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Universidad Inca Garcilaso de la Vega

Facultad de Ciencias Farmacuticas y Bioqumica

Cromatografia:Separacin de pigmentos vegetales

CURSO: Qumica Orgnica

GRUPO: 1 -2A (mesa : 3)

DOCENTE: Herrera Hernndez, Nora Gabriela

INTEGRANTE:

Collanque Meza, Vadir

Contreras Nues, Yanela
Castillo Carbajal, Ruth
Sanchez Quionez, Maria

2012

LIMA PERU
INTRODUCCIN:

La cromatografa es unos mtodos variados de separacin de mezclas. Segn la

definicin dada por Keulemans la cromatografa es un mtodo de separacin en el
que los componentes a desglosar se distribuyen entre dos fases, una de las
cuales constituye un lecho estacionario de amplio desarrollo superficial y la otra es
un fluido que pasa a travs o a lo largo del lecho estacionario.

La cromatografa se introduce en los mtodos de separacin en 1903 y su

posterior desarroll y evolucin se produce hacia 1930. La primera persona que
defini la cromatografa fue el botnico ruso Miguel Tswett (1872-1913) en 1906 y
eligi el trmino cromatografa procedente de las palabras griegas
khromatos(color) y graphos (escrito) ya que utiliz el trmino cromatografa para
describir la separacin de pigmentos vegetales en distintas zonas coloreadas.
Aunque la mayor parte de las separaciones que se realizan actualmente son de
compuestos incoloros, el trmino inicial cromatografa se ha mantenido.
MARCO TEORICO:

La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de los componentes

de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.

a) Retencin: Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase
estacionaria, que puede ser un slido o un lquido anclado a un soporte slido.

b) Desplazamiento: Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una

fase mvil, que puede ser un lquido o un gas.

El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase

estacionaria, impulsados por la fase mvil, recibe el nombre de elucin. La mezcla
a separar se deposita sobre la fase estacionara, mientras que la mvil atraviesa
el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad,
dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. Las
dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de
modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes
que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con
el flujo de la fase mvil; por el contrario los componentes que se unen dbilmente
a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta
movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas
discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
CLASIFICACIN DE LAS TCNICAS CROMATOGRFICAS:

De acuerdo al estado fsico de las fases:

Dependiendo de la naturaleza de la fase estacionaria y de la fase mvil se

pueden distinguir distintos tipos de cromatografa

a) Cromatografa slido-lquido: La fase estacionaria es un slido y la mvil un

lquido.

b) Cromatografa lquido-lquido: La fase estacionaria es un lquido anclado a un

soporte slido.

c) Cromatografa lquido-gas: La fase estacionaria es un lquido no voltil

impregnado en un slido y la fase mvil es un gas.

d) Cromatografa slido-gas: La fase estacionaria es un slido y la mvil un gas.

De acuerdo con la forma del lecho cromatogrfico:

Cromatografa preparativa en placa.

La cromatografa preparativa se lleva a cabo en placas de gel de slice de 1-2 mm

de espesor sobre un soporte de vidrio. Se utiliza para la separacin y aislamiento
de los componentes de una mezcla en cantidades comprendidas entre 100-200
mg. En la superficie del adsorbente (gel de slice), mediante una pipeta Pasteur,
se traza una lnea continua con la muestra disuelta y se introduce la placa en
posicin vertical en una cubeta.

Durante la elucin debe permanecer tapada para evitar la evaporacin del

disolvente. Una vez se han separado los productos que componen la muestra, se
marca con una cuchilla el contorno del compuesto a aislar y con ayuda de una
esptula se desprende del soporte de vidrio el gel de slice con el compuesto
adsorbido. Una vez transferido a un erlenmeyer se aade un disolvente en el cual
sea soluble el producto, se filtra el gel de slice y una vez eliminado el disolvente
tenemos el producto puro.
 Cromatografa en columna:

Es el mtodo ms utilizado para la separacin de compuestos orgnico a escala

preparativa. La fase estacionaria se deposita en el interior de una columna de
vidrio que termina con una placa porosa que impide su paso y en un
estrechamiento con una llave. La mezcla se deposita sobre la parte superior de la
fase estacionaria mientras que la fase mvil atraviesa el sistema. Los compuestos
van saliendo por separado de la columna y se recogen en fracciones, los ms
polares quedan ms retenidos y para que salgan generalmente hace falta
aumentar la polaridad del disolvente. El tiempo necesario para eluir un compuesto
de la columna se llama tiempo de retencin.

El adsorbente ms utilizado para cromatografa de columna es gel de slice,

aunque tambin se puede emplear almina y florisil. La elucin de la
cromatografa puede realizarse por gravedad o mediante presin (Flash
chromatography), la diferencia en ambos casos est en el tamao de las
partculas de gel de slice (0,063-0,200 nm, slice de columna, 0,040-0,063 nm,
slice flash). Debido a que la disminucin del tamao de las partculas de
adsorbente conduce a una separacin ms eficaz, la cromatografa a media
presin (flash) proporciona mejores resultados, adems de ser ms rpida.

Las variables que ms influyen en la eficacia de la separacin en cromatografa de

columna y utilizando gel de slice como adsorbente son las siguientes;

a) Dimetro de la columna y cantidad de gel de slice: La altura del adsorbente

est relacionada con la diferencia de Rf de los componentes de la mezcla. El
dimetro de la columna con la cantidad de producto a separar.

b) Eleccin del disolvente: El disolvente tienen que conducir a una buena

separacin de los componentes de la mezcla en capa fina, utilizndose en muchos
casos mezclas de disolventes y se realiza una elucin en gradiente. Una de las
mezclas ms utilizadas es hexano/acetato de etilo.

De acuerdo al mecanismo de separacin:

Segn el tipo de interaccin que se establece entre los componentes de la

mezcla y la fase mvil y estacionaria podemos distinguir entre.

a) Cromatografa de adsorcin: La fase estacionaria es un slido polar capaz de

adsorber a los componentes de la mezcla mediante interacciones de tipo polar.
b) Cromatografa de particin: La separacin se basa en las diferencias de
solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y mvil, que
son ambas lquidas.

c) Cromatografa de intercambio inico: La fase estacionaria es un slido que lleva

anclados grupos funcionales ionizables cuya carga se puede intercambiar por
aquellos iones presentes en la fase mvil.

CROMATOGRAFA DE ADSORCIN:

La adsorcin es la propiedad que tienen ciertos slidos de aumentar la

concentracin en su superficie de otras sustancias. La separacin se debe a las
diferencias de adsorcin de los componentes de una mezcla sobre la fase
estacionaria. La fase estacionaria ha de ser un slido polar de gran superficie
(adsorbente). La fase mvil puede ser un gas o un lquido dando lugar a la
cromatografa gas-slido (CGS) o lquido-slido (CLS).

El grado de adsorcin vara segn la naturaleza y superficie especfica de los

adsorbentes y naturaleza de los solutos. Los enlaces entre molculas adsorbidas y
el adsorbente han de ser dbiles para que su fijacin sea reversible, las uniones
son debidas a fuerzas intermoleculares (interacciones dipolo-dipolo o puentes de
hidrgeno). Como regla general, las polaridades del adsorbente y de los solutos
han de ser opuestas.
CROMATOGRAFA DE PARTICIN:

La cromatografa lquido-lquido, tambin llamada de particin se caracteriza por

emplear una fase estacionaria lquida, anclada a un soporte slido, y una fase
mvil tambin lquida. El soporte slido por lo general es gel de slice, sobre cuya
superficie se ha anclado una fase lquida con la incorporacin de una cadena
hidrocarbonada larga, mediante la transformacin de los grupos silanol (Si-OH) de
la gel de slice en grupos siloxano (Si-O-Si-R), lo que proporciona una fase lquida
estacionaria trmicamente estable y difcil de hidrolizar en condiciones normales.
La polaridad de la fase estacionaria puede modificarse en funcin de la naturaleza
de las cadenas hidrocarbonadas introducidas en el gel de slice, lo que permite
disponer de fases estacionarias con selectividad diferente. La separacin en la
cromatografa lquido-lquido se basa en la diferencia de solubilidad de los
componentes de la mezcla entre las dos fases lquida o en las diferentes
interacciones de los componentes de la mezcla con los grupos funcionales
presentes en la cadena enlazada al gel de slice. En funcin de la polaridad de la
fase lquida estacionaria, se distingue entre:

a) Cromatografa en fase normal: La fase estacionaria est constituida por un

lquido de carcter polar. Como fase mvil se emplean mezclas de disolventes
apolares (hexano, pentano), con disolventes polares (cloroformo, diclorometano,
T.H.F., etanol, metanol o acetonitrilo). Se utiliza para la separacin de
compuestos muy polares que quedaran demasiado retenidos en una
cromatografa slido-lquido. En este tipo de cromatografa el orden de elucin
est gobernado por interacciones de tipo polar: los solutos ms polares quedan
ms retenidos, igual que en la cromatografa de adsorcin.

b) Cromatografa en fase reversa: La fase estacionaria est constituida por un

lquido de carcter apolar. Como fase mvil se emplean mezclas de agua con
disolventes polares miscibles, como metanol o acetonitrilo siendo la fase mvil
ms polar que la fase estacionaria. Se emplea para la separacin de mezclas de
compuestos de polaridad baja, que se retienen muy poco en una cromatografa
slido-lquido, y para la separacin de compuestos de una misma serie homloga.
La retencin se explica en base a una adsorcin preferencial del disolvente menos
polar de la fase mvil a la superficie de las cadenas apolares que constituyen la
fase estacionaria, de manera que se establece un mecanismo complejo que
supone una combinacin de equilibrios de solubilidad (particin) de la mezcla que
se cromatografa entre la fase lquida adsorbida a la fase estacionaria y la fase
mvil.La separacin ocurre como consecuencia de las diferencias en la superficie
apolar de los componentes de la muestra, los compuestos menos polares sern
ms solubles en la fase estacionaria que los ms polares. Por tanto, al contrario
que en la fase normal, los compuestos ms polares estarn menos retenidos que
los menos polares. Los tiempos de retencin disminuyen cuando menor sea la
proporcin de agua, cuando menos polar sea el disolvente empleado.
CONCLUSIN :

En esta prctica nos dimos cuenta que la cromatografa es una buena tcnica de
separar componentes de la mezcla a medida que son transportadas por una fase
fluida mvil a travs de una fase estacionaria solida o liquida.

Tambin descubrimos que la separacin de las molculas se logra porque la movilidad de

cada soluto depende de un equilibrio en la distribucin entre la fase mvil y la estacionaria, y esta
separacin se puede realizar en funcin de sus cargas, masas, tamaos
moleculares, la polaridad de sus enlaces, sus potenciales redox.
Anexos :

Cromatografa plana
Cromatografia en columna

Cromatografa por exclusin:

BIBLIOGRAFA :

D.A. Skoog, J.J. Leary, Anlisis Instrumental, McGraw-Hill, Madrid (1996)

H.H. Willard, L.L. Merritt Jr.,J.A. Dean, F.A. Settle Jr., Mtodos
Instrumentales de anlisis, Grupo Editorial Iberoamericana S.A. de C.V.,
Mxico (1991).
TECHNIQUES in liquid chromatography Simpson, Colin F. John Wiley &
Sons (1984).
Liquid chromatography column theory Scott, Raymond P.W. John Wiley &
Sons (1992).
Chromatography of polymers : characterization by SEC and FFF American
Chemical Society (1993).
Handbook of size exclusion chromatography Marcel Dekker (1995).
Manual de cromatografa Loro Ferrer, Juan Francisco Gobierno de
Canarias, Direccin General de Universidades e Investigacin (2001).
http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Gas.htm
CUESTIONARIO:

4.Que mecanismos de separacin cromatografca existen?

a) Separacin por adsorcin (cromatografa de adsorcin)

Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie de un

slido activo (componentes con polaridad baja o media)

b) Separacin por reparto (cromatografa de reparto)

Diferente solublidad en fases estacionaria y mvil (Componentes con polaridad

media o alta)

c) Separacin por tamao molecular (Cromatografa de permeacin de gel, de

tamiz molecular o de exclusin por tamaos).

Parmetros de columna

- Intervalo de trabajo: intervalo de M que pueden ser separados

- Lmite de exclusin: M mnimo a partir del cual las macromolculas no

experimentan retencin.

d) Separacin por Intercambio inico

La separacin se basa principalmente en la diferente afinidad para el intercambio
de iones de los componentes de la muestra.

Cromatografa de exclusin(exclusin molecular ):Estrictamente ,se basa en

diferencias de tamao , forma o carga entre las molculas de los distintos
componentes de la muestra, pero lo mas habitual es aprovechar la diferencias de
forma y tamao.

Cromatografa de afinidad :variedad particular de cromatografa en la que la

separacin se basa en la especificidad biolgica singular de interaccin entre un
componente de la muestra y otra molecula unida a la F.E.

F.E: Un soporte inerte al que se une covalentemente el ligando de afinidad.

5. Qu diferencias existen entre Cromatografa de Gases y Cromatografa por

HPLC?

Las diferencias son:

A )Cromatografa de Gases (GC)

Tcnica de separacin en la que la fase mvil es un gas. Se lleva siempre a cabo
en columna.

B )Cromatografa Lquida (LC)

Tcnica de separacin en la que la fase mvil es un lquido. Puede desarrollarse
en una columna o sobre un plano. La cromatografa lquida en la actualidad
emplea generalmente partculas muy pequeas y una presin de entrada
relativamente alta, denominndose entonces cromatografa lquida de alta eficacia
o de alta presin, cuyas siglas provenientes del ingls son HPLC.