FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA DE INGENIERIA AGRONOMA

TEMA:
TECNICAS DE LA BIOTECNOLOGIA:
INTERCAMBIO Y ALMACENAMIENTO DE
GERMOPLASMA Y RESCATE DE EMBRIONES

ALUMNOS:

Valverde Trujillo, Karen

Vigo Cuzco, Carlos

DOCENTE:
San Martn Loyaga, Mara del Pilar

TRUJILLO - 2017
 NDICE

INTRODUCCION pag.

CAPITULO I: pag.

INTERCAMBIO Y ALMACENAMIENTO DE GERMOPLASMA pag.

1.1 DEFINICIONES pag.

1.2 OBJETIVOS pag.
1.3 MARCO TEORICO pag.
1.4 CONCLUSIONES pag.

CAPITULO II: pag.

RESCATE DE EMBRIONES pag

2.1 DEFINICION pag.

2.2 OBJETIVO pag.
2.3 MARCO TEORICO pag.
2.4 CONCLUSIONES pag.

WEBGRAFIAS pag.
 INTRODUCCION
Los orgenes de la conservacin de la biodiversidad vegetal contempornea
estn en gran parte vinculados a la prctica de la recoleccin, almacenamiento
y uso de las semillas en bancos de germoplasma. Las tcnicas de conservacin
ex situ son componentes fundamentales de un programa de conservacin global
que contemplan esencialmente las operaciones de almacenamiento y
propagacin de germoplasma.
El almacenamiento se lleva a cabo mediante el mantenimiento de colecciones
de plantas en jardines botnicos y el establecimiento de bancos de
germoplasma. Los programas de conservacin ex situ complementan la
conservacin in situ almacenando a largo plazo germoplasma representativo de
las poblaciones, permitiendo un mejor conocimiento de las caractersticas
anatmicas, fisiolgicas y bioqumicas del material almacenado, y
proporcionando propgulos para su utilizacin en programas educativos,
programas de mejora gentica de especies cultivadas y en planes de
reforzamiento, reintroduccin o introduccin.

La conservacin ex situ de germoplasma de especies raras y amenazadas est

basada esencialmente en la utilizacin de los bancos de germoplasma. Los
bancos de germoplasma son centros orientados al almacenamiento mediante
propgulos de una parte representativa de la variabilidad gentica
correspondiente a una determinada especie. Dentro de esta categora podemos
distinguir los bancos de semillas, los bancos de cultivo in vitro, los bancos de
polen y los bancos de genes o bancos de ADN. En 1983 la Conferencia de la
FAO estableci la Comisin de Recursos Fitogenticos (actualmente Comisin
sobre Recursos Genticos para la Alimentacin y la Agricultura). Desde
entonces ha desarrollado un Sistema Mundial para la Conservacin y Utilizacin
Sostenible de los RFAA, del cual tanto el informe sobre el Estado de los RF en
el Mundo como el Plan de Accin Mundial son elementos fundamentales.
En este artculo vamos a presentar en qu consiste y para qu se utiliza la tcnica
del rescate de embriones en el contexto de la mejora gentica vegetal. Esta
tcnica es gran inters cuando se realizan cruzamientos, generalmente para
transferir una caracterstica determinada de uno de los parentales al otro y se
presentan problemas de incompatibilidad, que se manifiestan tras la formacin
del embrin (a nivel postcigtico)
Factores de gran importancia a tener en cuenta para alcanzar el desarrollo del
embrin al utilizar esta tcnica van a ser la manipulacin del mismo en
condiciones de extremo cuidado para evitar daarlo durante la extraccin y
siembra, el estadio de desarrollo en el que se encuentre el embrin y, la
composicin del medio de cultivo. En general, la extraccin ser ms sencilla en
fases ms avanzadas de desarrollo, que adems requerirn de menor
dependencia alimenticia. De este modo, la dificultad del rescate de embriones
disminuir segn estos vayan desarrollndose desde el estadio globular, a
corazn (cordiforme), torpedo y cotiledonar
 CAPITULO I
En el almacenamiento de las semillas; estas semillas a conservar dentro del
banco de germoplasma se cosechan y se secan hasta un contenido de humedad
de menos del 5%. Las semillas luego se almacenan en congeladores a -18 C
o menos. Debido a que la semilla pierde su viabilidad con el tiempo, las semillas
tienen que ser peridicamente resembradas de modo de poder cosechar
semillas frescas las cuales inician otra ronda de almacenamiento a largo plazo.
1.1 DEFINICIONES
A. INTERCAMBIO

La distribucin de germoplasma consiste en el suministro de una muestra

representativa de accesiones de semillas de un banco de germoplasma
en respuesta a peticiones de usuarios de germoplasma vegetal. La
demanda de recursos genticos crece constantemente para responder a
los retos planteados por el cambio climtico, los cambios en los espectros
de virulencia de las principales plagas y enfermedades as como las
especies exticas invasivas. El tiempo que medie entre la recepcin de
una solicitud de semillas de un usuario y la respuesta y el envo
correspondientes de semillas (junto con la informacin pertinente) deber
ser lo ms corto posible. La adquisicin es el proceso de recoleccin o
solicitud de semillas para su inclusin en el banco de germoplasma, junto
con informacin relacionada.

B. GERMOPLASMA
El material que se conserva como semillas, cultivo de tejido o plantas
establecidas en colecciones de campo se llama germoplasma. El
germoplasma es el conjunto de genes que se transmite en la reproduccin
a la descendencia por medio de gametos o clulas reproductoras. El
concepto de germoplasma se utiliza comnmente para designar el
genoma de las especies vegetales silvestres y no genticamente
modificadas de inters para la agricultura. En la actualidad, la perdida
acelerada de la diversdad genetica vegetal tanto d amteriales silvestres
como domesticados, constituyen un problema cada vez mas
preoecupante en el mundo.

C. BANCO DE GERMOPLASMA
Los bancos de germoplasma son los sitios de conservacin de material
biolgico por excelencia, cuyo objeto es la conservacin de la
biodiversidad. Son recintos clave para evitar que se pierda la diversidad
gentica por la presin de factores ambientales, fsicos y biolgicos, y las
actividades humanas. La constitucin de bancos de germoplasma es
relativamente reciente a nivel mundial. Podramos decir que inicia en 1894
cuando Nicolai Vavilov, cientfico ruso, describiera los centros de origen
de la agricultura. Vavilov llam la atencin sealando la importancia que
tiene la conservacin de los ancestros de plantas cultivadas como fuentes
de variacin para el fitomejoramiento
1.2 OBJETIVOS

Conservar con la mayor integridad posible la variabilidad gentica de las

poblaciones seleccionadas
Identificacin de los actores, personas fsicas e instituciones,
involucrados en la conservacin in situ y ex situ de variedades locales
cultivadas

1.3 MARCO TEORICO

El mtodo a seguir para la conservacin de germoplasma depende de la

naturaleza del material vegetal y est definido por la duracin de su ciclo
de vida, el modo de reproduccin y el tamao de sus individuos.
Las estrategias de conservacin de germoplasma son:

A. METODO IN SITU
Se basan en mantener las plantas en su hbitat natural e incluye la
conservacin en parques nacionales y reservas ecolgicas, lo cual
requiere de un considerable espacio fsico. Adems, las plantas se
encuentran expuestas a las inclemencias del cambio climtico,
desastres naturales y riesgo de incendios

B. METODO EX SITU.

Se basan en el mantenimiento del material biolgico en colecciones

de plantas (en campo, vivero o jardines botnicos), bancos de
semillas y bancos de cultivo in vitro. Las colecciones de plantas
requieren altos costos para su manejo, por mano de obra para las
labores culturales y control permanente de plagas, enfermedades y
malezas.
Una nueva alternativa utilizada para la conservacin de germoplasma
ex situ es el uso de la biotecnologa, que dentro de sus bases incluye
al cultivo de tejidos vegetales (CTV) que permiten el establecimiento,
manipulacin y desarrollo, bajo condiciones artificiales y controladas
de clulas, tejidos u rganos vegetales.
Les mostramos acontinuacion los tipos de bancos de germoplasma:

BANCOS DE SEMILLAS

Entre los bancos de germoplasma los modelos ms extendidos son

los bancos de semillas, que requieren de inversiones menores y
sus instalaciones no resultan tan sofisticadas. En los bancos de
semillas se procura a los propgulos protocolos diferenciados de
procesado y conservacin, segn los requerimientos particulares
de la especie.
En general, la conservacin a corto y medio plazo de semillas de
especies llamadas ortodoxas requiere de recipientes hermticos,
 condiciones de fuerte desecacin de las semillas (contenido en
agua entre el 6-12%) y ambientes refrigerados (cmaras entre 3-5
C.). A ms largo plazo, estas semillas son conservadas secas y al
vacio en recipientes hermticos a temperaturas entre -15 i -23 C.
En el caso de semillas de especies llamadas recalcitrantes, que
resultan daadas si se exponen a temperaturas bajas en estado
seco y que requieren para sobrevivir de ambientes con oxgeno y
contenidos de humedad relativamente elevados (> 45 %), son
necesarias instalaciones especficas, siendo su conservacin
durante periodos de tiempo prolongados siempre problemtica, aun
en las condiciones de almacenamiento ms adecuadas.

BANCOS DE CULTIVO IN VITRO

Los mtodos de cultivo in vitro para la conservacin de plantas

han sido utilizados en especies que necesitan mantenerse como
clones; esto se logra generando cambios en el ambiente de
cultivo que permiten mantener o reducir parcial o totalmente el
crecimiento de las clulas y de los tejidos vegetales. El objetivo es
mantener o aumentar al mximo el perodo de permanencia del
material en cultivo, y en este sentido se han desarrollado los
siguientes sistemas de conservacin in vitro de germoplasma
vegetal:

- Conservacin a corto plazo.

Consiste en mantener el material vegetal mediante
subcultivos constantes, lo que permite mantener especies o
variedades por tiempo indefinido, pero con el inconveniente
de realizar subcultivos frecuentes. Esto depender de la
especie, va de regeneracin y sistema de cultivo, donde el
tiempo para cada subcultivo puede variar de entre 15 das
hasta tres meses.

- Conservacin a mediano plazo.

Tambin conocido como almacenamiento en condiciones de
crecimiento mnimo, consiste en retardar el crecimiento de los
cultivos in vitro con la finalidad de incrementar el tiempo entre
subcultivos lo ms posible. Para disminuir la tasa de
crecimiento de los tejidos sin afectar su viabilidad, adems del
control de las condiciones de luz y temperatura, se han
empleado sistemas de conservacin mediante el uso de
inhibidores del crecimiento, como el cido abscsico. Una va
alterna para disminuir el crecimiento in vitro consiste en el uso
de reguladores osmticos, como el manitol o sorbitol. Estos
compuestos reducen el potencial osmtico del medio de
cultivo y, en consecuencia, la disponibilidad de agua para los
tejidos.
 - Conservacin a largo plazo
En este caso se utiliza el mtodo llamado crioconservacin,
que consiste en mantener los tejidos congelados en nitrgeno
lquido por tiempo indefinido, a temperaturas extremadamente
bajas (usualmente 196 C). El uso de la crioconservacin
para el almacenamiento de germoplasma ofrece varias
ventajas en relacin con las tcnicas tradicionales, pues
permite la conservacin a largo plazo (aos), con bajos costos
de mantenimiento.

BANCOS DE ADN

Con el avance de las tcnicas de ingeniera gentica que

posibilitan la transferencia de genes entre especies totalmente
distintas, una nueva alternativa que comienza ahora a perfilarse
es la instalacin de bancos de ADN. Entre sus ventajas estn la
pequea cantidad de material vegetal necesaria para su
almacenamiento y la posibilidad de transferir genes a genotipos o
especies relacionadas. Esta tcnica puede ser utilizada con
especies amenazadas o incluso extintas tomando muestras del
material en vivo o a partir de espec-menes de herbario (Wang et
al., 1993). En los bancos de ADN, el ADN extrado de individuos
de una determinada poblacin se almacena a bajas temperaturas
(congeladores a 80 C o tanques de nitrgeno lquido). En la
actualidad, esta alternativa slo presenta utilidad en el caso de
especies o gneros cuyo genoma ha sido profundamente
estudiado y donde se conocen las secuencias de numerosos o
importantes genes. Sin embargo, es posible que en un futuro este
tipo de bancos vaya extendindose a medida que se vayan
implantando las tcnicas de ingeniera gentica en los procesos
de mejora y obtencin de nuevos cultivares.

OTROS BANCOS DE GERMOPLASMA

Los bancos de polen y los bancos de yemas vegetativas son otras

dos opciones de conservacin que en principio podran ser
aplicables a la conservacin de especies raras o amenazadas. En
ambos casos, el almacenamiento se realiza a bajas temperaturas,
siendo aplicables las tcnicas de crioconservacin. Los bancos de
polen tienen la ventaja de que requieren un mnimo espacio y
resultan aplicables tanto a especies con semillas ortodoxas como
a especies con semillas recalcitrantes. Sin embargo, slo
conservan la mitad del genoma, el polen tricelular resulta muy
difcil de almacenar, necesita de una coleccin de campo que
proporcione flores femeninas para llevar a cabo una propagacin
convencional y los propgulos no estn directamente disponibles
(Wang et al., 1993). Los bancos de yemas vegetativas se utilizan
 en la actualidad en la conservacin de clones de especies frutales
y requieren la puesta a punto de la tcnica de injerto sobre planta
patrn. Esta tcnica podra ser aplicable a determinados casos de
especies arbustivas o arbreas en peligro de extincin.

1.4 CONCLUSIONES

Las plantas conservadas incluyen cultivos alimenticios econmicamente

importantes, plantas hortcolas, forrajeras, plantas medicinales y rboles.
Los recursos genticos para la alimentacin y la agricultura constituyen la
base biolgica de la seguridad alimentaria mundial y contribuyen al sustento
de todas las personas de la Tierra. Estos recursos son la materia prima ms
importante de los fitomejoradores y aporte imprescindible para los
agricultores, por consiguiente son fundamentales para una produccin
agrcola sostenible.

CAPITULO II
Esta tcnica se inici en 1940 y se sigue utilizando en la actualidad.
Por qu se sigue utilizando una metodologa aparentemente antigua?.
La respuesta a esta pregunta est relacionada con la variabilidad gentica
existente en el germoplasma vegetal y que es la fuente de genes en los
programas de mejora. Disponemos de numerosas plantas cultivadas
seleccionadas por presentar caractersticas de inters, pero que son
susceptibles a distintos tipos de estreses de tipo bitico y/o abitico, que limitan
su rendimiento y que es necesario mejorar.
En este sentido, el cribado de accesiones pertenecientes a especies prximas
a la especie a mejorar para la identificacin de resistencias u otras
caractersticas de inters es esencial. Una vez identificada la accesin
resistente a un tipo de estrs se contina el programa hibridando con la
variedad a mejorar.
Sin embargo, los problemas de cruzabilidad entre las especies cultivadas y los
ancestros silvestres son frecuentes y esta situacin incrementa la dificultad de
introgresar los genes de inters. Si en un cruce no existen problemas de
incompatibilidad, el rescate de embriones no ser necesario, si existen, el
rescate ser necesario cuando la incompatibilidad sea causada por genes
nucleares y se llegue a formar el embrin. Si los causantes de la
incompatibilidad son genes citoplasmticos, podramos realizar el cruce inverso
para solucionar este problema. En aquellos cruces en los que se observa que
el embrin llega a formarse, pero aborta podremos aislarlo para cultivarlo in
vitro. Como se ha comentado anteriormente, tambin se pueden aislar
embriones de cruces sin problemas de incompatibilidad, para obtener plntulas
en un periodo de tiempo menor que el empleado si esperramos a la formacin
y maduracin de la semilla, y a la subsiguiente germinacin.
El procedimiento para llevar a cabo un rescate de embriones o un cultivo se
resume en:
1. Realizacin de cruces.
2. Determinacin de los das despus del cruce en los que se van a extraer los
embriones para su cultivo.
3. Desinfeccin de los frutos.
4. Extraccin de las semillas y de los embriones que contienen, en condiciones
de asepsia (Figura 2). Se utilizan agujas y lupa binocular para realizar la
extraccin.
5. Siembra de los embriones en placas con medios de cultivo apropiados para
la maduracin y germinacin de los embriones aislados.
6. Sellado de las placas utilizando parafilm u otra cinta adhesiva, que permita la
transpiracin.
7. Incubacin de las placas en cmaras de cultivo, en condiciones adecuadas
de temperatura y humedad (generalmente en oscuridad durante los primeros
das tras la siembra).
8. Extraccin de las plantas cultivadas in vitro, aclimatacin y trasplante a
condiciones estndar de cultivo in vivo.
Determinar el momento ms adecuado para realizar la extraccin de los
embriones es importante, por lo que se suele llevar a cabo un ensayo para
determinar en qu estadio se produce el aborto de los embriones. La extraccin
y siembra en condiciones de asepsia tambin lo es, puesto que se pretende el
cultivo del embrin no de hongos o bacterias que puedan estar presentes.
En cuanto al medio de cultivo, su composicin depender de los genotipos a
rescatar y el estadio de desarrollo.
Por ejemplo, en Gisbert et al. (2008) se describe un medio para aislar
embriones de tomate en fase globular o corazn, compuesto por sales
minerales, sacarosa, agar y los reguladores de crecimiento bencilaminopurina y
cido 2,4 D diclorofenoxiactico, que ha resultado adecuado en distintos
cruces. Sin embargo, con un medio de composicin similar no se obtuvieron
buenos resultados al utilizar semillas inmaduras en materiales de tomate
derivados de S. peruvianum. En este caso, fue ms eficiente un medio de
cultivo que contena el regulador de crecimiento, zeatina (Dez et al. 2014).
Teniendo en cuenta todos los aspectos anteriores, la incubacin de los
embriones en condiciones de luz, humedad y fotoperiodo permitir el desarrollo
de alguno de los embriones aislados, y la continuacin con el programa de
mejora si las plantas obtenidas son frtiles.
En la siguiente figura (figura 3) podemos observar un embrin sembrado en el
estadio corazn a los 7 das de cultivo, que ya est cambiando al estado de
torpedo (A) y la planta que ha germinado de este embrin a los 20 das de
cultivo (C) y, otro embrin aislado y sembrado en estadio cotiledonar (B) y la
planta obtenida a los 20 das de cultivo (D).

Como puede observarse en esta figura (D) no todos los embriones sembrados
han desarrollado. En este caso, posiblemente debido a la ocurrencia de daos
durante el proceso de extraccin.
Su uso del rescate de embriones, para transferencia de resistencia a enfermedades
producidas por hongos, virus o nematodos y a baja temperaturas y para rescate de
materiales frutales deciduos, cuyas semillas son generalmente de baja viabilidad

Aplicacion Agronomica
Aplicaciones a largo plazo (despus, del ao 2000): Ingeniera ,gentica para
caracteres multigenicos, uso de plantas transgnicas para la produccin de
metabolltos secundarlos (como bioreactores naturales).
Aplicaciones a corto plazo (hasta cinco aos): propagaci6n vegetativa,
obtenci6n de plantas libres de virus, intercambio y almacenamiento de
germoplasma, rescate de embriones, cultivo de anteras y producci6n de
haploides, variaci6n somaclonal, metabolitos secundarios, hibridaci6n somtica
y hbridos.
Aplicaciones a mediano plazo (cinco a 10 aos): Transferencia, integraci6n y
expresi6n de genes, que controlan caractersticas simples, a cultivos de
importancia econ6mica (ingeniera gentica para caracteres monogenicos).

https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/51365/Gisbert%20y%20Pic%C3%
B3%20Rescate%20de%20embriones.pdf?sequence=1
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/51365/Gisbert%20y%20Pic%20R
escate%20de%20embriones.pdf?sequence=1
https://www.researchgate.net/profile/Fernando_Gomez-
Merino/publication/273204588_Conservacion_de_recursos_geneticos_de_cana
_de_azucar_Saccharum_spp/links/54fba4a50cf2c3f52420830e/Conservacion-
de-recursos-geneticos-de-cana-de-azucar-Saccharum-spp.pdf