UNIVERSIDAD POLITCNICA ESTATAL DEL CARCHI

FACULTAD DE INDUSTRIAS AGROPECUARIAS Y CIENCIAS

AMBIENTALES

DESARROLLO INTEGRAL AGROPECUARIO

BIOTECNOLOGA AGROPECUARIA

PRCTICA DE LABORATORIO

EXPLANTES

VERNICA BENAVIDES FERNANDO NAZATE

DIANA MONTAO JESSICA ORTEGA

6TO A
DR. LUIS PARRA
30 05 2016
INTRODUCCIN

Se puede definir al cultivo de tejidos vegetales como una herramienta de la

biotecnologa vegetal que asla partes de una planta y las hace crecer en un
medio de cultivo artificial in vitro en condiciones de asepsia para obtener
metabolitos, tejidos, rganos o plantas completas.

Debido a que las clulas vegetales presentan largos tiempos de duplicacin

comparadas con las clulas microbianas, se hace necesario mantener los
cultivos exentos de contaminacin por microorganismos. Una sola clula
bacteriana puede invadir y matar rpidamente a un tejido cultivado.
Adicionalmente, se menciona como una de las ventajas del cultivo de tejidos
vegetales la obtencin de plantas sanas libres de enfermedades, por lo cual se
deben extremar las condiciones de asepsia.

Los medios nutritivos utilizados en cultivo de tejidos vegetales deben contener:

sustancias nutritivas: sales minerales macro y micronutrimentos; adems una
fuente de carbono (usualmente sacarosa) para soportar una tasa de
crecimiento elevada y debido a que los tejidos vegetales in vitro no cuentan con
un sistema fotosinttico bien desarrollado, es decir, son parcialmente
hetertrofos. Tambin contienen Promotores del crecimiento: aminocidos,
vitaminas del complejo B y fitorreguladores (principalmente de tipo auxinas y
citoquininas). Todos los componentes del medio de cultivo estn disueltos en
agua y generalmente contienen agar o agentes gelificantes sintticos para
formar un gel que sirve de soporte al tejido. Por supuesto tambin se cultivan
tejidos vegetales en medios lquidos. Es de vital importancia tomar en cuenta a
los Reguladores microambientales: el medio de cultivo debe ajustarse a un pH
adecuado para la especie vegetal que se est cultivando., Lo usual es que
sean ligeramente cidos (5.5 a 6.5).[ CITATION Isi \l 12298 ]
OBJETIVOS

Objetivo General

Desinfestar y establecer tejidos vegetales in Vitro de una planta de papa

en condiciones aspticas para obtener conocimientos acerca de este
tipo de propagacin.

Objetivos Especficos

Esterilizar todo el material a utilizar en el cultivo de tejidos vegetales

para evitar que se desarrollen microorganismos que no son de nuestro
inters.
Localizar, disectar y sembrar in vitro diferentes tipos de explantes,
obtenidos de los rganos de la planta de papa.
Preparar el medio de cultivo en condiciones aspticas para poder
establecer en forma adecuada los explantes.
MARCO TERICO

El cultivo in vitro o la micropropagacin se inicia con la extraccin de pequeos

fragmentos de tejido tomados de diversas partes de la planta, tales como hojas,
races, segmentos nodales y gemas axilares, gemas florales y apicales.

Limpiar cuidadosamente con agua y jabn el material elegido (hojas, tallos,

races, etc.) dando preferencia a las partes jvenes y saludables. Una vez
limpios y desinfectados, los explantes son transferidos en condiciones
aspticas a un medio de cultivo adecuado; Agar Nutrient Potatoe y .

La reproduccin asexual es utilizada para obtener una gran cantidad de

plntulas a partir de una nica planta. Dependiendo del caso, se aprovechan
bulbos (cebolla), cormos (gladiolos), rizomas (helechos), tubrculos (papas),
tallos (banana), races (batata o boniato, manzana, mora), hojas (begonia,
espada de San Jorge), estacas (vid), etc. Las plantas obtenidas por
propagacin asexual o vegetativa son idnticas a la planta madre e idnticas
entre s. En otras palabras, son clones. [ CITATION Mal14 \l 12298 ]

Se denomina totipotencia a la capacidad de una clula de generar rplicas del

organismo del cual deriva. Esta propiedad caracterstica de las plantas permite
la supervivencia en condiciones ambientales desfavorables o luego del ataque
de herbvoros, plagas y patgenos.

Las semillas germinan y se desarrollan en el medio de cultivo hasta el

momento de la transferencia a tierra. Esta tcnica es aplicada comercialmente
en la produccin de orqudeas, pero en el laboratorio de enseanza conviene
comenzar con simientes mayores y que germinen ms rpido.

[ CITATION Mal14 \l 12298 ]

MATERIALES

Planta de papa Autoclave

5 cajas petris desinfectadas
5 frascos autoclavables de
100 ml
3 pipetas de 10 ml
Un frasco autoclavable de
1000 ml
Dos vasos de precipitacin
de 1000 ml
Estilete o bistur
Estufa
Esptula
Agitador magntico
Cmara de flujo laminar
Varilla de agitacin
pH metro de sobremesa
5 agujas de diseccin
Estante
Plstico
Lmparas fluorescentes
Cinta

SUSTANCIAS

Cloro al 5 % Medio de cultivo Agar

Agua destilada
destroza papa
Medio de cultivo salmoloyef
PROCEDIMIENTO

Primeramente, comenzamos a elaborar la cmara de germinacin para esto

utilizamos el estante colocamos o instalamos las lmparas fluorescentes con
sus respectivas instalaciones elctricas, y procedemos a colocar el plstico de
invernadero alrededor del estante sellando bien con la cinta para que no se
escape el calor que se genera en el interior de la cmara de germinacin.

Colocamos las cajas petri, las pipetas, la esptula, y la varilla de agitacin a

desinfectar para esto realizamos primeramente un lavado con alcohol y agua
destilada secamos bien y cubrimos con papel todos estos materiales y los
colocamos a la estufa para su desinfeccin mediante el calor para generar un
ambiente estril.

Los frascos autoclavables los colocamos en la autoclave para realizar la

esterilizacin de los mismos.

Realizamos el lavado de la planta de papa para sacar los diferentes explantes

para esto ponemos en cloro con agua en un vaso de precipitacin por 5
minutos finalizado esto colocamos a la planta en un frasco con agua destilada,
limpiamos bien la mesa y el lavabo con cloro y agua destilada y lo mantenemos
hay hasta que la cmara de fulo laminar termine su esterilizacin este proceso
dura 20 minutos.

Iniciamos con la preparacin de los dos medios de cultivos a utilizarse

realizamos 800 ml de agar destroza papa ponemos con 800 ml de agua
destilada en el frasco autoclavable de 1000 ml en el agitador magntico y
procedemos a colocar el agar destroza a 18 gr esperamos que se mezcle todo
manteniendo la temperatura y la velocidad del agitador magntico constante
por unos 10 a 15 minutos. Continuamos con la preparacin del medio de cultivo
salmoloyef colocamos en un frasco autoclavable de 1000 ml agua destilada en
800 ml ponemos el frasco en el agitador magntico esperamos a que comience
a calentar y vertemos todo el frasco de salmoloyef dejamos que se mezcle bien
ya que utiliza microorganismos eficientes vivos por unos 20 minutos.
Llevamos los medios cultivos al pH-metro de sobremesa para estabilizar el pH
en un 5.8 para el aumento del pH utilizamos cido sulfrico y para la
disminucin del pH usamos hidrxido brico.

Terminada la preparacin de los medios de cultivos procedemos con todos los

materiales previamente esterilizados a la zona de la cmara de flujo laminar
una vez hay comenzamos a realizar cortes con el bistur de las diferentes
partes de la planta de papa colocamos 10 ml en 2 cajas petri cada una el
medio de cultivo salmoloyef y 30 ml en dos frascos autoclavables cada uno, las
cajas petri y los frascos autoclavables sobrantes colocamos el agar nutriente
en las cantidades antes mencionadas tanto para las cajas petri como para los
frascos autoclavables.

Terminados los diferentes cortes realizados a la planta de papa procedemos a

colocarlos en los diferentes medios de cultivo sellamos bien las cajas petri y
procedemos a llevarlas a la cmara de germinacin que elaboramos y
observamos en el transcurso de los das su desarrollo.
CONCLUSIONES:

Es de gran utilidad conocer la preparacin de medios de cultivo por la

razn de que es la base para que los explantes que tomamos de las
plantas se mantengan nutridas y puedan desarrollarse de manera
correcta el medio de cultivo es un medio artificial para el desarrollo de la
prctica.
La seleccin del explante es un aspecto clave para tener xito en el
Cultivo de Tejidos, ya que, dependiendo de su ubicacin en la planta, del
tipo de tejido que contiene, de su edad cronolgica y fisiolgica, de su
contenido endgeno de hormonas, entre otros, se comportar de una
manera negativa o positiva.
Las porciones de tejido que tomamos son clulas sueltas, protoplastos,
esporas, granos de polen o semillas. Con excepcin de los vulos y el
polen, los explantes estn constituidos por tejidos o clulas somticas.
Nosotros como futuros profesionales en el campo agropecuario estamos
en la obligacin de conocer estas tcnicas de manejo de explantes
vegetales en biotecnologa para as ofrecer nuevas alternativas a los
productores de papa para mejorar la variedad y de esa manera reducir
las prdidas econmicas que son causadas por las patologas en las
plantas.

RECOMENDACIONES:

Cumplir con todos los parmetros y requisitos de la gua para que la

prctica de laboratorio sea funcional y bien hecha. Todos los estudiantes
debemos dominar los conceptos bsicos expuestos en la gua facilitada
por el docente.
Es recomendable y esencial que los medios de cultivo y materiales estn
completamente esterilizados, de esa manera evitar que otros
microorganismos puedan interferir con el proceso de propagacin de
alguna enfermedad en el medio artificial de cultivo.
Recolectar muestras de tejido vegetal vivo del cultivo de papa, ya que es
representativo el cultico de mayor trascendencia de la zona, para de
esta manera la prctica no se pierda y los explantes presenten
estructuras slidas para su futuro.
BIBLIOGRAFA
Malajovich, M. (2014). bteduc.bio.br. Obtenido de
http://bteduc.bio.br/guias_es/80_Micropropagacion_laboratorio_educacio
nal.pdf

Ovando, I. (s.f.). Manual de Cultivo de Tejidos Vegetales para Ingenieros

Biotecnlogos.