TALLER DE QUMICA CLNICA

Nombre: _Luis Miguel Segura Calao __

A continuacin se presentan una serie de enunciados que usted debe contestar y

socializar antes de finalizar su rotacin por el rea de qumica.
El presente taller ser tabulado con la nota del desarrollo de la prctica y de las
actividades de extensin de la rotacin.

TEMA: ESPECTROFOTOMETRA

1. Defina que es Transmitancia

La transmitancia hace referencia a la cantidad de energa que es capaz de
atravesar un cuerpo en una unidad de tiempo expresada mediante una
magnitud.

2. Defina que es Absorbancia

Se define como absorbancia la cantidad de luz o energa que es absorbida

por una sustancia o por un cuerpo a partir de un rayo de luz incidente

3. Defina a que hace referencia el trmino curva de calibracin y grafique un

ejemplo.

El trmino curva de calibracin hace referencia a la representacin grfica

de una seal que se mide en funcin de la concentracin de un analito. La
calibracin incluye seleccionar un modelo para estimar los parmetros que
permitan determinar la linealidad de esa curva y en consecuencia, la
capacidad de un mtodo analtico para obtener resultados que sean
directamente proporcionales a la concentracin de un compuesto en una
muestra, dentro de un determinado intervalo de trabajo. En el
procedimiento se compara una propiedad del analito con la de estndares
de concentracin conocida del mismo analito (o de algn otro con
propiedades muy similares a ste). Para realizar la comparacin se requiere
utilizar mtodos y equipos apropiados para la resolucin del problema de
acuerdo al analito que se desee determinar.

EJEMPLO:
 4. Qu se debe tener en cuenta para seleccionar la longitud de onda de
medicin para los analitos?
Para seleccionar longitudes de onda hay que tener en cuenta el espectro de
los reactivos correspondientes y de la muestra para que no interfieran en
esa longitud de onda elegida. El mximo de absorbancia siempre que
tengamos en esa zona una curva plana y que los reactivos no interfieran en
el espectro.

Para obtener una mayor sensibilidad se eligen longitudes de onda que

corresponda con el pico de mxima absorcin y que tengan un intervalo de
variacin de longitud de onda en el que la absortividad sea constante.

5. Que caractersticas debe poseer un patrn de calibracin o estndar

-Debe ser inalterable, independiente de tiempo o de quien realice la

medicin.
-Ser universal y conocido.
-Ser fcilmente reproducible.

TEMA: ELISA
1. Defina la diferencia que existe entre ELISA directo e indirecto

La principal diferencia existente entre la tcnica de ELISA directo e indirecto

radica en que el directo se encarga de la bsqueda de la presencia del
antgeno como tal o de una porcin del mismo dentro de la muestra a
analizar y en el mtodo indirecto se busca la presencia de anticuerpos
(inmunoglobulinas) generadas por el sistema inmune como respuesta ante
la presencia del antgeno o sustancia reconocida como extraa.

2. Qu es la metodologa de ELISA? y enuncie los pasos generales para su

realizacin.
La metodologia de ELISA es un ensayo inmunoenzimtico usado para la
cuantificacin de molculas especialmente de aquellas que experimentan
cambios en diferentes estados como pueden ser infecciones por bacterias,
virus, hongos o parsitos o fases activas de enfermedades autoinmunes.
Como ejemplo se pueden medir por ELISA hormonas, autoanticuerpos,
inmunoglobulinas contra antgenos de patgenos, toxinas, antgenos. Las
tcnicas de ELISA son tambin muy usadas en los ensayos de nuevos
medicamentos para comprobar sus efectos cuantificando las molculas de
inters en cada caso.
Existen mtodos directo e indirecto. El directo permite detectar antgenos
con un anticuerpo especfico conjugado con una enzima como sistema de
marcaje. En el indirecto el antgeno reacciona con el anticuerpo especfico.
El complejo antgeno-anticuerpo es entonces detectado por un segundo
anticuerpo que reconoce dominios constantes de anticuerpos. Este
anticuerpo, que suele ser especfico de especie, es el que est marcado
enzimticamente. Esto permite que un mismo anticuerpo marcado sea
capaz de detectar diferentes antgenos. En ambos mtodos, la reaccin
enzimtica puede ser detectada espectrofotogrficamente con un lector
ELISA.

PASOS PARA METODO INDIRECTO:

Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos para los

anticuerpos objeto de estudio. Lavado para eliminar los antgenos
fijados deficientemente o no fijados.
Adicin del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarn
especficamente con los antgenos fijados al soporte. Lavado para eliminar
los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales
reaccionan con los anticuerpos especficos aadidos en el paso anterior y
que se encuentran fijados a los antgenos. Lavado para eliminar los anti-
anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
 Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. Se puede parar la reaccin si se desea.
Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

PASOS PARA METODO DIRECTO:

Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos. Lavado para

eliminar los antgenos fijados deficientemente o no fijados.
Adicin de anticuerpos marcados (conjugados) con una enzima; si
los anticuerpos reaccionan con los antgenos, el complejo quedar
solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan
reaccionado.
Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. Se puede parar la reaccin si se desea.
Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado

Pasos generales de un ELISA.

1. Tapizado del pocillo con el antgeno o anticuerpo.

2. Adicin de la muestra problema con la mezcla de antgenos o
anticuerpos.
3. Unin del antgeno o anticuerpo especfico al anticuerpo o antgeno
tapizado en el pocillo
4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antgeno o anticuerpo no
unido
5. Adicin del anticuerpo secundario marcado con la enzima
6. Unin del anticuerpo secundario al antgeno o anticuerpo
7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida
8. Adicin del substrato
9. Unin del substrato a la enzima
10. Desarrollo del color

3. Describa grficamente los diferentes tipos de ELISA

4. Describa los sistemas de deteccin de ELISA: colorimtricos, fluorescentes
y luminiscentes.
Colorimetra.
Los ensayos colorimtricos dan un producto de reaccin coloreado que
absorbe luz en el espectro visible, siendo la densidad
ptica (DO) del mismo proporcional a la cantidad de producto medido. Para
todos los ensayos enzimticos, la etapa final es la adicin del substrato
enzimtico, el cual da lugar a productos de reaccion solubles e insolubles y
es elegido por su rendimiento cuantitativo de producto de reaccin. Para
ensayos colorimtricos, la tasa de desarrollo de color es proporcional,
dentro de un cierto rango, a lacantidad de conjugado enzimtico presente.

Fluorescencia.
Los inmunoensayos de fluorescencia (ELFIA) son una simple variacin de
los colorimtricos; la enzima convierte el substrato en un producto de
reaccin que emite fluorescencia cuando es excitado a una determinada
longitud de onda, siendo las unidades relativas de fluorescencia (fotones de
luz emitidos) proporcionales a la cantidad de producto analizado.
En comparacin con los mtodos colorimtricos, los ensayos de
fluorescencia son ligeramente ms sensibles y, lo que es ms
importante, amplan el rango de medida, en oposicin al lmite de 2,0-4,0
DO impuesto en los ensayos colorimtricos.

Luminiscencia.
Al igual que la fluorescencia, la luminiscencia es una variacion del
metodo estandar de ELISA. Una enzima transforma un substrato en un
producto que emite fotones en lugar de dar color visible. la luminiscencia se
describe como la emision de luz por parte de una sustancia, que regresa
 desde un estado electronicamente excitado a su estado original. Las
diferentes formas de lumiscencia difieren, precisamente, en la forma e que
se alcanza dicho estado excitado:
Fotolumiscencia: la excitacion se alcanza mediante luz de una
determinada longitud de onda, es decir, igual que en la fluorescencia.
Biolumiscencia: la excitacion se alcanza mediante la utilizacion de un
compuestro que emite luz al ser degradado, por ejemplo, luciferna o
luciferasa
Quimioluminiscencia: la excitacion se alcanza mediante una reaccion
quimica.

5. Enuncie ventajas y desventajas entre los mtodos de deteccin de ELISA.

COLORIMETRIA: Muchos factores afectan la medida de la actividad

enzimatica; principalmente tiempo de reaccion, temperatura y exposicion a
la luz. Las ventajas son su sencillez y sus bajos costos. Adems la
realizacin de la colorimetra no exige profesionales de alta experiencia.

FLUORESCENCIA: Ms sensibles que los colorimetricos, estn sujetos a

distintos problemas como cambios de pH, temperatura, secado etc. Adems
de esto se deben controlar multiples variables entre los reactivos y
elementos a utilizar pues pueden ocasionar errores en la reaccin.

LUMINISCENCIA: Es el mtodo disponible ms sensible, simplicidad del

procedimiento,

TEMA: CONTROL DE CALIDAD

1. Defina el trmino incertidumbre de la medicin.

La incertidumbre de la medicin son los limites dentro de los cuales se
espera que deba encontrarse el valor verdadero de lo que se est
midiendo. Es la duda que existe acerca del resultado de cualquier medicin.

2. Defina el trmino precisin y grafique un ejemplo.

La precisin hace referencia a la proximidad entre los valores medidos

obtenidos en mediciones repetidas de un mismo objeto, bajo condiciones
especficas.

3. Defina el termino exactitud y grafique un ejemplo

 Se define como exactitud a la proximidad existente entre el valor medido y
el valor verdadero de una magnitud a medir.

Exacto y Preciso Ni exacto

preciso pero no ni preciso
exacto
4. Defina control de calidad interno y externo

El control de calidad interno es una herramienta operativa que permite

realizar un monitoreo de los procesos analiticos realizados en el laboratorio
y que a su vez permite aceptar o rechazar las series analticas.
Existen 2 variedades, el modelo de gestin interna, donde el tratamiento
estadstico de los resultados control se realiza nicamente con los datos
obtenidos por el propio laboratorio, y el control interno con gestin externa,
donde el procesamiento estadstico se realiza con los datos obtenidos por
el propio laboratorio y por otros laboratorios.

El Control de Calidad Externo puede definirse como la evaluacin de la

exactitud analtica de un laboratorio, mediante la comparacin del resultado
obtenido al procesar una muestra con los resultados de otros laboratorios
con caractersticas semejantes.

5. Realice un cuadro comparativo entre los conceptos de error sistemtico y

error aleatorio.
ERROR ALEATORIO ERROR SISTEMATICO
Se deben a las pequeas Es constante a lo largo de
variaciones que aparecen entre todo el proceso de medida
observaciones sucesivas y, por tanto, afecta a todas
realizadas por el mismo las medidas de un modo
observador y bajo las mismas definido y es el mismo para
condiciones. Las variaciones todas ellas.
no son reproducibles de una Afectan la exactitud osea la
medicin a otra y se supone proximidad al valor verdadero
que sus valores estn
 sometidos tan slo a las leyes
del azar y que sus causas son
completamente incontrolables
para un observador.
Afectan la precisin o la
reproducibilidad

6. Defina el termino error total

El error total se define como la diferencia porcentual entre el resultado
entregado al paciente y el valor real o valor aceptado como verdadero.
Resulta de sumar los errores de escala, los aleatorios y los sistemticos.

7. Defina el trmino Repetibilidad

Es la capacidad de un operador para repetir de manera uniforme la misma

medicin de la misma pieza, utilizando el mismo sistema de medicin, bajo
las mismas condiciones.

8. Defina el termino Reproducibilidad

Es la capacidad de un sistema de medicin, utilizado por varios operadores,

para reproducir de manera uniforme la misma medicin de la misma pieza,
bajo las mismas condiciones.

9. Defina el termino sesgo analtico

El sesgo es una desviacin (error) sistemtica de los valores y puede

aparecer en cualquier momento de la medicin.

10. Qu es un programa de evaluacin externa de la calidad?

Es un programa destinado a mejorar la calidad de los resultados analticos
de los laboratorios clnicos.

El Programa de Evaluacin Externa de Calidad ofrece, una herramienta a

los laboratorios de Anlisis Clnicos que les permite mejorar la calidad de
sus prestaciones, a travs del estudio de las diferentes condiciones
 operativas para un anlisis determinado, la comparacin del desempeo de
un laboratorio con el resto de los participantes y de cada uno de ellos con
estndares de calidad predefinidos con una campaa educativa continua de
manera de lograr una normatizacin de la actividad se obtendr como fin la
confiabilidad de la informacin lograda por una mayor transferibilidad de los
resultados elaborados por cada laboratorio.

11. Qu criterios se deben tener en cuenta para seleccionar un material de

control de calidad interno?
El material de control se debera escoger considerando su estabilidad,
disponibilidad en cantidad suficiente para mantener un anlisis a travs del
tiempo, idealmente por al menos 6 meses, o por el tiempo que sea posible
de acuerdo a la estabilidad del material, se sugiere el uso de controles de
tercera opinin, de matriz similar a las muestras en estudio e incluirlos en
una corrida analtica, es recomendable utilizar material de control trazable

TEMA: INTERFERENCIAS EN MEDICIONES

Los siguientes frmacos utilizados de forma habitual en el tratamiento del paciente
pueden causar interferencias tcnicas en las pruebas de laboratorio sanguneas
disminuyendo o aumentando falsamente los resultados. Mencione los analitos que
pueden aumentar o disminuir por interferencias con los siguientes frmacos en
sangre:
FARMACO DISMINUYE AUMENTA
Fenitoina Calcio Bilirrubina en sangre
Fosfatasa Alcalina Glucosa
LDH
GOT
GPT
Trigliceridos

Cefalosporinas Creatinina segn Jaff

GPT y bilirrubina total

Corticosteroides Glucosa

Anticonceptivos orales Trigliceridos

cido acetilsaliclico K,Na

GOT
GPT
FAL, bilirrubina,
 colesterol, creatina
kinasa, creatinina,
LDH,
triglicridos, cido
rico y cido valproico

Furosemida Calcio Trigliceridos

Potasio Colesterol
Urea
Amilasa
Acido urico
Amoniaco
Glucosa
Anticoagulantes: Colesterol H FAL W
warfarina y heparina Glucosa H Got W
Trigliceridos H GPT W
Insulina Colesterol CPK
Glucosa Catecolamina
Magnesio
Potasio
Glibenclamina Glucosa
Trigliceridos

PUNTO ADICIONAL:
- Qu es sigmametra?
Sigma significa variacin, estimar el nivel sigma del proceso de medicin es medir
la variacin del proceso en Ds es decir de acuerdo a sus especificaciones de
desempeo, imprecisin y sesgo, cuantas desviaciones estndar hay entre la
media y la especificacin de tolerancia permitido o error total admisible.

- Qu utilidad tiene en el laboratorio clnico?.

La sigmametra adquiere utilidad en el control de las mediciones realizadas dentro
del laboratorio clnico permitindonos establecer muchas variables y realizar
seguimiento en nuestros procesos, por medio de esta podemos establecer un nivel
de variabilidad en nuestras mediciones, saber que tantas desviaciones estndar
varan estas de la media establecida en comparacin con el nivel establecido
como permisible, por ende, podemos realizar un control que nos permita corregir
posibles errores.