Influencia de un probitico a base de hidrolizado de levadura en la

ecologa microbiana de aves.

Influence of a probiotic yeast hydrolyzate base in the microbial ecology of

birds.

Francisco Calzadilla Jimnez

Facultad de Agronoma.
Universidad de Matanzas Camilo Cienfuegos
Cuba
E-mail: delegado@puentes.cu

Manuel Prez Quintana

Facultad de Agronoma.
Universidad de Matanzas Camilo Cienfuegos
Cuba

Ral Piad Barreras

Facultad de Agronoma.
Universidad de Matanzas Camilo Cienfuegos
Cuba

RESUMEN

Se evala el efecto de un probitico de levadura de destilera de alcohol sobre

indicadores fermentativos- microbiolgicos en reemplazos de ponedoras y broilers. Se
utilizaron White Leghorn de reemplazo y broilers comerciales. Se adicion el
hidrolizado a 0, 25, 50 y 75 ml / kg de pienso. En reemplazos AGCC totales en leon
mostr valores ms altos con 50 y 75 ml. En pH, el valor ms bajo en leon se obtuvo
con 75 ml y en el ciego con 50 y 75 ml. El conteo de Lactobacillus fue superior en los
grupos con hidrolizado, mientras que coliformes mostr menores conteos. En broilers
en el examen microbiolgico del ciego, se encontr en conteo de totales y
Lactobacillus mayores contenidos en la dosis 75 ml. En los contenidos de AGCC en el
ciego los grupos con hidrolizado fueron superiores, obtenindose el ms alto con la
dosis de 75 ml. A loa 42 das los grupos con hidrolizado mostraron un contenido ms
alto de estos. A los 42 das los grupos con hidrolizado mostraron valores superiores,
la dosis de 50 ml tuvo mayor valor. En pH, en ciego e leon, a los 21, 35 y 42 das, se
observa una disminucin en los grupos tratados.

Revista Avanzada Cientfica Vol. 9 No. 1 Ao 2006

INTRODUCCIN

La produccin avcola constituye, una de las ramas de la produccin animal de mayor

importancia a nivel mundial contribuyendo a la satisfaccin de ms del 35 % de las
necesidades proteicas de la poblacin del planeta.

La alimentacin constituye, dentro de la produccin avcola, entre el 60-70 % de los

gastos. La va para mejorar el valor de la dieta por medio de la utilizacin de los
aditivos alimentarios constituye una premisa obligada en la avicultura moderna para
alcanzar las metas deseadas. En tal sentido, los aditivo Probiticos permiten un control
y establecimiento de una microflora beneficiosa en los animales y una disminucin
paulatina de la potencialmente enteropatgena (Urrutia, 1997; Paul et al. 2002).

Los probiticos no dejan residuos en los productos finales y son fortalecedores del
sistema inmune y mejoradores de la productividad animal (Gunther, 1995; Lyons,
1997). Las levaduras y muy especialmente los derivados de su pared, constituidas por
los oligosacridos de glucanos y mnanos, presentan una comprobada habilidad para
restablecer el balance de la microbiota intestinal y promover la inmunidad especifica y
no especfica en animales de granja e incrementar por esta va la produccin (Acevedo
y Pedroso, 1999; Prez, 2000; Prez et al. 2005).

Ha sido prctica en los sistemas de alimentacin animal el empleo de antibiticos

como promotores del crecimiento en la bsqueda de una respuesta productiva. Sin
embargo, debido a la resistencia microbiana y al efecto residual de estas sustancias se
ha prohibido su empleo para estos fines. Como alternativa se propone el uso de los
pre y probiticos que han alcanzado un elevado desarrollo.

El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de un probitico a base de

hidrolizado de levadura de destilera de alcohol sobre indicadores fermentativos-
microbiolgicos en reemplazo de ponedoras y broilers.

MATERIALES Y MTODOS

Animales

Para el desarrollo de los experimentos se utilizaron pollitas White Leghorn de

reemplazo de ponedora de un da de edad pertenecientes al hbrido cubano L33 y

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broilers del hbrido HE 21BE42. Las aves de reemplazo se sometieron a una duracin
experimental desde uno hasta ciento veintisis das de edad (0-18 semanas). Los
broilers de 0 a 42 das.

Alimentos

Las dietas experimentales se basaron en la utilizacin de concentrados en forma de

harina y con aportes nutricionales con las recomendaciones del NRC (1994). En
reemplazos fueron suministrados durante el inicio (0-6 semanas de edad), el
crecimiento (6-12 semanas) y la finalizacin (12-18 semanas). En broilers inicio (0-18
das), crecimiento (19-30 das y finalizacin (30-42 das).

La composicin nutricional de los concentrados fue calculada con el empleo de las

tablas de composicin de alimentos de acuerdo a los datos recomendado por Dale
(1998).

Elaboracin del hidrolizado, dosis utilizadas y composicin.

El hidrolizado enzimtico de crema de destilera se prepar de acuerdo a la tcnica

propuesta por Prez (1999) y Prez (2000). Los lotes manufacturados se
almacenaron en recipientes plsticos de 30 litros de capacidad, a temperatura
ambiente, hasta su empleo. En el momento de confeccionar la frmula del
concentrado, se adicion el hidrolizado a este en las dosis siguientes: 0, 25, 50 y 75 ml
/ kg de concentrado. Estas dosis fueron suministradas de la misma forma en todos los
experimentos.

La metodologa para los clculos de la composicin del hidrolizado enzimtico de

crema de destilera fue realizada de acuerdo a las tcnicas propuestas por AOAC
(1995).

Manejo de las aves

Las aves se alojaron en cuartones de crianza en piso de cemento, estos median 4 m2

y se utiliz una densidad de 12.5 aves / m2. El material que se empleo como lecho fue
de cscara de arroz. Antes del arribo de las aves, la nave experimental fue sometida a
una habilitacin sanitaria segn lo establecido por el Instructivo Tcnico (1998).
Durante los primeros 15 das recibieron agua en bebederos de 3.78 litros y a partir de

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la tercera semana de edad el agua se ofert en bebederos de tipo tetinas los que se
ajustaron al tamao de las aves durante la crianza. El concentrado se dispuso en
tarteras durante los primeros 15 das y a partir de la tercera semana este se suministr
en comederos tubulares los que se ajustaban a la altura del cuello de las aves a
medida que estas crecan. Durante esta etapa el calentamiento se realiz con
calentadoras de bombillos incandescentes. El suministro de alimento fue ab-libitum y
el agua de bebida se trat con hipoclorito de calcio al 0.1 %.

Tcnicas analticas

Determinacin de los cidos grasos de cadena corta (AGCC), cido lctico y pH.

Los niveles de AGCC totales se determinaron por cromatografa gaseosa utilizando un

cromatgrafo marca Krom de gas - lquido, con detector de llama. Para ello se
inyectaron 5 l de muestra en una columna tipo Cromosol W, obtenindose los
cromatogramas de AGCC. El pH se determino empleando un pH-metro digital marca
WPA serie CD-70 de manufactura inglesa.

Tcnicas microbiolgicas

Se extrajeron los contenidos cecales bajo atmsfera de CO2 y se efectuaron los

conteos segn la tcnica de Hungate (1966) para microorganismos anaerobios. El
conteo de anaerobios totales se realiz en NRF, lactobacilos en Robosa, levaduras en
Agar-extracto de malta y coliformes en agar- violeta- bilis. El tiempo transcurrido entre
la toma de muestras (contenido cecal) y el comienzo de la preparacin de las mismas
para los anlisis oscil entre 15-20 minutos.

Mtodos estadsticos

Para el tratamiento estadstico de los resultados se utiliz el anlisis de clasificacin

simple y la dcima de comparacin de Duncan (1955).

RESULTADOS

Reemplazos de ponedoras

Para los contenidos de AGCC totales en leon (semana 18) los valores ms altos se
alcanzaron con las dosis de 50 y 75 ml las que difieren (P<0.05) del resto (figura 1)..

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En tanto que para el pH, el valor ms bajo en leon se obtuvo con la dosis de 75 ml y
en el ciego con las dosis de 50 y 75 ml, difiriendo en ambos casos del resto de los
tratamientos (P<0.001) (Figura 2).

Los lactobacilos mostraron conteos ms elevados con la inclusin de 75 ml del

hidrolizado en tanto que para el conteo de coliformes sucedi lo opuesto (P<0.001).
No se hallo diferencia significativa entre tratamientos en el conteo de levaduras en la
semana 18 (P<0.001) (tabla 1).

Broilers

En el examen microbiolgico del ciego, se encontr en el conteo de totales (P<0.05) y

Lactobacillus (P<0.001) mayores contenidos en la dosis III (tabla 2).

Los contenidos de AGCC en el ciego los grupos con hidrolizado fueron superiores,
obtenindose el ms alto (P<0.05) con la dosis III, la que difiri del resto. A loa 42 das
los grupos con hidrolizado mostraron un contenido ms alto de estos que el control
(P<0.01).

El contenido de AGCC a los 35 das en leon (figura 3) mostr valores ms elevados

en los grupos tratados (P<0.001). A los 42 das tambin los grupos con hidrolizado
mostraron valores superiores, pero la dosis II tuvo el mayor valor (P<0.01). La
variacin del pH en ciego a los 21, 35 y 42 das, se presenta en la figura 4. Se observa
una disminucin significativa en los grupos tratados con el hidrolizado a los 2, 35 y 42
das (P<0.01).

DISCUSIN

Con el uso de este hidrolizado se observa un incremento en el contenido de AGCC, un

disminucin en el pH de leon y ciego, as como un incremento en el nmero de
lactobacilos y reduccin en los coliformes. Estos resultados coinciden con los
obtenidos por Prez (2000), quien al emplear este hidrolizado enzimtico en pollos de
ceba obtuvo reducciones en coliformes, aumentos en Lactobacillus totales en ciego y
reduccin del pH en leon y ciego (Kumprecht et al 1994; Kraliket et al. 2004)..

El hidrolizado enzimtico de crema de destilera empleado en este trabajo contiene

oligosacridos de glucanos y mananos, estos se derivan de la hidrlisis de las paredes

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de la levadura (Prez, 2000). Los resultados obtenidos corroboran lo planteado por
varios autores cuando plantean que la adicin de levaduras, y derivados de sus
paredes, a la dieta incrementa el nmero de Lactobacillus, y su metabolismo, esto
produce una mayor cantidad de AGCC y como consecuencia se reduce el pH del TGI
inhibiendo el crecimiento de las enterobacterias, principalmente los coliformes
(Salminen et al 1996; Ouwehand et al, 1999; Laurencio et al. 2005). Se conoce que los
oligosacridos de mananos tienen habilidad para producir adhesin selectiva de
microorganismos patgenos y pueden unirse a puntos especficos de adherencia de la
pared celular bacteriana, por lo que previenen la colonizacin y disminuyen las
poblaciones de stas en el TGI (Spring et al 1996 y Lyons, 1997; Prez al. 2005).

Estos resultados se corresponden con lo planteado por Connolly (1997) quin emple
un producto derivado de pared de Saccharomyces cerevisiae con alto contenido en
oligosacridos de mananos en broilers con una reduccin en el contenido de
coliformes en el ciego. Spring et al (1996) comprobaron en tres ensayos seriados con
broilers que el uso de este producto, produjo una reduccin en los coliformes cecales y
Jin et al (1998) observaron este mismo efecto en pollos de ceba cuando emplearon
cepas adherentes de Lactobacillus. Los resultados de este trabajo tambin coinciden
con los sealados por Nakano et al (1999) quienes emplearon en pollitas ponedoras
de reemplazo un probitico a base de lactobacilos, Bacillus, Estreptococcus y
Saccharomyces y obtuvieron en ciego un decrecimiento en las Enterobacteriaceae, un
incremento en los Lactobacillus y AGCC y un menor pH.

Otra de las funciones de los AGCC es la relacionada con su efecto trfico sobre el
epitelio intestinal. El hecho de encontrar mayores niveles de AGCC totales en leon,
es un indicativo de que la actividad probitica se puede poner de manifiesto con el
empleo de este hidrolizado enzimtico de crema de destilera mediante el efecto
trfico que producen estos productos sobre el epitelio intestinal, al favorecer los
procesos que contribuyen a incrementar la absorcin de nutrientes y el incremento de
peso (Bengmark, 1999).

Otro componente que se encuentra presente en los hidrolizados enzimticos de

levadura son los nucletidos (Silvestre, 1997). Los resultados de este trabajo en el
incremento de los Lactobacillus y su actividad metablica (mayor produccin de cido
lctico) se corresponden con lo planteado por Gunther (1995) y Langeris et al (1997)

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con respecto a que estos sustancias estimulan el crecimiento y actividad metablica
de los Lactobacillus. Segn estos mismos autores, los nucletidos estimulan la divisin
celular de las clulas intestinales, este aspecto, unido a los efectos ya citados (mayor
conteo de lactobacilos y menor de coliformes, menor pH intestinal, mayor nivel de
AGCC y su efecto trfico sobre el epitelio intestinal) puede ser otro de los efectos con
actividad probitica de este producto.

Los mayores niveles de AGCC totales en leon y ciego de los grupos con el
hidrolizado demuestran el efecto probitico de este sobre estos indicadores. Se sabe
que la produccin de cidos orgnicos en el TGI se obtiene, a travs de las
fermentaciones microbianas. Esto puede variar por un cambio de sustrato o de
factores que afecten, de un modo u otro, la composicin de la flora. En este caso se
lograron cambios significativos en los niveles de Lactobacillus y de coliformes. Estos
cambios estn relacionados con la composicin de los cidos orgnicos ya
mencionada y que en la literatura mundial en Probiticos se consideran como un
ndice de esta actividad (Spring et al (1996); Connolly (1997 y Garrido et al 2004)

CONCLUSIONES

La inclusin del hidrolizado enzimtico de crema de destilera produjo una mejora en

los niveles de AGCC en leon y ciego de reemplazos de ponedoras, as como en leon
de broilers. Favoreci el balance microbiano a nivel de ciego en reemplazo de
ponedoras y broilers al presentar en este rgano un mayor contenido de Lactobacillus
y menor de coliformes (eubacteriosis o equilibrio microbiano favorable para el
hospedero). gEl pH en leon y ciego de reemplazos disminuy con el hidrolizado, en
tanto este beneficio fue observado en ciego de broilers.

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Anexos

aa control
mmol / ml 8
b pH
160
b a 25 ml / kg
7 c b
140 c c 50 ml / kg
6
120 75 ml / kg
100 b 5
Control
80 25 ml / kg 4

a 50 ml / kg
60 a
75 ml / kg 3
40
2
20

0 1

AGCC totales
0
leon ciego

a,b ,b,c,
Valores con letras diferentes Valores con
letras diferentes difieren a
difieren a P<0.05 (Duncan (1955) P<0.05 (Duncan,
1955)

Figura 1. Efecto de 4 dosis de un HECD en el Figura 2. Efectos de 4

dosis de un HECD en el pH
contenido de AGCC totales en leon de pollonas de leon y ciego de
pollitas de reemplazo de
de reemplazo de ponedora (semana 18). ponedoras

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 Control a
6,2 b Control
25 a Dosis I a
b a Dosis I
a a Dosis II 6
b c
Dosis II
20 a Dosis III b
b
b d b Dosis III
AGCC totales leon

5,8
15 c
(mmol/L)

b pH 5,6 c
c
10
5,4

5 5,2

0 5
21 35 42
35 42
Das
Das

a,b,c
a,b,c Letras diferentes entre tratamientos difieren a letras diferentes
entre tratamientos

P<0.05 (Duncan, 1955).-P<0.01 a los 35 das. difieren para

P<0.05 (Duncan, 1955).

-P<0.001 a los 42 das. -P<0.05 a

los 21 das. -P<0.01 a los 35 y 42 das.

Figura 3. Dinmica de comportamiento del contenido Figura 4.

Dinmica de comportamiento del

de AGCC totales en leon en mmol/litro en pollos contenido de

pH en ciego en pollos de

de ceba con cuatro dosis de hidrolizado enzimtico de ceba con

cuatro dosis de hidrolizado

levadura Saccharomyces cerevisiae. enzimtico de

levadura Saccharomyces

cerevisiae

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Tabla 1. Efecto de 4 dosis de un HECD en el comportamiento de indicadores
microbiolgicos en ciego de reemplazo de ponedora (semana 18)

Tratamientos (hidrolizado ml / kg)

Medidas
0 25 50 75 ES
Anaerobios totales1 12.54 12.45 12.47 12.44 0.04
Levaduras2 7.43 7.57 7.52 7.51 0.05
Lactobacilos3 10.56c 10.72b 10.72b 10.84a 0.02 ***
Coliformes4 6.81a 6.5b 6.46cb 6.36c 0.04 ***

a,b,c
Valores con letras diferentes dentro de la misma fila difieren significativamente a
P<0.05

(Duncan,1955) *** P<0.001

1: dilucin 1011, 2: dilucin 106, 3: dilucin 109, 4: dilucin 105

Nota: El conteo se expresa en ufc/g de base seca. La expresin matemtica

utilizada para la transformacin logartmica de la poblacin microbiana fue: log
x + dilucin log 10

Tabla 2. Conteos microbianos en contenido de ciego en pollos de ceba con tres

dosis del hidrolizado enzimtico.

Indicadores Tratamientos

(ufc/ml) Control Dosis I Dosis II Dosis III ES

Conteo totales 24x1010 a 23x1010 a 50x1010 a 18.13x1010 b 5.1935*

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Conteo
31x105 28x105 29x105 49x105 6.331
levaduras

Conteo
28x109 b 34x109 b 35x109 b 69x109 a 2.7788***
Lactobacillus

Conteo
coliformes 26x106 a 2,5x106 b 3,3x106 b 2,7x106 b 3.0459*

a,b
Medias con letras no comunes en los suprandices dentro de cada fila difieren para

P<0.05 (Duncan, 1955). * P<0.05 *** P<0.001.

Fecha de recepcin: 07/02/2006 Fecha de aprobado: 09/04/2006

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