6.
Terapia Gnica
C. L. RONCHERA-OMS
J. M. GONZLEZ
1 TERAPIA GNICA(1, 2)
En la actualidad, la dotacin gentica de una c-
lula puede ser modificada mediante la introduccin de
un gen normal en el organismo diana que sustituya al
gen defectuoso en su funcin; es lo que se denomina
terapia gnica. La terapia gnica se puede definir como
el conjunto de tcnicas que permiten vehiculizar se-
cuencias de ADN o de ARN al interior de clulas dia-
na, con objeto de modular la expresin de determina-
das protenas que se encuentran alteradas, revirtiendo
as el trastorno biolgico que ello produce.
En funcin del tipo celular diana, existen dos mo-
dalidades de terapia gnica:
1) Terapia gnica de clulas germinales: aquella dirigi-
da a modificar la dotacin gentica de las clulas
implicadas en la formacin de vulos y espermato-
zoides y, por tanto, transmisible a la descendencia.
Este tipo de terapia gnica sera la indicada para co-
rregir de forma definitiva las enfermedades cong-
nitas, una vez que la tcnica sea eficaz y segura, si-
tuacin que no parece darse en el momento actual.
La terapia gnica de la linea germinal humana no
ha sido practicada debido a las limitaciones de la
tecnologa de manipulacin de las clulas germina-
les y a considerandos ticos, en especial el peligro
de la modificacin del acervo gentico de la especie
humana, y el riesgo de potenciacin gentica, que
derivara en prcticas de eugenesia por seleccin ar-
tificial de genes que confiriesen caracteres ventajo-
sos para el individuo.
2) Terapia gnica somtica: aquella dirigida a modificar
la dotacin gentica de clulas no germinales, es de-
cir, de las clulas somticas o constituyentes del or-
ganismo. Por ello, la modificacin gentica no pue-
de transmitirse a la descendencia. Por consenso
general entre los investigadores y con la legislacin
actual, basada en motivos ticos y de seguridad, so-
lamente se llevan a cabo protocolos clnicos en este
tipo de terapia gnica. En principio, la terapia gni-
ca somtica no ha sido motivo de reservas ticas,
salvo las relacionadas con su posible aplicacin a la
ingeniera gentica de potenciacin, es decir, toda
manipulacin gentica cuyo objetivo sea potenciar
algn carcter, como la altura, sin pretender tratar
enfermedad alguna.
Por otra parte, y en funcin de la estrategia aplicada,
la terapia gnica tambin puede clasificarse en:
920 FARMACIA HOSPITALARIA
1) Terapia gnica in vivo (Figura 1): agrupa la tcnicas
en las que el material gentico se introduce directa-
mente en las clulas del organismo, sin que se pro-
duzca su extraccin ni manipulacin in vitro. La gran
ventaja de las tcnicas in vivo sobre la terapia gnica in
vitro es su mayor sencillez. Sin embargo, tienen el in-
conveniente de que el grado de control sobre todo el
proceso de transferencia es menor, la eficiencia global
es tambin menor (dado que no pueden amplificarse
las clulas transducidas) y, finalmente, es difcil con-
seguir un alto grado de especificidad tisular.
2) Terapia gnica ex vivo (Figura 2): comprende
todos aquellos protocolos en los que las clulas
a tratar son extradas del paciente, aisladas, cre-
cidas en cultivo y sometidas al proceso de trans-
ferencia in vitro. Una vez que se han selecciona-
do las clulas que han sido efectivamente
transducidas, se expanden en cultivo y se intro-
ducen de nuevo en el paciente. Sus principales
ventajas son el permitir la eleccin del tipo de
Figura 1. Modelo de transferencia gnica in vivo mediado por liposomas catinicos: introduccin del gen que
codifica el regulador transmembrana de la fibrosis qustica (CFTR).
clula a tratar, mantener un estrecho control so-
bre todo el proceso, y la mayor eficacia de la
transduccin gentica. Los problemas ms im-
portantes de esta modalidad son la mayor com-
plejidad y coste de los protocolos, as como la
imposibilidad de transducir aquellos tejidos que
no son susceptibles de crecer en cultivo; ade-
ms, existe siempre el riesgo inherente a la ma-
nipulacin de las clulas en cuanto a problemas
de contaminacin.
En las ltimas dos dcadas aproximadamente, los
conceptos y la tecnologa de la ingeniera gentica apli-
cados a la teraputica han pasado desde la ciencia ficcin
al inicio de su experimentacin clnica. Esta tecnolo-
ga ha evolucionado rpidamente, y en la actualidad
hay ms de 200 protocolos de terapia gnica en fase de
ensayo clnico. Por ello, si bien la terapia de fundamen-
to gentico se encuentra mayoritariamente en fase de ex-
perimentacin, estas tcnicas se incorporarn al arsenal

Figura 2. Modelo de transferencia gnica ex vivo: introduccin del gen que codifica el receptor
de LDL en el tratamiento de la hipercolesterolemia familiar monognica.
teraputico en un futuro nada lejano para su uso clni-
co seguro y eficaz. El farmacutico debe conocerlas si
quiere participar de forma activa en el manejo y uso de
la terapia gnica, y contribuir con ello al cuidado del
paciente. En este contexto, deben sealarse los dos as-
pectos fundamentales que previsiblemente determina-
rn la participacin del farmacutico en esta teraputi-
ca:
Las especiales caractersticas de estos medicamentos
en cuanto a su obtencin, estabilidad, conservacin,
dispensacin, administracin, reacciones adversas y
coste. As, en la terapia in vivo el producto podra su-
ministrarse, como todo medicamento, en un prepa-
rado listo para su uso ya que sera idntico para to-
dos los pacientes que padeciesen la misma
enfermedad; tericamente, su preparacin respon-
dera a los mismos criterios que la de los medica-
mentos de origen biolgico. La terapia ex vivo, sin
embargo, requiere del manejo de las clulas del en-
TERAPIA GNICA 921
fermo y la preparacin de un producto especfico, lo
que podra ser abordado por un equipo multidisci-
plinar a nivel del propio hospital o con la participacin
externa de instituciones o sociedades de biotecnolo-
ga.
La previsible competitividad profesional por el manejo
de estos tratamientos entre farmacuticos, bioqu-
micos, inmunlogos, onclogos y otros profesiona-
les sanitarios.
Es probable que la formacin de un equipo multi-
disciplinario constituya el modelo ms adecuado para ga-
rantizar el uso racional de la terapia gnica. El farma-
cutico puede y debe participar en este grupo
aportando sus conocimientos y capacidades, particu-
larmente en lo que se refiere a formulacin, estabili-
dad, administracin de medicamentos, farmacocinti-
ca, farmacoterapia y farmacovigilancia.
922 FARMACIA HOSPITALARIA
2 TRANSFERENCIA GNICA(1, 2)
La terapia gnica requiere que se transfieran efi-
cientemente los genes clonados a clulas enfermas, de
manera que los genes introducidos sean expresados en
cantidad adecuada. Tras la transferencia gnica, los genes
insertados se pueden llegar a integrar en los cromosomas
de la clula, o bien quedar como elementos genticos
extracromosmicos (episomas).
2.1. Genes integrados en cromosomas
La ventaja de que el gen se integre en el cromosoma
es que puede perpetuarse por replicacin cromosmica
tras la divisin celular. Como las clulas de la progenie
tambin contienen los genes introducidos, se puede ob-
tener una expresin estable a largo plazo. As, en los te-
jidos formados por clulas en divisin activa, la clave es
dirigir la modificacin a las clulas madre (una pobla-
cin minoritaria de clulas precursoras indiferenciadas
que dan lugar a las clulas diferenciadas maduras del te-
jido). Adems, las clulas madre no slo dan lugar a las
clulas maduras del tejido, sino que al mismo tiempo se
renuevan ellas mismas. En consecuencia, se trata de una
poblacin inmortal de clulas a partir de la cual deriva el
resto de clulas del tejido. La transferencia eficiente de ge-
nes a las clulas madre y la posterior estable expresin del
gen estable ofrece, por tanto, la posibilidad de curar un
trastorno gentico.
No obstante, la integracin cromosmica tiene sus
inconvenientes debido a que la insercin suele ocurrir
casi al azar: la localizacin de los genes insertados puede
variar enormemente entre clulas. En algunos casos, los
genes insertados pueden no expresarse debido a su in-
sercin en regiones muy condensadas. En algunas oca-
siones, la integracin puede provocar la muerte de la c-
lula husped (por ejemplo, por insercin en un gen
crucial, inactivndolo). Este tipo de acontecimientos tie-
ne consecuencias nicamente para la clula en la que su-
cede la integracin. Una preocupacin mayor es el ries-
go de cncer: la integracin puede perturbar los
patrones normales de expresin de genes que controlan
la divisin o la proliferacin celular, por ejemplo a travs
de la activacin de un oncogn o de la inactivacin de un
gen supresor de tumores o de un gen implicado en la
apoptosis (= muerte celular programada). La terapia g-
nica ex vivo ofrece al menos la oportunidad de selec-
cionar las clulas en las que la integracin ha tenido xi-
to, gracias a que se amplifica a estas clulas en cultivo y se
comprueba si sus fenotipos presentan alguna evidencia
obvia de transformacin neoplsica, como paso previo
a su re-administracin al paciente.
2.2. Genes no integrados
Algunos sistemas de transferencia gnica estn di-
seados para insertar genes en clulas donde pueden
quedar como elementos extracromosmicos (episo-
mas) y tener una expresin elevada. Si las clulas estn di-
vidindose activamente, el gen introducido puede no
segregar igualmente a las clulas hijas, por lo que la ex-
presin a largo plazo puede ser un problema. El resultado
es que la posibilidad de curar un trastorno gentico pue-
de ser remota: harn falta tratamientos repetidos de te-
rapia gnica. Sin embrago, en algunos casos puede ser que
no haga falta una expresin estable a largo plazo. Por
ejemplo, las terapias gnicas contra el cncer suelen im-
plicar la transferencia y expresin de genes a clulas can-
cerosas con la intencin de eliminarlas. Una vez eliminado
el tumor, el gen teraputico puede no ser necesario nun-
ca ms.
2.3. Mtodos de transferencia gnica
Para alcanzar un determinado efecto biolgico en te-
rapia gnica es necesario introducir de manera eficaz la
secuencia gnica de inters en la clula diana y conse-
guir su expresin. Estos objetivos suponen contar con
un adecuado sistema de vehiculizacin o transferencia y,
al mismo tiempo, disponer de promotores adecuados pa-
ra conseguir la mxima expresin del gen insertado en
la clula.
La introduccin en una clula de material genmi-
co forneo se denomina transferencia gnica, trans-
duccin o transfeccin. Los principales sistemas de
transferencia pueden agruparse en dos tipos: los mto-
dos fsico-qumicos y los vectores virales.
Los mtodos de transferencia gnica fsico-qumicos
o no virales (Tabla 1) fueron los primeros en ser des-
arrollados. En estos mtodos el ADN forneo o ex-
geno est integrado en un plsmido, que es una molcula
de ADN que puede ser mantenida de manera epismi-
ca, es decir, de forma estable e independiente del geno-
ma de la clula husped. En general, presentan las si-
guientes ventajas: son sencillos de preparar, lo que
permite su produccin de forma industrial; no tienen
limitaciones en cuanto al tamao del ADN que pueden
transferir; son poco txicos; y no son inmunognicos.

Tabla 1. Mtodos fsico-qumicos
de transferencia gnica.
Microinyeccin
Precipitacin con fosfato clcico
Electroporacin
Bombardeo con microproyectiles
Inyeccin directa de ADN desnudo
Conjugados ADN-protenas
Conjugados ADN-adenovirus
Liposomas
Los inconvenientes de estos mtodos son su baja
eficacia de transduccin de las clulas diana y que algu-
nos de ellos slo pueden utilizarse in vitro.
En la transferencia mediada por virus se sustituyen
ciertos genes prescindibles del vector por aquellos ge-
nes que se desea introducir en las clulas diana. La re-
gin que ocupan estos genes se denomina regin para in-
sercin o cassette; su tamao (nmero de kilobases: kb)
depende del tamao del virus y de los genes que pue-
dan ser sustituidos y, obviamente, constituye un factor li-
mitante a la hora de insertar las secuencias gnicas de
inters.
Actualmente, los virus (Tabla 2) constituyen la for-
ma ms eficaz de transferir genes teraputicos al inte-
rior de las clulas diana, y son los vectores ms utilizados
en terapia gnica. Los virus estn constituidos por pe-
queos cidos nucleicos (ADN o ARN) encapsulados en
envolturas proteicas que los protegen y les permiten en-
trar en las clulas. Una vez en el interior de la clula, la in-
formacin contenida en el cido nucleico dirige la sntesis
de protenas virales, aprovechando el sistema sintetizador
(ribosomas) y el aparato productor de energa (mito-
condrias) de la clula husped; de este modo se gene-
ran nuevos viriones.
Tabla 2. Vectores virales de transferencia
gnica.
Adenovirus
Virus adenoasociados
Virus vaccinia
Herpesvirus
Retrovirus
TERAPIA GNICA 923
Los vectores virales se obtienen por eliminacin de
uno o ms genes indispensables para la replicacin del vi-
rus, y su sustitucin por el gen teraputico. De esta for-
ma, el nuevo virus es defectivo, lo que significa que
mantiene la capacidad de infectar las clulas pero es in-
capaz de multiplicarse en ellas. Es decir, un virus puede
ser transformado estructuralmente mediante diversas
tcnicas, dando lugar a un vector recombinante relati-
vamente seguro, siempre y cuando se sustituya los genes
responsables de su replicacin y virulencia por los ge-
nes teraputicos, manteniendo su capacidad infectiva
intacta.
Los vectores virales constituyen los sistemas ms
eficaces para transferir genes, ya que son capaces de
infectar una elevada proporcin de las clulas diana,
es decir, poseen una elevada eficacia de transfeccin,
que en algunos casos llega a ser incluso del 100 %.
Existen, sin embargo, importantes limitaciones en el
empleo de virus, derivados de la transferencia y la ex-
presin de secuencias virales. En consecuencia, la se-
guridad en el empleo de los vectores virales constituye
una importante preocupacin, bien porque puede
producirse una transferencia involuntaria del virus
nativo patgeno, o bien porque pueda activarse un
virus patgeno o un oncogn debido a la posibilidad
de recombinacin gnica al insertarse un gen for-
neo en el genoma del husped. Otro punto clave a
considerar en la terapia gnica in vivo es la reaccin
inmunitaria que el organismo receptor pone en mar-
cha, pudiendo eliminar el material gentico a travs de
la muerte de las clulas genticamente modificadas.
Para contrarrestar esta reaccin inmune se intenta
eliminar el mayor nmero posible de genes vricos
del vector, con el fin de obtener una expresin ms es-
table del gen teraputico.
2.4. Marcaje celular
Consiste en introducir, junto con el gen teraputi-
co, uno o ms genes que permitirn identificar y selec-
cionar aquellas clulas diana que hayan incorporado el
transgn. As, por ejemplo, el marcaje con un gen que
confiere resistencia a neomicina permite la deteccin
selectiva de las clulas cuando se hacen crecer en un me-
dio que contiene dicho antibitico.
Por otra parte, un riesgo potencial de la terapia gnica
es la posibilidad de aparicin de complicaciones que re-
quirieran la suspensin del tratamiento. Es por ello que
se ha desarrollado una alternativa consistente en el doble
924 FARMACIA HOSPITALARIA
marcaje de la clula con genes distintos de la secuencia de
inters, es decir, la clula marcada lleva un gen forneo
que nos sirve de marcador, como el de resistencia a ne-
omicina, que permite seleccionar in vitro las clulas que
han tomado el ADN exgeno o conocer in vivo el gra-
do de transfeccin, y el otro gen, como el de la enzima
timidina cinasa del virus del herpes simplex, que per-
mite hacer una seleccin negativa in vivo de las clulas
marcadas, mediante la administracin de ganciclovir, el
cual es fosforilado por la enzima y activado, provocando
la muerte celular; de este modo se elimina las clulas
modificadas si la situacin lo requiere debido a la toxici-
dad del tratamiento u otras complicaciones.
3 TERAPIA ANTISENTIDO(3)
El trmino antisentido se aplica a secuencias cortas
de ADN o ARN (oligonucletidos) diseadas para ser
complementarias de secuencias gnicas especficas, con
el fin de interferir el flujo de informacin gentica.
Los agentes teraputicos antisentido inhiben la sn-
tesis proteica al interferir los procesos de transcripcin
y/o traduccin. Existen tres clases principales:
Secuencias antisentido: derivan de cidos nucleicos
que se unen (hibridan) con hebras de ARNm citos-
licas (hebras con sentido: portadoras de la informa-
cin necesaria para la sntesis de protenas en los ri-
bosomas) o de ARNhn (precursor nuclear del
ARNm), a travs de puentes de hidrgeno, por com-
plementariedad de las bases correspondientes del ci-
do nucleico. Normalmente, las secuencias antisenti-
do son secuencias cortas de cido nucleico, por lo que
habitualmente se les denomina oligonucletidos an-
tisentido.
Secuencias antign: de forma similar a las secuencias an-
tisentido, las secuencias antign se hibridan al ADN
de doble hebra localizado en el ncleo, creando se-
cuencias en triple hlice que bloquean la transcripcin
del gen correspondiente, bien directamente o bien in-
terfiriendo en la unin de protenas a secuencias es-
pecficas del ADN.
Ribozimas: los ARN antisentido pueden catalizar en-
zimticamente la hidrlisis de secuencias especficas
de ARNm. Estos ARN catalticos se denominan ri-
bozimas, y actan sobre sustratos naturales concre-
tos, pero en el caso de la terapia antisentido se dise-
an de forman que combinen dicha actividad
cataltica con la posibilidad, aportada por el aparea-
miento de bases, de reconocer especficamente diver-
sas secuencias de ARN diana.
En general, pueden seguirse dos enfoques en terapia
antisentido: 1) la administracin directa de oligonucle-
tidos; y 2) la expresin de los oligonucletidos tras la
transfeccin de determinadas clulas. En el primer caso,
adems de la microinyeccin directa, se han investigado
diversos mtodos de liberacin in vitro como son la for-
macin de complejos con lpidos cargados positiva-
mente, la incorporacin en el interior de liposomas y la
electroporacin. En cuanto a la expresin de nucletidos,
se han utilizado vectores como adenovirus o retrovirus;
en tal caso, el vector es administrado al paciente, cuyas c-
lulas sern las encargadas de generar el oligonucletido
antisentido.
La expresin de oligonucletidos presenta ciertas
ventajas y desventajas con respecto a la administracin di-
recta de los mismos: 1) la produccin directa a nivel nu-
clear permite mecanismos adicionales, ya que el oligo-
nucletido puede interferir en el transporte del ARNm
al citoplasma, puede tambin inducir una actividad nu-
clear del tipo ribonucleasa H, y puede interferir en el
proceso de transcripcin de la hebra de ADN comple-
mentaria; y 2) los ARN antisentido expresados son de
mayor longitud, lo que ofrece ms posibilidades de
interaccin con el ARNm diana, aunque esto tambin
puede favorecer la formacin de interacciones no espe-
cficas y facilitar la formacin de estructuras secunda-
rias que interfieran en el proceso de hibridacin.
4 TERAPIA GNICA DE LAS
ENFERMEDADES MONOGNICAS(4, 5)
La terapia gnica fue inicialmente concebida co-
mo una forma de tratamiento de enfermedades ge-
nticas causadas por mutacin de un slo gen (mo-
nognicas), de las que se conocen aproximadamente
4.000. Las enfermedades hereditarias comprenden
trastornos de muy diversa ndole, en los que un gen
defectuoso determina que no se sintetice una prote-
na especfica, o bien que se elabore una protena
anormal. En ambos casos, la ausencia de la protena
normal puede ocasionar muy diversas manifestacio-
nes clnicas, segn la funcin estructural o enzimti-
ca que normalmente ejerce dicha protena en las c-
lulas. As, los cuadros varan desde leves, que no
necesitan tratamiento (como el daltonismo), hasta
enfermedades graves (como la fibrosis qustica y la

hemofilia). En trminos generales se trata de enfer-
medades en las que la farmacoterapia convencional re-
sulta poco eficaz. Slo para algunos de estos trastor-
nos se han desarrollado y aplicado tratamientos
basados en la restitucin de la protena defectuosa o
deficitaria (como sera el factor VIII en el caso de la
hemofilia A, o la enzima adenosina desaminasa en el
sndrome de inmunodeficiencia combinada grave);
pero adems, dichos tratamientos slo tienen una
efectividad parcial para paliar las manifestaciones de
la enfermedad y pueden conllevar graves complica-
ciones. En pocas enfermedadades de origen gentico
es pues factible suministrar la protena deficitaria en
una forma farmacutica efectiva, dada su naturaleza
lbil y compleja, y la necesidad de hacerla llegar a un
dominio subcelular especfico. En ciertos casos se
recurre a transplantar el rgano afectado, pero esta
tcnica tambin tiene graves limitaciones: la dispo-
nibilidad de rganos y las consecuencias adversas
que se derivan de la inmunosupresin requerida pa-
ra evitar el rechazo del nuevo tejido.
El problema podra resolverse si se suministrara
una copia normal del gen defectuoso a los tejidos
afectados; as la protena podra ser sintetizada dentro
de las clulas utilizando las vas celulares habituales. Es
importante sealar que el gen defectuoso est en to-
das las clulas de la persona afectada por el trastorno
hereditario, pero su expresin en los diferentes r-
ganos y tejidos es variable. Los defectos en genes
que se expresan en todas las clulas del organismo
suelen causar anomalas tan graves que no son com-
patibles con el desarrollo embrionario. No obstante,
el limitado nmero de tejidos afectados en casi to-
dos los trastornos hereditarios simplifica las exigen-
cias de la terapia gnica, puesto que se necesita in-
troducir una copia funcional del gen slo en aquellos
tejidos que realmente lo requieren. Si puede mante-
nerse la adecuada expresin del gen durante un pe-
riodo de tiempo prolongado, entonces la enferme-
dad puede ser curada, o cuanto menos, paliada. El
tratamiento definitivo de una enfermedad gentica
slo es posible mediante la correccin del defecto
gentico del gen mutado. La terapia gnica permite la
introduccin en el organismo del gen normal, el cual
debe corregir la alteracin gentica del organismo re-
ceptor.
Los criterios para seleccionar una enfermedad
humana como candidata al tratamiento mediante te-
rapia gnica son:
TERAPIA GNICA 925
La enfermedad ha de amenazar gravemente la vida
del paciente.
Los rganos, tejidos y tipos celulares afectados por la
enfermedad han de estar bien caracterizados.
La versin normal del gen defectuoso debe haber si-
do aislada y clonada.
El gen normal ha de poder ser introducido en una
fraccin significativa de clulas del tejido afectado, o
bien la introduccin del gen en un tejido accesible, co-
mo la mdula sea, puede beneficiar indirectamente el
curso de la enfermedad en el tejido afectado.
El gen debe poderse expresar adecuadamente, gene-
rando una cantidad suficiente de protena normal.
En la Tabla 3 se enumeran las enfermedades mo-
nognicas en las que se estn experimentando diversos
protocolos de terapia gnica; slo en algunas de ellas se
dispone ya de suficientes datos y de experiencia con-
trastada en humanos, ya que en muchos casos los estu-
dios todava se encuentran en fase preclnica o de expe-
rimentacin animal.
5 TERAPIA GNICA DEL CNCER(6-9)
En la actualidad se considera que las alteraciones
genticas desempean un papel esencial en la patoge-
nia del cncer. Por una parte, los oncogenes son genes
que pueden producir transformacin maligna cuando
se expresan de forma inadecuada debido a mutacin, a
ampliacin, o a nueva disposicin. Los protooncoge-
nes son los genes normales que desempean un im-
portante papel en la proliferacin y diferenciacin celu-
lar normales, pero que son susceptibles de ser mutados
y convertirse en oncogenes, provocando la aparicin de
cncer. En la mayor parte de los casos codifican factores
de crecimiento, receptores, u otras molculas implica-
das en las vas de transduccin de la seal, o factores de
transcripcin que regulan la expresin gnica. El n-
mero de protooncogenes identificados hasta ahora so-
brepasa los 50, y se cree que podra alcanzar los 100.
Por otra parte, los antioncogenes o genes supreso-
res de tumores actan inhibiendo el crecimiento celu-
lar, y una categora relacionada de genes estn implicados
en la gnesis tumoral cuando se pierden o se inactivan. El
nmero de genes supresores de tumores identificados y
clonados molecularmente hasta ahora es pequeo, al-
rededor de diez; no obstante, se espera un incremento
sustancial en los prximos aos. Los ms conocidos
son: Rb, p53, FAP, DCC, NF1, NF2, WT1 y p16.
926 FARMACIA HOSPITALARIA

Tabla 3. Enfermedades monognicas en las que se aplican protocolos clnicos de terapia gnica.

Enfermedad Gen alterado

Inmunodeficiencia combinada grave Adenosina desaminasa
Enfisema a1-antitripsina
Citrulinemia Arginosuccinato sintetasa
Deficiencia de adhesin leucocitaria CD 18
Fibrosis qustica CFTR
Hemofilia A Factor VIII
Hemofilia B Factor IX
Talasemia b-globina
Anemia falciforme b-globina
Enfermedad de Gaucher glucocerebrosidasa
Mucopolisacaridosis tipo I a-L-iduronidasa
Mucopolisacaridosis tipo IV b-glucuronidasa
Enfermedad de Niemann-Pick Esfingomielinasa
Fucosidosis a-L-fucosidasa
Hipercolesterolemia familiar Receptor LDL
Hiperamoniemia Ornitina transcarbamilasa
Fenilcetonuria Fenilalanina hidroxilasa
Distrofia muscular de Duchenne Distrofina

5.1. Estrategias en terapia gnica del cncer
En el cncer, no se trata de corregir un defecto ge-
ntico como ocurre en las enfermedades monognicas,
sino de utilizar la manipulacin gnica para dotar de una
nueva propiedad a las clulas, que permite aprovechar-
las en algn aspecto de la patologa oncolgica con fines
teraputicos.
En la actualidad, se han desarrollado distintas estra-
tegias en terapia gnica del cncer, y se estn realizando
diversos ensayos clnicos para tratar diferentes tipos de
cncer: de mama, ovario, cabeza y cuello, pulmn, prs-
tata, clulas renales, tumor cerebral, leucemia mieloide
aguda, leucemia mieloide crnica, linfomas, melanoma,
mieloma mltiple y neuroblastoma.
A continuacin se enumeran las diferentes estrategias
aplicadas en los ensayos clnicos realizados en terapia
gnica del cncer:
Aumentar la actividad antitumoral de clulas inmunes
por medio de citoquinas (interleucinas, factores de ne-
crosis tumoral, factores estimulantes de colonias o in-
terferones).
Aumentar la inmunogenicidad del tumor introdu-
ciendo antgenos forneos (vacunas tumorales).
Introducir un gen suicida o de sensibilidad aumen-
tada a determinados frmacos. Se transduce el gen de
una enzima (timidina cinasa) que activa selectivamen-
te un profrmaco (aciclovir).
Bloquear la expresin de oncogenes mediante terapia
antisentido.
Introducir genes supresores de tumores (p53).
Eliminacin de las clulas tumorales mediante ade-
novirus oncolticos.
Transferencia de genes con efecto antiangiognico,
para inhibir la formacin de vasos sanguneos indu-
cidos por el propio tumor.
Introducir genes de resistencia a frmacos para redu-
cir la toxicidad de la quimioterapia, particularmente
sobre la mdula sea.
6 TERAPIA GNICA DE LA INFECCIN
POR VIH(10)
Actualmente, la infeccin por el Virus de la Inmuno-
deficiencia Humana (VIH) se considera una enfermedad

gentica de carcter adquirido, ya que el virus retrotrans-
cribe su ARN genmico e integra el ADN de doble hli-
ce resultante en el cromosoma de la clula husped, de
modo que es capaz de modular las funciones de la clula pa-
ra, finalmente, suprimir el sistema inmune. Por ello, el SIDA
es en la actualidad un claro objetivo de la terapia gnica. Se
han realizado ya numerosos estudios sobre el tratamiento
de la infeccin por el VIH mediante terapia gnica, tanto in
vitro en diferentes lneas celulares como in vivo en anima-
les de experimentacin. Asimismo, en la actualidad se estn
ensayando diversos protocolos clnicos de terapia gnica
para el tratamiento del SIDA. Los ensayos clnicos en de-
sarrollo utilizan mayoritariamente tcnicas ex vivo. Se aslan
clulas del paciente, las cuales se utilizan como vehculos ce-
lulares de los genes teraputicos. Mediante vectores vri-
cos o por inyeccin directa de ADN, se introduce un gen
teraputico en estas clulas diana. A continuacin, las clulas
transducidas, es decir, aquellas que han incorporado y ex-
presado el transgn, son reintroducidas en el paciente por
va intravenosa. En algunos protocolos, las clulas trans-
ducidas,previamente a su administracin al paciente,son ex-
pandidas en un cultivo celular para aumentar su nmero.
A continuacin se enumeran las diferentes estrategias
aplicadas en los ensayos clnicos realizados en terapia gnica
de la infeccin por VIH:
Transferir un gen del virus VIH, para as estimular la res-
puesta inmune del paciente en cuanto dicho gen sea ex-
presado.
Introducir genes de inhibidores celulares de la replica-
cin vrica (interfern-a) en lneas celulares de linfocitos
T y monocitos, y con la subsiguiente inhibicin de la
produccin de VIH.
Transferir genes de protenas mutantes del VIH, las cua-
les compiten con las protenas vricas nativas, dificultan-
do el ensamblaje del virus o inhibiendo su replicacin.
Secuestrar protenas vricas reguladoras mediante se-
uelos de ARN, sobreexpresados en la clula a partir de
genes transferidos, los cuales impiden la unin de estas
protenas a sus verdaderos puntos de accin.
Oligonucletidos antisentido, que son hebras cortas de
ARN qumicamente modificado y no funcional, com-
plementarias de las secuencias genticas del VIH. La for-
macin de parejas (duplex) sentido:antisentido blo-
quea la traduccin y promueve la degradacin de los
complejos de ARN inestables.
Manejo de ribozimas, que son ARN con propiedades
catalticas. Al igual que los ARN antisentido, los ribozimas
se unen a secuencias complementarias del ARN diana,
TERAPIA GNICA 927
con la propiedad adicional de su actividad enzimtica ri-
bonucleasa, que rompe catalticamente el ARN sustra-
to. Esto les exime de las limitaciones estequiomtricas
que afectan a los ARN antisentido. Adems, no parecen
inducir respuesta inmunolgica. En el caso de los virus
ARN, los ribozimas resultan particularmente interesan-
tes, ya que pueden degradar al ARN genmico vrico an-
tes de su integracin, as como a los ARN mensajeros y
al ARN genmico destinado al ensamblaje y la generacin
de nuevos viriones.
Introduccin en las clulas diana de genes que codifican
anticuerpos de cadena nica frente a protenas del VIH,
de manera que la expresin de tales anticuerpos neutra-
liza las protenas vricas dentro de las clulas infectadas, in-
cluso antes de que se produzca el ensamblaje del virus, tra-
tndose pues de una verdadera inmunizacin
intracelular.
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