al., 2002; 2005).
Los canales KIR y KOR son sensibles a las protenas 14-3-3 (Van den Wijngaard et al., 2005).
Se sabe que las PAs pueden interactuar con protenas 14-3-3 y de esta manera podran
modular su unin con varias molculas blanco (Athwall y Huber, 2002).

6.1.3 Canales de K+ (KOR)

Liu et al. (2000) menciono que las PAs podan inhibir a KOR y a los canales aninicos, pero
no pudo demostrarlo. Datos preliminares obtenidos por Zepeda-Jazo (2006) muestran una
substancial inhibicin de canales KOR (KORC y NORC) por 1 mM Spm en protoplastos
radiculares de cebada (Fig. 15).
Como ya se ha mencionado, la entrada de Na+ por VIC hace que se despolarice la MP, y la
despolarizacin activan canales KOR. Las PAs al inhibir los canales VIC, inhiben la entrada
de Na+, no habiendo despolarizacin, ni activacin de los canales KOR, de esta forma las PAs
pueden prevenir la salida de K+ y ayudar a la homeostasis Na+/K+.
Contrariamente, Zhao et al. (2007) demostraron que Spd aumentaba la salida de K+.

6.1.4 Canales Aninicos

Para el balance elctrico y evaluacin del componente osmtico del estrs salino es necesario
tomar en cuenta las corrientes aninicas, estas en conjunto con los canales catinicos pueden
mediar una perdida neutra y masiva de solutos intracelulares, K+ + aniones. Zepeda-Jazo
(2006) encontr que en los protoplastos de cebada se expresaba alguna corriente aninica en
acople con una corriente catinica, por ejemplo KORC+E-QUAC o NORC+E-IRAC, lo que
mecnicamente permite la perdida de K+ y la toma de Cl- durante una despolarizacin inducida
por NaCl.

50
Segn el mismo autor, la adicin de 1 mM Spm4+ en los canales anteriores induce la inhibicin
de la corriente mediada por aniones mayormente que la mediada por cationes (Fig. 15).

6.2 Canales Inicos del Tonoplasto Regulados por Poliaminas

6.2.1 Canal SV

Figura 16. Bloqueo no monotnico del canal vacuolar SV por espermina citoslica. (1) A potencial negativo
(citosol menos vacuola) la afinidad de unin de Spm con el poro del canal SV es baja y el canal no se bloquea la
mayora del tiempo, con la corriente promedio cerca del control (la corriente relativa es cercana a 1). (2)
aplicando potenciales positivos desde el lado citoslico se empuja a Spm a que entre al poro, aumentando la
potencia del bloqueo. (3) A potenciales ms positivos Spm es forzada a atravesar el poro, sin bloquear el canal.
Experimentos posteriores con diferentes bloqueadores y cationes permeables dan una aproximacin del calibre
del canal SV que es ~0.7 nm. Esto significa que el canal SV es capaz de transportar PAs en su configuracin
extendida en y desde la vacuola, mientras que la velocidad de transporte es lenta comparada con la mayora de los
cationes permeables debido a que las PAs se unen fuertemente con el poro del canal (Zepeda-Jazo et al., 2008).

Las PAs actan como bloqueadoras de poro del canal SV (Fig. 15 y 16), compitiendo con el
transporte de K+. Este bloqueo es dependiente de voltaje y del lado de aplicacin de las PAs.
Las constantes de disociacin (Kd) fueron 150-300 M, 30-70 M y 2-10 mM para Spm, Spd

51
y Put respectivamente (Dobrovinskaya et al., 1999a,b). La inhibicin de cualquier canal
vacuolar es benfico para la planta en condiciones de salinidad.

6.2.2 Canal FV

El canal FV (canal vacuolar rpido) es modulado por Ca2+ vacuolar y es una ruta que permite
el libre paso de cationes monovalentes desde el citosol a la vacuola, como el Na+ en el caso de
la salinidad (Brggemann et al., 1999). El canal FV es inhibido por PAs (Fig. 15) de manera
independiente del voltaje probado en vacuolas de raz de betabel y mesfilo de cebada. Desde
el lado citoslico, las PAs con mayor carga inhiben con ms potencia al canal Spm4+ > Spd3+
>> Put2+. La Kd para Spm fue de 3-10 M y para Spd 100 M, lo que implica que el canal FV
es inhibido fuertemente por estas PA en cualquier condicin fisiolgica, ya que esa
concentracin micromolar es normal para estas PAs. Por el contrario la Kd para Put fue de 5
mM, que es la cantidad mxima encontrada para esta diamina en plantas (Dobrovinskaya et
al., 1999b; Brggemann et al., 1998).

6.2.3 Canal VK

Los canales SV y FV no discriminan bien entre K+ y Na+, el nico que es selectivo a K+ es el

canal VK que se encuentra en gran medida en la membrana vacuolar de clulas guarda (Allen
et al., 1998).
El canal VK de tabaco NtTPK1 fue parcialmente inhibido por Spm y Spd (Fig. 15), con una
Kd de 1-2 mM, mientras que 0.5 mM Put no provoco ningn cambio en la conductancia de
VK (Hamamoto et al., 2008).
El canal VK permite tanto la salida, como la entrada de K+, el cual ante salinidad se encuentra
en el citosol en menor cantidad de lo normal, as las PAs al inhibir al canal VK no permite la
compartimentalizacin en la vacuola de K+ necesario ms en el citosol.

6.3 Bombas de Protones Reguladas por Poliaminas

6.3.1 H+-ATPasa de la Membrana Plasmtica

52
La Spm activa a la H+-ATPasa-MP y se ha probado que un aumento en la actividad de la
bomba disminuye la fuga de K+ mediada por NaCl debido a un mejor control del potencial de
membrana (Roy et al., 2005; Garufi et al., 2007; Chen et al., 2007). El gradiente de protones
generado por la bomba ayuda a la expulsin del Na+ por el antitransportador Na+/H+ de la MP.

6.3.1.1 Regulacin de la H+-ATPasa-MP por protenas 14-3-3

Las protenas 14-3-3 son llamadas as por su patrn electrofortico y cromatogrfico

analizado. Hay siete genes que codifican para estas protenas en la mayora de los mamferos y
de 13-15 en las plantas superiores, estas protenas aparecen en su mayora como dmeros. Los
eucariontes pueden tolerar la prdida de una isoforma de 14-3-3 si mltiples isoformas estn
presentes, sin embargo, la deleccin de todas las 14-3-3 en levadura, resulta en la muerte. Las
protenas 14-3-3 contienen un nmero de dominios de modificacin comunes, incluyen
regiones para la interaccin de cationes divalentes, fosforilacin y acetilacin, ruptura
proteoltica, entre otros.
En plantas, las protenas 14-3-3 inhiben o activan a sus protenas blanco, inhiben a la nitrato
reductasa y activan a la sucrosa fosfato sintetasa, glutamina sintetasa, pero la interaccin
mejor estudiada en la MP es con la H+-ATPasa.
La H+-ATPasa-MP casi siempre se encuentra como dmero y en el estado inactivo, los
dominios C terminal atraviesan las bombas antiparalelamente bloqueando la entrada de
protones y de ATP. La activacin de la bomba por las protenas 14-3-3 normalmente requiere
la fosforilacin del residuo treonina 947 del modo III (Tyr946-Thr-Val) del C-terminal
(Fuglsang et al., 1999, 2003), regulado por la PKA (Sussman, 1994) y esta fosforilacin
permite la unin de 14-3-3, despus la enzima oligomeriza y se convierte de dmero a
hexmero, que es caracterizado por ser una enzima mucho ms activa. El complejo final es un
dodecamero, con tres dmeros de 14-3-3 localizados encima del hexmero de bombas, las 14-
3-3 coordinan a seis dominios autoinhibitorios constituyendo una enzima activa (Duby y
Boutry, 2008; Ottmann et al., 2007; Maudoux et al., 2000; Oecking et al., 1997; Gong et al.,
2006; Kanczewska et al., 2005).

53
El Mg2+ se requiere para la hidrolisis del ATP de la bomba y se sugiere que se coordina con el
Asp588 y Asp592 (Axelsen y Palmgren, 1998) entre los dominios N y P.
Seguida de la fosforilacin de la bomba, esta tiene mayor afinidad por las protenas 14-3-3.
Sin embargo, las PAs pueden asociarse fuertemente a las 14-3-3 y este complejo a la bomba
sin fosforilacin y sin cationes divalentes (Fig. 17) (Oecking, 1997), aunque con Mg2+ y Spm
la asociacin es aditiva (Garufi et al., 2007). El asa 8 (residuos 208-219) del C-terminal de la
protena 14-3-3 forma un sitio de unin para policationes, que contiene cinco residuos cidos,
as como siete residuos con oxigeno que pueden participar en la coordinacin de cationes,
donde los sitios de unin para Mg2+ y PAs es idntico o se sobrelapa (Athwall y Huber, 2002).

6.3.1.2 Regulacin de la H+-ATPasa-MP por Poliaminas y Protenas 14-3-3

Garufi et al. (2007) reportaron que solo Spm y no Spd o Put afectan la actividad ATPasa de la
bomba, con una estimulacin media mxima (S50) de hidrlisis de ATP con 70M Spm,
mientras que Reggiani et al. mostraron que 3-5 mM Put fue igualmente eficiente.
La concentracin M de Spm sugiere una relevancia fisiolgica e indica que al menos dos
aminas primarias y una secundaria se requieren para una eficiente interaccin. El
requerimiento de grupos amino cargados sugiere que hay interacciones electrostticas y
formacin de puentes de hidrogeno entre las PAs y las protenas 14-3-3 (Athwall y Huber,
2002).
El efecto de Spm en la bomba es anlogo al efecto que produce fusicoccina (FC), una toxina
del hongo Fusicoccum amygdale, el cual se une a protenas 14-3-3 e induce una activacin
irreversible de la bomba, abriendo el estoma y permitiendo la entrada del hongo y por
consiguiente la infeccin de la planta (Fuglsang et al., 1999).
Se ha propuesto una relacin 1:1 entre la hidrlisis del ATP y el transporte de H+, pero cuando
se elimina por protelisis el C-terminal de la bomba, se ha visto que el bombeo de H+ es
estimulado en mayor grado que la hidrlisis del ATP. Las PAs mediante la unin con
protenas 14-3-3 permite el aumento en la hidrlisis del ATP, pero no se ha demostrado si
aumentan proporcionalmente el bombeo de H+.

54
Figura 17. Activacin de las H+-ATPasa-MP por espermina y protenas 14-3-3. Unin de espermina a la protena
dmerica 14-3-3, este complejo interacciona con el modo III del C-terminal de una H+-ATPasa-MP, esto resulta
en la abolicin de los contactos intermoleculares entre los C-terminales del dmero de bombas. Al liberarse las C-
terminales, queda libre el paso para los protones en el dominio M (E1) y para el ATP que provoca la fosforilacin
en el dominio P (E1-P). Despus de la fosforilacin se entra al estado E2-P y el sitio de los protones es accesible
al lado del apoplasto, en esta conformacin no se puede dar la fosforilacin y el protn pierde afinidad a su sitio
de unin, por lo que los protones son expulsados al apoplasto. La hidrlisis del residuo aspartato fosforilado en el
sitio P de la bomba, induce al estado E2 y la protena est lista para un nuevo ciclo de bombeo (Zepeda-Jazo et
al., 2008).

6.3.2 H+-ATPasa del Tonoplasto

Las PAs al estimular la actividad fosfohidroltica de las bombas H+-ATPasa y H+-PPasa del
tonoplasto, generan el gradiente de protones que sirve como energa necesaria para la
compartimentalizacin del Na+ en la vacuola va el antiportador NHX (Na+/H+) del tonoplasto,

55
ayudando as las PAs a la tolerancia al estrs salino (Liu et al., 2006; Zhao et al., 2004; Zhao y
Qin, 2004). Sin embargo, Tang y Newton (2005) reportaron que la actividad de la V-ATPasa
isolada de la fraccin microsomal de Pinus virgina fue inhibida por PAs in vivo. Esto puede
ser debido a que los experimentos fueron diferentes tanto en materiales y condiciones.

CONCLUSIN

Hay un universo bajo nuestros pies, el suelo alberga varios microorganismos y nutrientes
necesarios para que las plantas vivan, pero la erosin y la mala actividad humana est
salinizndolo, afectando el crecimiento y desarrollo de las plantas y la productividad en el
caso de los cultivos agrcolas. La salinidad provoca estrs inico, osmtico-hdrico,
nutrimental y oxidativo en plantas.
A nivel celular ante NaCl se provoca una masiva entrada de Na+ y Ca2+ y una salida de K+. A
nivel de la MP los principales responsables del masivo influjo de Na+ y Ca2+ a la clula son los
NSCC, que no discrimina entre Na+, K+ y Ca2+. Los NSCC y KOR median el eflujo de K+. La
alta [Ca2+]cit produce estrs oxidativo al activar a la NADH oxidasa, fuente para la produccin
de ERO en el apoplasto (O2 -, H2O2 y HO ). El HO pueden activar al menos dos tipos de
NSCC en la MP, aunque en altas concentraciones puede inducir al estrs oxidativo y a la
peroxidacin lipdica, para finalmente provocar la muerte celular. Los cloroplastos,
mitocondrias y peroxisomas son organelos que ante salinidad tambin se ven afectados y
causan la sobreproduccin de ERO en el citoplasma.
La homeostasis K+/Na+ citoslica es crucial para el metabolismo celular y es considerada un
componente clave de la tolerancia a la salinidad en las plantas, los mecanismos llevados a
cabo para la resistencia ante NaCl se enfocan en disminuir la [Na+]cit inhibiendo su entrada al
citoplasma, promoviendo su expulsin al apoplasto y su compartimentalizacin en la vacuola,
as como en aumentar la [K+]cit.
Una de las primeras respuestas fisiolgicas en las plantas ante la prdida de la turgencia, es el
aumento en la sntesis y redistribucin de la fitohormona, acido abscsico (ABA). El modelo
celular ms estudiado para la sealizacin por ABA es el movimiento del estoma, flanqueado
por dos clulas guarda. Durante la transpiracin, donde los estomas estn abiertos, se permite

56
la perdida de ~95% de agua de las clulas guarda y la entrada de CO2 para la fotosntesis. Se
ha propuesto que el Ca2+ y el H2O2 citoplasmticos son inducidos por la seal de ABA y que
participan como molcula de sealizacin induciendo el eflujo sostenido de aniones y K+
necesarios para el cierre estomtico.
Como vimos anteriormente los canales de K+ y los NSCC son esenciales en la respuesta de
plantas ante el estrs salino. En clulas animales, las PAs naturales que son policationes a pH
fisiolgico, modulan casi todos los tipos de canales catinicos, incluso los canales de K+. Ante
salinidad se aumentan las concentraciones de PAs libres (Put2+, Spd3+ y Spm4+) y ayudan a la
resistencia de la planta, aunque los mecanismos precisos aun estn desconocidos. Las hiptesis
que existen son que las PAs estabilizan todas las superficies polianionicas (membranas, cidos
nucleicos) y son atrapadoras de las ERO. Aun menos se sabe acerca de la modulacin del
transporte inico en plantas por PAs. Por lo que nos enfocamos en investigar como las ERO y
PAs, modulan el transporte inico y su impacto sobre la tolerancia a la salinidad.
Los resultados fragmentarios sobre la modulacin de PAs en el transporte inico en plantas
superiores, son los siguientes:
En la vacuola las PAs a concentraciones bajas (M) inhiben directamente a los canales NSCC
(SV y FV) y casi no afectan a los canales VK, ayudando as a mantener la
compartimentalizacin del Na+. En la MP el efecto de PAs sobre los transportadores inicos
necesita mayores concentraciones de PAs y parece ser ms indirecto, mediado por protenas
14-3-3, fosfatasas, fosfoinostidos, GMPc o CaM. Las PAs inhiben a un tipo de NSCC
disminuyendo la [Na+]cit y [Ca2+]cit, la disminucin de en la concentracin de estos cationes
impide la despolarizacin de la membrana, necesaria para la activacin de canales KOR y
NSCC-DA. Spm activa a las H+-ATPasas de la MP y vacuolar, las cuales generan el gradiente
de protones, que sirve como fuente de energa para el exporte de Na+ por el antiportador
Na+/H+ de la MP y para la compartimentalizacin del Na+ en la vacuola por el antiportador
Na+/H+ del tonoplasto. Las PAs inhiben la apertura de estomas, inhibiendo a los canales KIR,
aliviando el estrs hdrico provocado por el estrs salino. Aunque uno de los metabolitos en la
degradacin de las PAs es el H2O2, parece que prevalece su carcter antioxidante.
Otra caracterstica comn en condiciones de salinidad en la planta es la sobreproduccin de
ERO. El H2O2 inhibe al canal SV. Las ERO activando a NSCC en raz median la entrada de
Ca2+ esencial para el crecimiento y elongacin celular que ante salinidad se ve afectado. El

57
H2O2 acta como segundo mensajero en la va de sealizacin por ABA para el cierre de
estomas, activando a los NSCC que median la entrada de Ca2+. Las ERO tambin pueden
estabilizar el RNAm del antiportador Na+/H+ de la MP.
A pesar de la considerable informacin que se ha venido acumulando en los ltimos aos
sobre el efecto de PAs y ERO an se desconocen y hay controversias en los mecanismos de
accin y sobre su impacto en el transporte y homeostasis inica.

PERSPECTIVAS

No se sabe con certeza si las ERO participan como molculas de sealizacin y si

efectivamente brindan tolerancia a la salinidad. Los datos sugieren que los efectos de ERO y
PAs sobre los canales inicos de la MP dependen del tipo celular. Para ningn modelo celular
se ha probado la modulacin de PAs y ERO en todo el repertorio de canales existentes, con
esto se conseguira entender las caractersticas integrales, como potencial de membrana,
capacidad y selectividad del transporte membranal y las relaciones inicas intracelulares. No
se han hecho trabajos para investigar los efectos simultneos de PAs y ERO, en particular los
efectos de PAs sobre los NSCC activados por ERO. Estos canales solo se han caracterizado
por sus caractersticas electrofisiolgicas y por el uso de farmacologa, pero hasta ahora no se
conocen bloqueadores especficos para NSCC. Pero aun no se han descubierto los genes que
los codifican, pese que los posibles candidatos pueden encontrarse dentro de las familias GluR
y CNG. La identificacin de productos de estos genes sera crucial para corroborar los
mecanismos que hasta ahora se han planteado con los diferentes tipos de NSCC-MP ante
estrs salino. El Ca2+ vimos que ayuda a la expresin de molculas antioxidantes va la
cascada de las MAPK, pero las ERO al activar a NSCC median ms entrada de Ca2+ pudiendo
causar la muerte celular. Las bases moleculares y fisiolgicas por las cuales las clulas eligen
una u otra alternativa aun no se conocen.
Hasta ahora tampoco se han identificado transportadores para PAs en plantas, y poco se sabe
acerca de la distribucin de stas molculas ente los diferentes compartimentos celulares y
tejidos de la planta, ni el cambio en la distribucin ante un estado alterado de la planta. Estos

58
son datos necesarios para tener un exacto control sobre los niveles de PAs en plantas no-
modificadas y transgnicas, diseadas para resistir el estrs.
Siendo la vacuola, el organelo que ocupa mas lugar en las clulas vegetales, falta indagar
acerca de sus antioxidantes y sistemas del transporte inico y de PAs, podramos llevarnos
grandes sorpresas.
Ante estrs aumentan los niveles de varias molculas, este cambio se debe a la activacin de
varios genes que responden al estrs, RD (responde a la deshidratacin), ABRE (elementos
responsivos de ABA), COR (responsivo al fro), LEA (embriognesis tarda abundante) y a los
responsables del metabolismo de las PAs y AJ, as como se incrementan los niveles de ERO,
fosfoinostidos, GMPc, entre otros. Para que sucedan tales respuestas al estrs, es necesaria la
seal del Ca2+ y/o la sobreregulacin desde el ncleo va MAPK, indicando la presencia de
entrecruzamientos entre rutas de sealizacin. Pero aun no se ha modelado tal ruta y no se ha
demostrado si las halfitas y las glicfitas siguen la misma ruta, o si hay diferencias
cualitativas o cuantitativas entre cada especie.
La disponibilidad del genoma completo de otras especies aparte de A. thaliana y Oryza sativa,
as como la post-genmica (saber el papel de cada gen) respondera muchas de nuestras dudas.
El Proyecto Arabidopsis 2010 pretende, que para el siguiente ao, se conozca la funcin de los
25,900 genes identificados en la planta. Por el momento se ha experimentado slo con 1,000
de ellos, y se sabe aproximadamente para qu pueden servir unos 14,000. Estamos a punto de
vivir en un nuevo mundo a la vez apasionante y aterrador, donde por la bsqueda necesaria de
plantas agroalimentarias mas nutritivas y de mayor rendimiento, estallaremos otra revolucin
verde, pero ahora con tecnologa transgnica.

59
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79
 Universidad de Colima
Facultad de Medicina
Centro Universitario de Investigaciones Biomdicas

MODULACIN DEL TRANSPORTE INICO POR POLIAMINAS Y

ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO Y SU POSIBLE IMPACTO EN
LA RESPUESTA DE PLANTAS AL ESTRS SALINO

Tesis que para obtener el grado de Maestra en Ciencias Fisiolgicas con

especialidad en Farmacologa

Presenta
Ana Mara Velarde Buenda

Director de Tesis
Dr. Igor Pottosin

Colima, Col., Agosto de 2009

80
DEDICATORIA

A mi mam y mi pap

AGRADECIMIENTOS

Al Dr. Igor Pottosin, que sin l no habra podido llevar a cabo este trabajo.

Al apoyo brindado por CONACYT porque me ha ayudado a avanzar en mi

formacin profesional y en la realizacin de este trabajo.

81
ABREVIATURAS

ABA cido abscsico

Apo Apoplasto
Cit Citoplasma
ERO Especies reactivas de oxgeno
HACC Canal de Ca2+ activado por hiperpolarizacin
H2O2 Perxido de hidrgeno
HO Radical hidroxilo
KIR Canal de K+ rectificador entrante
KOR Canal de K+ rectificador saliente
MAPK Protenas quinasa activadas por mitgeno
MP Membrana plasmtica
NOX NADPH oxidasa
NSCC Canal catinico no selectivo
1
O2 Singlete de oxigeno
O2 Radical superxido
PA Poliaminas
PC Pared celular
PCD Muerte celular programada
Put Putrescina
RE Retculo endoplsmico
Spd Espermidina
Spm Espermina
Potencial

82
NDICE PGINA

RESUMEN..1

ABSTRACT1

INTRODUCCIN.2

CAPTULO 1. ESTRS SALINO

1.1 Problema de salinidad en suelos para agricultura4

1.2 La salinidad produce estrs inico, osmtico, hdrico, nutrimental y oxidativo en
11 1plantas..5
1.3 Estrs inico..5
1.3.1 Mecanismos de transporte inico durante el estrs..6
1.3.2 Elementos celulares y inicos que inducen tolerancia ante estrs
333333salino8
1.4 Estrs osmtico e hdrico...10
1.4.1 Sealizacin mediada por ABA y especies reactivas de oxigeno.11
1.5 Estrs nutrimental. 14

CAPITULO 2. ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO

2.1 Particularidades de las especies reactivas de oxigeno...15

2.2 Antioxidantes.19
2.3 Fuentes fisiolgicas de especies reactivas de oxigeno y su remocin mediante
nnnnmolculas antioxidantes.21
2.3.1
Cloroplasto.......................21
2.3.2
Mitocondria23
2.3.2.1 Ciclo ascorbato-
glutatin.24

83
 2.3.3...Peroxisoma...
.25 ` ` 2.3.4 Apoplasto y
citoplasma.......26
2.4 Evaluacin de las especies reactivas de oxigeno...27
2.5 Papel fisiolgico de las especies reactivas de oxigeno...28
2.6 Estrs oxidativo..29
2.6.1 Peroxidacin lipdica..29
2.6.2 Dao oxidativo a protenas.31

CAPTULO 3. POLIAMINAS Y ESTRS SALINO

3.1 Propiedades qumicas y funciones fisiolgicas de las poliaminas.32

3.2 Biosntesis y degradacin de las poliaminas..33
3.3 Impacto de poliaminas sobre la resistencia de plantas ante salinidad...34

CAPTULO 4. CARACTERSTICAS GENERALES DEL TRANSPORTE INICO EN

PLANTAS

4.1 Sistemas de transporte inico.36

4.2 H+-ATPasa de la membrana plasmtica41
4.2.1 Caractersticas de la H+-ATPasa de la membrana plasmtica41

CAPTULO 5. ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO COMO REGULADORAS

DEL TRANSPORTE INICO ANTE ESTRS SALINO

5.1 Regulacin de canales inicos de la membrana plasmtica por especies reactivas

6666de oxigeno..43
5.1.1 Canales NSCC43
5.1.2 Canales de K+ (KIR). .45
5.1.3 Canales de K+ (KOR) .46

84
 5.2 Canales inicos del tonoplasto regulados por especies reactivas de oxigeno46
5.2.1 Canales SV..46
5.3 Otros canales inicos intracelulares regulados por especies reactivas de
3333oxigeno...47
5.3.1 Canales BCC1.47
5.4 Bombas de protones regulados por especies reactivas de oxigeno47
5.4.1 H+-ATPasa de la membrana plasmtica.47
5.4.2 Ca2+-ATPasa de la membrana plasmtica...48

CAPTULO 6. POLIAMINAS COMO REGULADORAS DEL TRANSPORTE INICO

ANTE ESTRS SALINO

6.1 Regulacin de canales inicos de la membrana plasmtica por poliaminas..48

6.1.1 Canales NSCC tipo VIC.48
6.1.2 Canales de K+ (KIR)...48
6.1.3 Canales de K+ (KOR)..50
6.1.4 Canales aninicos...50
6.2 Canales inicos del tonoplasto regulados por poliaminas.51
6.2.1 Canales SV..51
6.2.2 Canales FV..52
6.2.3 Canales VK52
6.3 Bombas de protones regulados por poliaminas.....................52
6.3.1 H+-ATPasa de la membrana plasmtica52
6.3.1.1 Regulacin de la H+-ATPasa-MP por protenas 14-3-353
6.3.1.2 Regulacin de la H+-ATPasa-MP por poliaminas y protenas
nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 14-3-3..54
6.3.2 H+-ATPasa del tonoplasto.....55

CONCLUSIN56
PERSPECTIVAS.58
BIBLIOGRAFA......60

85
 LISTA DE TABLAS

PGINA

Tabla 1 Particularidades de las especies reactivas de oxigeno...17

Tabla 2 Tiempo de vida media y origen de las especies reactivas de oxigeno...18
Tabla 3 Particularidades y localizacin de los agentes antioxidantes (cido ascrbico,
666666666AOX, APX, carotenoide, CAT, DHAR, Fd, GPX, GR, MDAR, PrxR, PX, SOD,
222222222Trx y -tocoferol).19
Tabla 4 Poliaminas y especies reactivas de oxigeno como reguladoras del transporte inico
-------------en plantas..38

LISTA DE FIGURAS
PGINA
Figura 1 Modelo que explica los efectos inicos y celulares implicados en el estrs salino en
66666666 las plantas, as como los mecanismos que median la tolerancia...7
Figura 2 Modelo de la sealizacin mediada por ABA y especies reactivas de oxigeno ante
66666666 6estrs por deshidratacin causado por la salinidad y los mecanismos de defensa
66666666 6activados en la clula..13
Figura 3 Generacin de diferentes especies reactivas de oxigeno (ERO).16
Figura 4 Fotosntesis con la concomitante generacin de ERO y la participacin de sus
666666666 antioxidantes...22
Figura 5 Cadena de transporte electrnico en la respiracin mitocondrial como la responsable
000000000 en la generacin de ERO y la participacin de sus antioxidantes...23
Figura 6 Produccin de ERO en los peroxisomas y su remocin..25
Figura 7 Diagrama esquemtico de la NADH oxidasa vegetal.26
Figura 8 Pasos de la peroxidacin lipdica30
Figura 9 Modificacin de protenas por ERO, peroxidacin lipdica y reparacin por
333333333 antioxidantes..31
Figura 10 Biosntesis y degradacin de poliaminas...33
Figura 11 Transporte de Na+ a travs de la membrana plasmtica..36

86
Figura 12 Transporte de Na+ a travs del tonoplasto...37
Figura 13 Dominios de la bomba H+-ATPasa de la membrana plasmtica.42
Figura 14 Especies reactivas de oxigeno como reguladoras del transporte inico en plantas.43
Figura 15 Poliaminas como reguladoras del transporte inico en plantas...49
Figura 16 Bloqueo no monotnico del canal vacuolar SV por espermina citoslica..52
Figura 17 Activacin de las H+-ATPasa-MP por espermina y protenas 14-3-3.54

87