PROTOCOLO MINI PREP

METODO ALCALINO
BIRNBOIM-DOLY.

Para cada grupo.

Se centrifugan 1,6 mL de cultivo de E.coli 5 a 4C 10000 RPM.

Se descarta el sobrenadante.
(esta parte no la vamos a hacer, van a estar los pellets directamente)

Al pellet bacteriano se lo resuspende en 100 uL de solucin de lisis

c/lisozima. Se deja incubar 15.

Se le agrega 200 uL de solucin alcalina (SDS 1%/NaOH 0,2N) se mezcla

bien y se deja incubar en hielo 5.

Se agrega 150 uL de acetato de sodio 3 M pH:4,8/5,2. Se agita hasta

aparicin de un flculo blacuzco, se coloca en hielo y se deja 30.

Se centrifuga 15 a 10000 RPM 4C.

En otro eppendorf rotulado se coloca 1 mL de EtOH absoluto en frio.

El sobrenadante de la centrifugacin se mezcla con el alcohol y se deja
2.

Se lleva a centrifugar 15 a 10000 RPM 4C.

Se descarta el sobrenadante, y se lava el pellet con alcohol 70%.

Se deja secar a T. Amb. o en estufa de 37C.

Se resuspende con 50 uL de agua o TE pH:8.0.