CONTROL DE LECTURA

Alumno: Fernando David Hernndez Soto Grado-Grupo: 9no A Carrera: Ingeniera en Biotecnologa Matrcula: 2014020001

Ttulo: Autor: Fecha del documento: Tema abordado:

1. Metabolic engineering of lactic 1. Maria Papagianni 1. October 2012 Bacterias acido lcticas
acid bacteria for the production Metabolitos
of industrially important
compounds

Resumen.
Las bacterias acido lcticas generan ATP por fermentacin de carbohidratos acoplados a fosforilacin a nivel de sustrato. Las dos vas principales
para el metabolismo de las hexosas son la va glicoltica (Embden-Meyerhofpathway), siendo el cido lctico el principal producto final
(metabolismo homo-fermentativo) y la va de la fosfocetolasa en la que otros productos finales como cido actico, cido propinico, CO2, etanol y
otros se forman adems de cido lctico (metabolismo hetero-fermentativo). L. lactis muestra el metabolismo homo-fermentativo en sustratos con
azcares metabolizados rpidamente, con ms del 90% del azcar metabolizado convertido en cido lctico. Desviacin de la homo-fermentativo
modo se observa en condiciones aerbicas o durante el metabolismo de galactosa o maltosa El cido lctico se utiliza como agente de conservacin
(acidificante) y potenciador del sabor por la industria alimenticia, como agente emulsionante e hidratante por la industria cosmtica, en la sntesis
de productos farmacuticos pticamente puros y como intermedio en procedimientos farmacuticos, y tambin por el curtido Industria. L cido
lctico tambin se utiliza industrialmente como el material de partida en la produccin de valiosos biopolmeros sintticos. Uno de ellos, el cido
polilctico se espera que sustituya a varios polmeros tradicionalmente derivados de la industria del petrleo en aplicaciones que van desde las
fibras de embalaje. La creciente demanda de cido polilctico ha llevado a un rpido aumento de la demanda de cido lctico en todo el mundo. Un
objetivo obvio para la ingeniera metablica con el objetivo de aumentar los niveles de produccin de cido lctico radica en el rea de utilizacin
de azcar y los subsiguientes flujos glicolticos y de lactato. Regulacin de la gluclisis y el cambio entre los diferentes modos de fermentacin han
sido ampliamente estudiados con L. lactis. Hoefnagel y colaboradores presentaron un modelo glucoltico detallado para L. lactis basado en
informacin bibliogrfica sobre cintica enzimtica. Los resultados publicados por Andersen et al. para el papel de la fosfofructoquinasa (PFK) sobre
el flujo glicoltico en L. lactis, muestran que la enzima particular desempea un papel importante ya que tanto los flujos glicolticos y lactato se
redujo proporcionalmente por una reduccin de dos veces de la actividad PFK. Un papel clave de PFK con respecto al control de flujo glicoltico
tambin fue informado por Neves et al. Papagianni et al. mostraron que el control del flujo glicoltico reside en gran medida en procesos fuera de la
va glicoltica en s, como el transporte de glucosa y las reacciones que consumen ATP, y las propiedades alostricas de enzimas clave como el PFK
tienen una influencia significativa en el control. Despus de la citada obra, Papagianni y Avramidis construido L. lactis cepas con actividad alterada
PFK, mediante la clonacin de la pfkA gen de Aspergillus niger o su versin truncada pfk13 que codifica un ms corto PFK1 fragmento, y estudi los
efectos de Aumento de los niveles de actividad de PFK en la capacidad glicoltica de L. lactis y produccin de cido lctico. Los resultados
demostraron el efecto directo de la actividad de PFK en el flujo glicoltico en L. lactis ya que un aumento de dos veces en la actividad especfica de
PFK (de 7.1 a 14.5 U / OD600) dio como resultado un aumento proporcional de las tasas mximas especficas de captacin de glucosa De 0,8 a 1,7
mmol s-1 g de CDW-1) y formacin de lactato (de 15 a 22,8 g de lactato (g CDW) -1 h-1).
Lactato deshidrogenasa (LDH) es la ltima enzima en la ruta que convierte el azcar en lactato en L. lactis. La interrupcin del gen respectivo (ldh)
conduce a la desviacin de la mayor parte del piruvato hacia productos mixtos. Andersen y colaboradores estudiaron la magnitud del control de
LDH sobre los flujos metablicos en clulas de L. lactis de tipo salvaje a travs de la construccin de una serie de cepas mutantes con actividades de
LDH que oscilaban entre el 1% y el 133% del nivel de actividad de tipo salvaje. Se estim que los coeficientes de control de flujo revelaban que la
LDH no ejerca ningn control sobre el flujo gliclico en el nivel de enzima de tipo salvaje y tampoco sobre el flujo catalizado por la propia enzima,
es decir, sobre la produccin de lactato. Su forma de ismero L o D. Se prefiere el cido L-lctico para aplicaciones alimentarias y farmacuticas y
como material de partida en la produccin de biopolmeros, mientras que el cido dlcico es txico para los seres humanos. Por lo tanto, los
estudios de ingeniera metablica se han centrado en la produccin de cido L-lctico puro por LAB homo-fermentativo. La inactivacin del gen D-
lactato deshidrogenasa (ldhD) por integracin cromosmica en el trabajo de Bhowmik y Steele dio como resultado la formacin de cido L-lctico
puro en Lactobacillus helveticus, aunque en cantidades comparables a la obtenida por la cepa de tipo salvaje. Trabajando tambin con Lb.
Helveticus, Kyl-Nikkil y colaboradores construyeron dos cepas ldhD negativas estables: una que llevaba una copia adicional del gen ldhL bajo el
control del promotor ldhD y la otra con la regin promotora ldhD suprimida. La mejora de la produccin de cido L-lctico en casi el 20% se logr en
el primer caso bajo condiciones de pH bajo. De manera similar, la inactivacin de ldhD en Lb. johnsonii result en la produccin de L-lactato puro.
Como con Lb. Helveticus, sobreexpresin del gen ldhL en Lb. Plantarum tuvo slo un pequeo efecto sobre la produccin de L-lactato. Davidson et
al. Trabajando con L. lactis aument el nmero de copias de los genes opern, que aparte de pfk incluye piruvato quinasa (pyk) y los genes ldhL, y
report slo un pequeo aumento en la produccin de cido L-lctico. La construccin de una cepa L. lactis sobreproducente de L-lactato por
mutagenizacin UV fue reportada por Bai y colaboradores. La sobreproduccin de L-lactato en ese caso fue a travs de una reduccin de la
actividad de la NADH oxidasa y el aumento de la tasa de captacin de glucosa.
Ilustracin 1Glycolysis (Embden-Meyerhof pathway).
Bibliografa
1. Kleerebezem M, Hols P, Hugenholtz J. (2000) Lactic acid bacteria as a cell factory: rerouting of carbon metabolism in Lactococcus lactis by metabolic
engineering. Enz Microbial Technol 26:840848
2. Smid EJ, van Enckevort FJ, Wegkamp A, Boekhorst J, Molenaar D, Hugenholtz J, Siezen RJ, Teusink B. (2005) Metabolic models for rational improvement of lactic
acid bacteria as cell factories. J Appl Microbiol 98:13261331
3. Kleerebezem M, Hugenholtz J. (2003) Metabolic pathway engineering in lactic acid bacteria. Curr Opin Biotechnol 14:232237
4. Sybesma W, Burgess C, Starrenburg M, van Sinderen D, Hugenholtz J. (2004) Multivitamin production in Lactococcus lactis using metabolic engineering. Metab
Eng 6:109115
5