Tesiscacao 141018222505 Conversion Gate01

MULTIPLICACIN DE HONGOS MICORRIZICOS ARBUSCULARES
MA NATIVOS DE CULTIVO DE CACAO (Theobroma cacao) EN
MAIZ (Zea mays) BAJO DISTINTOS TRATAMIENTOS
AGRONMICOS
LILIANA DAVILA ROCHA CARLOS
JULIO RAMOS FRAGOZO CINDY
MANUELA ROSALES MAESTRE
UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR FACULTAD DE
CIENCIAS BASICAS Y EDUCACION LICENCIATURA EN
CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION AMBIENTAL
VALLEDUPAR
2009
MULTIPLICACIN DE HONGOS MICORRIZICOS ARBUSCULARES
MA NATIVOS DE CULTIVO DE CACAO (Theobroma cacao) EN
MAIZ (Zea mays) BAJO DISTINTOS TRATAMIENTOS
AGRONMICOS
LILIANA DAVILA ROCHA CARLOS

JULIO RAMOS FRAGOZO CINDY
MANUELA ROSALES MAESTRE
Trabajo presentado como requisito para obtener el titulo de

Licenciados en Ciencias Naturales y Educacin Ambiental
Tutor
Laura Esther Rojas Martinez
Biloga
UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR FACULTAD DE

CIENCIAS BASICAS Y EDUCACION LICENCIATURA EN
CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION AMBIENTAL

VALLEDUPAR
2009
Nota de Aceptacin
Firma del Presidente del Jurado
Firma del Jurado
Firma del Jurado
Valledupar, Mayo 15 de 2009

A Dios
Por darme vida, salud, fortaleza y perseverancia en el transcurso de mi carrera.
A mis padres Atanasio Dvila y Celia Rocha

por haberme brindado su apoyo incondicional durante todo este tiempo.
A mi Ta Sebastiana Dvila
Mil gracias porque sin su apoyo, su tolerancia y su bondad no hubiera llegado a
ser lo que soy.
A la profesora Laura Rojas Martnez

Que dedic parte de su tiempo a la realizacin de este trabajo. Gracias a todos los
que confiaron en m y que de una u otra forma siempre estuvieron a mi lado
ayudndome.
Liliana Dvila
Rocha
A Dios
Por siempre iluminar el camino que he recorrido toda mi vida, gracias por ser mi
gua.
A mis padres
Saudy Maestre Morales Y Orlando Rosales Castro, a quienes les debo todo lo que
soy, son mi admiracin porque me han demostrado que nunca se debe uno de
rendir y buscar siempre nuevas oportunidades para salir adelante y las
adversidades tomarlas como un proceso de aprendizaje de la vida cotidiana.
Los amo y gracias por estar siempre conmigo en las buenas y en las malas, son la
bendicin ms grande que me ha dado Dios
A mis hermanos y familiares

Adriana, Andrs Felipe Y Joaqun quienes juntos crecimos y compartimos muchas
vivencias, alegras y tristezas. Espero seguir compartiendo la dicha y la felicidad
que nos mantiene unidos.
A la Biloga Laura Rojas Martnez

A quien admiro y respeto, gracias por tu gua en este difcil campo de la
investigacin micorrizica, adems de brindarme su amistad. Que Dios la bendiga
siempre.
A Carlos Julio Ramos Fragozo

Por su amor, compaa y ayuda en este proceso.
Cindy Rosales
Maestre
A Dios, a mis padres y a los sueos que se hicieron realidad
Carlos Julio Ramos Fragozo

AGRADECIMIENTOS
Los autores de este proyecto expresan su agradecimiento a:
Al propietario de la Finca Monte grande de Pueblo bello Cesar por habernos
permitido obtener las muestras del suelo de los cultivos de cacao.
A los trabajadores del almacn del laboratorio de Ciencias Naturales Freddy
Prez Domnguez y Luis Gonzales Fernndez por habernos facilitado las
herramientas necesarias durante la realizacin de este proyecto.
A la Universidad Popular del Cesar, por brindarnos la oportunidad de superarnos,
capacitarnos y crecer intelectualmente, para poder convertirnos en los prximos
profesionales del futuro.
Las diferentes personas que intervinieron para la recoleccin de las muestras, la
cual fue de gran ayuda para llevar a cabo los diferentes estudios y procesos
necesarios para la realizacin de este trabajo.

RESUMEN
En Colombia, los estudios del efecto de los sustratos y el tipo de cultivo trampa
adecuado para la multiplicacin de micorrizas arbusculares MA son escasos,
debido a ello, el objetivo del presente trabajo consisti en multiplicar hongos
micorrizgenos nativos y as obtener un inculo con una diversidad de
microorganismos fngico endfitos nativos adaptados a nuestro sistema
agroecolgico que pueda evaluarse posteriormente en cultivos de cacao bajo las
condiciones edficas y climticas de la regin y aumente la productividad de una
manera sostenible.
En los sistemas de cacao de la regin, la baja productividad ha generado el
planteamiento de estrategias como es el uso de microorganismos para estimular
su crecimiento, donde se destacan los hongos micorrizgenos. Estos organismos
pueden ser obtenidos, seleccionados, multiplicados e incorporados al suelo en
forma de inculos. El proceso de inoculacin es complejo, por una parte, implica
disear mtodos de aislamiento, seleccin, multiplicacin e incorporacin
adecuados para cada especie o propsito. En este trabajo se evalu la
multiplicacin de esporas de hongos micorrzicos arbusculares MA nativos
obtenidos de cultivo de cacao (Theobroma cacao) en plantas trampas de maz
(Zea mays) fertilizadas y no fertilizada. El ensayo se mantuvo en vivero durante
cuatro meses con condiciones de riego controladas. En cada una de las unidades
experimentales se evalu nmero de esporas/g de suelo seco, porcentaje de
colonizacin y las variables agronmicas como peso seco y altura de las plantas.
Dentro de los resultados se obtuvo que las plantas trampas de maz (Sea mays)
inoculadas respondieron significativamente a la infeccin y esporulacin por los
hongos MA nativos, mostrando mayores niveles de infeccin de micorriza.
El mayor rendimiento en la tasa de crecimiento y porcentaje de materia seca fue
alcanzado por el tratamiento de las plantas inoculadas no fertilizadas.
El gnero micorrzico predominante con mayor abundancia relativa dentro de la
poblacin de esporas aisladas en los tratamientos fue Glomus
Palabras claves: micorriza, inculo, cacao, fertilizacin, infectividad, esporas.

CONTENIDO
DEDICATORIA
RESUMEN
INTRODUCCION 17
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 19
2. JUSTIFICACION 21
3. OBJETIVOS 24
3.1 Objetivo General 24
3.2 Objetivos Especficos 24
4. MARCO TEORICO 25
4.1 Antecedentes de la Investigacin 25
4.2 Bases Tericas 30
4.2.1 la micorriza 30
4.2.2 Tipos de micorrizas 31
4.2.2.1 Ectomicorriza 31
4.2.2.2 Endomicorriza 32
5. MATERIALES Y METODOS 46
5.1Obtencion de esporas nativas MA de cultivo de cacao. 46
5.1.1 Toma de muestras de suelo. 46
5.1.2 Preparacin de l pre-Inoculo 47
5.1.2.1 Tamizaje-Flotacin-Filtracin 47
5.2.2.2 Secado de las muestras 48

5.2 Multiplicacin de esporas nativas en plantas trampas 50
5.2.1 Material vegetal 50
5.2.2 Preparacin de sustratos 51
5.2.3 Siembra 52
5.2.4 Aplicacin del pre- inculos 53
5.2.5 Manejo de los tratamientos 53
5.3.5 Evaluacin de la infectividad y efectividad de la multiplicacin de
los hongos MA nativos 55
5.3.1 Numero de esporas por gramo de suelo 56
5.3.2 Determinacin de porcentaje de infeccin 58
5.3.2.1 Tincin de las Races 58
5.3.2.2 Evaluacin de la colonizacin micorrizica por el mtodo de
intercepto de McGonigle 59
5.4. Identificacin de esporas de hongos MA multiplicados en el
cultivo trampa 64
6. RESULTADOS Y DISCUSIONES 65
6.1 Porcentaje de infeccin micorrizal 65
6.2 Altura de las plantas 72
6.3 Determinacin de biomasa 76
6.4 Anlisis de diversidad de hongos micorrzicos 78

7. CONCLUSIONES 82
RECOMENDACIONES
BIBLIOGRAFA
ANEXOS
LISTA DE FIGURAS
Figura 1: Proceso de formacin de micorriza arbuscular (MA) 35
Figura 2: Diversidad en forma de esporas de todos los gneros de
Hongos micorrzicos arbusculares MA 43
Figura 3: Toma de las muestras de suelo en el municipio de
Pueblo Bello- Cesar 46
Figura 4: Tamizado de las diferentes muestras 44
Figura 5: Semillas de maz (Zea mays)
Figura 6: Preparacin de los sustratos y tratamiento 49
Figura 7: Siembra y aplicacin del inculo en los diferentes tratamientos 52
Figura 8: Aplicacin del fertilizante a los diferentes tratamientos 55
Figura 9: Flotacin- filtracin de las muestras de suelo 56
Figura 10: Papel filtro con los sedimentos despus del filtrado y corte
de la misma para observar al microscopio 57
Figura 11: Mtodo para la tincin de las races 59
Figura 12: Races de las diferentes plantas en laminas portaobjetos 60
Figura 13: Corte de la raz y parte area de la planta 57
Figura 14: Peso de las races y parte area de las plantas 62
Figura 15: Vescula 65
Figura 16: Arbsculos 66

Figura 17: Hifas 66
Figura 18: Comparacin de la altura de plantas del tratamiento 2
y tratamiento 3 73
Figura 19: Crecimiento de parte foliar y raz de las plantas con micorriza y
sin micorrizas 74
Figura 20: Entrophospora 79
Figura 21: Acaulospora 79
Figura 22: Glomus 79
Figura 23: Archaeospora 79
Figura 24: Scutellospora 80
Figura 25: Gigaspora 80

LISTA DE GRAFICAS
Grafica 1: Porcentaje de infeccion por hifas 67
Grafica 2: Porcentaje de infeccin por arbsculos 64
Grafica 3: Porcentaje de infeccin por vesculas 69
Grafica 4: Altura de las plantas en los tratamientos 1, 2 y 3. 73
Grafica 5: Porcentaje peso seco parte area 76
Grafica 6: Porcentaje peso seco de la raz 76
Grafica 7: Porcentaje de esporas por gnero en cada uno de los
tratamientos 78
LISTA DE CUADROS
Cuadro 1: Ubicacin taxonmica y gneros de hongos formadores de
micorriza arbuscular 42
Cuadro 2: Proporciones del fertilizante Nutrifoliar por g/L 54

ANEXOS
Anexo 1: Resultados del peso seco de la parte area de las plantas en los
diferentes tratamientos 91
Anexo 2: Resultados del peso seco de la raz de las plantas en gramos 91
Anexo 3: Altura de las plantas a los 45 das de edad 92
Anexo 7: Nmero de esporas en 10 gr de suelo 94
Anexo 8: Infeccin por hifas 94
Anexo 9: Infeccin por arbsculos 95
Anexo 10: Infeccin por vesculas 95
Anexo 11: Nmero de vesculas por laminas 96
Anexo 12: Porcentaje de esporas por genero 96
Anexo 13: Anlisis fisicoqumico del suelo 97

INTRODUCCION
En la actualidad en los pases europeos y de Amrica latina, existe una alta
demanda por los productos orgnicos (Fraire, 2002). Colombia ha mostrado
inters para producir productos agropecuarios con insumos econmicos e inculos
para el bienestar de la poblacin consumidora y de la familia de la poblacin ms
vulnerable.
El cultivo de cacao es un producto agroindustrial que presenta buena aceptacin
y demanda. En los ltimos aos los productores han sufrido prdidas en las
plantaciones debido a los elevados costos de insumos, bajo nivel tecnolgico,
deficiencia de nutrimento en las plantaciones, altas incidencias de plagas y
enfermedades dainas como moniliasis (Barreras, 2007). En la actualidad es
necesario buscar tecnologas alternativas que estn al alcance de los productores,
que permitan minimizar costos de produccin e incrementar la productividad del
cultivo mediante la agricultura alternativa y reactivar las plantaciones mediante la
reconversin de cacao tradicional a la produccin orgnica competitiva.
Una de estas alternativas, es la aplicacin de microorganismos con alto potencial
biofertilizantes que puedan mantener la sostenibilidad de los cultivos. Las
micorrizas son una de las principales asociaciones simbiticas de la naturaleza ya
que las races de la mayora de las plantas vasculares son colonizadas
extensivamente por hongos micorrcicos vesculo arbuscular (MA). Estos son
organismos biotrficos obligados que pueden estimular el crecimiento y desarrollo

de las plantas al mejorar la nutricin de stas, determinando un incremento
importante en la absorcin de nutrimentos inmviles (Stribley, 1990; Bethlenfalvay
et al., 1991).
El reconocimiento, establecimiento y eficiencia de una asociacin micorrizica
dependen de factores como: a) tipo de hongo (su tasa de crecimiento interior y
exterior en la raz), b) planta hospedante (como genotipo, exudados radicales,
geometra radical, presencia de pelos radicales y de races laterales) y c) los
factores biofisicoqumicos del suelo (pH, humedad, textura, fertilidad, tipo de
microorganismos) (Graham et al., 1981; Estaol, 1987; Tester et al., 1987; Smith y
Giaginazzi, 1988; Varela y Estrada, 1991).
Debido a la gran variedad de especies MA es importante, determinar cual de estas
MA sera ms idnea para un cultivo especifico, todo esto con el fin de poder llegar
a la obtencin de una planta que presente ciertas caractersticas que le permita
adaptarse de mejor manera a las condiciones en el momento de su trasplante a
terreno definitivo con una disminucin en la aplicacin de fertilizantes inorgnicos.
Teniendo en cuenta esta problemtica, el objetivo del presente trabajo consisti
en multiplicar hongos micorrizgenos nativos, tiles para el posterior
establecimiento de un inculo potencial de uso regional en plantaciones de cacao.

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La produccin de cacao en Colombia se desarrolla en unidades productivas
pequeas en donde el cacao constituye una de las fuentes alternativas de
ingresos. En el Cesar, especficamente en la zona de Pueblo Bello, no es la
excepcin. Las plantaciones cacaoteras estn establecidas en fincas familiares,
donde la tecnologa empleada es baja, no se llevan a cabo labores de fertilizacin,
riego, drenaje y siembras (renovaciones). La fertilizacin se realiza solo en el
momento de la siembra, pero durante el desarrollo del rbol esta es casi nula. La
Corporacin Colombiana De Investigacin Agropecuaria (CORPOICA)
recomienda, fertilizar dos o tres veces al ao, actividad poco difundida en estas
fincas cacaoteras, lo que se constituye en una ventaja a la hora de aplicar
tecnologas limpias, como biofertilizantes que mejoren la productividad y
sostenimiento de los cultivos sin daar los ecosistemas.
Adicionalmente, las labores culturales realizadas por los agricultores son
precarias dando va libre para la propagacin de enfermedades como la
moniliasis, que ya ha sido diagnosticada en Pueblo Bello- Cesar y que se
constituye como la principal limitante para la produccin de cacao (Barreras,
2007). Esta enfermedad es causada por el hongo Moniliophthora roreri, que
ataca exclusivamente frutos; se estima que ocasiona prdidas superiores al 40%

en la produccin nacional que, estimada en valor comercial de $120.000 millones
al ao.
Todos estos factores contribuyen a la disminucin de la produccin en las
plantaciones de cacao. Departamentos como Nario, Tolima, Cundinamarca,
Meta y Cesar registran tasas decrecientes en la produccin de cacao. El
departamento del Cesar produjo; 633 toneladas en el ao 2000 y 513 toneladas
en el 2004 con un crecimiento de produccin de -3.7% (Barreras, 2007).
Debido a los precarios manejos agronmicos y la proliferacin de enfermedades
podemos identificar que la disminucin de la productividad de las plantaciones de
cacao es un problema de importancia econmica a nivel departamental y nacional,
teniendo en cuenta que el consumo de este producto es mucho mayor que la tasa
de produccin, las micorrizas se constituyen como una herramienta til para la
sostenibilidad y aumento de produccin de los cultivos de cacao.

2. JUSTIFICACIN
Los fertilizantes qumicos son sustancias que enriquecen el suelo y promueven el
desarrollo vegetal, son de gran ayuda si, se quiere lograr un mejor rendimiento y
produccin en los cultivos. Muchos agricultores no realizan la aplicacin de estos
productos debido a los altos precios que en muchas ocasiones registran.
En los suelos naturales todas las especies forestales incluyendo el cacao forman
asociaciones simbiticas y mutuamente benficas entre sus races y hongos
endfitos especializados (Guerrero et al, 1996). Esta formacin raz-hongo es
llamada micorriza y cuenta con un alto potencial biofertilizante. El 95% de las
plantas dependen de las micorrizas para crecer y sobrevivir, lo que es evidenciado
por la baja supervivencia de plantas no micorrizadas cuando son plantadas en
suelos con carencia de hongos micorrzicos (Alarcn, 2007).
En la actualidad hay una gama de productos biofertilizantes internacionales y
algunos nacionales a base de MA, la efectividad de la inoculacin depender del
balance de factores ecofisiolgicos en el sistema planta-suelo, lo cual significa
que un mismo inculo puede desencadenar efectos muy variados sobre un cultivo,
dependiendo del tipo de manejo agronmico que se realice. Por lo tanto, no se
puede generalizar el efecto de un tipo de micorrizas sobre todos los rboles ni
sobre todos los ecosistemas. (Molina L. y Col.2005).

Sieverding (1990) afirman que existe un desconocimiento acerca de la efectividad
de las especies nativas frente a las introducidas. Aunque la efectividad de la
inoculacin para la mejora y mantenimiento de la salud y fertilidad del suelo, as
como su efecto benfico en la produccin y el crecimiento de plantas de inters
han sido extensivamente demostrados para diferentes sistemas a nivel de
investigacin (Jeffries et al., 2003; Koide & Mosse, 2004), los reportes de
efectividad derivados de aplicacin masiva en campo de inculo producidos para
tal fin son ms escasos.
Read (1991) hace un planteamiento biogeogrfico segn el cual cada tipo de
micorriza, tendra un juego particular de atributos y funciones adaptados a un
ecosistema y ambiente edfico particular la cual hace un uso eficiente del fsforo
del suelo y de los fertilizantes fosfricos, optimizar la productividad de los suelos y
cultivos con niveles bajos de insumos, hace posible y rentable la produccin
vegetal en condiciones adversas (de fertilizacin, presencia de metales pesados,
desertificacin), ayudar a establecer cultivos en suelos erosionados o degradados.
Departamentos como Bolvar y Cesar son zonas que se han caracterizado en los
ltimos aos (1990-2006) por presentar especialidades de cacao en grano nico
reconocidas por empresa internacionales como producto con caracterstica nicas
y que por lo tanto puede ser transado a precios ms altos en los mercados
internacionales. Sin embargo uno de los principales problemas que afecta la

produccin de estos departamentos es la enfermedad fungosa conocida
tradicionalmente como la moniliasis, que es el factor ms limitante para la
produccin de cacao en todo el pas, causando graves prdidas representadas en
ms del 40% de la cosecha anual (Barreras, 2007)
Ante todas estas dificultades presentadas en la regin del Cesar especficamente
en Pueblo Bello, reconocida como zona potencial de alta produccin de cacao. El
proyecto en cuestin se propone obtener un inoculo como biofertilizante,
compuesto de hongos nativos (MA), con el objeto de mejorar las condiciones
edficas de las plantaciones y proporcionar muchos beneficios a las plntulas y a
los rboles adultos, especialmente en la obtencin del agua y los nutrientes que
mejoren la productividad del cultivo y mayor tolerancia a patgenos que
actualmente afectan a estos cultivos en el Cesar.

3. OBJETIVOS
3.1 Objetivo General
Evaluar la produccin de esporas de hongos Micorrizicos Arbusculares (MA)
nativos obtenidos de cultivo de cacao (Theobroma cacao) en plantas trampas de
maz (Zea mays) fertilizadas y no fertilizadas.
3.2 Objetivos Especficos
Obtener esporas de hongos MA nativos del cultivo de Cacao del municipio de
Pueblo Bello- Cesar.
Multiplicar las esporas nativas utilizando plantas trampa de maz (Zea mays).
Evaluar la infectividad y la efectividad de los hongos MA nativos obtenidos
del cultivo trampa de maz (Zea mays). Fertilizadas y no fertilizadas.
Identificar las esporas de los hongos MA nativos obtenidos y multiplicados en el
cultivo trampa de maz (Zea mays).

4. MARCO TERICO
4.1 Antecedentes de la Investigacin
La produccin a gran escala de inculos de hongos MA se inici en los aos 80
90s, habiendo en la actualidad un amplio nmero de compaas registradas para
este fin en todo el mundo (Dalpe & Monreal, 2003). Los sistemas de produccin
han evolucionado considerablemente en los ltimos aos, de tecnologas
relativamente simples a otras ms complejas, como los mtodos in vitro.
Actualmente, el inculo es producido para propsitos comerciales de diversas
maneras.
En general, la investigacin en el rea de microbiologa en Colombia ha tenido un
buen desarrollo en campos biotecnolgicos orientados a la solucin de
necesidades particulares relacionadas con las condiciones tropicales del pas, la
caracterizacin de microflora de plantas nativas de nuestros ecosistemas con
aplicacin en la produccin de biofertilizantes. Se puede decir que se han obtenido
desarrollos con impacto a nivel econmico en diferentes campos.
En el estudio de los hongos que forman endomicorrizas, principalmente de tipo
arbuscular MA, la Universidad Nacional Palmira ha estado comprometida desde
el ao1983 y en 1984, los estudios se enfocan hacia el conocimiento de MA en
agroecosistemas de importancia estratgica como es el caso del caf, yuca,

gramneas, hortalizas y frutales, indagando en primera instancia sobre especies
nativas y tambin sobre respuestas a inoculaciones con estos hongos. En esta
sede existe como programa de investigacin el estudio de endomicorrizas en
agroecosistemas y ecosistemas, con varias lneas de trabajo; sin embargo, el
trabajo en el campo ha mostrado que los MA son un componente del sistema y
que slo en la medida que se integra su manejo a los otros componentes, es
posible hacer un uso de sus potencialidades.
Existen instituciones en donde se estn adelantando procesos de obtencin de
patentes a nivel nacional como es el caso del Instituto de Biotecnologa de la
Universidad Nacional de Colombia - IBUN.
El segundo caso de estudio est representado por CENICAF quien ha
establecido un modelo para la produccin de diferentes microorganismos
biocontroladores de plagas y enfermedades en el cultivo de caf, adems de
adelantar investigaciones relacionadas con el empleo de microorganismos como
biofertilizantes con miras a establecer una caficultura biolgica. El modelo de
convenio internacional con la Comunidad Europea (proyecto INCO) firmado entre
varios pases tiene como fin la caracterizacin y produccin de inculo micorrzico
all se observa que a partir de la obtencin y caracterizacin de micorrizas vesculo
arbusculares (MA) se establece una coleccin cuyo manejo tecnolgico (cultivo

monoaxnico), inoculacin y formulacin favorece el establecimiento de musceas
(pltano y banano) micropropagadas.
En Colombia, el Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT) inici trabajos
de investigacin con micorrizas MA desde la dcada de los 80, donde se evalu
su importancia agronmica en cultivos tropicales como yuca y algunas pasturas.
Se iniciaron trabajos de recoleccin de hongos nativos, aislamiento e identificacin
de micorrizas originarias del Valle de Cauca, Llanos Orientales, entre otras. Como
resultado de estas investigaciones se form un Banco de Germoplasma, y algunas
recomendaciones relacionadas con su biodiversidad potencial de uso en la
agricultura. Existen tambin experiencias positivas con la aplicacin de inculos de
micorrizas (Glomus, Scutellospora y Entrophospora) en frutales tropicales.
La Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria (CORPOICA) es una
entidad con gran trayectoria y reconocimiento en el pas. Mediante convenio con el
Ministerio de Agricultura y el Instituto Colombiano Agropecuario (ICA), administra
el banco de germoplasma de microorganismos (4.500 cepas) que son de inters
en biofertilizacin y fotoproteccin, han obtenido biofertilizantes (Rhizobium,
Bradyrhizobium, micorrizas).
Ejemplo de este trabajo es el realizado por los tcnicos de la Regional Siete de
CORPOICA, quienes realizaron aislamientos de micorrizas en muestras de suelo

de la rizsfera de plantas de cacao, tomadas a diferentes altitudes de las zonas de
Ro negro, Landazur, El Carmen y San Vicente de Chucur. Las micorrizas fueron
analizadas en el laboratorio de microbiologa del Centro Internacional de
Agricultura Tropical (CIAT), concluyendo que para la multiplicacin e inoculacin
de estos microorganismos benficos en el cultivo de cacao, es aconsejable la
utilizacin de micorrizas nativas, ya que tienen mejor capacidad de adaptacin al
medio; si se aplican micorrizas forneas se corre el riesgo de que ocurra
competencia entre ellas.
En Colombia, la diversidad de climas y ecosistemas hace que la multiplicacin de
los cultivos vare por las diversas condiciones agroecolgicas, y estos factores
son las mayores limitantes para la produccin sostenible y eficiente. Los
microorganismos tienen un gran potencial para contribuir a la solucin de mltiples
problemas de la agricultura, dentro de los cuales, los biofertilizantes con base en
Micorrizas Arbusculares MA son una alternativa para reducir prdidas en los
procesos de multiplicacin de especies. Estas tecnologas tienen aplicacin de
fcil transferencia para los pequeos productores ya que son de bajo costos.
En la costa atlntica se est incursionando en el estudio microbiolgico y la
aplicabilidad que tienen estos sobre el suelo, CORPOICA ha financiados estudios
microbiolgicos con nfasis en micorrizas, especialmente con el objeto de
aumentar la produccin de especies de importancia econmica en la Costa

Atlntica como pltano, algodn, yuca y ame, mediante el desarrollo e
implementacin de metodologas de manejo y produccin, que incluyan las
micorrizas arbusculares.
Sin embargo en el departamento del Cesar hay mucho por hacer acerca de la
multiplicacin y obtencin de especies nativas de hongos MA que sirva para
mejorar la produccin y sostenibilidad de un cultivo especfico. Estudios
financiados por la Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria
(CORPOICA) ha incursionado en el estudio de las micorrizas sobre suelos
algodoneros deteriorados en Codazzi y san Juan del cesar, obteniendo respuestas
positivas en las plantas tratadas.
Las micorrizas tienen gran potencial para contribuir a una produccin sostenible.
Sin embargo, se resalta la importancia de profundizar en la investigacin sobre el
uso de micorrizas nativas o del sitio, lo que implica conocer ms sobre la relacin
hongo-planta, buscando aislar cepas especficas que permitan potencializar el
crecimiento y productividad de los rboles en determinados agroecosistemas y
evaluar las interacciones de estas con otros microorganismos de dicho suelo.
El estudio de microorganismos en un cultivo con produccin sostenible y sin
aplicacin de agroqumicos como ocurren en las plantaciones de cacao de Pueblo
Bello - Cesar. Se pueden detectar actividades rizosfrica importantes y reconocer

microorganismos promisorios para mejorar el estatus de nutrientes en el suelo y la
productividad en los cultivos, informacin que se divulgara en la zona estimulando
ms la incursin en el establecimiento de ms hectrea cultivable con este
sistema agroecolgico con menos costos de insumos para mantener la
produccin.
En la evaluacin del proceso de multiplicacin de hongos MA, se han usado
diferentes tipos de inculos, entre ellos nativos de agroecosistemas bananeros del
Urab (Antioquia-Colombia),con diferentes plantas hospedadoras para determinar
la infectividad y efectividad sobre plantas de banano (Musa AAA cv. Gran Enano).
La colonizacin micorrizal promedio general de los MA a las plantas trampa fue de
37,76. Se ha observado que las plantas micorrizadas se benefician en diferente
magnitud. (Usuga Osorio; Castaeda Snchez 1999)
4.2 Bases Tericas
4.2.1 La micorriza
Las micorriza debe entenderse como una estructura especializadas con diversas
funciones, la cual se origina al asociarse, en forma mutualista, diversos grupos de
hongos especficos con el sistema radical de la planta.

4.2.2 Tipos de micorrizas
4.2.2.1Ectomicorrizas
Las ectomicorrizas crecen en el exterior de las races formando una autntica
capa que envuelve a aquellas y que se llama el manto creciendo hacia el interior
entre las clulas formando retcula que recibe el nombre de red de Harting.
Las ectomicorrizas en general son bastante especficas, lo que quiere decir que
una especie de hongo solo puede vivir con una o unas pocas especies de plantas.
Las esporas slo germinan en contacto con una raz y las esporas sin germinar
tienen un perodo de viabilidad tambin corto. Adems los hongos de este grupo
son adems especficos a la planta, en general especficos al medio (suelo, clima,
etc.) y en general mucho ms sensibles a las agresiones externas que las
endomicorrizas.
4.2.2.2 Endomicorrizas
Son poco especficas, lo que quiere decir que una especie puede infectar a un
gran nmero de especies vegetales. Son mucho menos sensibles a las agresiones
externas que las ectomicorrizas, sus esporas germinan con facilidad alejadas de
races vivas y pueden crecer considerablemente sin contacto con ninguna raz, lo
que les permite localizar a stas y pueden sobrevivir durante dilatados perodos de
tiempo (meses) sobre trozos de raz si otras condiciones no son adversas. Como
su nombre indica viven en el interior de la raz, en los espacios intercelulares y si
emiten hifas al interior de las clulas que se subdividen formando estructuras en
rbol (arbsculo) dan origen al grupo de hongos micorrzicos ms abundante que
se conoce.
Proceso de infeccin de la micorriza
La infeccin o colonizacin de una raz por parte de un hongo micorrizgeno es un
proceso que involucra una secuencia de etapas reguladas de una precisa
interaccin entre endosimbionte y hospedero.
La pre-infeccin est asociada a la actividad de los propgulos infectivos
presentes en el suelo que circunda la raz. Dichos propgulos pueden ser esporas
o micelios fngicos. Este ltimo, generalmente se encuentra vinculado a raicillas
de plantas vivas o segmentos de raz infectada.
La penetracin se inicia con la formacin de un punto de entrada que se
caracteriza por el desarrollo de un abultamiento o apresorio en el punto de
contacto sobre la superficie de la raz. Cada espora genera un solo punto de
entrada, mientras que un segmento de raz puede eventualmente generar ms de
uno. No es del todo claro si el mecanismo de penetracin esta mediado por un
evento enzimtico, por un evento mecnico o por una combinacin de ambos.
Una vez que penetre el hongo se asegura un proceso proliferativo que conduce
al establecimiento de una unidad de colonizacin que se puede extender hasta un
centmetro de distancia a partir del punto de penetracin. El avance de la infeccin
est restringido a la epidermis y el parnquima cortical. La unidad de colonizacin
avanza mediante el crecimiento de hifas aseptadas que se extienden por entre las
clulas corticales y que generan estructuras caractersticas como los arbsculos y
las vesculas
Algunas semanas despus iniciada la infeccin, el hongo est en condiciones de
esporular, lo cual supeditado a las condiciones ambientales del suelo en particular
la humedad parece ser un factor regulador de importancia, ya que se ha visto
que le estrs hdrico en el suelo dispara la esporulacin (Guerrero, et, al 1996).
Las hifas externas estn en capacidad de reinfectar el mismo sistema de raz del
cual se origina. Algunas de estas hifas generan puntos de entrada que provocan
nuevas unidades de colonizacin, lo cual supone la infeccin avanza a lo largo de
la raz a travs de unidades de colonizacin discontinuas. Este proceso de
proliferacin se puede trasladar a otros sistemas de raz vecinos de la misma o
diferente especie de planta. Se ha establecido que los hongos micorrizgenos se
pueden mover en el suelo a razn de 0.6 -3.2 m/ao, lo cual da una idea de las
posibilidades de expansin de la infeccin micorrizica (Powell, 1970, citado por
guerrero, 1996). Figura 1

Figura 1: Proceso de formacin de micorriza arbuscular (Guerrero, et, al 1996)
Las ventajas de la aplicacin de micorrizas en un sistema agroecolgico son:
Mayor crecimiento y desarrollo de las plantas en beneficio de la adaptacin
y eficiencia de stas al facilitar una mayor absorcin de nutrientes minerales del
suelo.
La capacidad de la raz para absorber nutrientes del suelo unido al movimiento de
estos en el suelo, permiten su absorcin por la planta. La tasa de absorcin de
iones de alta movilidad en el suelo (como el nitrato) est determinada por la
especie vegetal o la variedad, y la de iones poco mviles, como el P, Zn, Mo y en
menor grado el K, S y NH4, dependen ms de la densidad de las races por
volumen de suelo.
En este caso, la absorcin de los nutrientes la determina la morfologa de la raz y
el crecimiento del hongo micorrcico en el suelo. Las hifas del hongo no son
capaces de absorber del suelo nutrientes diferentes a aquellos que estn
disponibles para la raz, bien sea en la solucin del suelo o las rpidamente
intercambiables. La micorriza solamente aumenta la eficacia de la absorcin de
nutrientes por la planta; as, las plantas cultivadas y asociadas con hongos
eficientes pueden usar el abono aplicado entre 2 y 10 veces ms que las plantas
micorrizadas y abonadas (Mosse y col., 1986).
La solucin del suelo contiene una concentracin relativamente baja de P y
alrededor de la raz se forma rpidamente una zona carente de este elemento.
Como la hifa de los hongos formadores de la micorriza vesculo-arbuscular (MA)

crecen mas all de la zona agotada de la raz, permiten que el suelo sea mas
intensivamente explorado. El P, una vez absorbido por la hifa en forma de
ortofosfato, es transportado por polifosfato hacia el interior de la raz donde es
liberado (Herrera y col., 1984).
Mejora el reciclado de nutrientes en el suelo.
La micorriza interacta significativamente en los reciclajes de nutriente por la
intensiva exploracin del suelo a travs de las hifas de los hongos MA,
incluyndose la perdida de nutrientes por la fijacin qumica o la lixiviacin,
despus de la mineralizacin de la materia orgnica.
Aumenta la eficiencia de otros microorganismos que tienden a asociarse
con ellas, tales como Rizhobium, Azospirillum, Azotobacter, que a su vez
incrementan la captacin de nutrientes para las plantas.
(Fitter, 1998), encontr que las micorrizas interactan con otros organismos del
suelo y estas interacciones pueden inhibir (crean competencia entre ellos) o
estimular (forman asociaciones mutualistas). Sin embargo, en muchos casos no
ha sido posible definir completamente dichas interacciones. Entre los organismos
mencionados pueden estar hongos patgenos (a nivel del micelio interno),
protozoarios, nemtodos y artrpodos.

Mejora el control de enfermedades y la disminucin en gasto de insecticidas
y funguicidas, con el uso de plantas micorrizadas.
En investigaciones realizadas, se encontr que la mezcla de bacterias del genero
Rhizobium con micorrizas, dan mayor vigor a la planta, lo cual la hace ms
resistente al ataque de patgenos, porque las micorrizas forman una barrera fsica
impenetrable en la superficie de las races, variando en grosor y densidad
(INGHAM, 2003). Adems se encontr que especies de micorrizas parasitan a
otros hongos como es el caso del Trichoderma y lo destruyen. Sin embargo
existen interacciones donde las micorrizas pueden sobrecolonizar la planta y
convertirse en parsitos ( FITTER AH, GARBAYE J, 1994 ).
Produce plantas ms resistentes al ataque de patgenos.
Varios autores concuerdan en que las micorrizas pueden contribuir a la salud de la
planta y a su productividad al aumentar el desarrollo de tolerancia a enfermedades
y parsitos (READ D. J. 1991). Las ectomorrizas protegen la raz ya que reciclan
los carbohidratos, aminocidos y otros compuestos producidos por las races,
capaces de atraer agentes patgenos. Adems proveen una barrera fsica a
patgenos debido a la formacin del manto, en el cual las hifas individuales o
cordones de hifas crecen hacia afuera, introducindose en el suelo, y hacia
adentro, intercalndose entre las clulas del crtex de la raz a travs de la lmina
media, formando un entramado denominado red de Harting.

En esta red el micelio deja de estar tabicado, es xenofitico, lo que se interpreta
como ventaja para acelerar los procesos de intercambio. La red de Harting puede
sintetizar compuestos como el diatretinenitrilo, con efecto de tipo antibitico. As
mismo, (RADDATTZ E. 2002) reporta tolerancia contra ataques de nemtodos.
Facilitan la adaptacin a suelos salinos.
La salinidad es un factor limitante de la produccin agrcola, los estudios sobre
micorrizas y tolerancia de las plantas a este estrs es relativamente reciente.
Resultados reportados por Barea, 2003, demuestran el efecto inducido por la
micorrizacin en la disminucin de la deficiencia nutritiva provocada por
antagonismos inicos, efecto secundario del estrs salino, lo que permite
crecimiento mayor de las plantas micorrizadas.
Concretamente, las micorrizas mejoran diversos procesos fisiolgicos (incremento
del ritmo de intercambio de CO2, transpiracin, cambios en la
conductancia estomtica, eficacia en el uso de agua), aparte del derivado de la
captacin de nutrientes. Adicionalmente, (Corredor 2003) y( Barea, 2003),
sugieren otros mecanismos para justificar el papel de las micorrizas en relacin
con la tolerancia a salinidad, tales como la induccin de cambios hormonales o la
mejora en la capacidad de agua.

Contribuyen con la disminucin de la erosin. (Molina L. y Col 2005)
Se sabe que tanto el medio agrcola como los ecosistemas naturales pueden ser
afectados por procesos de degradacin de diversa ndole, en cuanto a su origen y
naturaleza, que inciden en la productividad y calidad de las cosechas y/o en la
estabilidad, diversidad y productividad de los ecosistemas. La utilizacin de
micorrizas no slo ha facilitado mejor revegetalizacin en condiciones particulares,
como pueden ser la recuperacin de suelos degradados por la minera y la
introduccin de especies exticas en distintas partes del mundo, sino tambin ha
mejorado la repoblacin de especies vegetales en suelos forestales (3). Lo
anterior es confirmado por (LONDOO C, 2002), quien manifiestat que cuando se
aplican hongos edficos, la prdida por lixiviacin, fijacin y erosin se disminuye,
dado que la red de hifas captura y trasloca elementos nutritivos hacia la planta
desde sitios no explorados por la raz; as en los sistemas selvticos de los
trpicos hmedos, el reciclaje de nutrientes de la materia orgnica descompuesta
hacia la planta, la hacen los hongos, principalmente por los sistemas micorrcico.
La falta de especificidad en la asociacin micorrizal se ha mostrado con estudios
moleculares de DNA, al encontrar que una misma raz puede albergar tres o ms
especies de hongos micorrcicos (Clapp et al., 1995). As mismo tambin se ha
comprobado la colonizacin de diferentes sistemas radicales por parte de un
mismo organismo fngico (Chiariello et al., 1982; Francis & Read, 1984). La
proporcin de especies de hongos micorrcico-arbusculares MA y especies de
plantas descritos (150/ 225000) puede explicar la baja especificidad existente
entre planta y hongo en la asociacin micorrcica (Zobel et al., 1997). Esta falta de
especificidad puede condicionar una considerable diversidad en los componentes
de la red de micelio extramatricial, como sistema captador de nutrientes.
La ubicuidad y biodiversidad que presenta la micorriza dan la idea de un
organismo multifuncional, cuyo beneficio no se limita solamente al aumento de
toma de nutrientes -Fsforo especialmente- debido a un volumen mayor de suelo
explorado con ayuda de las hifas del hongo (Newsham et al., 1995). Tambin est
jugando un papel muy importante en la composicin de una comunidad vegetal,
pues el micelio presente en el suelo puede gobernar el establecimiento de una
planta. Adems, la colonizacin de material de origen vegetal -y posiblemente
animal- en descomposicin, hace de la micorriza un posible puente directo entre
plantas cultivadas y enmiendas orgnicas.
Recientemente se ha propuesto un rbol filogentico (cuadro 1) donde se incluyen
siete familias ancestrales, Glomeraceae Paraglomeraceae, Archaeosporaceae,
Acaulosporaceae, Gigasporaceae, diversisporaceae y pacisporaceae. De estas
dos ltimas familias estn en estudio para su reaclasificacion. Asi mismo se
incluye el gnero sclerocystis como parte del genero Glomus. (Schubler et al,
Walter, 2004)
Cuadro 1. Ubicacin taxonmica y gneros de hongos formadores de micorriza arbuscular
(Schubler et al, Walter, 2004)
Taxonoma basada en la morfologa de las esporas MA Prcticamente, para la
identificacin taxonmica de las esporas MA se toman en cuenta las
caractersticas morfolgicas de la hifa de sostn, el tamao de la espora, el
cual es muy variable aun centro de la misma especie, sin embargo se tienen
algunos rangos de estas. Para Acaulospora entre 50-150 um siendo las mas
comunes entre 50 y 100 um, para Entrophospora entre 50- 150 um, para
Gigaspora 250- 300 um y 300- 450 um, Scutellospora 150- 400 um, sclerocystis
50- 350 y Glomus 10- 250.
Morton (1988) resume 11 formas diferentes que las esporas de MA pueden tener
(figura 2). Las esporas tienen caractersticas altamente variables, probablemente
porque son afectadas por el medio ambiente fsico en el cual ellas se forman. Con
excepcin de sclerocystis, en la mayora de los otros gneros las esporas son
globosas o subglobosas, se han reportado proporciones de 44, 27 y 36% en
Glomus, Acaulospora y Gigaspora respectivamente (Gonzalez- Chavez, 1989).
Figura 2: Diversidad en forma de esporas de todos los gneros de hongos micorrizicos

arbusculares. A: globosas, B: subglobosa, C: ovoboide, E: elipsoidal, F: piriforme, G:
irregular, H: oblonga, I: reniforme, J: fusiforme, K: clavada (Gonzlez- Chvez, 1989).
La diferencia del color de muchas especies, puede ser debido a pigmentos en la
pared de la espora o pigmentos del interior de esta. Tendencias significantes en el
grado de color de la espora son evidentes a nivel de gnero (Morton 1988).
Esporas de Glomus, Acaulospora y Scutellospora presentan un rango de color
hialino a negro, espora de Entrophospora exhiban variabilidad similar, pero cada
una de las tres especies descritas de este gnero, tienen un diferente color.
Esporas de Sclerocystis y Gigaspora tienen un rango ms restringido en color,
siendo consistentemente caf en la primera y hialinas y amarillo plido en las
ltimas.
El nmero de capas es una caracterstica importante que se considera para
identificacin de esporas, aunque varan aun dentro de gneros. Glomus,
sclerocystis y Gigaspora usualmente tienen 1-2 capas (80, 100 y 72%
respectivamente). Ms de tres capas estn presentes en esporas de Acaulospora,
Scutellospora y Entrophospora (75, 90 y 100% respectivamente, Morton 1986). A
esta observacin, se adiciona la definicin de Walker (1983) que es el grupo de
pared, entendido como la agregacin de capas, las cuales pertenecen en
proximidad a otras a pesar de que la espora est rota.
Observaciones de la ornamentacin de las capas ayuda de gran manera a la
identificacin de las esporas. La ornamentacin de la capa en general se presenta
en la capa laminada, nica y membranosa. Las ornamentaciones no han sido
descritas en las capas de Gigaspora o sclerocystis. La ornamentacin de la capa

laminada puede ser: proyecciones reticulares, espinas agrupadas. Verrugas,
retculos, etc. En la capa nica: espinas poligonales, pstulas, tubrculos, etc.

5. MATERIALES Y MTODOS
5.1 Obtencin de esporas nativas MA de cultivo de cacao.
5.1.1 Toma de muestras de suelo.
Para esta fase se seleccion una plantacin de cultivo de cacao (Theobroma
cacao) con rboles de diferentes edades (figura 3), se dividi el rea de estudio
de la siguiente forma:
Zona A, rboles de 1-5 aos
Zona B, rboles de 5-15 aos
Zona C, rboles de15-30 aos
Figura 3: Toma de las muestras de suelo en el municipio de Pueblo Bello- Cesar

Se tom de cada zona un promedio de 15 muestras de suelo y races que se
homogenizaron para cada zona, estas se guardaron en bolsas plsticas de ziploc
y se refrigeraron a -4 grados centgrados y posteriormente se secaron a
temperatura ambiente por tres das.
5.1.2 Preparacin del pre- Inculo
Para la obtencin de las esporas del pre-inculo se utiliz el mtodo de tamizaje
flotacin-filtracin propuesto por Sieverding, (1983) Del Centro De Investigacin
De Agricultura Tropical (CIAT) y el mtodo de L-DRYING modificado de
Tommerup y Kidby, (1979) para el secado de las muestras cuyo procedimiento es
el siguiente
5.1.2.1 Tamizaje-flotacin-filtracin:
Se pesaron 100g de suelo y se le agreg 1 litro de agua, se agit vigorosamente,
luego se dej sedimentar por 5 minutos las partculas pesadas y se procedi a
decantar a una serie de tamices de 150 um, 250 um, 65 u.m y 45 u.m uno
colocado sobre el otro (figura 4). Despus se lav la muestra con un chorro fuerte
de agua para que las partculas pequeas pasaran a los tamices de menor calibre.
Estas fracciones fueron lavadas en un Beaker de 500 mL y se llen hasta partes
con agua, luego se agit la suspensin fuertemente por 10-15 segundos,
posteriormente se dej sedimentar el suelo durante 2 min, se decant lentamente
en un embudo de Buhner (figura 9) al cual se le coloc un papel filtro y se

complement con una bomba de vaco, de manera que todo el material que se
encontr flotando en la superficie del agua qued atrapado en el papel filtro, se
repiti el procedimiento con el suelo precipitado en el Beaker dos veces ms.
Del papel filtro se realiz la posterior obtencin, observacin y cuantificacin de las
esporas al microscopio con los objetivo de 4X, 10X Y 40X. Para su respectiva
multiplicacin.
5.1.2.2 Secado de las muestras
El tamizado obtenido del suelo nativo se mezcl y se llev a un recipiente de vidrio
para un posterior secado de las muestras, en esta etapa las muestras se llevaron
a una estufa de secado a una temperatura de 38- 40 hasta que toda el agua se
evapor. El suelo obtenido se macer y fraccion en porciones de 10g el cual se
utiliz como inculo para las plantas trampa.

Figura 4: Tamizado de las diferentes muestras
5.2 Multiplicacin de las esporas nativas de hongos MA en plantas trampas
de maz (Zea mays)
5.2.1 Material vegetal :
Se utilizaron semillas de maz (Zea mays) variedad ICA-109. Las semillas
seleccionadas para la siembra se desinfectaron con 500 mL de una solucin de
hipoclorito de sodio al 1% durante 1 minuto. (Figura 5).
Se seleccion como hospedero de reproduccin de hongos MA, el maz (Zea
mays) ya que la literatura recomienda, que para multiplicar organismos
micorrizicos la planta trampa debe ser una gramnea, para disminuir el peligro de
los patgenos que pueden ser iguales o muy parecidos (Sieverding, 1984).
Adicionalmente, el maz es de rpido crecimiento, desarrolla una abundante raz
que es rpidamente infectada (Hayman et al., 1976; Owusu-Bennoah y Mosse,
1979; Skipper y Smith, 1979).
Figura 5: Semillas de maz (Zea mays)

5.2.2 Preparacin de sustratos:
la preparacin del sustrato tuvo la siguiente relacin 2:1; 2 de suelo y 1 de
cascarilla de arroz.
Se tom suelo de la zona en estudio y junto con la cascarilla de arroz se procedi
a dividirse en fracciones de 1000g, cada una por separado se guardaron en
recipientes de aluminio tapados con papel del mismo material. Posteriormente los
C
recipientes fueron llevados a una estufa con una temperatura constante de 100
durante 2 horas para su esterilizacin con el fin de eliminar microorganismos que
establecieran competencia y la posible presencia de propgulos de micorrizas ya
establecidas. Despus de las 2 horas, los recipientes se retiraron de la estufa y se
dejaron en reposo por 48 horas. (Figura 6)
Figura 6: Preparacin de los sustratos y tratamiento

5.2.3 Siembra
Para el establecimiento del micro-cultivo se realiz la mezcla del sustrato teniendo
en cuenta la relacin de 2:1; 2 de suelo y 1 de cascarilla de arroz. Se llevaron a
unos 20 recipientes de icopor con capacidad de 1000g que sirvieron como
macetas. Se plantaron 4 semillas de maz (Zea mays) por cada maceta teniendo
un total de 80 semillas sembradas. (Figura 7)
Figura 7: Siembra y aplicacin del inculo en los diferentes tratamientos
5.2.4 Preparacin de los Tratamientos
El experimento consta de tres tratamientos de los cuales, dos de ellos estuvieron
inoculados con el pre-inoculo nativo obtenido de cultivo de cacao. El otro
tratamiento no se vio afectado por ningn carcter externo y las plantas tuvieron la
oportunidad de desarrollarse por sus propios medios constituyndose en el
tratamiento control. Estos tratamientos se designaron de la siguiente manera:
Tratamiento 1: Inoculadas fertilizadas
Tratamiento 2: Inoculadas no fertilizadas
Tratamiento 3: Testigo o control
5.2.4.1 Aplicacin de pre-inculo:
Se tomaron 10 macetas con semillas y a cada una de ellas se les aplic 10
gramos de pre-inculo a 5 centmetros de profundidad. Luego las otras diez
macetas con sus respectivas semillas se dejaron sin inculo como tratamiento
control.
Transcurridos 15 das despus de la siembra se procedi a realizar el corte
(raleo) de las plantas mas pequeas dejando las mas desarrolladas en cada
maceta con el fin de evitar competencia.
5.2.5 manejo de los tratamientos
Se aplicaron soluciones nutritivas o iniciadoras buscando ajustar el nivel de
nutrientes para el desarrollo de los hongos, ya que segn Brundrett, et al (1996) el

sustrato debe poseer un nivel moderado de nutrientes para estimular la asociacin
entre el hongo y la planta. (Figura 8).
Para caracterizar al tratamiento 1 se preparo una solucin del fertilizante
Nutrifoliar, al 40% de concentracin. Que se le aplico al tratamiento 1 cada 15
das a partir de los 45 das de edad, hasta los 90 dias de edad. Las plantas tenan
una altura promedio de 23.5 cm . La composicin del fertilizante nutrifoliar se
muestra en el cuadro 2.
Elemento g/L
Nitrgeno total 200,0 g/L
Fosforo asimilable 100,0 g/L
Potasio soluble 50,0 g/L
Magnesio 10,0 g/L
Azufre 14,0 g/L
Cobre 1,5 g/L
Hierro 2,5 g/L
Manganeso 1,0 g/L
Molibdeno 1,0 g/L
Zinc 0,03 g/L
Cuadro 2: Composicin del fertilizante Nutrfoliar por g/L

La duracin del desarrollo de las plantas de maz fue de tres meses, en condicin
de vivero.
Figura 8: Aplicacin de las soluciones nutritivas a los tratamientos
5.3 Evaluacin de la infectividad y efectividad de la multiplicacin de los
hongos MA nativos
Las variables respuesta a utilizar son los nmero de esporas por gramo de suelo,
porcentaje de infeccin y el desarrollo vegetativo (altura y peso seco) de las
plantas.
5.3.1 Numero de esporas por gramo de suelo utlilizando el mtodo de Flotacin
Filtracin planteado por el CIAT.
Se pes 10g de suelo tamizado y se llev a un beaker de 500 ml, se le agreg 300
ml de agua y luego se agit la suspensin fuertemente por 10-15 segundos,
posteriormente se dej sedimentar el suelo durante 2 min. Se decant lentamente
en un embudo de Buhner (figura 9) al cual se le coloc un papel filtro y se
complement con una bomba de vaco, de manera que todo el material que se
encontraba flotando en la superficie del agua pas al papel filtro (figura 10). Luego
se repiti el procedimiento con el suelo precipitado en el beaker unas dos veces
ms.
Para cada fase de decantacin se cambi el papel filtro, enumerndolos para una
posterior obtencin, observacin y cuantificacin de las esporas al microscopio
con los objetivo de 4X, 10X Y 40X.
Figura 9: Mtodo Flotacin- filtracin de las muestras de suelo

Figura 10: Papel filtro con los sedimentos despus del filtrado y corte del mismo para
observar al microscopio
5.3.2 Determinacin de porcentaje de infeccin
Para hallar el porcentaje de infeccin se dividi en dos etapas; la primera consisti
en la tincin de las races de los diferentes tratamientos y la segunda etapa en
calcular la infeccin mediante el mtodo de interceptos de McGonigle et al (1990)
para determinar porcentaje de MA
5.3.2.1 Tincin de las Races
Se tomaron las races de las plantas trampas del tratamiento 1 y el tratamiento 2
por separado, las races se lavaron con abundante agua con la ayuda de un tamiz
convencional para eliminar todo el suelo, luego se introdujeron en un tubo de
ensayo al cual se agreg una solucin de hidrxido de potasio (KOH) al 10%
hasta cubrir las races por completo y se llev al bao de mara a una temperatura
de 97 C por un tiempo de una hora con el fin de despigmentar las las races.
Transcurrido este tiempo y con ayuda de unas pinzas se lavaron las races con
agua corriente, luego se adicion acido clorhdrico (HCl) al 10% hasta taparlas
completamente. Se dejaron reposar 15 minutos, pasado este tiempo se escurri el
exceso de cido pero sin lavar las races. Se le adicion el colorante (azul de
tripn en lactoglicerina) y se llevaron las races a bao de mara durante 5
minutos. Posteriormente se decant el colorante y se filtr para reutilizarlo, las
races teidas se conservaron en lactoglicerina limpia para su posterior
observacin al microscopio. (Figura 11)

Figura 11: Mtodo para la tincin de las races
5.3.2.2 Evaluacin de la colonizacin micorrizica por el Mtodo de Interceptos de
McGonigle Etal (1990)
Se tomaron las races ya teidas y se arreglaron los segmentos en las lminas
portaobjetos a lo largo (figura 12). Luego se le coloco un cubreobjeto suavemente
para evitar la formacin de burbujas, y se llev al microscopio. El campo ptico
del microscopio se movi a travs de la lmina, se utiliz el indicador de ocular
como lnea de interseccin. En cada interseccin se registr algunas de las
siguientes posibilidades.
Figura 12: Races de las diferentes plantas en laminas portaobjetos
La lnea puede interceptar:
NI=seccin no infectada
A=arbsculos
V=vesculas
H=hifas micorrizicas (exclusivamente)
Se debe tener en cuenta que:
1. Arbsculos (A) y vesculas (V) pueden ser interceptados a la vez, en este
caso se sum un registro para cada categora, pero se sum un solo
campo para el total de intersecciones observadas.

2. Las hifas micorrizicas pueden tambin fueron interceptadas en A y V pero
no se sumaron a H ya que en esta categora se registraron solo los casos
de presencia exclusiva de hifas en la interseccin.
3. Las hifas que se registraron en H fueron solo las que se consideraron
micorrizicas basndose en caractersticas morfolgicas.
4. Las intersecciones con hifas de las que no se tuvo la certeza de que eran
micorrizicas o bien con hifas claramente pertenecientes a otros hongos no
micorrizicos se registraron como NI.
Se examinaron 100 intersecciones para cada muestra de raz asignando cada
interseccin en una de las categoras mencionadas: NI, A, V y H.
El porcentaje de micorrizacin (%M.A) se calcul de la siguiente manera.
%M.A= (# Intersecciones NI) x 100 / # Intersecciones observadas.
5.4 Identificacin de esporas de hongos MA multiplicados en el

cultivo trampa
Las plantas se midieron cada 15 das a partir de los 45 das hasta completar
los tres meses (90 das), realizndose en total 4 mediciones por tratamiento,
posterior a esto se eliminaron los riegos para inducir un estrs hdrico con el
objeto de estimular la esporulacin de los hongos durante una semana. Mas
tarde se procedi a medir y a separar la planta en hojas, tallo (parte area) y
raz. (Figura 13, 14). Este material vegetal fue pesado e introducido en bolsas
de papel previamente identificadas, luego se colocaron dentro de una estufa de
secado a una temperatura de 70C por un perodo de 48 horas hasta obtener
un peso constante, luego el material vegetal fue pesado nuevamente para
determinar los indicadores de peso seco.
Figura 13: Corte de la raz y parte area de la planta

Figura 14: Peso de las races y parte area de las plantas
5.4 identificacin de los hongos nativos multiplicados en las plantas
trampas de Maz.
Para la identificacin taxonmica de las esporas de MA se tuvieron en cuenta las
caractersticas morfolgicas de las hifas de sostn, el tamao de las esporas, la
forma y el color de las mismas. Segn el catalogo ilustrado de micorrizas
arbusculares de la amazonia colombiana (Pea-Venegas C. P., Cardona G. I.,
Mazorra A., Arguellez J. H., Arcos A. L. Catalogo Ilustrado. Instituto Amaznico de
Investigaciones Cientficas SINCHI, 2006.).
(Schenck. Norman, the international culture collection of va mycorrhizal fungI
(INVAM), Florida, 1985)

6. RESULTADOS Y DISCUSION
6.1 Porcentaje de Infeccin Micorrizal:
Se obtuvieron segmentos radiculares con presencia de micelio y de estructuras
representativas de los hongos MA (arbsculos y vesculas). (Figura 15, 16,17).
El anlisis de varianza realizado a la variable del porcentaje de infeccin mostr
diferencias significativas entre porcentaje de infeccin del tratamiento 1 y el
tratamiento 2.
En los datos obtenidos se pudo observar que la infeccin de los hongos
micorrzicos se ve influenciado por la cantidad de nutrientes presentes en el
sustrato utilizado es decir, que el porcentaje de infeccin micorrizal es
inversamente proporcional a la cantidad de nutrientes presentes en el suelo, tal
como se observa en las graficas 14,15,16. El tratamiento con MA no fertilizado
alcanz los valores mas altos en cada uno de los indicadores de infeccin
micorrizal (Hifas, Arbsculos y vesculas).
En relacin a este punto de vista algunos autores han sealado que el grado de
micorrizacin y colonizacin del sistema radical se ve influenciado por factores
como el grado de fertilidad del suelo y el pH (Barea, J. M. Y Azcon Aguilar, C.
1982). Esto se corrobor con un anlisis fisicoqumico realizado al sustrato de
cada uno de los tratamientos (Anexo 13). Con respecto a los nutrientes del suelo,
especficamente a la cantidad de fsforo se encontr que todos los tratamientos

mostraron niveles altos de este elemento, pero numricamente dentro de los
tratamiento inoculados con MA, el tratamiento 2 se mostr con valores de 133,6
ppm; mientras que el tratamiento 1 tuvo un porcentaje de fsforo de 138,6 ppm,
estos valores llamaron la atencin ya que diversos autores sealan que a medida
que los niveles de fsforo en el suelo aumentan, se disminuye la infeccin
micorrizal, esto se refleja en una diminucin del porcentaje de infeccin, tal como
se aprecia en las plantas de tratamiento 1 las cuales presentaron los niveles de
infeccin micorrizal ms bajos.
Figura15: Vescula observado en el objetivo 10X

Figura 16: Arbsculos observado en el objetivo 10X
Figura 17: Hifas observado en el objetivo 10X

Grafica 1: Porcentaje de infeccion por hifas
Para el porcentaje de infeccin por hifa los valores ms altos fueron alcanzados
por las plantas del tratamiento 2 con un nivel de infeccin de 30,5 %, frente al
tratamiento 1 con valores de 12,16% (Grafica 1)

Para el porcentaje de infeccin por arbsculos los valores ms altos fueron
alcanzados por las plantas del tratamiento 2 con un porcentaje de infeccin de
2,333 %, mientras que en el tratamiento 1 no se encontraron dichas estructuras
(grafica 2).
Los arbsculos son un conjunto de hifas intracelulares que forman un
enrollamiento con un alto potencial metablico el cual sirve como centro de
intercambio bidireccional entre el hongo y la planta. Estos arbsculos tienen un
perodo de vida muy corto que oscila entre 2 y 15 das, cuando un arbsculos
muere o sucumbe es reemplazado por otro ms joven, este relevo se repite
mientras el intercambio de nutrientes esta activo, cuando este intercambio cesa
todos los arbsculos mueren y, de la colonizacin interna solo quedan las
vesculas que son estructuras de reserva de nutrientes del hongo. Este fenmeno
se pudo apreciar en el tratamiento 1 en el cual no se encontraron arbsculos, pero
si se detect la presencia de vesculas las cuales aparecen durante el periodo de
vida de los arbsculos, evidenciando la presencia previa de arbsculos en el
tratamiento 1 pero desaparecieron cuando ces el intercambio de nutrientes,
debido a que el exceso de P, Mn, Fe, Cu y otros elementos, induce a una
disminucin en la asociacin simbitica del hongo MA- Planta. Y la planta se ve
forzada a utilizar su propio sistema radical para la obtencin de estos elementos
disminuyendo asi la infeccin micorrizal

Grafica 2: Porcentaje de infeccin por arbsculos
Para el porcentaje de infeccin por vesculas los valores ms altos fueron
alcanzados por las plantas del tratamiento 2 con un porcentaje de 15.5,
mientras que en el tratamiento 1 fue de 4.66. (Figura 3).
Las vesculas son estructuras globosas cuya funcin es de almacenamiento o
de reserva, ya que en su interior se encuentra densas gotas de grasa (Hodge A.
2000). La formacin de vesculas es posterior a la de los arbsculos y tiene
lugar a partir del hinchamiento de una hifa generalmente terminal. Esta

estructura es muy comn en las especies del gnero Glomus Acaulospora,
Archaespora, Entrophospora excepto Gigaspora y Scutellospora (honrubia et al
1992). En el gnero Glomus las vesculas se caracterizan por que pueden
llegar a engrosar sus paredes y convertirse en esporas.
Debido a que la produccin de vesculas depende de las actividades de los
arbsculos, se puede afirmar que la cantidad de vesculas es directamente
proporcional a la cantidad de arbsculos.
La disminucin de vesculas en el tratamiento1 est corroborada por estudios
previos (Smith y Gianinazzi-Pearsson1989,Hetrick et tal 1989, Sieveverding
1991) observaron, que en ocasiones la fertilizacin con niveles altos de fosforo
reduce los porcentaje de infeccin y deprime el desarrollo de arbsculos,
vesculas, hifas externas e internas y disminuye tambin el nmero de puntos
de penetracin y de esporas (Figura 18)

Grafica 3: Porcentaje de infeccin por vesculas
6.2 Altura de las plantas
Los anlisis de varianza y la prueba de media de Dunnett realizados a los
tratamientos 1, tratamiento 2 y tratamiento 3 no mostr diferencias
significativas. Sin embargo numricamente se not una diferencia en las
plantas del tratamiento 2 (inoculadas no fertilizadas) en el incremento de la
tasa de crecimiento, superando a los otros dos tratamientos (Grafica 4, figuras
18 y 19 ).
Cuando las plantas se asocian con el hongo para formar micorrizas
arbusculares (MA), se incrementa la absorcin del fsforo y otros nutrientes
presentes en la solucin del suelo por parte de estas plantas hospederas, esto
es debido a que las hifas del hongo se extienden y exploran un mayor volumen
de suelo, que sera imposible explorar con los pelos radiculares. Por esta razn,
las plantas micorrizicas alcanza un mejor desarrollo que las no micorrizadas en
suelos con bajos contenidos de fsforo disponible. Resultados similares fueron
reportados en muchos trabajos por autores como (Saif, 1977;Tinker, 1978;
Fortn et al., 2002).
Las estimulaciones de los hongos MA en el crecimiento de la planta estn
normalmente acompaado de un incremento en el contenido y frecuentemente
la concentracin de algunos nutrientes minerales en los tejidos de la planta.
En numerosos trabajos experimentales se ha puesto de manifiesto que como
consecuencia de la formacin de la MA, tiene lugar normalmente una
considerable estimulacin al ritmo de crecimiento de la planta. La causa de
tales acciones es fundamentalmente inducida por el hongo, aunque como
consecuencia de la formacin de la MA se producen diversos cambios
fisiolgicos que con mayor o menor grado pueden contribuir dicho incremento al
crecimiento (Smith y Read, 1997)

Grafica 4: Altura de las plantas en los tratamientos 1, 2 y 3.
Figura 18: Comparacion altura de plantas del tratamiento 2 y tratamiento 3

Figura 19: Crecimiento de parte foliar y raz de las plantas con micorriza y sin micorriza
6.3 Determinacin de biomasa (peso seco)
El anlisis de varianza realizado a la variable peso seco mostr diferencias
significativas entre los tratamientos. En la prueba de medias por Dunnett
realizada a la parte area (hojas y tallos) se observ que el mximo valor fue
obtenido por el tratamiento 2 con un peso de 1,876 gr. (Grafica 5), de igual
manera el tratamiento 2 alcanz un valor de 0,296 gr, siendo el ms alto en la
variable peso seco de la raz. (Grafica 6). Analizando las variaciones en el
tamao de las plantas, no es extrao que las caractersticas morfomtricas de
la variable en cuestin sean mayor en las plantas del tratamiento 2, ya que
segn otros autores la presencia de MA hace aumentar la tasa de crecimiento y
un incremento en la produccin de biomasa, y que este efecto es mayor en
suelos de baja fertilidad o desequilibrados nutrimentalmente, especialmente
cuando el contenido de fosforo asimilable es bajo (Smith y Read, 1997). El
aumento de la materia seca es debido a que las hifas de las MA exploran un
mayor volumen de suelo aumentando as la capacidad de absorcin de
nutrientes en la planta. Se pudo observar que una de las plantas del
tratamiento 1 logro una altura de 35,6 cm y aun as el tratamiento 2 logr
superarlo en la cantidad de peso seco, teniendo plantas con alturas de 33,6 cm,
esto se debe a que la planta del tratamiento 1 a pesar de que eran altas
posean tallos muy delgados, mientras que en las del tratamiento 2 tenan una
altura cercana 35,6 cm y posean tallos con mayor dimetro.

Grafica 5: Porcentaje peso seco parte area
Grafica 6 : Porcentaje peso seco de la raiz

6.4 Anlisis de la diversidad de hongos micorrizicos
En la grafica 7 se presentan los conteos totales de las esporas correspondientes a
10 gramos de suelo seco. Para esta variable segn el ndice de margalef, que es
una medida utilizada en ecologa para estimar la biodiversidad de una comunidad
con base a la distribucin numrica de los individuos de las diferentes especies en
funcin del nmero de individuos existentes en la muestra analizada. Tiene la
siguiente expresin I=(s-1)/Ln N, donde I es la diversidad, s es el nmero de
especies presentes, y N es el nmero total de individuos encontrados
(pertenecientes a todas las especies). La notacin Ln denota el logaritmo
neperiano de un nmero.
De acuerdo a este ndice la diversidad es baja para cada tratamiento. Pero en
trminos generales el porcentaje de esporas por 10 gramos de suelo no es bajo
para condiciones nativas, si tenemos en cuenta los datos reportados por Collins et
al (1991) quienes encontraron entre 0 y 49 esporas en 1 gramo de suelo en un
experimento en el que se evaluaron poblaciones MA asociadas en cultivos de
maz y soya de cinco aos. Igualmente Douds et al (1995) encontraron entre 1 y
43 esporas por 50 gramos de suelo en cultivo de maz, soya y trigo en sistemas de
labranza convencional y mnima.
A partir del aislamiento de las esporas se encontraron seis de los gneros
conocidos: Glomus, Acaulospora, Entrophospora, Gigaspora, Archaeospora y

Scutellospora (figuras 20, 21,22, 23, 24) siendo el ms comn el gnero Glomus
en cada uno de los tratamientos. Se logr incrementar el nmero total de esporas
del suelo muestreado, pero no en todos los gneros se obtuvo la misma tasa de
multiplicacin. Esto coincide con lo sealado por Morton y Benny (1990), quien
observ que algunas especies presentes en los suelos pueden disminuir su
nmero o incluso desaparecer, cuando se les intenta multiplicar en macetas de
propagacin, debido a factores ambientales desconocidos o a las condiciones del
invernadero, otras especies raras o aparentemente inexistentes pueden en cambio
incrementar su nmero.
Grafica 7: Numero de esporas por gnero en cada uno de los tratamientos

Figura 20: Entrophospora (Dvila, Rosales, Ramos) Figura 21: Acaulospora (Rosales)
Figura 22: Glomus(Dvila, Ramos, Rosales) Figura 23: Archaeospora (Dvila, Rosales)
Figura 24: Scutellospora (Dvila, Rosales) Figura 25: Gigaspora
(Dvila, Ramos, Rosales)
7. CONCLUSIONES
El suelo del municipio de Pueblo Bello es rico en diversidad de esporas de
hongos MA.
Las plantas trampas de maz (Zea mays) inoculadas respondieron
significativamente a la infeccin y esporulacin por los hongos MA nativos,
mostrando mayores niveles de infeccin micorrizal y produccin de esporas
MA en las plantas inoculadas no fertilizadas.
El mayor porcentaje de infeccin por hifas fue alcanzado por las plantas
inoculadas no fertilizadas.
El mayor porcentaje de infeccin por Arbsculos fue alcanzado por las
plantas inoculadas no fertilizadas
El mayor porcentaje de infeccin por vesculas fue alcanzado por las
plantas inoculadas no fertilizadas
El mayor rendimiento en la tasa de crecimiento fue alcanzado por el
tratamiento de las plantas inoculadas no fertilizadas
Los mayores rendimientos de porcentaje de materia seca fueron
alcanzados por las plantas inoculadas no fertilizadas.

Existe una asociacin inversamente proporcional entre el porcentaje de
infeccin y la cantidad de nutrientes presentes en el suelo.
El gnero micorrizico predominante con mayor abundancia relativa dentro
de la poblacin de esporas aisladas en los tratamientos fue Glomus.
El tratamiento que mostr la mayor abundancia relativa de esporas fue el de
las plantas inoculadas no fertilizadas.
Las plantas inoculadas sin fertilizante respondieron significativamente a la
infeccin por hongos micorrizicos arbusculares con un alto contenido de
fosforo, a pesar que la literatura dice que cuanto hay alto contenido de
fosforo se inhibe la infeccin.

8. RECOMENDACIONES
Utilizar varias tipos de plantas trampas en la multiplicacin de estos hongos
ya que los hongos MA no son altamente especficos en el momento de
infectar a una planta determinada pero si existe afinidad o compatibilidad
con ciertas especies vegetales.
Realizar nuevos aislamientos de hongos MA nativos en otras regiones
donde se cultiva cacao con el fin de caracterizarlas, identificarlas y evaluar
el comportamiento de las mismas, con el objeto de producir un pool de
estos individuos como inoculo potencial.
Establecer cultivos monoesporicos con el fin de evaluar la multiplicacin,
infectividad y efectividad de cada uno de los gneros individualmente.
Evaluar los factores que afectan el proceso de micorrizacin en
condiciones naturales estableciendo la habilidad competitiva y estudiando
su infectividad en las plantas
Continuar con este tipo de investigaciones con el fin de evaluar las
micorrizas nativas en los diferentes cultivos agroforestales

Realizar cultivos monoesporicos con cada uno de los gneros multiplicados
para evaluar la infectividad y efectividad de cada uno de ellos.

BIBLIOGRAFIA
BAREA, J. M. Y AZCON AGUILAR, C. 1982. Production of plant growth
regulating substances by the vesicular - arbuscular mycorrhizal gungi Glomus
mosseae. Rev. Applied and enviromental Microbiology. 43: 810 813.
BAREA, JM. 2003. Las micorrizas arbusculares componente clave en la
productividad y estabilidad de agroecosistemas. Departamento de
Microbiologa del Suelo y Sistemas Simbiticos, Estacin Experimental del
Zaidn, Granada, Espaa.
CHIARIELLO, N., J. C. HICKMAN & H. A. MOONEY. 1982. Endomycorrhizal
role interspecific transfer of phosphorus in community of annual plants. Science,
217: 94- 111.
CLAPP, J. P., J. P. W. YOUNG, J. W. MERRYWEATHER & A. H. FITTER
1995.Diversity of fungal symbionts in arbuscular mycorrhizas from a natural
community. NewPhytol, 130: 259-265.
CORPOICA. INFORME ANUAL 2005. El manejo de moniliasis liderado en
CORPOICA por el Programa de Manejo Integrado de enfermedades. (Pagina

web en lnea. Disponible en:
www.corpoica.org.co/Archivos/Asamblea/Informe%20Anual%20CORPOICA%2
02005%20v%20marzo%2013.pdf -.
CORREDOR, G. Micorrizas arbusculares: Aplicacin para el manejo sostenible
de los agroecosistemas. Programa Nacional De Recursos Biofsicos, Corpoica,
Bogot, 2003, pp. 12 17.
DALPE, Y. AND M. MONREAL. 2003. Arbuscular mycorrhiza inoculum to
support sustainablecropping systems. Crop management 10:1094-1104.
ESPINAL G. CARLOS; HCTOR J. MARTNEZ COVALEDA ; LUZ STELLA
BELTRN LAMMOGLIA Y LILA ORTIZ HERMIDA. La cadena del cacao en
Colombia una mirada global de su estructura y dinmica 1991 2005.( Pagina
web en lne. Disponible en: http://www.agrocadenas.gov.co
FITTER AH, GARBAYE J. Interactions between mycorrhizal fungi and other soil
organisms. Plant and soil 1994; 159: 123 133.
GUERRERO, E. 1996. Micorrizas: fundamentos biolgicos y estados del arte.
En: Micorrizas: Recurso biolgico del suelo. Fondo FEN Colombia. Bogot, pp
5 46.
INGHAM, 2003.The soil food wed: tuning in to the world beneath our feet.
Revist Acres, A voice for eco-agriculture. USA 2003, Vol: 30, Nro. 4.
JEFFRIES P., GIANINAZZI S., PEROTTO S., TURNAU K., BAREA J. 2003.
The contribution ofarbuscular mycorrhizal fungi in sustainable maintenance of
plant health and soil fertility.Biol Fertil Soils. 37:1-16.
LONDOO C, ESTRADA J. Evaluacin productiva de la micorriza Glomus
manihotis en el pasto Axonopus Scoparius. Universidad Nacional de Colombia.
Tesis, Facultad de Ciencias Agropecuarias. Medelln, 1991, pp. 10 24.
MEJA L., PALECIA G. 2005. Abono orgnico para el cultivo de cacao. (Pagina
web en lnea. Disponible en: http://www.turipana.org.co/abono_cacao.htm.
MELGAREJO, L. M., J. SNCHEZ, A. CHAPARRO, F. NEWMARK, M.
SANTOS-ACEVEDO, C. BURBANO y C. REYES. Aproximacin al estado
actual de la bioprospeccin en Colombia Bogot: Cargraphics, 2002. 334p.--
(Serie de Documentos Generales INVEMAR No.10)

MOLINA L. MAURICIO., LILIANA MAHECHA Y MARISOL MEDINA.
Importancia Del Manejo De Hongos Micorrizgenos En El Establecimiento De
rboles En Sistemas Silvopastoriles. Rev Col Cienc Pec Vol. 18:2, 2005.
MORTON, J. B. Y G. L. BENNY. 1990. Revised classification of arbuscular
mycorhizal fungi (Zygomycetes): a new order, Glomales, two new suborders,
Glominae and Gigasporineae, and two new families, Acaulosporaceae and
Gigasporaceae, with an emendation of Glomacea. Mycotaxon, 37: 471 491.
NEWSHAM, K. K., A. H. FITTER Y A. R. WATKINSON. 1995. Multi-
functionalityand biodiversity in arbuscular mycorrhizas. Tree, 10: 407-411
PEDRAZA, J. E. 1986. Ocurrencia e importancia de las micorrizas en los
ecosistemas tropicales. Boletn tcnico. INCORA. Colombia. 19: 5 - 13.
RADDATTZ E. Micorriza: el abono vivo Campo & Agro. Zamorano, Espaa,
2002, 15 p.
READ D. J. 1991 Mycorrhiza en ecosystems. Experiencia 47:376-391.

SNCHEZ N. JIMENA Y TIFFANY SOSA RODRGUEZ. Produccin De
Hongos Formadores De Micorrizas Arbusculares Y Su Aplicacin Como
Biofertilizantes (Pagina web en lnea. Disponible en:
www.scielo.org.co/scielo.php
SANDERS, I. R. Y A.H. FITTER. 1992. The ecology and functioning of
vesicular-arbuscular mycorrhizas in co-existing grassland species. II. Nutrient
uptake and growthof vesicular-arbuscular mycorrhizal plants in a semi-natural
grassland. New Phytol., 120:525-533
SIEVERDING V. 1990 Efecto de la micorrizas arbustivas en Caf (Cafelea
arabiga). Acta Agronmica 40(2): 89 99.
ZOBEL, M., M. MOORA Y E. HAUKIOJA. 1997. Plant coexistence in the
interactiveenvironment: arbuscular mycorrhiza should not be out of mind.
OIKOS, 78: 202-208
Pea-Venegas C. P., Cardona G. I., Mazorra A., Arguellez J. H., Arcos A. L.
Micorrizas arbusculares de la amazonia colombiana. Catalogo Ilustrado.
Instituto Amaznico de Investigaciones Cientficas SINCHI, 2006.)
Hodge A. (2000) Microbial ecology of the arbuscular mycorrhiza (32): 91-96

(Schenck. Norman, THE INTERNATIONAL CULTURE COLLECTION OF VA
MYCORRHIZAL FUNGI (INVAM), Florida, 1985)
Petit de Soler, presencia de micorrizas en el cultivo de (Sorghum Bicolor L.
Moench) en el municipio Jess, Maracaibo, 2004.
Valle Acosta, Respuesta del cultivo de frijol ( Vigna Unguiculata) a la asociacin
simbitica con micorrizas vescula arbusculares y Rhizobium sp, Mracaibo,
2004.
Lopez Guerra, Hongos de micorriza arbuscular en diferentes sistemas de
produccin de maguey mezcalero (agave angustifolia) en Oaxaca, Santacruz
Xoxocotlan, 2006.
ANEXOS
Peso seco de la parte area de las plantas (en gr)
Tratamiento 1 Tratamiento 2 Tratamiento 3 (control)
0,5 2,63 1,3

1 1,5 1,8
0,7 1,5 2,1
0 0 0
0 0 0
Anexo 1: Resultados del peso seco de la parte area de las plantas en los
diferentes tratamientos
Peso seco Raz de las plantas (en gr)

Tratamiento 1 Tratamiento 2 Tratamiento 3
(control)
0,1 0,35 0,1
0,1 0,3 0,2
0,2 0,24 0,1

Gr gr gr
Gr gr gr
Anexo 2: Resultados del peso seco de la raz de las plantas en gramos

Altura 45 das
(control)
19 37 35
25 32 34
27 34 34
20 36 32
25 31 21
Anexo 3: Altura de las plantas a los 45 das de edad
Altura 60 das
(control)
24 45 40
31 34 38
33 37 37
24 42 38
30 0 25

Altura 75 das
(control)
28 67 43
36 0 40
37 42 0
27 48 42
0 0 0
Altura 90 das
(control)
32 70 45
40 0 42
0 46 0
0 52 44
0 0 0

Nmero de esporas en 10 gr de suelo
Tratamiento 1 Tratamiento 2 Tratamiento X (suelo
nativo)
309 224 77
115 344 86
165 233 79
Anexo 7: Nmero de esporas en 10 gr de suelo
Infeccin por hifas

Tratamiento 1 Tratamiento 2
22 50
8 28
6 29
2 12
23 40
12 24
Anexo 8: Infeccin por hifas

Infeccin por arbsculos
0 4
0 3
0 2
0 1
0 2
0 2
Anexo 9: Infeccin por arbsculos
Infeccin por vesculas

0 14
1 16
0 17
1 10
15 15
11 21
Anexo 10: Infeccin por vesculas

Numero de vesculas por laminas
0 251
1 282
0 322
19 202
198 261
172 439
Anexo 11: Numero de vesculas por laminas
Tabla 8: Numero de esporas por genero
Genero Tratamiento Tratamiento Tratamiento

1 2 X (suelo
nativo)
Glomus 154 364 144
Entrophospora 12 78 22
Acaulospora 205 61 10
Archaeospora 21 48 13
Paraglomus 0 0 0
Gigaspora 20 67 17
Scutellospora 108 92 25
total 520 710 231
Anexo 12: Porcentaje de esporas por genero

Tesiscacao 141018222505 Conversion Gate01

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Tesiscacao 141018222505 Conversion Gate01

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

MULTIPLICACIN DE HONGOS MICORRIZICOS ARBUSCULARES

MA NATIVOS DE CULTIVO DE CACAO (Theobroma cacao) EN

MAIZ (Zea mays) BAJO DISTINTOS TRATAMIENTOS

LILIANA DAVILA ROCHA CARLOS

JULIO RAMOS FRAGOZO CINDY

MANUELA ROSALES MAESTRE

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR FACULTAD DE

CIENCIAS BASICAS Y EDUCACION LICENCIATURA EN

CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION AMBIENTAL

MA NATIVOS DE CULTIVO DE CACAO (Theobroma cacao) EN

MAIZ (Zea mays) BAJO DISTINTOS TRATAMIENTOS

LILIANA DAVILA ROCHA CARLOS

Trabajo presentado como requisito para obtener el titulo de

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR FACULTAD DE

CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION AMBIENTAL

Firma del Presidente del Jurado

Firma del Jurado

Firma del Jurado

Valledupar, Mayo 15 de 2009

A mis padres Atanasio Dvila y Celia Rocha

A la profesora Laura Rojas Martnez

A mis hermanos y familiares

A la Biloga Laura Rojas Martnez

A Carlos Julio Ramos Fragozo

Carlos Julio Ramos Fragozo

Los autores de este proyecto expresan su agradecimiento a:

Al propietario de la Finca Monte grande de Pueblo bello Cesar por habernos

permitido obtener las muestras del suelo de los cultivos de cacao.

A los trabajadores del almacn del laboratorio de Ciencias Naturales Freddy

Prez Domnguez y Luis Gonzales Fernndez por habernos facilitado las

herramientas necesarias durante la realizacin de este proyecto.

A la Universidad Popular del Cesar, por brindarnos la oportunidad de superarnos,

capacitarnos y crecer intelectualmente, para poder convertirnos en los prximos

profesionales del futuro.

Las diferentes personas que intervinieron para la recoleccin de las muestras, la

necesarios para la realizacin de este trabajo.

adecuado para la multiplicacin de micorrizas arbusculares MA son escasos,

debido a ello, el objetivo del presente trabajo consisti en multiplicar hongos

micorrizgenos nativos y as obtener un inculo con una diversidad de

microorganismos fngico endfitos nativos adaptados a nuestro sistema

agroecolgico que pueda evaluarse posteriormente en cultivos de cacao bajo las

condiciones edficas y climticas de la regin y aumente la productividad de una

En los sistemas de cacao de la regin, la baja productividad ha generado el

planteamiento de estrategias como es el uso de microorganismos para estimular

su crecimiento, donde se destacan los hongos micorrizgenos. Estos organismos

pueden ser obtenidos, seleccionados, multiplicados e incorporados al suelo en

forma de inculos. El proceso de inoculacin es complejo, por una parte, implica

disear mtodos de aislamiento, seleccin, multiplicacin e incorporacin

adecuados para cada especie o propsito. En este trabajo se evalu la

multiplicacin de esporas de hongos micorrzicos arbusculares MA nativos

obtenidos de cultivo de cacao (Theobroma cacao) en plantas trampas de maz

(Zea mays) fertilizadas y no fertilizada. El ensayo se mantuvo en vivero durante

inoculadas respondieron significativamente a la infeccin y esporulacin por los

hongos MA nativos, mostrando mayores niveles de infeccin de micorriza.

El mayor rendimiento en la tasa de crecimiento y porcentaje de materia seca fue

alcanzado por el tratamiento de las plantas inoculadas no fertilizadas.

El gnero micorrzico predominante con mayor abundancia relativa dentro de la

poblacin de esporas aisladas en los tratamientos fue Glomus

Palabras claves: micorriza, inculo, cacao, fertilizacin, infectividad, esporas.

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 19

3.1 Objetivo General 24

3.2 Objetivos Especficos 24

4.1 Antecedentes de la Investigacin 25